一種治療肝纖維藥物組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療肝纖維藥物組合物，具體由原料藥丹參酚酸B、丹參酮IIA及甘草次酸組成，所述組合物對肝纖維化具有協(xié)同增效的作用，效果強于單用一種或兩種。本發(fā)明還涉及到所述藥物組合物的優(yōu)選制劑，如脂質體及凍干粉針，以及所述制劑的制備方法。
【專利說明】一種治療肝纖維藥物組合物及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療肝纖維的藥物組合物，所述藥物組合物由丹參酮IIA、丹參酚酸B及甘草次酸組成，本發(fā)明還涉及由該藥物組合物制成的藥物制劑，如脂質體或凍干粉針及其制備方法，屬于藥物制劑【技術領域】。
【背景技術】 [0002]肝病是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題，目前我國慢性肝病及攜帶患者達1.2億人。肝纖維化是各種原因引起的慢性肝病共同的病理特征，表現(xiàn)為肝內(nèi)纖維結締組織增生與沉積，是機體對慢性肝損傷的創(chuàng)傷-愈合反應，是慢性肝病向肝硬化發(fā)展的中間環(huán)節(jié)，是近10多年來全球范圍肝病研究的熱點。研究資料表明肝纖維化病癥經(jīng)過治療可以逆轉[1]，但仍有25%~40%的肝纖維化最終會發(fā)展為無法逆轉的肝硬化。所以，阻斷及逆轉肝纖維化已成為慢性肝病治療中的關鍵環(huán)節(jié)。
[0003]從現(xiàn)代醫(yī)學的角度探究，肝纖維化是肝細胞發(fā)生壞死及炎癥刺激時，肝內(nèi)纖維結締組織增生的病理過程，是肝硬化形成的病基。肝纖維化形成機制復雜，但其核心環(huán)節(jié)為肝星狀細胞(HSC)的激活、增殖，以致肝損傷后HSCs發(fā)生活化，細胞表型轉變?yōu)榧±w維樣細胞，生成細胞外基質(ECM)的能力明顯增強，表達基質金屬蛋白酶(MMP)抑制物增加、MMP活性降低及ECM降解減少，進而導致肝臟膠原沉積與纖維化。隨著對肝纖維化發(fā)生機制的認識不斷深入，人們提出了在各個環(huán)節(jié)上治療的方法，但臨床效果并不理想。西藥對肝纖維化的治療尚缺乏理想的藥物和方法，目前認為有一定療效的藥物，不良反應大，費用高。
[0004]中醫(yī)學認為，肝纖維化屬癥瘕、積聚等范疇，其病機為正虛血瘀。在肝纖維化的發(fā)病過程中，血瘀與氣虛相互伴生及互為因果。瘀血阻絡，必阻礙氣機，血為氣之母，氣為血之帥，氣機阻滯，血行不暢，進一步導致瘀阻經(jīng)絡，從而形成氣血不暢的惡性循環(huán)。正氣虛弱是肝纖維化的內(nèi)因和轉歸，肝血瘀阻是肝纖維化的病理基礎?，F(xiàn)代病理學研究亦證明，肝細胞及竇內(nèi)皮細胞的變性壞死，引起肝組織微循環(huán)障礙而產(chǎn)生血瘀證，同時貯脂細胞及肝細胞增生分泌大量膠原蛋白，形成膠原纖維束，逐漸發(fā)展為纖維化，形成血瘀證。由此可見，血瘀是肝纖維化的病理基礎及病機關鍵。由于中醫(yī)采用復方中藥，對病理復雜的肝纖維化病癥可發(fā)揮其綜合治療優(yōu)勢。
[0005]丹參-甘草為來源于臨床的肝纖維治療藥對，基于中藥組分配伍理論，不僅活血與補氣的功效互生互動，也實現(xiàn)了將方劑“復雜-簡單-復雜”的分解與整合。
[0006]丹參、甘草兩藥材中對肝纖維化具有治療作用的主要有丹參酚酸B(Sal B)、丹參酮IIA(TSN)、甘草次酸(GA)、甘草酸(GCA)四種成份，其中，甘草中甘草酸體內(nèi)活性代謝產(chǎn)物為甘草次酸，且對大鼠離體肝細胞的生物膜效應及肝細胞膜上的結合位點，甘草次酸較甘草酸更為顯著。選擇臨床藥對丹參-甘草中的丹參酚酸B、丹參酮IIA和甘草次酸三種抗肝纖維化作用顯著但作用環(huán)節(jié)、作用機理均不相同的有效成分，組成復方，治療肝纖維。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種治療肝纖維化的藥物組合物，所述藥物組合物主要由原料藥丹參酚酸B、丹參酮IIA、甘草次酸組成，各原料藥間的重量配比為:以丹參酮IIA為I重量份計，丹參酚酸B為1-12重量份，甘草次酸為1-9重量份。優(yōu)選地，所述各原料藥間的重量配比為，以丹參酮IIA為I重量份計，丹參酚酸B為9重量份，甘草次酸為6重量份。
[0008]本發(fā)明技術人員發(fā)現(xiàn)，將丹參酮IIA、丹參酚酸B、甘草次酸按適當比例混合，在治療肝纖維化方面，比如以人肝星狀細胞(HSC)為例，可以起到很好的協(xié)同增效的作用。
[0009]本發(fā)明的再一方面，是提供一種含有本發(fā)明所述活性成分的制劑，所述制劑包括本發(fā)明由原料藥丹參酮IIA、丹參酚酸B、甘草次酸，以及制藥上可接受的輔料制成。
[0010]本發(fā)明所述的包含本發(fā)明原料藥活性成分的制劑，可以是口服給藥的制劑，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、口服液，也可以是非經(jīng)胃腸道給藥的制劑，如注射劑、噴霧劑、貼劑等。
[0011]優(yōu)選的一方面，本發(fā)明所述制劑為脂質體制劑。
[0012]由于丹參酚酸B化學結構不穩(wěn)定，在水溶液中極易降解和被氧化，通過一系列反應生成丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、紫草酸和丹酚酸E、紫草酸異構體1、I1、III及原紫草酸和二聚咖啡酸等復雜產(chǎn)物。
[0013]丹參酮IIA在水中的溶解度較差，為0.24mg/L。李素春等將美國FTSN指導新藥研究的生物藥劑學分類系統(tǒng)運用到丹參酮IIA的吸收預測和劑型設計中，研究表明丹參酮IIA溶解度和滲透性均較低，屬于第IV類化合物。研究證實，丹參酮II A的口服絕對生物利用度低于3.5%，一方面是由于其水溶性極差，另一方面是由于其透膜性差，自身受P-糖蛋白作用以及受首過代謝的影響。因此含丹參酮II A的普通制劑(如片劑、膠囊等)，生物利用度均不高，直接影響臨床療效。
[0014]甘草次酸為三萜皂苷元成分，是甘草酸類口服藥在體內(nèi)真正的藥用結構，但其難溶于水，水中溶解度僅為6.32mg/L, 口服利用度差，故市售制劑一般為甘草酸鹽，但是由于其需要經(jīng)過水解方可吸收，且有復雜的肝腸循環(huán)，不同患者的生物利用度及藥動學數(shù)據(jù)差別很大，且長期服用易出現(xiàn)水鈉潴留、高血壓、低鉀性肌病等假醛固酮癥。
[0015]基于上述三種藥物藥效顯著但口服生物利用率均較低的特點，選擇合適的藥物傳遞系統(tǒng)以提高藥效尤為重要。
[0016]因此，本發(fā)明提供了一種脂質體制劑，所述脂質體的處方組成為:丹參酮IIA為I重量份，丹參酚酸B為9重量份，甘草次酸為6重量份，磷脂為70-80重量份，膽固醇為10-20重量份。
[0017]在本發(fā)明的一實施例中，提供了制備本發(fā)明所述脂質體的方法。制備本發(fā)明所述脂質體的方法，可以是采用薄膜分散法、超聲分散法、PH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法、逆向蒸發(fā)法、注入法、高壓乳勻法、復乳法、凍融法、超臨界法中的一種或多種，優(yōu)選為采用薄膜分散法、超聲分散法及PH梯度法相結合。具體地，制備本發(fā)明所述脂質體的步驟包括:稱取處方量磷脂、膽固醇、甘草次酸及丹參酮II A，溶于共溶的有機溶劑中，蒸發(fā)除去有機溶劑，形成均勻透明的薄膜，加入純水使薄膜溶脹水合。得到的甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液進一步勻化處理；另取丹參酚酸B溶于甘氨酸-鹽酸緩沖液中，溶解，加入甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液中，水浴搖勻或超聲分散即得甘草次酸-丹參酮IIA-丹參酚酸B復方脂質體。[0018]本發(fā)明的還一目的，在于提供另外一種非胃腸道給藥的藥物制劑，將上述制備得到的脂質體，加以制藥上適當?shù)闹С謩?，即可制備本發(fā)明所述的另一種非經(jīng)胃腸道給藥的制劑，凍干粉針制劑。所述的適當?shù)闹С謩梢允钦崽?、山梨醇、右旋糖酐、木糖醇、乳糖、甘露醇、海藻糖中的一種或多種。
[0019]具體地，本發(fā)明所述的非胃腸道給藥的凍干粉針劑，其處方組成為:丹參酮IIA為I重量份，丹參酚酸B為9重量份，甘草次酸為6重量份，磷脂為70-80重量份，膽固醇為10-20重量份，凍干支持劑為9重量份，所述凍干支持劑選自蔗糖、甘露醇或山梨醇。
[0020]制備本發(fā)明所述的非胃腸道給藥粉針劑的方法，包括將上述制備得到的脂質體溶液，加入凍干支持劑，通過冷凍干燥，即可得到。
[0021]所述方法包括:稱取處方量磷脂、膽固醇、甘草次酸及丹參酮IIA，溶于共溶的有機溶劑中，蒸發(fā)除去有機溶劑，形成均勻透明的薄膜，加入純水使薄膜溶脹水合。得到的甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液進一步勻化處理；另取丹參酚酸B溶于甘氨酸-鹽酸緩沖液中，溶解，加入甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液中，水浴搖勻或超聲分散即得甘草次酸-丹參酮IIA-丹參酚酸B復方脂質體，分裝，加入支持劑冷凍干燥，即得。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1TSN-GA-Sal B混合液組對HSC增值細胞的生長抑制圖；
[0023]圖2TSN-GA_Sal B復方脂質體組對HSC增值細胞的生長抑制圖；
[0024]圖3為空白脂質體組對HSC增值細胞的生長抑制圖；
[0025]圖4為HSC對照 組；
【具體實施方式】
[0026]實施例1不同配比的本發(fā)明藥物復方對人HSC的抑制作用
[0027]肝星狀細胞(HSC)是位于肝血竇內(nèi)皮細胞與肝細胞之間的一種肝非實質細胞，約占正常肝內(nèi)細胞總數(shù)的5%~15%。HSC的激活及EMC的大量產(chǎn)生活化決定肝纖維化的形成、發(fā)展與轉歸，是肝纖維化的核心環(huán)節(jié)，活化后的HSCs分泌大量的細胞外基質和細胞因子，后者相互作用并形成網(wǎng)絡結構，反過來促進HSCs的活化和增殖，不斷循環(huán)，最終形成肝纖維化甚至肝硬化。而HSCs的凋亡則是肝纖維化逆轉的關鍵。
[0028]取對數(shù)生長期的人HSC，0.25%胰蛋白酶消化后，用含10%胎牛血清的DMEM制成細胞懸液，以IXlOVmL接種于96孔板，每孔200 μ L。24小時后將96孔板中的培養(yǎng)液棄去，加入事先配好的各組藥物，使其最終容積為200 μ L/孔，分成單純HSC對照組，空白溶劑組、丹參酮IIA(TSN)組、甘草次酸(GA)組、丹參酚酸B(Sal B)組、TSN-GA混合溶液組、TSN-SalB混合溶液組、GA-Sal B混合溶液組、TSN-GA-Sal B混合溶液組，給藥組藥物濃度見表1，每組6個復孔。37°C、5% C02孵箱內(nèi)培養(yǎng)24、48h后每孔加入A液(含MTT成分)10 μ L，繼續(xù)孵育4h進行顯色實驗，可見藍紫色結晶。終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入100 μ L的B液，低速振蕩lOmin，使結晶充分溶解。選擇490nm為測量波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔吸光度值(A值)。并根據(jù)A值計算細胞生長抑制率(GI) = (AO-Ai)/A0，其中GI表示藥物對細胞增殖抑制率，Ai表示實驗組細胞A值，AO表示對照組細胞A值，光鏡監(jiān)控細胞形態(tài)變化。[0029]表1 TSN-GA-Sal B為1:6:9時對人HSC增值的影響
[0030]
【權利要求】
1. 一種治療肝纖維化的藥物組合物，所屬組合物由原料藥丹參酮IIA、丹參酚酸B及甘草次酸組成，所述原料藥的重量配比為:以丹參酮IIA為I重量份計，丹參酚酸B為1-12重量份，甘草次酸為1-9重量份。
2.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，所述原料配比為:以丹參酮IIA為I重量份計，丹參酹酸B為9重量份,甘草次酸為6重量份。
3.—種藥物制劑，所述藥物制劑含有權利要求1或2所述原料藥組分，及制藥上可接受的賦形劑。
4.權利要求3所述的藥物制劑，其中所述制劑為原料藥與賦形劑制成的脂質體。
5.根據(jù)權利要求3所述的藥物制劑，所述脂質體的處方組成為:丹參酮IIA為I重量份，丹參酚酸B為9重量份，甘草次酸為6重量份，磷脂為70-80重量份，膽固醇為10-20重量份。
6.一種制備權利要求4或5所述脂質體的方法，所述方法包括:稱取處方量磷脂、膽固醇、甘草次酸及丹參酮ΠΑ，溶于共溶的有機溶劑中，蒸發(fā)除去有機溶劑，形成均勻透明的薄膜，加入純水使薄膜溶脹水合。得到的甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液進一步勻化處理；另取丹參酚酸B溶于甘氨酸-鹽酸緩沖液中，溶解，加入甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液中，水浴搖勻或超聲分散即得甘草次酸-丹參酮IIA-丹參酚酸B復方脂質體。
7.權利要求3所述的藥物制劑，所述制劑為凍干粉針劑。
8.權利要求7所述的藥物制劑，所述凍干粉針的處方為:丹參酮IIA為I重量份，丹參酚酸B為9重量份，甘草次酸為6重量份，磷脂為70-80重量份，膽固醇為10-20重量份，凍干支持劑為9重量份,所述凍干支持劑選自鹿糖、甘露醇或山梨醇。
9.一種制備權利要求7或8所述凍干粉針的方法，所述方法包括:稱取處方量磷脂、膽固醇、甘草次酸及丹參酮II A，溶于共溶的有機溶劑中，蒸發(fā)除去有機溶劑，形成均勻透明的薄膜，加入純水使薄膜溶脹水合。得到的甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液進一步勻化處理；另取丹參酚酸B溶于甘氨酸-鹽酸緩沖液中，溶解，加入甘草次酸-丹參酮IIA脂質體混懸液中，水浴搖勻或超聲分散即得甘草次酸-丹參酮IIA-丹參酚酸B復方脂質體，分裝，加入支持劑冷凍干燥，即得。
【文檔編號】A61K9/127GK103520182SQ201310496973
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月22日 優(yōu)先權日:2013年10月22日
【發(fā)明者】王秀麗, 林珈好, 王玉蓉 申請人:王秀麗