一種具有抗腫瘤活性的中藥提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種具有抗腫瘤活性的中藥提取物，該中藥提取物從馬甲子的葉片中提取得到，并公開(kāi)了制備其使用乙醇溶液進(jìn)行醇提的方法，以及所述的中藥提取物作為制備治療腫瘤藥物的用途，所述中藥提取物對(duì)腫瘤具有良好的抑制效果。
【專利說(shuō)明】一種具有抗腫瘤活性的中藥提取物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取及應(yīng)用領(lǐng)域，具體是指一種具有抗腫瘤活性的馬甲子提取物及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤是危害人類健康最嚴(yán)重的一類常見(jiàn)病、多發(fā)病。中藥治療腫瘤在穩(wěn)定瘤體，調(diào)節(jié)機(jī)體功能，增加免疫能力，改善臨床癥狀，減輕放化療毒副作用，延長(zhǎng)帶瘤生存時(shí)間方面有獨(dú)特療效。目前，祖國(guó)傳統(tǒng)中藥在腫瘤的治療方面己取得了令人注目的成就，大力開(kāi)展中醫(yī)藥治療腫瘤的研究是一項(xiàng)非常有意義的探索。植物不僅是新型抗腫瘤藥的重要來(lái)源之一，如長(zhǎng)春新堿、喜樹(shù)堿、紫杉醇等抗腫瘤藥的發(fā)現(xiàn)和用途，而且植物藥對(duì)機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)作用也越來(lái)越受到人們的關(guān)注。研究表明不少中草藥及其有效成分對(duì)免疫具有調(diào)節(jié)作用，這種調(diào)節(jié)作用既有增強(qiáng)作用也有抑制作用，有些則有雙向調(diào)節(jié)作用，如黃芪、人參、當(dāng)歸、淫羊藿、菟絲子、刺五加、蟲(chóng)草、靈芝等等被證實(shí)對(duì)免疫功能具有增強(qiáng)作用，包括對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫、吞噬細(xì)胞吞噬功能、細(xì)胞因子的釋放等多方面的明顯增強(qiáng)作用，在抗腫瘤、抗感染等方面有著廣泛用途的前景。
[0003]藥物治療作為治療腫瘤的重要手段之一，雖然取得了一定的效果，但對(duì)于大多數(shù)類型的腫瘤，特別是對(duì)發(fā)病率較高的實(shí)體瘤的藥物治療效果仍然難以令人滿意，因此發(fā)現(xiàn)與研究新型有效的抗腫瘤藥物是生物醫(yī)藥科研領(lǐng)域的重大課題與長(zhǎng)期任務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種中藥提取物，該中藥提取物是由馬甲子葉片經(jīng)過(guò)醇提提取的，該中藥提取物具有良好抗腫瘤活性。
[0005]本發(fā)明提供了一種具有抗腫瘤活性的中藥提取物，該中藥提取物從馬甲子的葉片中提取得到。馬甲子是一種常見(jiàn)藥用植物，據(jù)報(bào)道枝葉根花果均可藥用。收載于《中藥大辭典民間》及一些地方藥物志，民間有不少腫瘤患者長(zhǎng)期服用，取得滿意的治療效果，基于民間用途的經(jīng)驗(yàn)，選擇其樹(shù)葉提取分離，對(duì)粗提物和不同極性提取物的體外抗腫瘤活性極進(jìn)行了初篩，表明馬甲子葉片的提取物具有良好的抗腫瘤活性。
[0006]進(jìn)一步優(yōu)選的被提取馬甲子的葉片為鮮葉。分別對(duì)馬甲子的鮮葉與馬甲子葉干品進(jìn)行提取以獲得提取物，馬甲子葉干品的提取物沒(méi)有抗腫瘤活性，故選擇馬甲子鮮葉進(jìn)行提取。
[0007]進(jìn)一步地，所述被提取的馬甲子的葉片為經(jīng)過(guò)乙醇浸泡并干燥的葉片。使用乙醇浸泡馬甲子的鮮葉，之后避光晾干，再經(jīng)過(guò)乙醇提取，依舊可以獲得該中藥提取物的抗腫瘤的活性成分，且與使用鮮葉提取效果相同，可以滿足提取物的抗腫瘤效果，方便存放與實(shí)驗(yàn)。
[0008]進(jìn)一步地，所述中藥提取物主要成分包括三萜類，黃酮類，生物堿類以及香豆素類。取樣品lg，溶于25ml無(wú)水乙醇中，離心。取上清液2ml，無(wú)水乙醇稀釋5倍，至終濃度為0.008g/ml，通過(guò)對(duì)其的成分做反應(yīng)測(cè)試，最后確定含有三萜類，黃酮類，生物堿類以及香豆素類幾類成分。
[0009]進(jìn)一步地，所述Ig中藥提取物中，三萜類成分含量為0.01~0.05g，黃酮類成分含量為0.2^0.5g，生物堿類成分含量為0.02、.05g,香豆素類成分含量為0.01~0.lg。
[0010]本發(fā)明還提供了一種制備上述中藥提取物的方法，所述方法為使用乙醇溶液醇提。制備馬甲子葉片中的提取物的方法可以使用醇提和水提，根據(jù)提取結(jié)果顯示，醇提效果較優(yōu)，故優(yōu)選醇提作為制備上述中藥提取物的主要方法?；谝掖级拘孕?，易揮發(fā)等優(yōu)良特性，選擇乙醇溶液作為醇提的主要溶劑。
[0011]進(jìn)一步地，所述醇提的具體步驟為:
(1)取馬甲子葉片，加入5-15倍量的50%~95%乙醇浸泡；
(2)將葉片進(jìn)行粉碎，再加入5-15倍量的50%~95%乙醇浸潰，提取醇溶性成分；
(3)收集提取液，3(T70°C下減壓回收乙醇至無(wú)醇味，得到的提取物；
(4)將提取物濃縮液進(jìn)一步冷凍干燥即得馬甲子葉片醇提物。
[0012]本發(fā)明提供的中藥提取物作為制備治療腫瘤藥物的用途。
[0013]進(jìn)一步地，所述中藥提取物通過(guò)石油醚或乙酸乙酯進(jìn)行萃取處理。將該中藥提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，回收溶劑并凍干，得到3個(gè)極性部位的萃取物，均用異丙醇溶解，然后測(cè)試其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果，結(jié)果該中藥提取物的石油醚部位和乙酸乙酯部位具有很好的抗腫瘤活性，正丁醇提取部位顯示無(wú)抗腫瘤活性，乙酸乙酯部位表現(xiàn)更好的抗腫瘤活性。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果:
本發(fā)明的中藥提取物具有良好的抗腫瘤效果，加快了抗腫瘤藥物的研究進(jìn)程。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例
[0016]1、馬甲子葉片提取
取馬甲子鮮葉Ikg,加入8-10倍量的95%乙醇浸泡1-2天后(作用:1、使鮮葉中的活性酶系失活，避免對(duì)有效成分的破壞；2、使鮮葉硬度增加，更利于下一步的粉碎流程)，將鮮葉進(jìn)行粉碎，再加入10倍量的95%乙醇(60-100%乙醇提取)浸潰3天提取醇溶性成分。收集提取液，3(T40°C下加壓回收乙醇至無(wú)醇味，得到的提取物濃縮液進(jìn)一步冷凍干燥即得馬甲子鮮葉醇提物。
[0017]將提取殘?jiān)栏?，加?^10倍量的水浸潰3天提取水溶性成分，收集提取液，冷凍干燥即得馬甲子鮮葉水提物。
[0018]馬甲子葉干品(室溫自然干燥)按照上述方法進(jìn)行提取，獲得馬甲子葉干品醇提物及水提物。
[0019]馬甲子鮮葉片經(jīng)過(guò)乙醇浸泡，之后置于避光處晾干，獲得干葉片，所得馬甲子經(jīng)過(guò)乙醇浸泡并晾干的葉片按照上述方法進(jìn)行提取，獲得醇提物及水提物。
[0020]2、抗腫瘤活性比較馬甲子葉片提取物的抗腫瘤活性研究。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的多種腫瘤細(xì)胞(采用的腫瘤細(xì)胞株有如下幾種:宮頸癌細(xì)胞株Hela;人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721 ;人肺癌細(xì)胞株A549 ;人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2 ;白血病細(xì)胞株K562 ;胃癌細(xì)胞株MGC-803 ; ),2000 rpm離心5 min，用含有含10%胎牛血清的相應(yīng)培養(yǎng)液將沉淀細(xì)胞濃度調(diào)為I X IO5個(gè)/ml細(xì)胞懸液后，將細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板。每孔加細(xì)胞懸液200 μ 1，然后分別加入一定濃度無(wú)菌的提取物溶液，使每孔內(nèi)的提取物終濃度為0.02,0.1,0.2,0.4,0.5,0.8、1.0,2.0mg/ml，混勻后置37 °C、5 % CO2孵箱中培養(yǎng)24 h后，析出培養(yǎng)液并用PBS洗滌兩次，再向每孔加入5mg/ml的MTT磷酸緩沖液20 μ I以及150 μ I培養(yǎng)基，同樣條件下繼續(xù)培養(yǎng)4 h后終止培養(yǎng)。2000 rpm離心5 min，然后棄去培養(yǎng)板孔內(nèi)的培養(yǎng)液，每孔加入150 μ I DMSO，震蕩10min，使形成的甲臜顆粒充分溶解后，酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光值。選擇測(cè)定波長(zhǎng)為570 nm。計(jì)算提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞的IC50。結(jié)果見(jiàn)表1。由結(jié)果可知，馬甲子鮮葉醇提物及馬甲子經(jīng)過(guò)乙醇浸泡并晾干的葉片醇提取物具有良好的腫瘤抑制效果，其他幾種提取物并不具有抗腫瘤活性，分析原因可能與活性提取物的溶解性以及穩(wěn)定性有關(guān)。
[0021]馬甲子提取物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用:
【權(quán)利要求】
1.ー種具有抗腫瘤活性的中藥提取物，其特征在于:該中藥提取物從馬甲子的葉片中提取得到。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種具有抗腫瘤活性的中藥提取物，其特征在于:所述被提取的馬甲子的葉片為鮮葉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種具有抗腫瘤活性的中藥提取物，其特征在于:所述被提取的馬甲子的葉片為經(jīng)過(guò)こ醇浸泡并干燥的葉片。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的ー種具有抗腫瘤活性的中藥提取物，其特征在于:所述中藥提取物主要成分包括三萜類，黃酮類，生物堿類以及香豆素類。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的ー種具有抗腫瘤活性的中藥提取物，其特征在于:所述Ig中藥提取物中，三萜類成分含量為0.0r0.05g,黃酮類成分含量為0.2^0.5g，生物堿類成分含量為0.02~0.05g，香豆素類成分含量為0.0r0.lg。
6.ー種制備權(quán)利要求1、任意一項(xiàng)所述中藥提取物的方法，其特征在于:所述方法為使用こ醇溶液醇提。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于:所述醇提的具體步驟為: (1)取馬甲子葉片，加入5-15倍量的509^95%こ醇浸泡； (2)將上述こ醇浸泡葉片進(jìn)行粉碎，再加入5-15倍量的509^95%こ醇浸潰，提取醇溶性成分； (3)收集提取液，3(T70°C下減壓回收こ醇至無(wú)醇味，得到的提取物； (4)將提取物濃縮液進(jìn)ー步冷凍干燥即得馬甲子葉片醇提物。
8.一種以權(quán)利要求f 5任意一項(xiàng)所述的中藥提取物作為制備治療腫瘤藥物的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的中藥提取物作為制備治療腫瘤藥物的用途，其特征在于:所述中藥提取物通過(guò)石油醚或こ酸こ酯進(jìn)行萃取處理。
【文檔編號(hào)】A61K127/00GK103550323SQ201310528511
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】徐超群, 袁志翔, 阮佳, 李東曉, 詹雁, 譚鐳 申請(qǐng)人:四川省中醫(yī)藥科學(xué)院