牛膝提取物的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種牛膝提取物的制備方法及其應(yīng)用，所述牛膝提取物在TLC硅膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應(yīng)呈淺藍(lán)色，其HRMS給出的準(zhǔn)分子離子峰m/z204.5126[M+Na]+。本發(fā)明通過藥效實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：本發(fā)明方法制備得到的牛膝提取物具有顯著的降尿酸效果，其對小鼠的灌胃最大耐受量大于相當(dāng)于生藥240g/kg，具有極大的安全性。
【專利說明】牛膝提取物的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體涉及一種牛膝提取物的制備方法及其在制備降尿酸藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人們物質(zhì)生活不斷豐富，生活節(jié)奏日益加快，高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)病率不斷上升。當(dāng)人體的血清尿酸值≥416 μ mo I / L(710 mg / dl)，稱為高尿酸血癥。痛風(fēng)則是由于嘌呤類物質(zhì)代謝紊亂，產(chǎn)生尿酸過多和(或)尿酸排泄減少，血尿酸濃度持續(xù)增高導(dǎo)致尿酸鹽結(jié)晶沉積軟組織所致的一組代謝性疾病。痛風(fēng)的臨床特征是高尿酸血癥、反復(fù)發(fā)作的急性關(guān)節(jié)炎，以及痛風(fēng)石形成并沉積于關(guān)節(jié)、結(jié)締組織和腎臟，導(dǎo)致關(guān)節(jié)活動障礙或畸形，腎尿酸結(jié)石或痛風(fēng)性腎病。高尿酸血癥是痛風(fēng)的前提與重要生化基礎(chǔ)，痛風(fēng)患者在其病程中的某一階段必將有高尿酸血癥的存在。
[0003]由高尿酸血癥引發(fā)的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作時關(guān)節(jié)的紅腫熱痛，及高尿酸血癥與其他各種疾病的潛在關(guān)系，嚴(yán)重影響著高尿酸血癥和痛風(fēng)患者的日常生活和工作。因此，當(dāng)前對于降尿酸的藥物研究尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的一個目的在于提供一種牛膝提取物的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一個目的在于提供牛膝或其提取物在制備降尿酸藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種降尿酸藥物。
[0007]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
一種牛膝提取物的制備方法，包括如下步驟:
1)取牛膝粉碎后，用90~95%(V/V)的乙醇水溶液浸提，將浸提液減壓濃縮得浸膏；
2)將浸膏溶解于50~70°C的溫水中，冷卻后用氯仿萃取，減壓濃縮得到氯仿部分浸
膏；
3)氯仿部分浸膏經(jīng)硅膠柱層析，石油醚(6(T90°C)-丙酮(石油醚，50:1，20:1,10:1,5:1, 2:1，丙酮)梯度洗脫，TLC檢測，相同部分合并到一起，共分成10個部分；
4)部分5經(jīng)硅膠制備薄層，展開劑為石油醚:乙酸乙酯(5:1，V/V)，分離提純得到牛膝提取物，該物質(zhì)在TLC硅膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應(yīng)呈淺藍(lán)色，該化合物的HRMS給出的準(zhǔn)分子離子峰m/z 204.5126[M+Na] +。
[0008]作為優(yōu)選的，步驟I)是用93% (V/V)的乙醇水溶液提取2~4次。
[0009]牛膝或其提取物在制備降尿酸藥物或保健品中應(yīng)用。
[0010]所述牛膝提取物采用上述的方法制備得到。
[0011]一種降尿酸藥物，其主要成分為牛膝或其提取物。
[0012]所述牛膝提取物采用上述的方法制備得到。[0013]所述藥物還含有藥學(xué)上可以接受的載體和/或輔料。
[0014]所述藥物為口服制劑或注射液。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明通過藥效實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:本發(fā)明方法制備得到的牛膝提取物具有顯著的降尿酸效果，其對小鼠的灌胃最大耐受量大于相當(dāng)于生藥240g/kg，具有極大的安全性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為高尿酸血癥小鼠造模結(jié)果；
圖2為牛膝對小鼠高尿酸血癥的藥效試驗(yàn)的結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但并不局限于此。
[0018]實(shí)施例1牛膝提取物的制備方法
(1)取牛膝50kg用中藥粉碎機(jī)粉碎至粗粉，粉碎后用93%乙醇浸提(80LX3次)，減壓濃縮得總浸膏3800g ；
(2)總浸膏溶解在10.0L約60°C的溫?zé)崴?，冷卻后用氯仿萃取(3.0LX 10次)，減壓濃縮得氯仿部分浸膏1500g ；
(3)氯仿部分浸膏經(jīng)硅膠柱層析，石油醚(60~90°C)_丙酮(石油醚，50:1，20:1,10:1, 5:1, 2:1，丙酮)梯度洗脫，TLC檢測，相同部分合并到一起，共分成10個部分；
(4)部分5經(jīng)硅膠制備薄層，展開劑為石油醚:乙酸乙酯(5:1，V/V)，分離提純得到牛膝提取物12750mg，該物質(zhì)在TLC硅膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應(yīng)呈淺藍(lán)色，其HRMS給出的準(zhǔn)分子離子峰m/z 204.5126[M+Na] +。
[0019](5)往牛膝提取物中加入8 g/L羧甲基纖維素鈉水溶液，制備成牛膝提取物濃度為lmg/ml的溶液備用，進(jìn)行后面的動物灌胃做藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)。
[0020]實(shí)施例2牛膝提取物對小鼠的急性毒性試驗(yàn)
分組:將正常小鼠隨機(jī)均等分為四組:空白組(生理鹽水)、60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg牛膝提取物組，每組小鼠10只，體重20±2g，均為雄性。
[0021]灌胃試驗(yàn):各組小鼠均禁食>12h，分別為每組小鼠稱量體重，一次性為各組每只小鼠按體重灌胃以相應(yīng)藥品，觀察14天內(nèi)小鼠的狀態(tài)、行為活動及死亡情況，并進(jìn)行記錄。
[0022]空白組小鼠以生理鹽水灌胃后無一死亡，試驗(yàn)結(jié)束，小鼠精神和飲食欲均未見異常；60mg/kg牛膝提取物組小鼠灌胃后無一死亡，試驗(yàn)結(jié)束，小鼠精神和飲食欲均未見異常；120mg/kg牛膝提取物組小鼠中1號在灌藥后四肢無力，第2天死亡，2號小鼠第1天出現(xiàn)尾巴偶然僵直并抖動，精神緊張，隨后行為無異常，疑為個體現(xiàn)象，其余小鼠行為正常；240mg/kg牛膝提取物組小鼠 灌胃后無一死亡，試驗(yàn)結(jié)束時，小鼠精神和飲食欲均未見異常。
[0023]實(shí)施例3牛膝對小鼠高尿酸血癥的藥效試驗(yàn)
1、羧甲基纖維素鈉助懸劑的制備
電子稱量儀準(zhǔn)確稱取羧甲基纖維素鈉粉末，用生理鹽水配制濃度為8 g/L助懸劑。
[0024]2、造模劑的制備
氧嗪酸鉀造模劑的制備:稱取氧嗪酸鉀1.5g，加50ml羧甲基纖維素鈉助懸劑，超聲波助懸15min，得0.03g/ml氧嗪酸鉀造模劑；次黃嘌呤造模劑的制備:稱取次黃嘌呤0.3g，加50ml羧甲基纖維素鈉助懸劑，超聲波助懸15min，得0.006g/ml次黃嘌呤造模劑。
[0025]3、高尿酸血癥小鼠模型制造
分組:將正常小鼠隨機(jī)均等分為三組:空白組、單用氧嗪酸鉀(300mg/kg)模型組、氧嗪酸鉀(300mg/kg)和次黃嘌呤(60mg/kg)聯(lián)用模型組，每組小鼠10只，體重20±2g，均為雄性。
[0026]造模試驗(yàn):各組小鼠禁食>12h，分別為每組小鼠稱量體重，依體重確定小鼠實(shí)際給藥量，為各組每只小鼠腹腔注射，注射相應(yīng)藥品(空白組:生理鹽水、單用氧嗪酸鉀模型組:氧嗪酸鉀300mg/kg、氧嗪酸鉀和次黃嘌呤聯(lián)用模型組:氧嗪酸鉀300mg/kg和次黃嘌呤60mg/kg)o 2h之后，對各組小鼠眼球采血，3500r離心分離血清，取血清測試三組小鼠的血尿酸濃度。
[0027]統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)x±s表示，采用單因素方差分析，組間比較用檢驗(yàn)，P <0.05被認(rèn)為有顯著性差異。
[0028]本實(shí)驗(yàn)以氧嗪酸鉀(300mg/kg)和次黃嘌呤(60mg/kg)聯(lián)用制備高尿酸模型,經(jīng)過2h后，檢測血尿酸水平，發(fā)現(xiàn)明顯高于空白對照組，表明造模成功，見表1、圖1。
[0029]表1.小鼠高尿酸血癥造模試驗(yàn)血尿酸水平
【權(quán)利要求】
1.一種牛膝提取物的制備方法，包括如下步驟: 1)取牛膝粉碎后，用90~95%(V/V)的乙醇水溶液浸提，將浸提液減壓濃縮得浸膏； 2)將浸膏溶解于50~70°C的溫水中，冷卻后用氯仿萃取，減壓濃縮得到氯仿部分浸膏； 3)氯仿部分浸膏經(jīng)硅膠柱層析，石油醚(6(T90°C)-丙酮(石油醚，50:1，20:1,10:1,5:1, 2:1，丙酮)梯度洗脫，TLC檢測，相同部分合并到一起，共分成10個部分； 4)部分5經(jīng)硅膠制備薄層，展開劑為石油醚:乙酸乙酯(5:1，V/V)，分離提純得到牛膝提取物，該物質(zhì)在TLC硅膠薄層板上與10%的硫酸乙醇反應(yīng)呈淺藍(lán)色，其HRMS給出的準(zhǔn)分子離子峰 m/z 204.5126 [M+Na] +。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟I)是用93%(V/V)的乙醇水溶液提取2~4次。
3.牛膝或其提取物在制備降尿酸藥物或保健品中應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述牛膝提取物采用權(quán)利要求1或2所述的方法制備得到。
5.一種降尿酸藥物，其主要成分為牛膝或其提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的降尿酸要求，其特征在于，所述牛膝提取物采用權(quán)利要求1或2所述的方法制備得到。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征中在于，所述藥物還含有藥學(xué)上可以接受的載體和/或輔料。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于，所述藥物為口服制劑或注射液。
【文檔編號】A61K36/21GK103610716SQ201310567564
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月14日
【發(fā)明者】臧林泉, 臧詩蕾, 吳之喬 申請人:廣東藥學(xué)院