裙帶菜凝集素的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種裙帶菜凝集素的應(yīng)用，它利用裙帶菜凝集素來提高蝦夷馬糞海膽的免疫力，相比于傳統(tǒng)的其他免疫促進(jìn)劑，其毒副作用更小，它通過提高水產(chǎn)動物免疫相關(guān)酶的活性，來達(dá)到提高機(jī)體免疫功能的目的，通過促進(jìn)細(xì)胞的對外源物質(zhì)的吞噬作用，來達(dá)到降低蝦夷馬糞海膽病害發(fā)生幾率的效果。可以說本發(fā)明為目前裙帶菜凝集素作為水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑提供理論依據(jù)，以期為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的綠色發(fā)展開辟一條新道路。
【專利說明】裙帶菜凝集素的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種裙帶菜凝集素的應(yīng)用，特別是一種裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]奸夷馬糞海膽(51 trongylocen tro tus in termedi),又稱中間球海膽，棘皮動物門，游走亞門，海膽綱。蝦夷馬糞海膽原產(chǎn)于日本北海道和俄羅斯的遠(yuǎn)東等地沿海，由于其性腺色澤好，味甜，在國際市場上很受歡迎，是日本的海膽類中經(jīng)濟(jì)價值最高的種類之一。該種1989年由大連水產(chǎn)學(xué)院從日本引入，其后對其人工育苗及增殖等進(jìn)行了研究，國內(nèi)每年的種苗生產(chǎn)量已達(dá)億枚以上，目前已成為我國主要的養(yǎng)殖種類。其出口價格高于我國的其他固有的經(jīng)濟(jì)海膽類，發(fā)展前進(jìn)良好。隨著海膽?zhàn)B殖規(guī)模的擴(kuò)大，病害問題也日趨嚴(yán)重，這些疾病大都具有傳染性，所以一旦感染就會造成很大的損失。其常見的病害有以下幾種:
(I)海膽禿斑病
病原體為革蘭氏陰性桿菌?；疾『Ｄ懙臍ど鲜紫瘸霈F(xiàn)紫黑色斑點，繼之棘開始脫落，而后死亡。對該病的防治一般采用四環(huán)素，大環(huán)內(nèi)酯類藥物等。四環(huán)素等的長期使用不僅會使病原菌產(chǎn)生抗性和耐藥性，而且這些藥物的殘留會對人體造成潛在危害，可引起溶血性貧血、多發(fā)性神經(jīng)炎、眼部損害和急性肝壞死等疾病。目前已被歐盟等國家禁用。
[0003](2)海膽黑嘴病
病原體為芽孢桿菌。癥狀為圍口膜變黑，棘刺脫落后不久死亡。該病對常用抗生素如磺胺甲基異噁唑，復(fù)方新諾明，頭孢噻肟等，比較經(jīng)濟(jì)的抗生素如土霉素，青霉素，氯霉素等卻無作用。此藥的長期添加，已發(fā)現(xiàn)對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的肝、腎能造成很大的破壞，引起水產(chǎn)養(yǎng)殖動物肝臟腫大、腹水，造成水產(chǎn)動物的死亡。如果長期使用該類藥，則會造成耐藥性。導(dǎo)致腸球菌廣為流行，嚴(yán)重危害人類健康。歐盟等禁用。
[0004](3)海膽吸蟲病
吸蟲主要寄生于海膽的生殖腺，管足基部，口器的肌肉中，嚴(yán)重影響海膽的攝食，目前沒有對該病有效防止的藥物。
[0005]而如果能夠有意識的提高海膽本身的免疫性，則可以在一定程度上防止發(fā)生上述病害，或者將上述病害限制在相對較小的范圍內(nèi)，現(xiàn)在理論上已經(jīng)成熟的免疫促進(jìn)劑有以下幾種:
(1)脂多糖(LPS)
使用方法:脂多糖作為免疫刺激劑時一般采用注射或者同飼料混合后投喂海膽，注射劑量大約為100-500ug/只。投喂量為7.5和1.5 mg/kg。
[0006]存在問題及缺陷:影響其作用效果的因素例如免疫途徑、制劑的生產(chǎn)方法以及怎樣同其他
物質(zhì)交互作用等都存在技術(shù)難題，目前脂多糖的提取方法多用于科學(xué)研究，并未涉及工業(yè)化生產(chǎn)，因此，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中沒有探究出生產(chǎn)高效、價格低廉的生產(chǎn)方式，也使其成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的瓶頸。
[0007](2)中草藥免疫增強(qiáng)劑
使用方法:在選用中草藥時一般選擇多種具有不同藥理作用的，組成中藥復(fù)方制劑，進(jìn)而可以獲得藥效互補(bǔ)，療效增強(qiáng)的作用。
[0008]存在問題及缺陷:雖然已經(jīng)有實驗證明中草藥單種成分可以提高海膽非特異性免疫功能，這些單個成分如果以復(fù)合物形態(tài)存在，會不會在養(yǎng)殖中產(chǎn)生其他毒副作用，這個是未知的，所以在海膽?zhàn)B殖業(yè)中沒有得到有效利用。
[0009](3)靈芝多糖和葡聚糖
近年的研究也有將這些多糖作為免疫促進(jìn)劑的，通過提高過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力以及增加海膽吞噬細(xì)胞的數(shù)量來增強(qiáng)免疫能力，但是均以代價太高，不適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的集約化和規(guī)?；a(chǎn)，而沒有得到大范圍的使用。
[0010]因此現(xiàn)在需要一種可以廣泛應(yīng)用于海膽?zhàn)B殖的新型免疫力增強(qiáng)劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述不足，提出一種裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:一種裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點:
本發(fā)明所公開的方法，利用裙帶菜凝集素來提高蝦夷馬糞海膽的免疫力，相比于傳統(tǒng)的其他免疫促進(jìn)劑，其毒副作用更小，它通過提高水產(chǎn)動物免疫相關(guān)酶的活性，來達(dá)到提高機(jī)體免疫功能的目的，通過促進(jìn)細(xì)胞的對外源物質(zhì)的吞噬作用，來達(dá)到降低蝦夷馬糞海膽病害發(fā)生幾率的效果?？梢哉f本發(fā)明為目前裙帶菜凝集素作為水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑提供理論依據(jù)，以期為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的綠色發(fā)展開辟一條新道路。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1裙帶菜凝集素凝集活性。
[0015]稀釋倍數(shù)從左至右依次為27，28，29，空白對照，注:初始濃度為 0.43 mg/ml。
[0016]圖2裙帶菜凝集素對蝦夷馬糞海膽吞噬細(xì)胞吞噬率的影響。
[0017]圖3裙帶菜凝集素對蝦夷馬糞海膽吞噬指數(shù)的影響。
【具體實施方式】
[0018]本發(fā)明提供了裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽體液免疫力方面的應(yīng)用，測定了各個溫度梯度下蝦夷馬糞海膽體腔液中吞噬細(xì)胞吞噬率的變化，并利用外源性注射的方式添加裙帶菜凝集素，檢測注射后吞噬細(xì)胞的吞噬活性變化。
[0019]注射的裙帶菜凝集素濃度分別為1.13 mg/ml>0.57mg/ml、0.28mg/ml,然后分別收集注射后5d，IOd，12d，14d，16d，18d的體腔液樣品，測定吞噬率和吞噬指數(shù)。[0020]動物重量(g) X0.219=總體腔液(ml) X2=注射的凝集素的微克數(shù) 吞噬率(PI)=吞噬酵母的吞噬細(xì)胞數(shù)/100個吞噬細(xì)胞X 100%
吞噬指數(shù)(PR)=吞噬酵母總數(shù)/100個吞噬細(xì)胞 實驗結(jié)果如下:
不同溫度不同時間對吞曬細(xì)胞的吞曬率的影響
在吞噬反應(yīng)開始15、30、60 min后測定不同溫度下吞噬細(xì)胞的吞噬率,從表2可看出吞噬率隨溫度的升高而增加。在15 min和30min時，30°C組吞噬率最高，60 min時由于30°C組細(xì)胞發(fā)生凝集而無法計數(shù)，其他3組以25 °C最高。在30°C時吞噬反應(yīng)開始后的30 min,吞嗤率最聞(表1)。
[0021]表1不同溫度不同時間對吞曬細(xì)胞的吞曬率(%)的影響
【權(quán)利要求】
1.一種裙帶菜凝 集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P37/04GK103656619SQ201310580567
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月19日
【發(fā)明者】李丹彤, 張穎, 常亞青, 項揚, 宋堅 申請人:大連海洋大學(xué), 李丹彤