一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉及其制備方法，該混合凍干粉包括以下重量份數(shù)的組分：抗鴨病毒病卵黃抗體90?95份、抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子1?2份、a-干擾素1?2份、防腐劑0.01?0.02份、滅活劑0.2?0.3份、砸0.05?0.1份、抗氧化劑1?2份、聚乙烯卩比略烷酮1?2份、甘氨酸0.5?1份、活性乳酸桿菌0.5?1份。本發(fā)明的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，將抗鴨病毒病卵黃抗體、抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子與干擾素進(jìn)行復(fù)配，并輔以多種輔料，各組分相互配合，協(xié)調(diào)作用，可以顯著提高其防治鴨病毒性疾病的效果，具有針對性強(qiáng)、常溫下保存時間長、抗體效價高、生物活性良好的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，同時還 涉及一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鴨病毒性疾病是對由不同的病毒引起的鴨的不同程度的急性、高度傳染性疾病的 一種統(tǒng)稱，包括鴨瘟、鴨病毒性肝炎等疾病。鴨病毒性疾病是一種養(yǎng)鴨業(yè)中最常見的疾病， 由于其具有發(fā)病突然、病程短、死亡率高等特點(diǎn)，目前仍然是養(yǎng)鴨業(yè)的主要危害之一。
[0003] 目前防治鴨病毒性疾病的方法較多，主要是使用西藥、接種免疫、中草藥等進(jìn)行防 治。其中，西藥使用的泛濫給鴨肉、蛋類食品帶來了極大的安全隱患，藥物殘留已經(jīng)成為影 響鴨肉、蛋產(chǎn)品安全的主要因素之一。接種免疫早期效果較好，但是需要多次接種，操作麻 煩，成本較高，容易造成應(yīng)激反應(yīng)；而且疫苗對于保藏條件要求較高，需要在2_8°C條件下 冷藏，室溫條件下一段時間則失去效果。中草藥飼料添加劑也是目前的研究方向之一，但是 由于中草藥的種類較多，相同的中藥材對不同的禽畜疾病的作用差異很大，且中草藥對疾 病的免疫效果極其有限，因此應(yīng)用也具有一定的局限性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，解決現(xiàn)有技術(shù)防治鴨病 毒性疾病存在的操作不便、藥劑不易保存、效果較差的問題。
[0005] 本發(fā)明的第二個目的是提供一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種抗鴨病毒性疾病的混合凍 干粉，包括以下重量份數(shù)的組分：抗鴨病毒病卵黃抗體90?95份、抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子 1?2份、α -干擾素1?2份、防腐劑0· 01?0· 02份、滅活劑0· 2?0· 3份、硒0· 05?0· 1 份、抗氧化劑1?2份、聚乙烯吡咯烷酮1?2份、甘氨酸0. 5?1份、活性乳酸桿菌0. 5? 1份。
[0007] 所述滅活劑為甲醛。
[0008] 所述防腐劑為硫柳汞。
[0009] 所述抗氧化劑為維生素 C、維生素 Ε中的任意一種或其組合。
[0010] 一種上述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0011] a.采用鴨病毒性疫病病毒標(biāo)準(zhǔn)株制備疫苗，免疫健康鴨群獲得高免蛋，將高免蛋 經(jīng)過消毒、酸化處理、離心處理得到含有抗鴨病毒病卵黃抗體的上清液；
[0012] b.將含有抗鴨病毒病卵黃抗體的上清液與抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子、防腐劑、滅活劑、 硒、抗氧化劑、α -干擾素、活性乳酸桿菌、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再凍干即得。
[0013] 優(yōu)選的，上述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0014] 1)取鴨病毒性疫病病毒標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對健 康產(chǎn)蛋鴨群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 : 256時，收集1?免蛋，將收集的1?免蛋進(jìn)行清理、消毒，晚干備用；
[0015] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢瑁?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入酸化水溶液，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0016] 3)在步驟2)所得上清液中加入鈉鹽使鈉鹽體積占總體積的0. 8%，離心分離，得含 有抗鴨病毒病卵黃抗體的上清液；
[0017] 4)取步驟3)所得的含有90?95重量份的抗鴨病毒病卵黃抗體的上清液，加入 1?2重量份抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子，過濾，留濾液備用；
[0018] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入防腐劑0. 01?0. 02重量份、 滅活劑0. 2?0. 3重量份、硒0. 05?0. 1重量份、抗氧化劑1?2重量份、α -干擾素1? 2重量份、活性乳酸桿菌0. 5?1重量份、聚乙烯批咯燒酮1?2重量份、甘氨酸0. 5?1重 量份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0019] 步驟2)中所述酸化水溶液的pH為4. 9?5. 2 ;酸化水溶液的加入量為卵黃抗體 溶液體積的8倍。所述酸化水溶液可為鹽酸化水溶液。
[0020] 步驟3)中所述鈉鹽為NaCl與NaS04的質(zhì)量比為4:1的混合物。
[0021] 步驟3)中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為15000rpm，時間為20min。
[0022] 步驟4)中所述過濾是先用0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截留分子量大于200KD的大 分子，再將濾液用〇. 22 μ m的濾膜過濾。
[0023] 卵黃抗體是一種免疫球蛋白，由于機(jī)體受到外界抗原的刺激而產(chǎn)生的一種應(yīng)激產(chǎn) 物，可以和相應(yīng)抗原結(jié)合，消除病因。本發(fā)明將鴨病毒性疾病的疫苗免疫接種健康的鴨群， 可以使獲得的鴨蛋蛋黃中產(chǎn)生有效的抗鴨病毒性卵黃抗體，同時減少了毒株返祖的可能 性。
[0024] 轉(zhuǎn)移因子攜帶有致敏淋巴細(xì)胞的特異性免疫信息，能夠?qū)⑻禺愋悦庖咝畔⒊蔬f給 受體淋巴細(xì)胞，使受體無活性的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樘禺愋灾旅袅馨图?xì)胞，從而激發(fā)受體細(xì)胞 介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。
[0025] α-干擾素通過細(xì)胞表面受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，同時還可增強(qiáng)自然殺 傷細(xì)胞（ΝΚ細(xì)胞)、巨噬細(xì)胞和Τ淋巴細(xì)胞的活力，從而起到免疫調(diào)節(jié)作用，并增強(qiáng)抗病毒能 力。
[0026] 本發(fā)明的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉中，抗鴨病毒病卵黃抗體是一種免疫球蛋 白，對鴨病毒性疾病有很好的防治效果；抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子本身是一種特異抗病毒因子； α-干擾素、活性乳酸桿菌作為免疫增強(qiáng)劑可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能，將上述物質(zhì)結(jié)合 使用，可極大地提高預(yù)防和治療鴨病毒性疾病的效果。
[0027] 本發(fā)明的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，將抗鴨病毒病卵黃抗體、抗鴨病毒病轉(zhuǎn) 移因子與免疫增強(qiáng)劑（α -干擾素、活性乳酸桿菌)進(jìn)行復(fù)配，并輔以抗氧化劑、防腐劑、滅活 齊IJ、硒、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酸制備混合凍干粉，各組分相互配合，協(xié)調(diào)作用，可以顯著提 高其防治鴨病毒性疾病的效果，具有針對性強(qiáng)、常溫下保存時間長、抗體效價高、生物活性 良好的優(yōu)點(diǎn)，是一種具有廣泛應(yīng)用前景的強(qiáng)效生物制劑；經(jīng)動物試驗(yàn)證明，本發(fā)明的抗鴨病 毒性疾病的混合凍干粉，對鴨病毒性疾病的防治效果要明顯優(yōu)于抗鴨病毒病卵黃抗體、抗 鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子、α -干擾素中任意一種單獨(dú)使用或其中兩種組合使用的情況。
[0028] 本發(fā)明的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，使用時，可作為飼料添加劑按質(zhì)量分?jǐn)?shù) 2%?3%混入飼料中；發(fā)病時采用肌注方式給藥，每100ml注射液中含有混合凍干粉lg，注 射液的使用量為每次〇. 1?〇. 2ml/kg體重；首次用藥加倍，治療效果更好。
[0029] 本發(fā)明的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，將將抗鴨病毒病卵黃抗體、 抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子、免疫增強(qiáng)劑（α -干擾素、活性乳酸桿菌）和多種輔料進(jìn)行復(fù)配，并通 過調(diào)整輔料的成分、控制其用量，進(jìn)一步延長了卵黃抗體的保存時間，保證了卵黃抗體在常 溫下較長時間內(nèi)的活性，降低了凍干粉制劑的保存和運(yùn)輸成本，使用方便，具有廣泛的應(yīng)用 前景；制備方法工藝簡單，操作方便，極大的降低了生產(chǎn)成本，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0031] 本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，所用鴨病毒毒株為國家標(biāo)準(zhǔn)毒株；所用α-干擾素購 自長春生物制品研究所。
[0032] 本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，所用抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子，是由以下方法制備的：
[0033] 1)用鴨病毒性疫病標(biāo)準(zhǔn)病毒抗原(市售）對豬脾臟和/或胸腺進(jìn)行免疫后，去其表 面筋、脂肪，再用滅菌后的生理鹽水沖洗；
[0034] 2)將沖洗后的豬脾臟和/或胸腺破碎后，加入2倍體積的預(yù)冷后的PBS緩沖液，用 組織勻漿儀將其勻質(zhì)，得勻漿液；
[0035] 3)將勻漿液用超聲破碎儀處理5?lOmin后，調(diào)節(jié)pH為5. 5,在5000?6000rpm 轉(zhuǎn)速下離心30min，收集上清液；
[0036] 4)將步驟3)所得上清液用微濾膜過濾，截留分子量為7000道爾頓以上的物質(zhì)，將 所得濾液用除菌濾膜過濾，即得抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子原液，在4°C條件下保存?zhèn)溆谩?br> [0037] 實(shí)施例1
[0038] 本實(shí)施例的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉為抗鴨瘟的混合凍干粉，包括以下重量 份數(shù)的組分：抗鴨瘟卵黃抗體90份、抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子2份、α -干擾素2份、活性乳酸桿菌 1份、硫柳汞〇. 02份、甲醛0. 2份、硒0. 05份、維生素 C1份、維生素 Ε1份、聚乙烯吡咯烷酮 2份、甘氨酸0. 5份。
[0039] 本實(shí)施例的抗鴨瘟的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0040] 1)取鴨瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對健康產(chǎn)蛋 鴨群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康鴨群接種滅活疫苗1. 5ml，第二次、第三次免 疫接種加量1倍，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256時，收集高免蛋， 將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0041] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢瑁?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0042] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗鴨 瘟卵黃抗體的上清液；
[0043] 4)取步驟3)所得的含有90重量份的抗鴨瘟卵黃抗體的上清液，加入2重量份抗 鴨瘟轉(zhuǎn)移因子，用0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截流分子量大于200KD的大分子物質(zhì)，再將濾 液經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾，留濾液備用；
[0044] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 02重量份、甲醛0. 2 重量份、硒〇. 05重量份、維生素 C1重量份、維生素 E1重量份、α -干擾素2重量份、活性乳 酸桿菌1重量份、聚乙烯吡咯烷酮2重量份、甘氨酸0. 5重量份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再 在-80°C條件下凍干，即得。
[0045] 實(shí)施例2
[0046] 本實(shí)施例的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉為抗鴨病毒性肝炎的混合凍干粉，包括 以下重量份數(shù)的組分：抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體93份、抗鴨病毒性肝炎轉(zhuǎn)移因子1. 5份、 α -干擾素1. 5份、活性乳酸桿菌1份、硫柳汞0. 01份、甲醛0. 3份、硒0. 1份、維生素 C0. 5 份、維生素 Ε0. 5份、聚乙烯吡咯烷酮1. 5份、甘氨酸1份。
[0047] 本實(shí)施例的抗鴨病毒性肝炎的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0048] 1)取鴨病毒性肝炎病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對 健康產(chǎn)蛋鴨群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康鴨群接種滅活疫苗1. 5ml，第二次、 第三次免疫接種加量1倍，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256時，收 集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0049] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢瑁?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0050] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗鴨 病毒性肝炎卵黃抗體的上清液；
[0051] 4)取步驟3)所得的含有93重量份的抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體的上清液，加入1.5 重量份抗鴨病毒性肝炎轉(zhuǎn)移因子，用〇. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截流分子量大于200KD的大 分子物質(zhì)，再將濾液經(jīng)〇. 22 μ m濾膜過濾，留濾液備用；
[0052] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 01重量份、甲醛0. 3 重量份、硒〇. 1重量份、維生素 C0. 5重量份、維生素 E0. 5重量份、α -干擾素1. 5重量份、 活性乳酸桿菌1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1. 5重量份、甘氨酸1重量份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù) 冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0053] 實(shí)驗(yàn)例1
[0054] 本實(shí)驗(yàn)例對實(shí)施例1?2所得混合凍干粉進(jìn)行性能檢測，結(jié)果如表1、2所示。
[0055] 常溫效價檢測實(shí)驗(yàn)方法：將實(shí)施例1?2所得混合凍干粉制劑保存在37°C培養(yǎng)箱 中，保存24個月，分別在1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后，用瓊脂 擴(kuò)散(AGP)法，測定每個時間點(diǎn)所取樣品的卵黃抗體效價變化。
[0056] 表1實(shí)施例1?2所得混合凍干粉常溫效價檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0057]

【權(quán)利要求】
1. 一種抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，其特征在于：包括以下重量份數(shù)的組分：抗鴨 病毒病卵黃抗體90?95份、抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子1?2份、α -干擾素1?2份、防腐劑 0. 01?0. 02份、滅活劑0. 2?0. 3份、硒0. 05?0. 1份、抗氧化劑1?2份、聚乙烯吡咯烷 酮1?2份、甘氨酸0. 5?1份、活性乳酸桿菌0. 5?1份。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，其特征在于：所述滅活劑為 甲醛。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，其特征在于：所述防腐劑為 硫柳萊。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉，其特征在于：所述抗氧化劑 為維生素 C、維生素 Ε中的任意一種或其組合。
5. -種如權(quán)利要求1所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于： 包括下列步驟： a. 采用鴨病毒性疫病病毒標(biāo)準(zhǔn)株制備疫苗，免疫健康鴨群獲得高免蛋，將高免蛋經(jīng)過 消毒、酸化處理、離心處理得到含有抗鴨病毒病卵黃抗體的上清液； b. 將含有抗鴨病毒病卵黃抗體的上清液與抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子、防腐劑、滅活劑、硒、 抗氧化劑、α -干擾素、活性乳酸桿菌、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再凍干即得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：包 括下列步驟： 1) 取鴨病毒性疫病病毒標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對健康產(chǎn) 蛋鴨群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256 時，收集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用； 2) 將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢瑁玫铰?黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入酸化水溶液，混勻、靜置沉淀，取上清液備用； 3) 在步驟2)所得上清液中加入鈉鹽使鈉鹽體積占總體積的0. 8%，離心分離，得含有抗 鴨病毒病卵黃抗體的上清液； 4) 取步驟3)所得的含有90?95重量份的抗鴨病毒病卵黃抗體的上清液，加入1?2 重量份抗鴨病毒病轉(zhuǎn)移因子，過濾，留濾液備用； 5) 將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入防腐劑0. 01?0. 02重量份、滅活 劑0. 2?0. 3重量份、硒0. 05?0. 1重量份、抗氧化劑1?2重量份、α -干擾素1?2重 量份、活性乳酸桿菌0. 5?1重量份、聚乙烯吡咯燒酮1?2重量份、甘氨酸0. 5?1重量 份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟2)中所述酸化水溶液的pH為4. 9?5. 2 ;酸化水溶液的加入量為卵黃抗體溶液體積的8 倍。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟3)中所述鈉鹽為NaCl與NaS04的質(zhì)量比為4:1的混合物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟3)中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為15000rpm，時間為20min。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗鴨病毒性疾病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟4)中所述過濾是先用0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截留分子量大于200KD的大分子，再將 濾液用〇. 22 μ m的濾膜過濾。
【文檔編號】A61K35/26GK104208681SQ201310463393
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】徐進(jìn), 郭俊清, 李建正 申請人:鄭州后羿制藥有限公司