一種白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種白花油麻藤提取物的新用途，該新用途是白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。所述白花油麻藤提取物是按如下方法制備的：以白花油麻藤為原料，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，大孔吸附樹(shù)脂純化技術(shù)分別得到白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C，按一定比例混合，即為白花油麻藤提取物。本發(fā)明所提供的白花油麻藤提取物對(duì)制備治療白血病藥物具有重要意義。
【專利說(shuō)明】一種白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種中藥材提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用，具體是涉及一種白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]白血病是起源造血系統(tǒng)的、以骨髓或其他造血組織中產(chǎn)生和積聚大量幼稚和異常白細(xì)胞為特點(diǎn)的惡性疾病。從形式看白血病細(xì)胞大多數(shù)是未成熟和形態(tài)異常的白細(xì)胞；在功能上，白血病細(xì)胞有著與腫瘤細(xì)胞相同的特點(diǎn):白血病細(xì)胞呈腫瘤性增值，無(wú)法控制，常導(dǎo)致骨髓造血功能的抑制和衰竭，致病人出現(xiàn)貧血、中性粒細(xì)胞和血小板減少，白血病細(xì)胞可浸潤(rùn)全身各種組織與臟器，使各個(gè)臟器的功能受損，如脾、肝、淋巴結(jié)、腦膜、皮膚等，產(chǎn)生肝、脾、淋巴結(jié)腫大、頭痛、頸強(qiáng)直等臨床癥狀和體征；也可表現(xiàn)為局部的腫瘤，例如浸潤(rùn)骨膜下時(shí)，可聚集成淡綠色腫塊，俗稱綠色瘤，如乳突綠色瘤、硬腦膜綠色瘤、脊椎綠色瘤、骨盆綠色瘤等，并可早于白血病前出現(xiàn)于臨床。由于白血病細(xì)胞源于血液系統(tǒng)，又具有腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)，所以人們習(xí)慣上稱他為血癌。白血病的分布是世界性的，占癌癥總發(fā)病率的5%左右，發(fā)病以兒童和青年居多。我國(guó)白血病患者約為3-4人/10萬(wàn)人口，男性多于女性。在我國(guó)各年齡組惡性腫瘤的死亡率中白血病占第6位(男性)和第8位(女性)，在兒童及35歲以下的人群中則占第I位。白血病按白細(xì)胞發(fā)育成熟的程度區(qū)分，可分為急性、慢性兩種；按白細(xì)胞的不同類型來(lái)區(qū)分，可分為淋巴細(xì)胞型、粒細(xì)胞型、單核細(xì)胞型、漿細(xì)胞型、巨核細(xì)胞型白血病，有時(shí)也可由兩種細(xì)胞混合而成，如粒一單細(xì)胞性白血病。
[0003]目前白血病的治療主要依靠化療，治療白血病的藥物也比較多，中藥西藥均有，常見(jiàn)的西藥有甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、三尖杉酯堿、干擾素等，中成藥有珍香膠囊、復(fù)方斑蝥膠囊等，這些藥物通過(guò)不同的機(jī)制對(duì)白血病進(jìn)行治療，其中有細(xì)胞毒性藥物、誘導(dǎo)分化藥物等。細(xì)胞毒性藥物雖然可以殺傷大量的白血病細(xì)胞，減少體內(nèi)的白血病負(fù)荷，但副作用較多，如殺傷、抑制正常造 血細(xì)胞，導(dǎo)致貧血、出血；抑制正常免疫功能，機(jī)體免疫力下降，容易合并感染；損傷胃腸道粘膜，導(dǎo)致厭食惡心、嘔吐；還會(huì)影響心肝腎功能，而且還可使第二腫瘤發(fā)生率增加。此外,這些藥物劑量再大，也不可能完全殺滅體內(nèi)的白血病細(xì)胞,而殘留的白血病細(xì)胞是疾病復(fù)發(fā)的根源。誘導(dǎo)分化治療是指應(yīng)用能夠促進(jìn)白血病細(xì)胞分化成熟或能夠調(diào)節(jié)白血病細(xì)胞表型以增強(qiáng)其對(duì)藥物敏感性的誘導(dǎo)分化劑。目前應(yīng)用最有效的是全反式維甲酸治療急性早幼粒細(xì)胞白血病，全反式維甲酸已成為急性早幼粒細(xì)胞白血病誘導(dǎo)緩解的首選藥物。
[0004]干擾素是一種單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。分為a、P、Y3種。自80年代以來(lái)，許多研究顯示，干擾素(尤其是a-干擾素及Y-干擾素)除具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)的作用外，還具有明顯的抗細(xì)胞增值作用。目前干擾素已被用于治療多種白血病。干擾素的治療主要顯示對(duì)慢粒(慢性期)、毛細(xì)胞白血病，慢淋等慢性白血病是有幫助的。由于干擾素治療費(fèi)用昂貴、大劑量是副作用多(如行動(dòng)能力降低、治理減退等)，目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用尚不
曰 o[0005]上述藥物有的具有較強(qiáng)的毒性，在治療白血病的同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞液有殺傷作用，有的效果不明顯，有的效果雖然好但價(jià)格昂貴。中藥在白脈病治療上已表現(xiàn)出一定的效果，并且由于中藥毒性低，副作用少而越來(lái)越受到關(guān)注。
[0006]白花油麻藤為豆科植物白花油麻藤M(fèi)ucuna birdwoodiana Tutcher的干燥種子。秋季采集果實(shí)，取出種子，曬干。收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥(第一冊(cè))》，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3-BC-0030-95。性平，味甘。具有清脾熱，通絡(luò)，強(qiáng)身之功效。用于肺病，脾病，經(jīng)絡(luò)病，培根病，中毒癥，外敷消腫。種仁滋補(bǔ)，增精液。為我國(guó)藏蒙等少數(shù)民族地區(qū)的常用藥物。但有關(guān)白花油麻藤的基礎(chǔ)研究尚十分有限，使該藥材的后續(xù)推廣和應(yīng)用受到限制。現(xiàn)代研究關(guān)于白花油麻藤的化學(xué)成分及藥理作用鮮有報(bào)道。
[0007]國(guó)內(nèi)專利檢索結(jié)果，未見(jiàn)白花油麻藤相關(guān)專利。 [0008]上述文獻(xiàn)及專利等，尚未見(jiàn)白花油麻藤或白花油麻藤提取物用于制備治療白血病藥物的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于提供一種白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
本發(fā)明所用白花油麻藤為豆科植物白花油麻藤M(fèi)ucuna birdwoodiana Tutcher的干燥種子。
[0011]本發(fā)明一種白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用，所述白花油麻藤提取物的制備方法為:
(1)白花油麻藤，粉碎，過(guò)10-50目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度400C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時(shí)間l_2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C-80°C溫浸提取，提取次數(shù)為2-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-15倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ；
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ；
(4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C，其中一種或兩種或三種按一定比例混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0012]白花油麻藤提取物的制備方法為:
(1)白花油麻藤，粉碎，過(guò)10-50目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度400C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時(shí)間l_2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C-80 °C溫浸提取，提取次數(shù)為2-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-15倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ；
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ；
(4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0013]優(yōu)選的白花油麻藤提取物的制備方法為:
(1)白花油麻藤，粉碎，過(guò)30目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度45°C、萃取壓力25MPa、萃取時(shí)間2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度80%乙醇為溶劑，在70°C溫浸提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的12倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ;
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)HPD600大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度50%的乙醇溶液洗脫，收集50%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ；
(4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
`[0014]本發(fā)明的的白花油麻藤提取物的制備方法，其特征在于:所采用的大孔吸附樹(shù)脂為HPD600大孔吸附樹(shù)脂、DlOl大孔吸附樹(shù)脂。
[0015]本發(fā)明的白花油麻藤提取物，通過(guò)加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué)上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
[0016]本發(fā)明的的白花油麻藤提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
[0017]本發(fā)明的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
[0019]本發(fā)明首次對(duì)白花油麻藤采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)、大孔吸附樹(shù)脂純化技術(shù)等進(jìn)行治療白血病提取物制備研究，分離得到了具有治療白血病活性的提取物，包括白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B和白花油麻藤提取物C。
[0020]本發(fā)明首次以豆科植物白花油麻藤M(fèi)ucuna birdwoodiana Tutcher的干燥種子為原料，制備提取物用于治療白血病。本發(fā)明首次探索研究并分離得到了白花油麻藤具有治療白血病的提取物。本發(fā)明的白花油麻藤提取物能夠抑制白血病細(xì)胞(HL-60細(xì)胞)增殖和誘導(dǎo)白血病細(xì)胞(HL-60細(xì)胞)凋亡，因此，可以用來(lái)對(duì)白血病進(jìn)行治療。
【具體實(shí)施方式】[0021]下面通過(guò)具體實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例對(duì)一種白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用做進(jìn)一步說(shuō)明，但不限于本發(fā)明。
[0022]實(shí)施例1:白花油麻藤提取物的制備
(1)白花油麻藤26kg，粉碎，過(guò)30目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度45°C、萃取壓力25MPa、萃取時(shí)間2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度80%乙醇為溶劑，在70°C溫浸提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的12倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ;
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)HPD600大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度50%的乙醇溶液洗脫，收集50%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ；
(4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0023]實(shí)施例2:白花油麻藤提取物的制備
(O白花油麻藤20kg，粉碎，過(guò)10目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度40-°C、萃取壓力20MPa、萃取時(shí)間lh，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度70%乙醇為溶劑，在50°C溫浸提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ;
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為I次，每次提取時(shí)間為3小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%的乙醇溶液洗脫，收集30%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ；
(4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0024]實(shí)施例3:白花油麻藤提取物的制備
(1)白花油麻藤19kg，粉碎，過(guò)50目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度50°C、萃取壓力30MPa、萃取時(shí)間2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度95%乙醇為溶劑，在80°C溫浸提取，提取次數(shù)為4次，每次提取時(shí)間為3小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的15倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ;
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為4次，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的8倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)HPD600大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度70%的乙醇溶液洗脫，收集70%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ；(4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0025]實(shí)施例4:白花油麻藤提取物片劑的制備
取實(shí)施例2白花油麻藤提取物310g，加入淀粉120g，混勻，制粒，干燥，過(guò)篩，加微晶纖維素30g，硬脂酸鎂3.5g，混勻，壓制成1000片，即得白花油麻藤提取物片劑。
[0026]實(shí)施例5:白花油麻藤提取物顆粒劑的制備 取實(shí)施例1白花油麻藤提取物225g，加入糊精100g，混勻，制粒，干燥，整粒，即得白花油麻藤提取物顆粒劑。
[0027]實(shí)施例6:白花油麻藤提取物膠囊的制備
取實(shí)施例3白花油麻藤提取物265g，加入淀粉85g，混勻，制粒，干燥，整粒，裝膠囊1000粒，即得白花油麻藤提取物膠囊。
[0028]實(shí)驗(yàn)例1:白花油麻藤各提取物抑制HL-60細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡試驗(yàn) I材料和方法
1.1材料:RPMI1640培養(yǎng)基購(gòu)于Gibco公司；四甲基偶氮唑鹽(MTT)、羅丹明123為Sigma公司產(chǎn)品；Caspase_3, 9分光光度法檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京凱基生物有限公司；其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。白花油麻藤提取物、白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C (實(shí)施例1方法制備得到，批號(hào)分別為:20110909、20110910、20110911、20110912)。
[0029]1.2細(xì)胞培養(yǎng):人早幼粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞株HL-60購(gòu)于中科院上海細(xì)胞生物研究所，培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，青霉素100kU/L，鏈霉素100 mg/L, 370C，5%C02，飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0030]1.3人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的分離:無(wú)菌采集健康供者靜脈血，肝素抗凝(每毫升全血加0.1ml的200U/ml肝素鈉溶液)，PBS等倍稀釋血液，1:4加入人淋巴細(xì)胞分離液，2000rpm離心20min,收集乳白層后用無(wú)血清RPM1-1640培養(yǎng)基1500rpml0min離心洗滌2次，獲得單個(gè)核細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)拒染率大于95%，重懸于10% FCS的RPM1-1640培養(yǎng)基中備用。
[0031]1.4白花油麻藤各提取物對(duì)HL-60細(xì)胞和人PBMC生長(zhǎng)的影響:接種HL-60細(xì)胞和人PBMC與96孔板，每孔2 X IO4個(gè)細(xì)胞(IOOul)。37。。、5% CO2條件下培養(yǎng)24h后，實(shí)驗(yàn)組一次加50ug/mL白花油麻藤提取物、50ug/mL白花油麻藤提取物A、50ug/mL白花油麻藤提取物B、50ug/mL白花油麻藤提取物C，繼續(xù)分別培養(yǎng)24、48、72h后，終止培養(yǎng)，設(shè)只加培養(yǎng)液的對(duì)照組，每個(gè)劑量組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前4h，每孔加入20ul MTT溶液(5g/L)，繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)，小心吸棄上清液，每孔加入150 uL DMSO,震蕩lOmin，選擇570nm波長(zhǎng)，在自動(dòng)酶聯(lián)檢測(cè)儀上測(cè)定各孔吸光度(A)值，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，并計(jì)算其生長(zhǎng)抑制率(Cl)。Cl=(陰性對(duì)照組A值-實(shí)驗(yàn)組A值)/陰性對(duì)照組A值X 100%。
[0032]1.5流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡率:收集50ug/mL白花油麻藤提取物、50ug/mL白花油麻藤提取物A、50ug/mL白花油麻藤提取物B、50ug/mL白花油麻藤提取物C處理48h的各組細(xì)胞，PBS洗滌2次，加入預(yù)冷的70%乙醇于-20°C固定24h，離心洗滌后加入200uLPI染液，50ul RNA酶，4°C避光放置20min，1500rpm離心5min。調(diào)整細(xì)胞濃度為I X IO5個(gè)/ml~I X IO6個(gè)/ml，上流式細(xì)胞儀分析，激發(fā)光源為氫離子激光，激發(fā)波長(zhǎng)為488nm。[0033]1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析:軟件SPSS13.0處理，組間比較采用單因素方差分析。
[0034]2 結(jié)果
2.1白花油麻藤各提取物對(duì)HL-60細(xì)胞及PBMC生長(zhǎng)的影響
對(duì)照組HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)活躍,經(jīng)50ug/mL的白花油麻藤提取物、50ug/mL的白花油麻藤提取物A、50ug/mL的白花油麻藤提取物B、50ug/mL的白花油麻藤提取物C處理24、48、72h后，HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)均不同程度的減慢，并呈時(shí)間、濃度依賴性。在相同濃度下，培養(yǎng)72h白花油麻藤各提取物對(duì)人PBMC幾乎無(wú)抑制作用，與HL-60細(xì)胞比較有顯著性差異(P〈0.05)(見(jiàn)表1)。
[0035]表1白花油麻藤各提取物對(duì)HL-60細(xì)胞增殖的影響(n=4)
【權(quán)利要求】
1.一種白花油麻藤提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用，所述白花油麻藤提取物的制備方法為: (1)白花油麻藤，粉碎，過(guò)10-50目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度40°C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時(shí)間l-2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C-80°C溫浸提取，提取次數(shù)為2-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-15倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ； (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ； (4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C，其中一種或兩種或三種按一定比例混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物的制備方法為: (1)白花油麻藤，粉碎，過(guò)10-50目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度400C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時(shí)間l_2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C-80°C溫浸提取，提取次數(shù)為2-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-15倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ； (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ; (4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物的制備方法為: (1)白花油麻藤，粉碎，過(guò)30目篩，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，萃取溫度45°C、萃取壓力25MPa、萃取時(shí)間2h，萃取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，即得白花油麻藤提取物A，超臨界二氧化碳萃取后的白花油麻藤藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的白花油麻藤藥渣A用濃度80%乙醇為溶劑，在70°C溫浸提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的12倍，濾過(guò)，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得白花油麻藤提取物B ; (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，通過(guò)HPD600大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度50%的乙醇溶液洗脫，收集50%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物C ； (4)上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2所述的白花油麻藤提取物的制備方法，其特征在于:所采用的大孔吸附樹(shù)脂為HPD600大孔吸附樹(shù)脂、DlOl大孔吸附樹(shù)脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的白花油麻藤提取物，通過(guò)加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué)上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B、白花油麻藤提取物C與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物 。
【文檔編號(hào)】A61K45/00GK103610734SQ201310527764
【公開(kāi)日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】孔倩倩 申請(qǐng)人:濟(jì)南星懿醫(yī)藥技術(shù)有限公司