3-{2-[([1,1`-聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚的抗腫瘤應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了3-{2-[([1,1'-聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚的抗腫瘤應(yīng)用。本發(fā)明通過結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物信息學(xué)和生物學(xué)活性驗(yàn)證相結(jié)合的候選藥物篩選平臺(tái)，篩選出3-{2-[([1,1'-聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚這種小分子化合物，能夠應(yīng)用于抗腫瘤領(lǐng)域，或與其它藥物和手段聯(lián)合應(yīng)用于抗腫瘤領(lǐng)域。3-{2-[([1,1'-聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚能夠靶向抑制HAb18G/CD147蛋白，能夠應(yīng)用于制備與HAb18G/CD147蛋白高表達(dá)相關(guān)疾?。ㄈ缒[瘤，尤其是肝癌）的治療藥物。
【專利說(shuō)明】3-{2-[([1’T -聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚
的抗腫瘤應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及3-{2-[([1，1’-聯(lián)苯]-4-甲基）氨 基]-1-羥乙基}苯酚的抗腫瘤應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]肝癌是嚴(yán)重威脅人類生命健康的疾病之一，死亡率極高。目前治療肝癌的常用手 段為手術(shù)治療、放化療等。然而多數(shù)患者就診時(shí)已進(jìn)入晚期，不適宜手術(shù)切除，而放化療的 遠(yuǎn)期療效亦均較差。近年來(lái)，隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)、蛋白組學(xué)的不斷發(fā)展，肝癌的分子靶向 治療逐漸興起，并引起廣泛關(guān)注和高度重視。分子靶向治療是以肝癌細(xì)胞特異性分子標(biāo)志 物為靶點(diǎn)，選擇相應(yīng)的阻斷劑，達(dá)到抑制肝癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等功效。因此，尋找高特異性的標(biāo)志 物分子是分子靶向治療方法的前提和關(guān)鍵所在。
[0003]CD147分子，又稱為基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子，是細(xì)胞膜表面的糖蛋白分子，屬于 免疫球蛋白超家族的一員。研究表明，CD147分子在肺癌、肝癌、乳腺癌等諸多腫瘤中高表 達(dá)，并參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展、代謝、遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲轉(zhuǎn)移等生物功能。HAblSG/⑶147分子 是用肝癌單克隆抗體HAbl8篩選人肝癌cDNA文庫(kù)獲得的一個(gè)新的肝癌相關(guān)抗原，高表達(dá)于 人肝癌組織和一些高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞表面，屬于CD147家族新成員。研究表明，該分子是一 個(gè)新型通用型、有較好癌特異性的標(biāo)志物。因此，HAbl8G/CD147有望成為新藥篩選的特異 性靶標(biāo)。
[0004]隨著結(jié)構(gòu)生物學(xué)和生物信息學(xué)的不斷發(fā)展，基于蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的計(jì)算機(jī)輔助藥 物篩選技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。依靠不斷更新優(yōu)化的計(jì)算機(jī)軟件，實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)與化合物的對(duì)接和篩 選，既縮短了傳統(tǒng)藥物研發(fā)的周期，又能夠增強(qiáng)靶向性，大大提高了成藥效率。目前該技術(shù) 已經(jīng)得到了充分認(rèn)可和廣泛應(yīng)用。目前，尚無(wú)靶向HAbl8G/CD147的小分子藥物及候選化合 物，已經(jīng)研制出的靶向HAbl8G/⑶147的“碘[1311]美妥昔單抗注射液”利卡汀，雖然顯示 了很好的療效及安全性，但是和小分子藥物相比，生產(chǎn)成本昂貴等因素使其在臨床應(yīng)用中 有一定的局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0005]本發(fā)明的目的在于提供3- {2- [([1，1’ -聯(lián)苯]-4-甲基）氨基]-1-羥乙基}苯酚 的抗腫瘤應(yīng)用，3-{2-[([1，1’-聯(lián)苯]-4-甲基）氨基]-1-羥乙基}苯酚能夠在制備抗腫瘤 藥物中應(yīng)用。
[0006]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0007]3-{2_[([1，1’ -聯(lián)苯]_4_甲基）氨基]-1-羥乙基}苯酚在制備抗腫瘤藥物中的 應(yīng)用。
[0008]所述的抗腫瘤藥物為能夠與HAbl8G/CD147蛋白結(jié)合的藥物。
[0009]所述的抗腫瘤藥物為能夠與表達(dá)HAbl8G/CD147蛋白的腫瘤細(xì)胞結(jié)合的藥物。[0010]所述的抗腫瘤藥物為能夠阻斷HAbl8G/CD147蛋白功能位點(diǎn)的藥物。
[0011]所述的抗腫瘤藥物為能夠靶向抑制HAbl8G/⑶147蛋白生物學(xué)活性的藥物。
[0012]所述的抗腫瘤藥物包括能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的藥物。
[0013]所述的抗腫瘤藥物包括能夠抑制腫瘤細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)的藥物。
[0014]所述的抗腫瘤藥物包括能夠抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的藥物。
[0015]所述的抗腫瘤藥物包括抗肝癌藥物。
[0016]所述的抗肝癌藥物包括能夠抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲轉(zhuǎn)移的藥物。
[0017]相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為:
[0018]本發(fā)明提供了 3-{2-[([1，1’_聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物信息學(xué)和生物學(xué)活性驗(yàn)證相結(jié)合的候選藥物篩選平臺(tái)，篩選出3-{2-[([1，I’ -聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚這種小分子化合物，能夠應(yīng)用于抗腫瘤領(lǐng)域，或與其它藥物和手段聯(lián)合應(yīng)用于抗腫瘤領(lǐng)域。
[0019]進(jìn)一步的，本發(fā)明提供的3-{2_[([1，I’ -聯(lián)苯]-4_甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚是針對(duì)HAbl8G/CD147蛋白的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)出的，是首個(gè)以HAbl8G/CD147蛋白為靶點(diǎn)的抗肝癌小分子化合物，3-{2-[([1，I’ -聯(lián)苯]-4_甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚與HAblSG/CD147蛋白特異性結(jié)合后，能夠有效靶向阻斷HAbl8G/CD147蛋白分子的功能位點(diǎn)，能夠作為HAbl8G/CD147蛋白的抑制劑，從而能夠用于制備抗腫瘤藥物，尤其是用于制備治療HAbl8G/CD147蛋白高表達(dá)的肝癌細(xì)胞的藥物，具有能夠抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
[0020]本發(fā)明提供的3-{2-[([1，1’_聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚與HAbl8G/CD147 蛋白的親和力常數(shù)為 3.6 X 10_4mol/L。將 3_{2_[([1，I’-聯(lián)苯]_4_ 甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚加入肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)液中后，檢測(cè)到吸光值降低，說(shuō)明3-{2-[([1，l-聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚能夠抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。并且與對(duì)照組相比，加入3-{2-[([1，I’ -聯(lián)苯]-4_甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚的處理組的肝癌細(xì)胞的遷移率和侵襲轉(zhuǎn)移數(shù)降低。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1是3-{2-[([1，I’-聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]_1_羥乙基}苯酚和HAbl8G/CD147蛋白體外表面等離子共振結(jié)果圖。
[0022]圖2是向肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入不同濃度的3-{2-[([1，1’_聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚后的吸光值圖，其中3-{2-[([1，1’_聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚的濃度分別為 0,3.125ymol/L、6.25 μ mol/L、12.5 μ mol/L。
[0023]圖3是加入3- {2- [([1，I’ -聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚后肝癌細(xì)胞的遷移結(jié)果，其中a~d分別為實(shí)驗(yàn)組I~4的肝癌細(xì)胞的遷移顯微照片，e為實(shí)驗(yàn)組I~4的肝癌細(xì)胞的遷移率圖；其中實(shí)驗(yàn)組I為純的SMMC-7721細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組2為HAbl8抗體陽(yáng)性對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組3為加入5 μ mol/L的3_{2_[ ([I, I’ -聯(lián)苯]_4_甲基)氛基]-1-輕乙基}苯酹的實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組4為加入10 μ mol/L的3_{2_[ ([I, I’ _聯(lián)苯]_4_甲基)氨基]_1_輕乙基}苯酚的實(shí)驗(yàn)組。[0024]圖4是加入3- {2- [([1，I’ -聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚后肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移結(jié)果，其中a為加入O μ mol/L的3_{2_[ ([1，I’ -聯(lián)苯]_4_甲基)氨基]_1_羥乙基}苯酚的肝癌細(xì)胞的顯微照片，b為加入10 μ mol/L的3-{2-[([1，I’-聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚的肝癌細(xì)胞的顯微照片，c為統(tǒng)計(jì)的細(xì)胞數(shù)柱狀圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。此部分僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人在《分子克隆:實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(紐約,冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，New YorkiColdSpring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述條件,或按照制造廠商所建議的條件。
[0026]除非另行定義，本發(fā)明中所使用的所有專業(yè)和科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。下述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0027]經(jīng)過前期廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)與正常組織相比，肝癌細(xì)胞內(nèi)HAblSG/⑶147蛋白的表達(dá)量往往明顯升高，提示HAbl8G/CD147可能與肝癌發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)。同時(shí)，在高表達(dá)HAbl8G/⑶147的肝癌細(xì)胞內(nèi)，阻斷HAbl8G/⑶147蛋白分子可以在一定程度上抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲轉(zhuǎn)移能力，提示HAbl8G/CD147蛋白很可能是肝癌診斷和治療中潛在的候選靶標(biāo)。而且在前期的工作中已經(jīng)成功解析出HAblSG/⑶147蛋白分子胞外段的三維晶體結(jié)構(gòu)(PDB編號(hào):3B5H)，并通過深入研究，明確了 HAbl8G/⑶147的N端的活性位點(diǎn)以及這些位點(diǎn)可能具備的重要生物學(xué)活性。因此，本發(fā)明首先采用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的篩選方法，并基于生物信息學(xué)的方法，運(yùn)用計(jì)算機(jī)軟件Discovery Studio3.0對(duì)HAbl8G/CD147胞外段三維晶體結(jié)構(gòu)模型(PDB編號(hào):3B5H)進(jìn)行構(gòu)象分析，最終確定在3B5H一個(gè)單體的N端建立藥效團(tuán)模型。然后根據(jù)已經(jīng)建立好的藥效團(tuán)模型，對(duì)Specs化合物庫(kù)(約30萬(wàn)個(gè)化合物)進(jìn)行虛擬篩選，對(duì)匹配值高的前5000個(gè)化合物做進(jìn)一步的構(gòu)象優(yōu)化，最后根據(jù)結(jié)合能評(píng)分，選出排·名較高的1000個(gè)化合物。再繼續(xù)應(yīng)用Discovery Studio3.0軟件，對(duì)初選的1000個(gè)化合物進(jìn)行分析。根據(jù)化合物結(jié)構(gòu)相似性進(jìn)行聚類分析，從中選取具有結(jié)構(gòu)多樣性的100個(gè)可能會(huì)和HAbl8G/CD147蛋白結(jié)合的候選小分子化合物。隨后運(yùn)用體外表面等離子相互作用試驗(yàn)、WST-1增殖試驗(yàn)、細(xì)胞劃痕試驗(yàn)以及細(xì)胞侵襲試驗(yàn)對(duì)這些化合物進(jìn)行復(fù)篩，得到首個(gè)可以靶向結(jié)合HAbl8G/CD147蛋白分子，能夠與HAbl8G/CD147分子特異性結(jié)合，抑制其生物學(xué)活性，并且能夠抑制肝癌細(xì)胞系SMMC-7721增殖、遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲轉(zhuǎn)移的小分子化合物，即3-{2-[ ([1，I’ -聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚，記為AN-465/42834501，可由荷蘭Specs公司購(gòu)買得到，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示:
[0028]
【權(quán)利要求】
1.3-{2-[([1，I’ -聯(lián)苯]-4-甲基)氨基]-1-羥乙基}苯酚在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物為能夠與HAbl8G/CD147蛋白結(jié)合的藥物。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物為能夠與表達(dá)HAblSG/CD147蛋白的腫瘤細(xì)胞結(jié)合的藥物。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物為能夠阻斷HAblSG/⑶147蛋白功能位點(diǎn)的藥物。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物為能夠靶向抑制HAblSG/⑶147蛋白生物學(xué)活性的藥物。
6.如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物包括能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的藥物。
7.如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物包括能夠抑制腫瘤細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)的藥物。
8.如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物包括能夠抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的藥物。
9.如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物包括抗肝癌藥物。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的抗肝癌藥物包括能夠抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移運(yùn)動(dòng)和侵襲轉(zhuǎn)移的藥物。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103622938SQ201310574056
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月14日
【發(fā)明者】陳志南, 付之光, 蔣建利, 朱平, 崔洪勇, 彭建龍, 汪莉 申請(qǐng)人:陳志南