金蕎麥提取物在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及金蕎麥提取物在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途，本發(fā)明還涉及了一種用于預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的藥物組合物以及一種用于預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的功能性保健食品。本發(fā)明技術(shù)方案提供了一種金蕎麥提取物的新用途，可用于制備治療阿爾茨海默癥的藥物或功能性保健食品，開(kāi)拓了金蕎麥提取物的應(yīng)用領(lǐng)域。金蕎麥提取物為天然產(chǎn)物，安全、無(wú)毒，可以有效地用來(lái)制備用于預(yù)防、延緩和治療阿爾茨海默癥的藥物組合物和功能性保健食品。
【專利說(shuō)明】金蕎麥提取物在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種金蕎麥提取物的新用途以及含有金蕎麥提取物的藥物組合物和功能性保健食品。

【背景技術(shù)】
[0002]阿爾茨海默癥(AD)是一種進(jìn)行性的致命的神經(jīng)退行性疾病，它的流行與世界人口的老齡化成正比。《2009世界阿爾茨海默癥報(bào)告》中說(shuō)，到2050年全球?qū)⒂?.15億人受到這種疾病的困擾(Martin Prince, Jim Jackson等,2009)。AD的主要病理標(biāo)志是淀粉樣神經(jīng)炎斑塊蛋白沉積(Melanie Meyer-Luehmann, Tara L等,2007),形成神經(jīng)纖維纏結(jié),反應(yīng)性小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞增生，長(zhǎng)期激活的小膠質(zhì)細(xì)胞釋放趨化因子和受損的細(xì)胞因子，如IL-1、IL-6和TNF-α導(dǎo)致炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，這些炎癥因子反過(guò)來(lái)又加強(qiáng)了 Aβ的釋放(Mehlhorn 等，1999)。炎癥可導(dǎo)致神經(jīng)元死亡(L.E.Rojo, J.A.Fernandez 等，2008),或引發(fā)神經(jīng)退行性疾病(P.D.Drew, P.D.Store等,2005)。根據(jù)淀粉樣蛋白的假說(shuō),A β在大腦中的沉積是促使AD發(fā)病的主要原因(Hardy及Selkoe，2002)。神經(jīng)炎可能對(duì)AD的發(fā)展和長(zhǎng)期性有顯著作用(Heneka及0’Ban1n，2007)。因此，清除大腦中的Αβ沉積和抗炎代表了一種重要的防治該病的策略(Wang J, Ho L, Zhao Z, Seror, Humala N, Dickstein DL, ThiyagarajanΜ, Percival SS,Talcott ST, Pasinetti GM(2006a)Moderate consumpt1n of CabernetSauvignon attenuate Abeta neuropathology in a mouse model of Alzheimer’ sdisease.FASE BJ20:2313 - 2320)。
[0003]目前臨床上用于治療AD的藥物有乙酰膽堿酯酶(AchE)抑制劑(如加蘭他敏)，鈣拮抗劑，改善腦血液循環(huán)和腦細(xì)胞代謝的藥物(如腦復(fù)康)，激素類藥物(如雌激素)，非甾體抗炎藥物(如布洛芬和阿司匹林)，抗氧化劑(如維生素E)，毒蕈堿受體激動(dòng)劑(占諾美林)等。這些藥物通過(guò)不同途徑緩解早期病人的認(rèn)知障礙，適度改善癥狀，但還不能有效地逆轉(zhuǎn)AD腦內(nèi)老年斑沉積和神經(jīng)元纖維纏結(jié)等病理改變以阻止病情進(jìn)展。
[0004]金養(yǎng)麥(Fagopyrumdibotrys (D.Don)Hara)屬于寥科(Polygonaceae)養(yǎng)麥屬(Fagopyrum)的雙子葉植物,根據(jù)文獻(xiàn)記載,金養(yǎng)麥藥材以根莖入藥。據(jù)明代蘭茂所著《滇南本草》所載，金蕎麥“治五淋、(赤)白濁，楊梅結(jié)毒、丹流等癥”，《本草拾遺》、《李氏草秘》、《綱目拾遺》中也均有“性寒、味酸苦，清熱，解毒，祛風(fēng)利濕”的記載。它是云南及我國(guó)南方常用的一種中草藥。近年研究發(fā)現(xiàn)，金蕎麥具有癌化學(xué)預(yù)防及抗癌活性，是一種很有前景的抗腫瘤中藥。
[0005]金蕎麥的化學(xué)抗腫瘤活性成分原花色素縮合性單寧混合物，總單寧含量為67.49%,稱為原矢車菊素(procyanidin) B_2、B-4及原矢車菊素B-2的3，3’ - 二沒(méi)食子酸酉旨(3,3，-digalloylrocyanidin B—2)。
[0006]金蕎麥根為我國(guó)藥典收載品種(劉慧，劉月紅，安根炬等，金蕎麥活性成分的研究，遼寧醫(yī)藥2004，19，(4)35?37)，我國(guó)已批準(zhǔn)其提取物的片劑和膠囊劑(肖培根主編，金蕎麥，新編中藥志第一卷，化學(xué)工業(yè)出版社，北京:607?610)為治療藥物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為進(jìn)一步尋找金蕎麥提取物更多的應(yīng)用領(lǐng)域，本發(fā)明的目的是提供金蕎麥提取物在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途。
[0008]其中，所述金蕎麥提取物為金蕎麥的乙醇提取物、甲醇提取物、正己醇提取物、丙醇提取物或熱水提取物。
[0009]優(yōu)選地，所述金蕎麥提取物為金蕎麥的乙醇提取物。
[0010]其中，所述金蕎麥提取物的制備過(guò)程為:向金蕎麥中加入I?10倍重量的體積百分比濃度為20?90%的乙醇溶液或甲醇溶液或正己醇溶液或丙醇溶液，回流后濃縮即得。
[0011]本發(fā)明的另一目的是提供一種用于預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的藥物組合物，其包括金蕎麥提取物以及藥學(xué)上可接受的輔料。
[0012]其中，所述金蕎麥提取物為金蕎麥的乙醇提取物。
[0013]其中，所述金蕎麥提取物的制備過(guò)程為:向金蕎麥中加入I?10倍重量的體積百分比濃度為20?90%的乙醇溶液，回流后濃縮即得。
[0014]其中，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膏劑、混懸劑、凝膠劑、滴丸、口服液、注射劑或散劑。
[0015]本發(fā)明的另一目的是提供一種用于預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的功能性保健食品，其包括金蕎麥提取物。
[0016]其中，所述金蕎麥提取物為金蕎麥的乙醇提取物。
[0017]其中，所述金蕎麥提取物的制備過(guò)程為:向金蕎麥中加入I?10倍重量的體積百分比濃度為20?90%的乙醇溶液，回流后濃縮即得。
[0018]本發(fā)明技術(shù)方案提供了一種金蕎麥提取物的新用途，可用于制備治療阿爾茨海默癥的藥物或功能性保健食品，開(kāi)拓了金蕎麥提取物的應(yīng)用領(lǐng)域。金蕎麥提取物為天然產(chǎn)物，安全、無(wú)毒，可以有效地用來(lái)制備用于預(yù)防、延緩和治療阿爾茨海默癥的藥物組合物和功能性保健食品。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1是實(shí)施例2的Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中，圖1A為各組小鼠的平均逃避潛伏期結(jié)果，圖1B為各組小鼠的平均游泳距離結(jié)果，圖1C為各組小鼠的平均游泳速度結(jié)果，圖1D為各組小鼠在第八天探索平臺(tái)實(shí)驗(yàn)的首次進(jìn)入平臺(tái)的平均逃避潛伏期；
[0020]圖2是實(shí)施例3的耐受性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中，圖2A為各組小鼠的體重結(jié)果，圖2B為各組小鼠的進(jìn)食量結(jié)果，圖2C為各組小鼠的肝功能ALT及AST的血清指標(biāo)結(jié)果；
[0021]圖3是實(shí)施例4的Αβ水平測(cè)定結(jié)果，其中，圖3Α為各組小鼠大腦中總的Aβ水平結(jié)果，圖3Β為各組小鼠大腦中的Aβ 40水平結(jié)果，圖3C為各組小鼠大腦中的Aβ 42水平結(jié)果，圖3D為各組小鼠血清中總的A β水平結(jié)果，圖3Ε為轉(zhuǎn)基因小鼠食用金蕎麥提取物飼料后大腦組織中Aβ斑塊負(fù)荷的結(jié)果；
[0022]圖4是實(shí)施例5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中，圖4Α為小鼠大腦中小膠質(zhì)細(xì)胞的對(duì)比效果圖，圖4Β為小鼠大腦中星形細(xì)胞的對(duì)比效果圖，圖4C為小鼠大腦中出血斑點(diǎn)的對(duì)比效果圖；
[0023]圖5是實(shí)施例6炎癥因子水平變化實(shí)驗(yàn)中小鼠血清中的IL-1 β ,TNF- α和IFN- Y 濃度水平的結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0024]以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0025]本發(fā)明使用的野生型(WT)和APPSwe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠購(gòu)于南方模式動(dòng)物研究所(上海)，動(dòng)物的管理嚴(yán)格遵守2007年頒布的《云南省動(dòng)物管理?xiàng)l例》，并嚴(yán)格按照供應(yīng)商提供的PCR方法對(duì)小鼠基因進(jìn)行了鑒定。
[0026]將小鼠分別設(shè)為以下四個(gè)大組:APPSwe/PS I dE9轉(zhuǎn)基因小鼠的金蕎麥提取物給藥組(N= 12，金蕎麥提取物和普通飼料相混)、APPSwe/PS I dE9轉(zhuǎn)基因小鼠的姜黃素(Curcumin)給藥組(N=12，姜黃素和普通飼料相混)、APPSwe/PS I dE9轉(zhuǎn)基因小鼠的AD對(duì)照組(N=12，普通飼料)以及一個(gè)WT野生型對(duì)照組(N=12，普通飼料)。每個(gè)大組又分雌雄兩個(gè)小組，每組各6只動(dòng)物。
[0027]本發(fā)明所有數(shù)據(jù)的分析均使用SPSS17.0軟件，一般用mean土SEM表示，除非另有說(shuō)明。單向ANOVA分析被用于確定所有測(cè)試組間顯著性的不同，P>0.05被認(rèn)為無(wú)顯著性差巳升。
[0028]實(shí)施例1金蕎麥提取物的制備
[0029]取金蕎麥干藥材破碎成顆粒、加I?10倍的20%?90%的乙醇回流提取三次、濾液減壓濃縮、加入鰲合劑(0.6%的檸檬酸)，混勻，噴霧干燥制成浸膏粉，加入賦形劑，混勻，干法制粒等步驟制成。
[0030]實(shí)施例2莫里斯(Morris)水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)
[0031]小鼠水迷宮適應(yīng)階段兩天(不記錄，可視平臺(tái)高于水面2cm)，訓(xùn)練階段從第三天開(kāi)始，平臺(tái)隱藏在水下1cm，水溫保持23°C左右，連續(xù)進(jìn)行5天，每只小鼠每天訓(xùn)練3次。訓(xùn)練時(shí)，將小鼠面向池壁從3個(gè)入水點(diǎn)分別放入水池，記錄小鼠從入水到找到水下隱蔽平臺(tái)和停留在平臺(tái)上所需時(shí)間，作為潛伏期(latency)，用秒(S)表示。若入水后60s內(nèi)小鼠未能找到平臺(tái)，則將其輕輕從水中拖上平臺(tái)，并停留30s，然后進(jìn)行下一次訓(xùn)練。第8天移走平臺(tái)，每只小鼠從平臺(tái)起始點(diǎn)對(duì)面下水，游泳60秒，動(dòng)物在目標(biāo)區(qū)域游泳的時(shí)間，穿越平臺(tái)的次數(shù)和路徑等主要參數(shù)將被微型攝像機(jī)(Stoelting C0.，America)跟蹤記錄供分析。
[0032]水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)附圖1，WT(野生型)作為野生型對(duì)照組，給予正常飼料。APPSwe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠給予正常的飲食，作為對(duì)照組。另一組APPSwe/PS I dE9小鼠從3個(gè)月起持續(xù)9個(gè)月按100mg/kg/d的劑量給予金蕎麥提取物。另外一組APPSwe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠按47mg/kg/d給予姜黃素作為陽(yáng)性對(duì)照組。小鼠每天用Morris水迷宮進(jìn)行3次尋找平臺(tái)實(shí)驗(yàn)，持續(xù)7天，第8天移除平臺(tái)后，小鼠從平臺(tái)起始象限對(duì)面的點(diǎn)入水進(jìn)行探索實(shí)驗(yàn)。隱藏跳臺(tái)后的七天里各組小鼠的潛伏期(圖1A)、游泳距離(圖1B)、游泳速度(圖1C)沒(méi)有明顯差異(P>0.05)。第8天的探索平臺(tái)實(shí)驗(yàn)(圖1D)顯示潛伏期也沒(méi)有差異(P>0.05vs.Control),這意味著金蕎麥提取對(duì)AD小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有提高的趨勢(shì)。圖中所有的數(shù)據(jù)都進(jìn)行了ANOVA 分析及 Student-Newman-Keulspost-hoc 檢驗(yàn)。
[0033]實(shí)施例3耐受性實(shí)驗(yàn)
[0034]APPSwe/PS I dE9轉(zhuǎn)基因小鼠從第三個(gè)月(此時(shí)大腦中還未形成A β沉積)開(kāi)始喂食含有金蕎麥提取物和姜黃素的飼料，直至第十二個(gè)月。在此期間，動(dòng)物無(wú)死亡發(fā)生，無(wú)行為異常，長(zhǎng)期食用這種飼料的動(dòng)物的體重和日食量也沒(méi)有受到影響(將圖2A和2B)。另外，長(zhǎng)期食用金蕎麥和姜黃素也不會(huì)引起小鼠的肝功能損傷(圖2C)。
[0035]小鼠平均每天的進(jìn)食量為每克體重0.14-0.16g，每日金蕎麥提取物的消耗量為每克體重54 μ g，姜黃素為每克體重消耗77 - 98μ g。在喂食期間為觀察到小鼠死亡和生理異常情況，且未引起肝功能損傷。血清中總膽紅素(Tb)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)測(cè)定的值依然在正常范圍內(nèi)(由昆醫(yī)附一院檢驗(yàn)科協(xié)助完成)，由于總膽紅素(Tb)的含量較低(〈1U/L)，圖中未顯示。這些數(shù)據(jù)說(shuō)明，金蕎麥提取物毒性小，長(zhǎng)期食用是安全的。
[0036]實(shí)施例4大腦和血清中A β水平的測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0037]將APPSwe/PS I dE9轉(zhuǎn)基因小鼠從第三個(gè)月開(kāi)始喂食含有金蕎麥提取物和姜黃素的飼料。九個(gè)月后吸入乙醚麻醉處死小鼠，通過(guò)灌注取右心房的血及腦組織并稱重，對(duì)左腦大腦半球做組織病理分析，右腦半球則裝入凍存管存放在在-80° C液氮中用于生化分析。
[0038]小鼠大腦的組織病理分析:對(duì)給藥組的轉(zhuǎn)基因小鼠的大腦海馬區(qū)和大腦皮層中的Αβ做定量分析，并與對(duì)照組比較，觀察Aβ斑塊的沉積的影響、對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形細(xì)胞增生的影響，并用ELISA實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。
[0039]三大系列的六個(gè)等距離跨越海馬區(qū)域的組織切片(?200 μ m部分)被隨機(jī)挑選出來(lái)，使用免疫組織化技術(shù)對(duì)所有的Aβ進(jìn)行染色，分別激活小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞。切片與主要抗體(CD45和GFAP抗體)在4°C過(guò)夜培育，以二氨基氧化酶和葡萄糖為底物，進(jìn)一步用 DAB 試劑盒(Cat.N0.AB500-500Slide Kit CHEMICON Internat1nal, Inc.)展開(kāi)。對(duì)所有的Αβ沉淀、小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生進(jìn)行定量分析，病理圖像可以通過(guò)數(shù)字顯微鏡的攝像頭獲得，然后進(jìn)行圖像分析，所有的圖像處理和分析都采用單盲分析。小鼠大腦和血清中A β 40和A β 42肽水平的定量采用ELISA(Cat.#EZBRAIN40及Cat.#EZBRAIN42,MILLIP0RE)試劑盒。
[0040]如圖3所示，用ELISA試劑盒對(duì)各組小鼠大腦SDS (Α β-SDS)及甲酸(Α β-FA)提取部分中的Aβ進(jìn)行檢測(cè)，Aβ-SDS代表可溶性Aβ，Ai3-FA代表不可溶的Αβ，單個(gè)動(dòng)物的總的A β水平的計(jì)算是用總的可溶性A β (可溶性的SDS-A β 42加上可溶性的SDS-A β 40)加上總的FA中的可溶性A β (可溶性的FA-A β 42加上可溶性的FA-A β 40)。
[0041]與食用普通飼料的轉(zhuǎn)基因小鼠相比，食用含金蕎麥提取物(P=0.001)飼料及含有姜黃素(ρ〈0.001)飼料的轉(zhuǎn)基因小鼠大腦中總的Αβ的負(fù)荷明顯降低(圖3Α) (ANOVAF=71.044，P=0.003<0.05)。食用含金蕎麥提取物飼料的小鼠大腦中A β的負(fù)荷降低約45%，食用姜黃素飼料的AD小鼠則降低約57%，SDS-A β及FA-A β (Α β 40及A β 42)的組間比較與總的Αβ的比較本質(zhì)上一致(圖3Β和圖3C)。
[0042]食用含金蕎麥提取物及含有姜黃素飼料的轉(zhuǎn)基因小鼠的血清中的Αβ也顯著降低(圖3D) (AN0VA，F(xiàn)=53.057，P=0.005)，小鼠血清中總的Αβ的濃度與大腦中Αβ的總負(fù)荷有正相關(guān)性(Pearson r=0.986，P=0.014)，這就表明，在用金蕎麥提取物作為食物防治阿爾茨海默氏癥(AD)的研究中，對(duì)血清中Αβ濃度的檢測(cè)值可以反應(yīng)小鼠大腦Αβ的負(fù)荷。
[0043]圖3Ε為APPSwe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠食用金蕎麥提取物飼料后大腦組織中Aβ斑塊負(fù)荷的結(jié)果。6個(gè)空間等距離系列腦組織切片，用漂片免疫組化法對(duì)腦片上的Αβ淀粉蛋白斑塊進(jìn)行反應(yīng)(ant1-Αβ antibody6E10, Serotec),并用DAB試劑盒完成顯色反應(yīng),對(duì)新皮層區(qū)和海馬區(qū)的Αβ淀粉蛋白斑塊進(jìn)行定量，對(duì)總的檢測(cè)區(qū)域內(nèi)的陽(yáng)性反應(yīng)斑點(diǎn)與面積比進(jìn)行分析，計(jì)算單位面積的陽(yáng)性反應(yīng)的數(shù)量的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。對(duì)比食用姜黃素飼料的AD小鼠與對(duì)照組小鼠新皮層區(qū)和海馬區(qū)Αβ斑塊所占的面積部分(AVOVA分析，P〈0.01orP<0.05)有顯著性差異。
[0044]食用金蕎麥提取物組(P=0.007)與食用姜黃素(P=0.005 小鼠大腦海馬區(qū)及新皮質(zhì)區(qū)的Αβ明顯減少。這與ELISA試劑盒對(duì)Αβ水平的檢測(cè)結(jié)果的趨勢(shì)一致，食用金蕎麥提取物飼料的組用免疫組化定量，總的Αβ沉積減少了 65%，姜黃素組減少了 70%，這些數(shù)據(jù)表明金蕎麥提取物在減少Aβ負(fù)荷和預(yù)防Αβ沉積方面有明顯效果。
[0045]實(shí)施例5金蕎麥提取物阻礙神經(jīng)病理通路的實(shí)驗(yàn)
[0046]采用抗體⑶45加小膠質(zhì)細(xì)胞及GFAP加星形細(xì)胞的免疫組化實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)新皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)域。
[0047]圖4Α為小鼠大腦中小膠質(zhì)細(xì)胞的對(duì)比效果圖。6個(gè)空間等距離系列腦組織切片，用漂片免疫組化法對(duì)腦片上的激活小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)(大鼠單克隆ant1-⑶45，Millipore)，并用DAB試劑盒完成顯色反應(yīng)，同時(shí)對(duì)新皮層區(qū)和海馬區(qū)的激活的小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行定量，對(duì)總的檢測(cè)區(qū)域內(nèi)的陽(yáng)性反應(yīng)斑點(diǎn)與面積比進(jìn)行分析，計(jì)算單位面積的陽(yáng)性反應(yīng)斑點(diǎn)的數(shù)量的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差(AN0VA分析，P〈0.01)，有顯著性差異。野生型(WT)小鼠的大腦組織上幾乎沒(méi)有觀察到小膠質(zhì)細(xì)胞，APPSwe/PS I dE9轉(zhuǎn)基因小鼠則有明顯的小膠質(zhì)細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)用的是ANOVA分析(F=42.635，P〈0.001)。結(jié)果表明，與喂普通飼料的轉(zhuǎn)基因小鼠相比，食用含金蕎麥提取物的小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞的水平明顯降低(7 ± 3.8vs32.6 ± 11.2，F(xiàn)〈0.001)，與食用姜黃素的小鼠相比則水平一致(7±3.8±3.8vs4.8±2.2，P=0.012)。
[0048]圖4B為小鼠大腦中星形細(xì)胞的對(duì)比效果圖。6個(gè)空間等距離系列腦組織切片，用免疫組化漂片法對(duì)腦片上的星形細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)(兔抗-膠質(zhì)纖維酸蛋白，DAK0)，并用DAB試劑盒完成顯色反應(yīng)，對(duì)新皮層區(qū)和海馬區(qū)的星形細(xì)胞細(xì)胞進(jìn)行定量，對(duì)總的檢測(cè)區(qū)域內(nèi)的陽(yáng)性反應(yīng)斑點(diǎn)與面積比進(jìn)行分析，計(jì)算單位面積的陽(yáng)性反應(yīng)斑點(diǎn)的數(shù)量的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，(AN0VA分析，P〈0.05)，有顯著性差異。食用含有金蕎麥提取物飼料的小鼠星形細(xì)胞明顯較少(F=19.966，P〈0.001)，與食用普通飼料的小鼠的大腦上的星形細(xì)胞相比水平明顯降低(14.8±5.1vs35.2±3.9，P〈0.001 )，與食用含姜黃素飼料的小鼠相比，無(wú)顯著性差異(14.8±5.lvsl5.7±5.3, P=0.801)。
[0049]圖4C為小鼠大腦中出血斑點(diǎn)的對(duì)比效果圖。準(zhǔn)備6張空間等距離系列腦組織切片，用含濃鹽酸2%的亞鐵氰化鉀溶液(體積比計(jì)算為2%)對(duì)腦片上的血紅素斑點(diǎn)進(jìn)行染色，然后再用1%的核固紅復(fù)染，對(duì)每張腦片子上的藍(lán)色微型斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算單位面積的陽(yáng)性反應(yīng)斑點(diǎn)的數(shù)量的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差、(AN0VA分析，Ρ〈0.05)，有顯著性差異。含鐵血黃素陽(yáng)性反應(yīng)的藍(lán)色特征顆粒是出血點(diǎn)，主要觀察新皮層區(qū)、柔腦膜區(qū)、大腦的海馬區(qū)和丘腦區(qū)域。喂食普通飼料的每個(gè)轉(zhuǎn)基因小鼠的單側(cè)大腦的微出血點(diǎn)率為38±13.0，遠(yuǎn)高于野生型(WT)4.0±11.0 (P〈0.001)。同樣，喂含有金蕎麥提取物(10.4±119，P〈0.05)和姜黃素(23.2±16.8)飼料的小鼠也沒(méi)有觀察到明顯的微出血點(diǎn)(ANOVA，F(xiàn)=7.125，P=0.003)。
[0050]實(shí)施例6炎癥因子水平變化實(shí)驗(yàn)
[0051]給藥組的小鼠取右心房血液，并做心臟灌注，對(duì)血清中的炎癥因子IL-1、IL-6和TNF-α的水平進(jìn)行測(cè)評(píng)，并與對(duì)照組比較，觀察AD小鼠血清中炎癥因子水平的變化，采用ELISA 試劑盒(Cat N0.BMS607/2, BMS6002, BMS606, eB1science, USA)進(jìn)行測(cè)定，并嚴(yán)格按照廠家提供的操作指南進(jìn)行。
[0052]圖5為測(cè)得的小鼠血清中IL-1 β ,TNF- α和IFN- Y濃度水平的結(jié)果(AN0VA分析，P>0.05vs喂正常飼料的WT野生型，P>0.05vs喂對(duì)照藥物飼料的AD組)。
[0053]小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞被激活后會(huì)釋放出一些炎癥因子IL-1 β、TNF-α和IFN-Y，在AD大腦內(nèi)部的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的進(jìn)展過(guò)程中，這是一個(gè)重要的病理現(xiàn)象。通常情況下，轉(zhuǎn)基因小鼠血清中炎癥因子的水平應(yīng)該趨向于增高，但檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL-Ιβ和IFN-Y的水平變化不大，與野生型小鼠相比無(wú)顯著性差異(ANOVA IL-1 β，F(xiàn)=L 520，P=0.253AN0VAIFN- Y , F=0.252，P=0.859)。食用金蕎麥提取物飼料轉(zhuǎn)基因小鼠與食用正常飼料的對(duì)照組轉(zhuǎn)基因小鼠AD組相比，血清中的TNF-a水平也無(wú)明顯降低，沒(méi)有顯著性差異(0.08±0.0025pg/mL vs0.0858±0.0061pg/mL, P=0.093)，食用姜黃素飼料的 AD 小鼠也沒(méi)有顯著變化(0.08±0.0025vs0.0824±0.0071, P=0.470)，這表明金蕎麥提取物對(duì)AD小鼠血清中的炎癥因子抑制效果不明顯(ANOVATNF-a，F(xiàn)=8.39，P=0.002)。
[0054]以上實(shí)施例說(shuō)明:
[0055](I)施用對(duì)象對(duì)金蕎麥提取物具有很好的耐受性，長(zhǎng)期服用不會(huì)引起肝功能受損和其它生理功能異常。
[0056](2)金蕎麥提取物能有效清除AD小鼠大腦中Αβ的沉積，減少血清中Αβ負(fù)荷的的水平，減輕炎癥引起的小膠質(zhì)細(xì)胞增生，減少由Αβ淀粉纏結(jié)引起的出血，金蕎麥提取物可作為一種潛在的對(duì)AD有防治和治療作用的藥物(或功能性保健食品)。
[0057]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【權(quán)利要求】
1.金蕎麥提取物在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述金蕎麥提取物為金蕎麥的乙醇提取物、甲醇提取物、正己醇提取物、丙醇提取物或熱水提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述金蕎麥提取物的制備過(guò)程為:向金蕎麥中加入I?10倍重量的體積百分比濃度為20?90%的提取溶液，回流后濃縮即得，所述提取溶液為乙醇、甲醇、正己醇或丙醇。
4.一種用于預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的藥物組合物，其特征在于，包括金蕎麥提取物以及藥學(xué)上可接受的輔料。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述金蕎麥提取物為金蕎麥的乙醇提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述金蕎麥提取物的制備過(guò)程為:向金蕎麥中加入I?10倍重量的體積百分比濃度為20?90%的乙醇溶液，回流后濃縮即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膏劑、混懸劑、凝膠劑、滴丸、口服液、注射劑或散劑。
8.一種用于預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的功能性保健食品，其特征在于，包括金蕎麥提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的功能性保健食品，其特征在于，所述金蕎麥提取物為金蕎麥的乙醇提取物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的功能性保健食品，其特征在于，所述金蕎麥提取物的制備過(guò)程為:向金蕎麥中加入I?10倍重量的體積百分比濃度為20?90%的乙醇溶液，回流后濃縮即得。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK104510782SQ201310445027
【公開(kāi)日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】袁建平, 曾躍勤 申請(qǐng)人:云南康創(chuàng)生物醫(yī)藥科技孵化有限公司