使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其沉淀的新穎調(diào)配物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明針對(duì)所屬領(lǐng)域中改進(jìn)諸如多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物和蛋白質(zhì)免疫原等免疫原性組合物的穩(wěn)定性的不斷增長(zhǎng)的需求。本發(fā)明大致涉及使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其沉淀的新穎調(diào)配物。更具體來(lái)說(shuō)，下文所述的本發(fā)明針對(duì)所屬領(lǐng)域中對(duì)于使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其微粒形成(例如，聚集、沉淀)的調(diào)配物的需求，所述免疫原性組合物在諸如發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、小瓶、燒瓶、袋子、注射器、橡膠塞、管道等容器裝置中加工、研制、調(diào)配、制造和／或存儲(chǔ)。
【專利說(shuō)明】使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其沉淀的新穎調(diào)配物
[0001]本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00780014734.3、申請(qǐng)日為2007年4月19日、發(fā)明名稱為“使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其沉淀的新穎調(diào)配物”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明大體來(lái)說(shuō)涉及免疫學(xué)、細(xì)菌學(xué)、疫苗調(diào)配、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和工藝過(guò)程開(kāi)發(fā)領(lǐng)域。更具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明涉及抑制免疫原性組合物沉淀的新穎調(diào)配物。
【背景技術(shù)】
[0003]生物制藥領(lǐng)域一般公認(rèn)，改進(jìn)免疫原性組合物(例如，蛋白質(zhì)免疫原、多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物)的穩(wěn)定性是一個(gè)必需且特別需要的目標(biāo)。舉例來(lái)說(shuō)，免疫原性組合物當(dāng)投與患者時(shí)，須看起來(lái)新鮮、品質(zhì)優(yōu)良且專門的。免疫原性組合物的穩(wěn)定性和/或物理性質(zhì)的任何改變(諸如顏色改變、變渾或渾濁)都可能使患者或用戶對(duì)產(chǎn)品失去信心。此外，由于許多免疫原性調(diào)配物是分配于多劑量容器中，故必須確保隨時(shí)間流逝活性成分(例如，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物)的劑量均勻(例如，渾濁溶液可導(dǎo)致不均勻的劑量模式)。另外，免疫原性組合物須在其“預(yù)期”保存期限內(nèi)具活性，其中使免疫原性組合物失去活性或其它不合需要的形式(例如，聚集)的任何破壞都會(huì)降低產(chǎn)品的總濃度。
[0004]若干文獻(xiàn)中的報(bào)道表明，特定免疫原性組合物(例如，蛋白質(zhì)免疫原、多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物)的穩(wěn)定性至少部分取決于特定蛋白質(zhì)或載體蛋白(胡(Ho)等人，2001 ;胡(Ho)等人,2002;波爾加諾(Bolgiano)等人,2001)。舉例來(lái)說(shuō)，與破傷風(fēng)類毒素(tetanustoxoid, TT)或CRM197載體蛋白連結(jié)的C群腦膜炎球菌(meningococcal C, MenC)多糖和b型流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖的穩(wěn)定性分析揭示視載體蛋白而定不同的穩(wěn)定性概況(胡等人，2002)。在另一研究(胡等人，2001)中，分析來(lái)自兩個(gè)不同制造商的MenC-CRM197連結(jié)物(胡等人，2001)，其中MenC — CRM197連結(jié)物的連結(jié)化學(xué)和連結(jié)物多糖的長(zhǎng)度不同(二者具有相同的載體蛋白，CRM197)。來(lái)自這項(xiàng)研究的數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，諸如連結(jié)化學(xué)(例如，直接或經(jīng)由化學(xué)聯(lián)接基團(tuán)還原胺化)、連結(jié)位點(diǎn)的數(shù)量、多糖鏈長(zhǎng)、PH值、存儲(chǔ)緩沖劑、存儲(chǔ)溫度和冷凍/解凍循環(huán)等因素也會(huì)影響免疫原性組合物的穩(wěn)定性。
[0005]因此，當(dāng)研發(fā)用于免疫原性組合物的調(diào)配物時(shí)，須考慮許多因素以確保得到安全、穩(wěn)定、穩(wěn)固和節(jié)省成本的產(chǎn)物。所述考慮因素包括(但不限于)免疫原性組合物的化學(xué)穩(wěn)定性(例如，糖水解、多糖解聚合、蛋白質(zhì)的蛋白水解或發(fā)`酵)、免疫原性組合物的物理/熱穩(wěn)定性(例如，聚集、沉淀、吸附)、免疫原性組合物與容器/密封物系統(tǒng)的相容性、免疫原性組合物與無(wú)活性成分(例如，緩沖劑、鹽、賦形劑、防凍劑)之間的相互作用、制造工藝、劑型(例如，凍干形式、液體)、裝運(yùn)、存儲(chǔ)和處理過(guò)程中所遇到的環(huán)境條件(例如，溫度、濕度、剪切力)和制造與使用之間的時(shí)間長(zhǎng)度。
[0006]所屬領(lǐng)域中已提出，誘導(dǎo)蛋白質(zhì)二級(jí)和三級(jí)構(gòu)型改變的硅油可能會(huì)引起在某些蛋白質(zhì)藥物制劑中所見(jiàn)的聚集/沉淀(瓊斯(Jones)等人，2005)。舉例來(lái)說(shuō)，19世紀(jì)80年代的若干報(bào)道涉及到由一次性塑料注射器釋放的硅油為引起人類胰島素聚集的病原體(辰特羅(Chantelau)和伯杰(Berger), 1985 ;辰特羅(Chantelau)等人，1986 ;辰特羅(Chantelau), 1989 ;伯恩思坦(Bernstein), 1987 ;鮑德溫(Baldwin), 1988 ;科利爾(Collier)和道森(Dawson)，1985)。辰特羅等人(1986)觀察到，在三次或三次以上從十劑量的胰島素制劑抽出(使用硅化一次性注射器)后，小瓶會(huì)因硅油污染而開(kāi)始變渾濁，從而導(dǎo)致胰島素聚集和失活(辰特羅等人，1986)。不合理的是，硅油是塑料注射器的必需組分，因?yàn)槠溆糜跐?rùn)滑橡膠柱塞并且便利將柱塞移下注射管(即，硅油改進(jìn)調(diào)配物的可注射性)。
[0007]此外，由于硅油還用作用于使蛋白質(zhì)吸附最小化的玻璃小瓶的涂層；在填充程序期間防止橡膠塞堆集的潤(rùn)滑劑；對(duì)玻璃和彈性密封物的可加工性/機(jī)械加工性至關(guān)重要的潤(rùn)滑劑；和便利針頭穿透小瓶的橡膠塞的潤(rùn)滑劑，故硅油的使用不限于注射器。另外，注射器、玻璃小瓶、橡膠塞等的硅化并非充分可控制和標(biāo)準(zhǔn)化的過(guò)程，且因此各批次間存在硅油含量高可變性。
[0008]因此，所屬領(lǐng)域中不斷需要增強(qiáng)免疫原性組合物的穩(wěn)定性且抑制其沉淀的調(diào)配物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明大致涉及使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其沉淀的新穎調(diào)配物。更具體來(lái)說(shuō)，在某些實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)抑制容器裝置中所包含的免疫原性組合物沉淀的新穎調(diào)配物。在一個(gè)特定實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使免疫原性組合物對(duì)于硅油相互作用、剪切力、裝運(yùn)攪動(dòng)等穩(wěn)定的新穎調(diào)配物。
[0010]因此，在某些實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物穩(wěn)定的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i)pH值緩沖 鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；(ii)表面活性劑；和(iii) 一種或多種多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物。在一個(gè)特定實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物包含于容器裝置中。在某些實(shí)施例中，所述容器裝置選自一個(gè)或多個(gè)以下組成的群組:小瓶、小瓶塞、小瓶密封物(vial closure)、玻璃密封物、橡膠密封物、塑料密封物、注射器、注射器塞、注射器柱塞、燒瓶、燒杯、量筒、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣口瓶、安瓿、藥筒和一次性筆。在某些實(shí)施例中，所述容器裝置經(jīng)硅化。
[0011]在某些實(shí)施例中，調(diào)配物的pH值緩沖鹽水溶液具有5.5到7.5的pH值。在其它實(shí)施例中，緩沖液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組氨酸或檸檬酸鹽。在某些實(shí)施例中，緩沖液為最終濃度為ImM到IOmM且pH值為5.8到6.0的琥珀酸鹽。在一個(gè)特定實(shí)施例中，琥珀酸鹽緩沖液的最終濃度為5mM。在其它實(shí)施例中，pH值緩沖鹽水溶液中的鹽包含氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉或其組合。在一個(gè)特定實(shí)施例中，PH值緩沖鹽水溶液中的鹽為氯化鈉。
[0012]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物中的表面活性劑選自由以下組成的群組:聚山梨醇酯20 (polysorbate20)(吐溫20 (Tween?20))、聚山梨醇酯40 (吐溫40)、聚山梨醇酯60(吐溫60)、聚山梨醇酯65 (吐溫65)、聚山梨醇酯80 (吐溫80)、聚山梨醇酯85 (吐溫 85)))、曲通 N—101 (Triton?N一 101)、曲通 X-100、氧托夕醇 40 (oxtoxynol40)、壬苯醇醚-9 (nonoxynol-9)、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸鹽、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG —15，索羅托H15 (Solutol H15))、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(克林莫佛EL(Cremophor EL?))、大豆卵憐脂(soy lecithin)和泊洛沙姆(poloxamer)。在一個(gè)特定實(shí)施例中，表面活性劑為聚山梨醇酯80。在另一實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物至少0.01重量％到10重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.01重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.05重量％聚山梨醇酯80。在另一實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.1重量％聚山梨醇酯80。在某些其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物1.0重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物10.0重量％聚山梨醇酯80。 [0013]在另一實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物包含-種或多種肺炎球菌多糖。在某些實(shí)施例中，所述一種或多種肺炎球菌多糖為肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)血清型4多糖、肺炎鏈球菌血清型6B多糖、肺炎鏈球菌血清型9V多糖、肺炎鏈球菌血清型14多糖、肺炎鏈球菌血清型18C多糖、肺炎鏈球菌血清型19F多糖、肺炎鏈球菌血清型23F多糖、肺炎鏈球菌血清型I多糖、肺炎鏈球菌血清型3多糖、肺炎鏈球菌血清型5多糖、肺炎鏈球菌血清型6A多糖、肺炎鏈球菌血清型7F多糖和肺炎鏈球菌血清型19A多糖。在某些實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物中的蛋白質(zhì)選自由以下組成的群組=CRM197、破傷風(fēng)類毒素、霍亂類毒素、百日咳類毒素、大腸桿菌(E.coli)熱敏性類毒素(LT)、肺炎球菌溶血素類毒素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白A(PsaA)、來(lái)自鏈球菌(Streptococcus)的C5a肽酶、流感嗜血桿菌蛋白D、卵清蛋白、鑰孔戚血藍(lán)蛋白(keyhole limpet haemocyanin, KLH)、牛血清白蛋白(BSA)和結(jié)核菌素純蛋白衍生物(purified protein derivative of tuberculin,PPD)。
[0014]在一個(gè)特定實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物為7價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(7vPnC)調(diào)配物，其包含肺炎鏈球菌血清型4多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6B多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型9V多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型14多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型18C多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型19F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物和肺炎鏈球菌血清型23F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物。
[0015]在另一特定實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物為13價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(13vPnC)調(diào)配物，其包含肺炎鏈球菌血清型4多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6B多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型9V多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型14多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型18C多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型19F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型23F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型I多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型3多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型5多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型7F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物和肺炎鏈球菌血清型19A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物。
[0016]在其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種腦膜炎球菌多糖、一種或多種腦膜炎球菌抗原蛋白或其組合。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種鏈球菌多糖、一種或多種鏈球菌抗原蛋白或其組合。
[0017]在某些其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種佐劑。例示性適當(dāng)佐劑將于下文中描述。
[0018]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使鏈球菌C5a肽酶(SCP)組合物穩(wěn)定的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i)pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約6.5的pKa值；(ii)表面活性劑；和(iii)鏈球菌C5a肽酶。在一個(gè)特定實(shí)施例中，SCP調(diào)配物包含于容器裝置中。在某些實(shí)施例中，所述容器裝置選自一個(gè)或多個(gè)以下組成的群組:小瓶、小瓶塞、小瓶密封物、玻璃密封物、橡膠密封物、塑料密封物、注射器、注射器塞、注射器柱塞、燒瓶、燒杯、量筒、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣□瓶、安瓿、藥筒和一次性筆。
[0019]在其它實(shí)施例中，調(diào)配物的pH值緩沖鹽水溶液具有5.5到7.5的pH值。在其它實(shí)施例中，緩沖液為琥珀酸鹽、組氨酸、磷酸鹽或檸檬酸鹽。在一個(gè)特定實(shí)施例中，緩沖液為最終濃度為ImM到IOmM且pH值為5.8到6.0的琥珀酸鹽。在另一特定實(shí)施例中，琥珀酸鹽緩沖液的最終濃度為5mM。在其它實(shí)施例中，pH值緩沖鹽水溶液中的鹽包含氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉或其組合。
[0020]在某些實(shí)施例中，調(diào)配物中的表面活性劑選自由以下組成的群組:聚山梨醇酯20 (吐溫20)、聚山梨醇酯40 (吐溫40)、聚山梨醇酯60 (吐溫60)、聚山梨醇酯65 (吐溫65)、聚山梨醇酯80 (吐溫80)、聚山梨醇酯85 (吐溫85)、曲通N —101、曲通X-100、氧托夕醇40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸鹽、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG —15，索羅托H15)、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(克林莫佛EL)、大豆卵磷脂和泊洛沙姆。在一個(gè)特定實(shí)施例中，表面活性劑為聚山梨醇酯80。在某些實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.01重量％到10重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.01重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.05重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.1重量％聚山梨醇酯80。在另一實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物1.0重量％聚山梨醇酯80。在另一實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物10.0重量％聚山梨醇酯80。
`[0021]在某些其它實(shí)施例中，SCP組合物另外包含一種或多種選自由以下多肽組成的群組的多肽:鏈球菌多肽、肺炎球菌多肽、腦膜炎球菌多肽和葡萄球菌多肽。在其它實(shí)施例中，SCP組合物另外包含一種或多種選自由以下多糖組成的群組的多糖:鏈球菌多糖、肺炎球菌多糖、腦膜炎球菌多糖和葡萄球菌多糖。
[0022]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種佐劑。例示性適當(dāng)佐劑將于下文中描述。
[0023]在另一實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)抑制聚硅氧(silicone)誘導(dǎo)的硅化容器裝置中所包含的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物沉淀的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i)pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；(ii)鋁鹽；和(iii) 一種或多種多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物。在某些實(shí)施例中，所述硅化容器裝置選自一個(gè)或多個(gè)以下組成的群組:小瓶、小瓶塞、小瓶密封物、玻璃密封物、橡膠密封物、塑料密封物、注射器、注射器塞、注射器柱塞、燒瓶、燒杯、量筒、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣口瓶、安瓿、藥筒和一次性筆。
[0024]在某些實(shí)施例中，調(diào)配物的pH值緩沖鹽水溶液具有5.5到7.5的pH值。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中的緩沖液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組氨酸或檸檬酸鹽。在其它實(shí)施例中，緩沖液為最終濃度為ImM到IOmM且pH值為5.8到6.0的琥珀酸鹽。在一個(gè)特定實(shí)施例中，琥珀酸鹽緩沖液的最終濃度為5mM。在其它實(shí)施例中，pH值緩沖鹽水溶液中的鹽包含氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉或其組合。在一個(gè)特定實(shí)施例中，PH值緩沖鹽水溶液中的鹽為氯化鈉。
[0025]在其它實(shí)施例中，鋁鹽為氫氧化鋁、磷酸鋁或硫酸鋁。在一個(gè)特定實(shí)施例中，鋁鹽為磷酸招。
[0026]在某些其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含聚山梨醇酯80 (吐溫80)。在一個(gè)特定實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物至少0.01重量％到10重量％聚山梨醇酯80。
[0027]在另一實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物包含一種或多種肺炎球菌多糖。在某些實(shí)施例中，所述一種或多種肺炎球菌多糖為肺炎鏈球菌血清型4多糖、肺炎鏈球菌血清型6B多糖、肺炎鏈球菌血清型9V多糖、肺炎鏈球菌血清型14多糖、肺炎鏈球菌血清型18C多糖、肺炎鏈球菌血清型19F多糖、肺炎鏈球菌血清型23F多糖、肺炎鏈球菌血清型I多糖、肺炎鏈球菌血清型3多糖、肺炎鏈球菌血清型5多糖、肺炎鏈球菌血清型6A多糖、肺炎鏈球菌血清型7F多糖和肺炎鏈球菌血清型19A多糖。
[0028]在某些其它實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物中的蛋白質(zhì)選自由以下組成的群組=CRM197、破傷風(fēng)類毒素、霍亂類毒素、百日咳類毒素、大腸桿菌熱敏性類毒素(LT)、肺炎球菌溶血素類毒素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白A(PsaA)、來(lái)自鏈球菌的C5a肽酶、流感嗜血桿菌蛋白D、卵清蛋白、鑰孔貝血藍(lán)蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)和結(jié)核菌素純蛋白衍生物(pro)。
[0029]在一個(gè)特定實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物為7價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(7vPnC)調(diào)配物，其包含肺炎鏈球菌血清型4多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6B多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型9V多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型14多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型18C多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型19F多糖與C RM197多肽的連結(jié)物和肺炎鏈球菌血清型23F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物。
[0030]在另一特定實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物為13價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(13vPnC)調(diào)配物，其包含肺炎鏈球菌血清型4多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6B多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型9V多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型14多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型18C多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型19F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型23F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型I多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型3多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型5多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型7F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物和肺炎鏈球菌血清型19A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物。
[0031]在其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種腦膜炎球菌多糖、一種或多種腦膜炎球菌抗原蛋白或其組合。
[0032]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種鏈球菌多糖、一種或多種鏈球菌抗原蛋白或其組合。
[0033]在某些其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種佐劑。例示性適當(dāng)佐劑將于下文中描述。
[0034]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)抑制聚硅氧誘導(dǎo)的硅化容器裝置中所包含的鏈球菌C5a肽酶(SCP)組合物沉淀的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i) pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約6.5的pKa值；(ii)鋁鹽；和(iii)鏈球菌C5a肽酶。在某些實(shí)施例中，所述容器裝置選自一個(gè)或多個(gè)以下組成的群組:小瓶、小瓶塞、小瓶密封物、玻璃密封物、橡膠密封物、塑料密封物、注射器、注射器塞、注射器柱塞、燒瓶、燒杯、量筒、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣口瓶、安瓿、藥筒和一次性筆。
[0035]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物的pH值緩沖鹽水溶液具有5.5到7.5的pH值。在其它實(shí)施例中，緩沖液為琥珀酸鹽、組氨酸、磷酸鹽或檸檬酸鹽。在某些實(shí)施例中，緩沖液為最終濃度為ImM到IOmM且pH值為5.8到6.0的琥珀酸鹽。在另一實(shí)施例中，pH值緩沖鹽水溶液中的鹽包含氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉或其組合。
[0036]在某些其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含聚山梨醇酯80 (吐溫80)。在一個(gè)特定實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.01重量％到10重量％聚山梨醇酯80。
[0037]在其它實(shí)施例中，SCP組合物另外包含一種或多種選自由以下多肽組成的群組的多肽:鏈球菌多肽、肺炎球菌多肽、腦膜炎球菌多肽和葡萄球菌多肽。
[0038]在某些其它實(shí)施例中，SCP組合物另外包含一種或多種選自由以下多糖組成的群組的多糖:鏈球菌多糖、肺炎球菌多糖、腦膜炎球菌多糖和葡萄球菌多糖。
[0039]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種佐劑。例示性適當(dāng)佐劑將于下文中描述。
[0040]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使腦膜炎奈瑟菌(N.meningitidis) 2086蛋白組合物穩(wěn)定的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i)pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約
6.5的pKa值；(ii)表面活性劑；和(iii)腦膜炎奈瑟菌2086蛋白。例示性腦膜炎奈瑟菌2086蛋白將于下文中描述。在一個(gè)特定實(shí)施例中，腦膜炎奈瑟菌2086蛋白調(diào)配物包含于容器裝置中。在某些實(shí)施例中，所述容器裝置選自一個(gè)或多個(gè)以下組成的群組:小瓶、小瓶塞、小瓶密封物、玻璃密封物、橡膠密封物、塑料密封物、注射器、注射器塞、注射器柱塞、燒瓶、燒杯、量筒、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣口瓶、安瓿、藥筒和一次性筆。
[0041]在其它實(shí)施例中，調(diào)配物的pH值緩沖鹽水溶液具有5.5到7.5的pH值。在其它實(shí)施例中，緩沖液為琥珀酸鹽、組氨酸、磷酸鹽或檸檬酸鹽。在一個(gè)特定實(shí)施例中，緩沖液為最終濃度為ImM到IOmM且pH值為5.8到6.0的琥珀酸鹽。在另一特定實(shí)施例中，琥珀酸鹽緩沖液的最終濃度為5mM。在其它實(shí)施例中，pH值緩沖鹽水溶液中的鹽包含氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉或其組合。
[0042]在某些實(shí)施例中，調(diào)配物中的表面活性劑選自由以下組成的群組:聚山梨醇酯20 (吐溫20)、聚山梨醇酯40 (吐溫40)、聚山梨醇酯60 (吐溫60)、聚山梨醇酯65 (吐溫65)、聚山梨醇酯80 (吐溫80)、聚山梨醇酯85 (吐溫85)、曲通N —101、曲通X-100、氧托夕醇40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸鹽、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG —15，索羅托H15)、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(克林莫佛EL)、大豆卵磷脂和泊洛沙姆。在一個(gè)特定實(shí)施例中，表面活性劑`為聚山梨醇酯80。在某些實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.01重量％到10重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.01重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.05重量％聚山梨醇酯80。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.1重量％聚山梨醇酯80。在另一實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物1.0重量％聚山梨醇酯80。在另一實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物10.0重量％聚山梨醇酯80。
[0043]在某些其它實(shí)施例中，腦膜炎奈瑟菌2086蛋白組合物另外包含一種或多種選自由以下多肽組成的群組的多肽:鏈球菌多肽、肺炎球菌多肽、腦膜炎球菌多肽和葡萄球菌多肽。在其它實(shí)施例中，腦膜炎奈瑟菌2086蛋白組合物另外包含一種或多種選自由以下多糖組成的群組的多糖:鏈球菌多糖、肺炎球菌多糖、腦膜炎球菌多糖和葡萄球菌多糖。
[0044]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種佐劑。例示性適當(dāng)佐劑將于下文中描述。
[0045]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)抑制聚硅氧誘導(dǎo)的硅化容器裝置中所包含的腦膜炎奈瑟菌2086蛋白組合物沉淀的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i)pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約6.5的pKa值；(ii)鋁鹽；和(iii)腦膜炎奈瑟菌2086蛋白。在某些實(shí)施例中，所述容器裝置選自一個(gè)或多個(gè)以下組成的群組:小瓶、小瓶塞、小瓶密封物、玻璃密封物、橡膠密封物、塑料密封物、注射器、注射器塞、注射器柱塞、燒瓶、燒杯、量筒、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣□瓶、安瓿、藥筒和一次性筆。
[0046]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物的pH值緩沖鹽水溶液具有5.5到7.5的pH值。在其它實(shí)施例中，緩沖液為琥珀酸鹽、組氨酸、磷酸鹽或檸檬酸鹽。在某些實(shí)施例中，緩沖液為最終濃度為ImM到IOmM且pH值為5.8到6.0的琥珀酸鹽。在另一實(shí)施例中，pH值緩沖鹽水溶液中的鹽包含氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉或其組合。
[0047]在某些其它實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含聚山梨醇酯80 (吐溫80)。在一個(gè)特定實(shí)施例中，調(diào)配物中聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積調(diào)配物0.01重量％到10重量％聚山梨醇酯80。
[0048]在其它實(shí)施例中，腦膜炎奈瑟菌2086蛋白組合物另外包含一種或多種選自由以下多肽組成的群組的多肽:鏈球菌多肽、肺炎球菌多肽、腦膜炎球菌多肽和葡萄球菌多肽。
[0049]在某些其它實(shí)施例中，腦膜炎奈瑟菌2086蛋白組合物另外包含一種或多種選自由以下多糖組成的群組的多糖:鏈球菌多糖、肺炎球菌多糖、腦膜炎球菌多糖和葡萄球菌多糖。
[0050]在另一實(shí)施例中，調(diào)配物另外包含一種或多種佐劑。例示性適當(dāng)佐劑將于下文中描述。
[0051]本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)將自以下實(shí)施方式、其實(shí)施例和權(quán)利要求書(shū)顯而易見(jiàn)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0052]圖1繪示在水平旋轉(zhuǎn)式振蕩器上輕柔攪動(dòng)(60cpm) 2天前和之后鏈球菌C5a肽酶(SCP)調(diào)配物(填充于注射器中)的穩(wěn)定性。圖1A所提供的數(shù)據(jù)為未用任何吐溫80 (即0% )調(diào)配的SCP的2天穩(wěn)定性，而圖1B所提供的數(shù)據(jù)為用0.025%吐溫80調(diào)配的SCP的2天穩(wěn)定性。圖1A和IB中所示的調(diào)配物中所使用的緩沖液為琥珀酸鹽緩沖鹽水(SBS)、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)和三(羥甲基)氨基甲烷(TRIS)。
[0053]圖2繪示在2—8°C下以500rpm攪動(dòng)2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)后用AlPO4 (0.25mg /ml)調(diào)配且填充于BD海派(Hypak)注射器中的13vPnC的總抗原性損失。
[0054]圖3繪示在2—8 °C下以500rpm攪動(dòng)2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)后用AlPO4 (0.25mg /ml)調(diào)配且填充于未硅化的注射器中的13vPnC的總抗原性損失。
[0055]圖4繪示在2—8 °C下以500rpm攪動(dòng)2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)后用AlPO4 (0.25mg /ml)調(diào)配且填充于維特(Vetter)注射器中的13vPnC的總抗原性損失。
[0056]圖5繪示在2—8 °C下以500rpm攪動(dòng)2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)后用AlPO4 (0.25mg /ml)調(diào)配且填充于肖特拓普派克(Schott TopPac)注射器中的13vPnC的總抗原性損失。
[0057]圖6繪示在2—8 °C下以500rpm攪動(dòng)2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)后用AlPO4 (0.25mg /ml)(圖6A)和未用AlPO4 (0.25mg / ml)(圖6B)調(diào)配且填充于BD貝克特注射器中的13vPnC的總抗原性損失。
[0058]圖7繪示在2—8°C下以500rpm攪動(dòng)2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)后用AlPO4 (0.25mg /ml)(圖 7A)和未用 AlPO4 (0.25mg / ml)(圖 7B)調(diào)配且填充于邦吉 PS2 (BunderGlas PS2)注射器中的13vPnC的總抗原性損失。
【具體實(shí)施方式】
[0059]本發(fā)明針對(duì)一種用于改進(jìn)諸如多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物和蛋白質(zhì)免疫原等免疫原性組合物的穩(wěn)定性的所屬領(lǐng)域中的不斷增加的需求。因此，本發(fā)明大致涉及使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其沉淀的新穎表面活性劑調(diào)配物和/或新穎鋁鹽調(diào)配物。更具體來(lái)說(shuō)，下文所述的本發(fā)明針對(duì)所屬領(lǐng)域中關(guān)于使免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其微粒形成(例如，聚集、沉淀)的調(diào)配物的需求，所述免疫原性組合物在諸如發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、小瓶、燒瓶、袋子、注射器、橡膠塞、管道等容器裝置中經(jīng)加工、研制、調(diào)配、制造和/或存儲(chǔ)。
[0060]如上文本發(fā)明技術(shù)背景中所述，多個(gè)因素會(huì)影響免疫原性組合物的穩(wěn)定性，包括(但不限于)免疫原性組合物的化學(xué)穩(wěn)定性、免疫原性組合物的物理/熱穩(wěn)定性、免疫原性組合物與容器/密封物系統(tǒng)的相容性、免疫原性組合物與無(wú)活性成分(例如，緩沖劑、鹽、賦形劑、防凍劑)之間的相互作用、制造工藝、劑型、裝運(yùn)、存儲(chǔ)和處理過(guò)程中所遇到的環(huán)境條件(例如，溫度、濕度、剪切力)和制造與使用之間的時(shí)間長(zhǎng)度。
[0061]易于使用對(duì)于所屬領(lǐng)域技術(shù)人員為熟知且常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)定本發(fā)明免疫原性組合物的穩(wěn)定性。舉例來(lái)說(shuō)，可通過(guò)包括(但不限于)以下方法來(lái)分析免疫原性組合物的穩(wěn)定性、聚集、免疫原性、微粒形成、蛋白質(zhì)(濃度)損失等:光散射、光密度、沉降速度離心、沉降平衡離心、圓二色性(⑶)、洛瑞分析(Lowry assay)、二辛可寧酸(bicinchoninic acid,BCA)分析、抗體結(jié)合等。
[0062]如本文所詳述，本發(fā)明涉及利用諸如吐溫80等表面活性劑調(diào)配免疫原性組合物顯著增強(qiáng)免疫原性組合物`的穩(wěn)定性且抑制其沉淀的出人意料且意外的結(jié)果。舉例來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明(例如參看實(shí)例2)中觀察到，在2— 8°C下當(dāng)經(jīng)由水平旋轉(zhuǎn)式振蕩器輕柔攪動(dòng)時(shí)，在緩沖鹽水中調(diào)配且填充于單劑量注射器中的13價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(13vPnC)將在10分鐘內(nèi)從溶液中沉淀析出。(水平旋轉(zhuǎn)式振蕩器用于模擬13vPnC免疫原性組合物的典型加工、裝運(yùn)和存儲(chǔ)條件)。然而，意外地觀察到，在2— 8°C下輕柔攪動(dòng)的在緩沖鹽水和0.001%吐溫80中調(diào)配且填充于單劑量注射器中的13vPnC可穩(wěn)定25天而無(wú)可見(jiàn)的沉淀跡象(資料未顯示)。因此，此資料表明，將表面活性劑(例如，吐溫80)添加到免疫原性組合物調(diào)配物中會(huì)增強(qiáng)免疫原性組合物的穩(wěn)定性。
[0063]關(guān)于13vPnC的第二穩(wěn)定性研究進(jìn)一步證實(shí)，將表面活性劑添加到調(diào)配物中會(huì)顯著增強(qiáng)13vPnC的穩(wěn)定性。舉例來(lái)說(shuō)，評(píng)定2小時(shí)時(shí)間段內(nèi)存在0.05%吐溫80 (表1)和不存在吐溫80 (0.0%，表1)的13vPnC調(diào)配物的穩(wěn)定性(即，通過(guò)測(cè)量13vPnC抗原性的改變來(lái)分析)。如表1中所示，在2小時(shí)的分析中，13種血清型多糖(未用吐溫80調(diào)配)的抗原性顯著降低。然而，特別引人注目的是，包含0.05%吐溫80 (表1)的13vPnC調(diào)配物在2小時(shí)的抗原性分析中展現(xiàn)穩(wěn)固的穩(wěn)定性。還觀察到，在250mL玻璃瓶中用0.01 %吐溫80或0.05%吐溫80調(diào)配的13vPnC可經(jīng)受經(jīng)由在2 — 8°C下渦旋所述調(diào)配物30分鐘所誘導(dǎo)的顯著剪切力，存在極少或無(wú)抗原性損失(例如參看實(shí)例2，表2)。
[0064]在其它實(shí)驗(yàn)(實(shí)例3)中，表明當(dāng)用諸如吐溫80等表面活性劑調(diào)配時(shí)，免疫原性鏈球菌C5a肽酶(SCP)組合物的穩(wěn)定性極大增強(qiáng)。舉例來(lái)說(shuō)，如圖1A所示，將在5mM琥珀酸鹽緩沖液(ρΗ6.0)、IOmM磷酸鹽緩沖液(ρΗ7.0和7.4)或IOmM Tris緩沖液(ρΗ7.5)中調(diào)配的SCP (55 μ g / mL)渦旋2天后，SCP濃度明顯降低(例如，大于90%)。然而，如圖1B所示，在2天的渦旋之前，將0.025%吐溫80添加到SCP琥珀酸鹽、SCP磷酸鹽和SCP Tris調(diào)配物中完全抑制SCP損失，這與圖1A中所觀察的相同。
[0065]也可在存在或不存在佐劑(諸如磷酸鋁(AlPO4))的情況下調(diào)配本發(fā)明的13vPnC免疫原性組合物。因此，在一系列單獨(dú)實(shí)驗(yàn)(實(shí)例4)中，在不添加表面活性劑(例如，調(diào)配物中不包括吐溫80)的情況下，在5mM琥珀酸鹽緩沖液(pH5.8)、0.85% NaCl和AlPO4 (0.25mg鋁/ ml)中調(diào)配13vPnC免疫原性組合物。
[0066]在這些實(shí)驗(yàn)中，將13vPnC免疫原性組合物(在存在AlPO4的情況下調(diào)配)填充于各種硅化和未硅化容器裝置(例如參看表3)中并且經(jīng)由在2 — 8°C下攪動(dòng)使其經(jīng)歷模擬的裝運(yùn)和處理?xiàng)l件。在這些實(shí)驗(yàn)(實(shí)例4)中觀察到，具有較高聚硅氧含量的容器裝置展現(xiàn)較高程度的13vPnC微粒形成和較高的13vPn`C抗原性損失百分比。對(duì)于微粒的FTIR分析表明，所述微粒是由蛋白質(zhì)和聚娃氧組成(資料未顯示)，且約85%的13vPnC與AlPO4結(jié)合，其中剩余15%為在溶液中游離(未結(jié)合AlPO4)的13vPnC。
[0067]在比較在存在與不存在AlPO4的情況下調(diào)配的13vPnC免疫原性組合物(其隨后被填充于相同注射器中)的另一實(shí)驗(yàn)中，觀察到在所測(cè)試的注射器中，在不存在AlPO4的情況下調(diào)配的13vPnC保持比在存在AlPO4的情況下調(diào)配的13vPnC高的免疫原性損失(例如參看圖6和圖7)。
[0068]因此，如本文所述，本發(fā)明針對(duì)使諸如多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物(例如13vPnC)和蛋白質(zhì)免疫原(例如，鏈球菌C5a肽酶、腦膜炎奈瑟氏菌0RF2086蛋白)等免疫原性組合物對(duì)于各種影響免疫原性組合物的穩(wěn)定性的因素(例如，剪切力、裝運(yùn)攪動(dòng)、硅油相互作用、吸附、制造工藝、溫度、濕度、制造與使用之間的時(shí)間長(zhǎng)度等)穩(wěn)定且抑制其聚集或沉淀的新穎調(diào)配物。
[0069]在某些實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物穩(wěn)定的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含PH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；表面活性劑；和一種或多種多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物。在其它實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物包含于容器裝置中。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使鏈球菌C5a肽酶(SCP)組合物穩(wěn)定的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約6.5的pKa值；表面活性劑；和鏈球菌C5a肽酶。在某些實(shí)施例中，SCP調(diào)配物包含于容器裝置中。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使腦膜炎奈瑟菌2086蛋白組合物穩(wěn)定的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；表面活性劑；和腦膜炎奈瑟菌2086蛋白。在某些實(shí)施例中，腦膜炎球菌2086調(diào)配物包含于容器裝置中。
[0070]在某些其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)抑制聚硅氧誘導(dǎo)的硅化容器裝置中所包含的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物沉淀的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；鋁鹽；和一種或多種多糖_蛋白質(zhì)連結(jié)物。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)抑制聚硅氧誘導(dǎo)的硅化容器裝置中所包含的鏈球菌C5a肽酶(SCP)組合物沉淀的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約6.5的pKa值；鋁鹽；和鏈球菌C5a肽酶。在某些其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)抑制聚硅氧誘導(dǎo)的硅化容器裝置中所包含的腦膜炎奈瑟菌2086蛋白組合物沉淀的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；鋁鹽；和腦膜炎奈瑟菌2086蛋的。
[0071]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使腦膜炎奈瑟菌2086蛋白的抗原穩(wěn)定性以及與鋁鹽佐劑(例如AlPO4)的結(jié)合百分比優(yōu)化的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含pH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；表面活性劑；和腦膜炎奈瑟菌2086蛋白。在某些實(shí)施例中，調(diào)配物包含于容器裝置中。
[0072]如下文所定義，術(shù)語(yǔ)“沉淀”、“沉淀物”、“微粒形成”、“變渾”和“聚集”可互換使用，且意欲指引起多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物或蛋白質(zhì)(或多肽)免疫原“聚集”的任何物理相互作用或化學(xué)反應(yīng)。聚集(例如蛋白質(zhì)聚集)的過(guò)程已為所屬領(lǐng)域眾所周知(但尚未完全了解)且描述，并且其通常受多種物理化學(xué)應(yīng)力的影響，包括熱、壓力、PH值、攪動(dòng)、剪切力、冷凍-解凍、脫水、重金屬、酚系化合物、硅油、變性劑等。
[0073]如下文所定義，本發(fā)明的“多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物”、“肺炎球菌連結(jié)物”、“7價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(7vPnC)”、“13價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(13vPnC)”、“鏈球菌C5a肽酶(SCP)免疫原性組合物”和“腦膜炎奈瑟菌2086蛋白免疫原性組合物”包括液體調(diào)配物、經(jīng)冷凍液體調(diào)配物和固體(例如，冷凍干燥或凍干)調(diào)配物。
[0074]A.表面活性劑
[0075]如上文所述，本發(fā)明針對(duì)使免疫原性組合物對(duì)于影響免疫原性組合物穩(wěn)定性的多個(gè)因素(例如，剪切力、裝運(yùn)攪動(dòng)、硅油相互作用、吸附、制造工藝、溫度、濕度、制造與使用之間的時(shí)間長(zhǎng)度等)穩(wěn)定且抑制其聚集的調(diào)配物。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)包含表面活性劑的調(diào)配物。
[0076]表面活性劑(surfactant或surface-active agent)通常定義為(a)包含親水基團(tuán)或部分以及親脂(疏水)基團(tuán)或部分的分子或化合物，和/或(b)減小或降低溶液表面張力的分子、物質(zhì)或化合物。如本文所定義，本發(fā)明的“表面活性劑”為降低免疫原性組合物調(diào)配物的表面張力的任何分子或化合物。
[0077]本發(fā)明的調(diào)配物中所使用的表面活性劑包含使本文所述的免疫原性組合物穩(wěn)定且抑制其聚集的任何表面活性劑或任何表面活性劑的組合。因此，本發(fā)明的表面活性劑包括(但不限于)聚山梨醇酯20(吐溫20)、聚山梨醇酯40(吐溫40)、聚山梨醇酯60 (吐溫60)、聚山梨醇酯65 (吐溫65)、聚山梨醇酯80 (吐溫80)、聚山梨醇酯85 (吐溫85)、曲通N—101、曲通X-100、氧托夕醇40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸鹽、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG —15，索羅托H15)、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(克林莫佛EL)、大豆卵磷脂、泊洛沙姆、十六烷基胺、十八烷基胺、氨基酸十八烷酯、溶血卵磷脂、二甲基-二十八烷基溴化銨、甲氧基十六烷基甘油、普流尼克多元醇(pluronic polyol)、聚胺(例如，批喃、硫酸右旋糖苷、多聚肌苷酸多聚胞苷酸(polyIC)、卡伯波(carbopol))、肽(例如，胞壁肽和二肽、二甲基甘氨酸、促吞噬素(tuftsin)、油乳液、礦物凝膠(例如磷酸鋁)和免疫刺激復(fù)合物(ISCOM)。
[0078]所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可易于通過(guò)測(cè)量在存在和不存在表面活性劑的情況下特定免疫原性組合物調(diào)配物的表面張力來(lái)確定適當(dāng)表面活性劑或表面活性劑組合?；蛘?，針對(duì)表面活性劑降低、抑制或防止免疫原性組合物聚集的能力定性(例如目視檢查微粒的形成)或定量(例如，光散射、沉降速度離心、光密度、抗原性)評(píng)估表面活性劑。
[0079]B.容器裝置
[0080]在某些實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)包含于容器裝置中的免疫原性組合物的調(diào)配物。如本文所定義，本發(fā)明的“容器裝置”包括在研究、加工、研制、調(diào)配、制造、存儲(chǔ)和/或投藥期間用于“含有”、“保存”、“混合”、“摻合”、“分配”、“注射”、“傳遞”、“噴霧”等免疫原性組合物的任何相關(guān)組合物。舉例來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的容器裝置包括(但不限于)常用實(shí)驗(yàn)室玻璃器具，燒瓶、燒杯、量筒、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣口瓶、小瓶、小瓶密封物(例如，橡膠塞、螺旋蓋)、安瓿、注射器、注射器塞、注射器柱塞、橡膠密封物、塑料密封物、玻璃密封物等。本發(fā)明的容 器裝置不受制造材料的限制，且包括諸如玻璃、金屬(例如，鋼、不銹鋼、鋁等)和聚合物(例如，熱塑性塑料、彈性體、熱塑性塑料-彈性體)。
[0081]所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將了解，上述容器裝置并不是詳盡列表，而只是充當(dāng)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)于了解在研究、加工、研制、調(diào)配、制造、存儲(chǔ)和/或投與免疫原或免疫原性組合物期間用于含有、保存、混合、摻合、分配、注射、傳遞、噴霧等所述組合物的多種容器裝置的指導(dǎo)。預(yù)期用于本發(fā)明中的其它容器裝置可見(jiàn)于諸如以下實(shí)驗(yàn)室設(shè)備供應(yīng)商和制造商的公開(kāi)目錄中:美國(guó)塑料公司(United States Plastic Corp.)(俄亥俄州利馬(Lima, OH))、VWR?(賓西法尼亞州西切斯特(West Chester, PA))、BD生物技術(shù)公司(BD Biosciences)(新澤西州弗蘭克林湖(Franklin Lakes, NJ))、菲舍爾科技國(guó)際有限公司(FisherScientific International Inc.)(新罕布什爾州漢普頓(Hampton, NH))和西格瑪-奧德里奇公司(Sigma-Aldrich)(密蘇里州圣路易斯(St.Louis, MO))。
[0082]因此，本發(fā)明的新穎調(diào)配物因其使容器裝置中所包含的免疫原性調(diào)配物在研究、加工、研制、調(diào)配、制造、存儲(chǔ)和/或投與所述組合物的各個(gè)階段中始終穩(wěn)定且抑制其沉淀而特別有益。本發(fā)明的新穎調(diào)配物不僅使免疫原性組合物對(duì)于物理/熱應(yīng)力(例如溫度、濕度、剪切力等)穩(wěn)定，而且還增強(qiáng)免疫原性組合物對(duì)于諸如免疫原性組合物與容器/密封物系統(tǒng)(例如，硅化容器裝置)不相容等不利因素或影響的穩(wěn)定性且抑制其沉淀。
[0083]因此，本發(fā)明的新穎調(diào)配物對(duì)于使免疫原(即，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物、蛋白質(zhì)或多肽抗原)對(duì)于硅油誘導(dǎo)的沉淀和上文所述的沉淀穩(wěn)定特別有用。舉例來(lái)說(shuō)，2006年4月26日申請(qǐng)的共同待決的美國(guó)申請(qǐng)案第60 / 795，098號(hào)(特別以引用的方式并入本文中)描述免疫原性組合物在容器裝置(諸如注射器、玻璃小瓶、橡膠塞等)上所見(jiàn)的硅油存在下發(fā)生聚集，其中將表面活性劑添加到容器裝置中防止硅油誘導(dǎo)的這些免疫原性組合物聚集。
[0084]C.佐劑和醫(yī)藥載劑/賦形劑
[0085]在某些實(shí)施例中，進(jìn)一步在存在佐劑的情況下調(diào)配本發(fā)明的免疫原性組合物。佐劑為當(dāng)與免疫原或抗原一起投與時(shí)增強(qiáng)免疫反應(yīng)的物質(zhì)。經(jīng)證實(shí)，多種細(xì)胞因子或淋巴因子具有免疫調(diào)節(jié)活性且因此可用作佐劑，包括(但不限于)白細(xì)胞介素I一 α、1一 β、2、
4、5、6、7、8、10、12(例如參看美國(guó)專利第5，723，127號(hào))、13、14、15、16、17和18(和其突變形式)；干擾素-α > Y ;粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF，例如參看美國(guó)專利第5，078，996號(hào)和ATCC登記號(hào)39900)；巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF);粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF);和腫瘤壞死因子α和β (TNF)。適用于本發(fā)明中的其它佐劑包括趨化因子，包括(但不限于)MCP— 1、MIP—1 a ,MIP-1 β 和 RANTES。
[0086]在某些實(shí)施例中，用于增強(qiáng)免疫原性組合物調(diào)配物的免疫反應(yīng)的佐劑包括(但不限于)MPL?(3-0-脫?；鶈瘟柞Ｖ珹 ;科里沙公司(Corixa)，蒙大拿州漢彌敦(Hamilton，MT))，其描述于美國(guó)專利第4，912，094號(hào)中，所述專利以引用的方式并入本文中。適用作佐劑的還包括合成脂質(zhì)A類似物，或氨基烷基葡糖胺磷酸酯化合物(AGP)或其衍生物或類似物，其購(gòu)自科里沙公司(Corixa)，蒙大拿州漢彌敦(Hamilton，MT)且描述于美國(guó)專利第6，113，918號(hào)中，所述專利以引用的方式并入本文中。一種所述AGP為2-[(R)-3-十四烷酰氧基十四烷?；被鵠乙基2-脫氧-4-0-膦基-3-0-[(R)-3-十四烷酰氧基十四烷酰基]-2- [ (R) -3-十四烷酰氧基十四烷?；?氨基]-b—D-吡喃葡萄糖苷，其也稱為529 (曾稱為RC529)。此529佐劑是調(diào)配為水溶液形式或穩(wěn)定乳液形式(RC529-SE)。
[0087]其它佐劑包括礦物油和水乳液；鋁鹽(alum)，諸如氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁等；愛(ài)菲金(Amphigen);阿夫立定(Avridine) ；L121 /角S烯；D-丙交酯-聚丙交酯/糖苷；普流尼克多元醇；胞壁酰二肽；滅活博德特氏菌(killed Bordetella);皂草苷，諸如契木倫QS-21(StimulonTM QS-21)(馬薩諸塞州弗拉明漢的安帝君斯公司(Antigenics，F(xiàn)ramingham, ΜΑ.)，描述于美國(guó)專`利`第5，057，540號(hào)中，其以引用的方式并入本文中；和由其產(chǎn)生的顆粒，諸如ISCOMS (免疫刺激復(fù)合物)、ISC0MATRIX (澳大利亞派克威爾CSL有限公司(CSL Limited, Parkville, Australia)),描述于美國(guó)專利第5，254，339號(hào)中；結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)細(xì)菌脂多糖；合成聚核苷酸,諸如含有CpG基元的寡核苷酸(美國(guó)專利第6，207，646號(hào)，其以引用的方式并入本文中)、IC-31 (奧地利維也納英特塞爾AG公司(Intercell AG, Vienna, Austria),描述于歐洲專利第1，296，713號(hào)和第1，326，634號(hào)中；百日咳毒素(PT)，或大腸桿菌熱敏性毒素(LT)，尤其LT-K63、LT-R72、PT-K9 / G129 ;例如參看國(guó)際專利公開(kāi)案第W093 / 13302號(hào)和第W092 / 19265號(hào)，其以引用的方式并入本文中。
[0088]適用作佐劑(和載體蛋白)的還有霍亂毒素和其突變體，包括已公開(kāi)的國(guó)際專利申請(qǐng)案第W000 / 18434號(hào)中所述者(其中第29位氨基酸處的谷氨酸經(jīng)另一氨基酸(除天冬氨酸外)、優(yōu)選組氨酸置換)。類似CT毒素或突變體描述于已公開(kāi)的國(guó)際專利申請(qǐng)案第W002 / 098368號(hào)中(其中單獨(dú)第16位氨基酸處的異亮氨酸經(jīng)另一氨基酸置換，或者所述置換與第68位氨基酸處的絲氨酸經(jīng)另一氨基酸置換的組合；和/或其中第72位氨基酸處的纈氨酸經(jīng)另一氨基酸置換)中。其它CT毒素描述于已公開(kāi)的國(guó)際專利申請(qǐng)案第W002 /098369號(hào)(其中第25位氨基酸處的精氨酸經(jīng)另一氨基酸置換；和/或?qū)⒁粋€(gè)氨基酸插入第49位氨基酸處；和/或?qū)蓚€(gè)氨基酸插入第35位和第36位氨基酸處)。
[0089]在某些實(shí)施例中，免疫原性組合物調(diào)配物包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑。在一個(gè)實(shí)施例中，醫(yī)藥學(xué)上可接受的稀釋劑為無(wú)菌水、注射用水、無(wú)菌等滲鹽水或生物緩沖劑。將多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物和/或蛋白質(zhì)免疫原與所述稀釋劑或載劑以常規(guī)方式混合。如本文所使用，短語(yǔ)“醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑”意欲包括與對(duì)人類或其它脊椎動(dòng)物宿主投藥相容的任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸附延遲劑等。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)適當(dāng)載劑且其在很大程度上視投藥途徑而定。
[0090]舉例來(lái)說(shuō)，可存在于免疫原性組合物調(diào)配物中的賦形劑為防腐劑、化學(xué)穩(wěn)定劑和懸浮劑或分散劑。通常，將穩(wěn)定劑、防腐劑等優(yōu)化以確定有效用于對(duì)目標(biāo)受者(例如人類個(gè)體)的最佳調(diào)配物。防腐劑的實(shí)例包括氯丁醇、山梨酸鉀、山梨酸、二氧化硫、沒(méi)食子酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸酯、乙基香蘭素、甘油、苯酚和對(duì)氯苯酚。穩(wěn)定成分的實(shí)例包括酪蛋白氨基酸(casamino acid)、鹿糖、明膠、酹紅、N-Z胺、二磷酸一鉀、乳糖、水解乳白蛋白和奶粉。
[0091]在某些實(shí)施例中，制備例如液體、散劑、氣霧劑、片劑、膠囊、腸衣片劑或膠囊或栓劑形式的免疫原性組合物調(diào)配物以對(duì)人類個(gè)體投與。因此，免疫原性組合物調(diào)配物還可包括(但不限于)油性或水性媒劑中的懸浮液、溶液、乳液，糊劑和可植入持續(xù)釋放或生物可降解調(diào)配物。
[0092]本發(fā)明的免疫原性組合物不受適用于上述類型的醫(yī)藥制劑中的常規(guī)、生理學(xué)上可接受的載劑、稀釋劑和賦形劑(諸如溶劑、緩沖劑、佐劑或其它成分)的選擇的限制。由上述組分制備具有適當(dāng)PH值、等滲性、穩(wěn)定性和其它常規(guī)特征的所述醫(yī)藥學(xué)上可接受的組合物在所屬領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。
[0093]D.免疫原
[0094]在某些實(shí)施例中，本發(fā)明的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物包含一種或多種肺炎球菌多糖。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物包含一種或多種鏈球菌多糖。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物包含一種或多種腦膜炎球菌多糖。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物包含一種或多種肺炎球菌多糖、一種或多種肺炎球菌多肽、一種或多種鏈球菌多糖、一種或多種鏈球菌多肽、一種或多種腦膜炎球菌多糖和/或一種或多種腦膜炎球菌多肽的組合。
[0095]如下文所定義，術(shù)語(yǔ)“多糖”意欲包括免疫學(xué)和細(xì)菌疫苗領(lǐng)域中常用的任何抗原糖成分(或抗原單元)，包括(但不限于)“糖”、“寡糖”、“多糖”、“脂糖”、“脂寡糖(LOS) ”、“脂多糖(LPS) ”、“糖基化物”、“糖連結(jié)物”等。
[0096]在本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施例中，所述一種或多種肺炎球菌多糖為肺炎鏈球菌血清型4多糖、肺炎鏈球菌血清型6B多糖、肺炎鏈球菌血清型9V多糖、肺炎鏈球菌血清型14多糖、肺炎鏈球菌血清型18C多糖、肺炎鏈球菌血清型19F多糖、肺炎鏈球菌血清型23F多糖、肺炎鏈球菌血清型I多糖、肺炎鏈球菌血清型3多糖、肺炎鏈球菌血清型5多糖、肺炎鏈球菌血清型6A多糖、肺炎鏈球菌血清型7F多糖和肺炎鏈球菌血清型19A多糖。
[0097]在某些實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物為7價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(7vPnC)調(diào)配物，其包含肺炎鏈球菌血清型4多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6B多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型9V多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型14多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型18C多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型19F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物和肺炎鏈球菌血清型23F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物。
[0098]在某些其它實(shí)施例中，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物為13價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(13vPnC)調(diào)配物，其包含肺炎鏈球菌血清型4多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6B多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型9V多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型14多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型18C多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型19F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型23F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型I多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型3多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型5多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型7F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物和肺炎鏈球菌血清型19A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物。
[0099]多糖是通過(guò)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備。舉例來(lái)說(shuō)，本發(fā)明中所述的莢膜多糖是由肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6么、68、7?、9￥、14、18(:、194、19?和23?制備，其中使各血清型在含大豆的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，且隨后將個(gè)別多糖通過(guò)離心、沉淀、超濾和柱色譜純化。類似地，使用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常用技術(shù)和方法由臨床相關(guān)血清型或血清群制備鏈球菌多糖(例如，一種或多種來(lái)自諸如A群鏈球菌、B群鏈球菌、C群鏈球菌和G群鏈球菌等乙型溶血性鏈球菌(β-hemolytic Streptococcus)的多糖(或寡糖))和腦膜炎球菌糖(例如，腦膜炎奈瑟菌脂寡糖(LOS)或脂多糖(LPS))。隨后將經(jīng)純化多糖化學(xué)活化(例如，經(jīng)由還原胺化)以使所述糖能夠與載體蛋白反應(yīng)?；罨?，即將各莢膜多糖與載體蛋白(例如CRM197)單獨(dú)連結(jié)以形成糖連結(jié)物(或者，將各莢膜多糖與相同載體蛋白連結(jié))并且將其調(diào)配成單劑量調(diào)配物。
[0100]多糖的化學(xué)活化和隨后與載體蛋白的連結(jié)(即，多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物)是通過(guò)常規(guī)方式實(shí)現(xiàn)。例如參看美國(guó)`專利第4，673，574號(hào)和第4，902，506號(hào)。
[0101]載體蛋白優(yōu)選為無(wú)毒且無(wú)反應(yīng)性并且可以足量和純度獲得的蛋白質(zhì)。載體蛋白可接受標(biāo)準(zhǔn)連結(jié)程序。在本發(fā)明的特定實(shí)施例中，將CRM197用作載體蛋白。
[0102]CRM197(北卡羅來(lái)納州桑福德惠氏公司(Wyeth，Sanford, NC))為從生長(zhǎng)于含酪蛋白氨基酸和酵母提取物的培養(yǎng)基中的白喉?xiàng)U菌(Corynebacterium diphtheria)菌株07(β 197)的培養(yǎng)物中分離的白喉毒素的無(wú)毒變體(即，類毒素)。將CRM197通過(guò)超濾、硫酸銨沉淀和離子交換色譜純化。或者，根據(jù)美國(guó)專利第5，614，382號(hào)(其以引用的方式并入本文中)重組制備CRM197。其它白喉毒素也適于用作載體蛋白。
[0103]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明的載體蛋白為無(wú)酶活性的鏈球菌C5a肽酶(SCP)(例如，美國(guó)專利第6，951，653號(hào)、美國(guó)專利6，355，255和美國(guó)專利6，270, 775中所述的一種或多種SCP變體)。
[0104]其它適當(dāng)載體蛋白包括無(wú)活性細(xì)菌毒素，諸如破傷風(fēng)類毒素、百日咳類毒素、霍亂類毒素(例如，CT E29H，其描述于國(guó)際專利申請(qǐng)案W02004 / 083251中)、大腸桿菌LT、大腸桿菌ST和來(lái)自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)的外毒素A。也可使用細(xì)菌外膜蛋白，諸如外膜復(fù)合物c (OMPC)、孔蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白(PsaA)或流感嗜血桿菌蛋白D。也可將諸如卵清蛋白、鑰孔戚血藍(lán)蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)用作載體蛋白。
[0105]在將莢膜多糖與載體蛋白連結(jié)后，通過(guò)各種技術(shù)純化(關(guān)于多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物的量富集)多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物。這些技術(shù)包括濃縮/透濾操作、沉淀/洗脫、柱色譜和深部過(guò)濾。
[0106]在純化個(gè)別糖連結(jié)物后，將其混合以調(diào)配本發(fā)明的免疫原性組合物?？墒褂盟鶎兕I(lǐng)域認(rèn)可的方法得到本發(fā)明的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物的調(diào)配物。舉例來(lái)說(shuō)，可將13種個(gè)別肺炎球菌連結(jié)物與生理學(xué)上可接受的媒劑一起調(diào)配來(lái)制備所述組合物。所述媒劑的實(shí)例包括(但不限于)水、緩沖鹽水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液體聚乙二醇)和右旋糖溶液。
[0107]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使鏈球菌C5a肽酶(SCP)免疫原性組合物穩(wěn)定的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物包含PH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約6.5的pKa值；表面活性劑；和鏈球菌C5a肽酶。C5a肽酶為高度保守的絲氨酸蛋白酶且其在所有乙型溶血性鏈球菌(例如A群、B群、C群和G群鏈球菌)中表達(dá)。舉例來(lái)說(shuō)，編碼B群鏈球菌(GBS) C5a肽酶的核苷酸序列與編碼A群鏈球菌(GAS) C5a肽酶的核苷酸序列98%—致。因此，在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，針對(duì)由乙型溶血性鏈球菌所引起的感染的免疫原性組合物包含C5a肽酶免疫原(或抗原)。
[0108]在一個(gè)特定實(shí)施例中，本發(fā)明的C5a肽酶為無(wú)酶活性的鏈球菌C5a肽酶(例如，美國(guó)專利第6，951，653號(hào)、美國(guó)專利6，355，255和美國(guó)專利6，270, 775中所述的一種或多種SCP變體，所述專利各自特定地以引用的方式并入本文中)。在另一特定實(shí)施例中，用于本發(fā)明的新穎免疫原性組合物調(diào)配物中的SCP是從B群鏈球菌克隆。在另一實(shí)施例中，已使B群鏈球菌SCP序列基因突變以使其無(wú)蛋白分解活性(例如參看美國(guó)專利6，951，653、6，355，255和6，270, 775)且在大腸桿菌中表達(dá)為重組蛋白。
[0109]在另一實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使腦膜炎奈瑟菌2086蛋白免疫原性組合物穩(wěn)定的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物包含PH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的PKa值；表面活性劑；和腦膜炎奈瑟菌2086蛋白。通過(guò)鑒別為“0RF2086”的核酸序列開(kāi)放式閱讀框(ORF)編碼腦膜炎奈瑟菌2086蛋白(例如參看國(guó)際公開(kāi)案第W003 / 063766A2號(hào)(國(guó)際申請(qǐng)案第PCT / US02 / 32369號(hào))、國(guó)際公開(kāi)案第W004 / 094596A2號(hào)(國(guó)際申請(qǐng)案第PCT / US04 / 011901號(hào))和國(guó)際公開(kāi)案第W004 / 065603A2號(hào)(國(guó)際申請(qǐng)案第PCT /US04 / 000800號(hào))，其各自特定地以引用的方式并入本文中)。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明針對(duì)使腦膜炎奈瑟菌2086蛋白的抗原穩(wěn)定性以及與鋁鹽佐劑(例如AlPO4)的結(jié)合百分比優(yōu)化的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物包含PH值緩沖鹽水溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約
7.5的pKa值；表面活性劑；和腦膜炎奈瑟菌2086蛋白。
[0110]本文中所引用的所有專利和公開(kāi)案都是以引用的方式并入本文中。
[0111]E.實(shí)例
[0112]以下實(shí)例是使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行，除非另外詳述，否則所述技術(shù)為所屬領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知且常用。以下實(shí)例是出于說(shuō)明的目的提供且不應(yīng)以任何方式解釋為限制本發(fā)明的范圍。
[0113]實(shí)例I
[0114]包含0.001% -0.05%吐溫80的免疫原性調(diào)配物使免疫原穩(wěn)定且防止其聚集[0115]用于本實(shí)例中的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物為13價(jià)肺炎球菌多糖連結(jié)物(13vPnC)，其包含來(lái)自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、18C、19F、14、23F、1、3、5、6A、7F和19A的莢膜多糖，所述多糖各自與CRM197連結(jié)。莢膜多糖是通過(guò)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，使各肺炎球菌多糖血清型在含大豆的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，隨后通過(guò)離心、沉淀、超濾和柱色譜來(lái)純化個(gè)別多糖。將經(jīng)純化多糖化學(xué)活化以供連結(jié)，且將各多糖與CRM197載體蛋白單獨(dú)連結(jié)以形成糖連結(jié)物，并將其調(diào)配成單劑量調(diào)配物。
[0116]多糖的化學(xué)活化和隨后與載體蛋白的連結(jié)是通過(guò)常規(guī)方式完成(例如參看美國(guó)專利第4，673，574號(hào)和第4，902，506號(hào))。CRM197 (北卡羅來(lái)納州桑福德惠氏公司(Wyeth,Sanford, NC))為從生長(zhǎng)于含酪蛋白氨基酸和酵母提取物的培養(yǎng)基中的白喉?xiàng)U菌菌株C7(i3 197)的培養(yǎng)物中分離的白喉毒素的無(wú)毒變體(即，類毒素)。通過(guò)超濾、硫酸銨沉淀和離子交換色譜將CRM197純化。
[0117]通過(guò)將13vPnC樣本與13種對(duì)各多糖血清型具特異性的抗血清(Ab)中的一種混合且經(jīng)由在Array? 360系統(tǒng)(貝克曼庫(kù)爾特有限公司(Beckman Coulter, Inc.);加州富爾頓(Fullerton，CA))上進(jìn)行光散射測(cè)量以檢測(cè)免疫復(fù)合物來(lái)進(jìn)行下文所述的抗原性實(shí)驗(yàn)。隨后將所檢測(cè)的13種血清型中每一種的光散射測(cè)量值與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較并報(bào)導(dǎo)為抗原性(μ g / ml)。
[0118]注射器(BD海派公司SCF?)和注射器塞(BD海派公司SCF?)是購(gòu)自BD生物技術(shù)公司(BD Biosciences)(新澤西州弗蘭克林湖(Franklin Lakes, NJ))。具有內(nèi)襯有特氟隆(Teflon?)密封物的透明硼硅酸鹽小瓶(VWR TraceClean?,40mL)是購(gòu)自VWR?(賓西法尼亞州西切斯特(West Chester, PA))。聚山梨醇酯80 (吐溫80)是購(gòu)自J.T.Baker (馬林克羅特貝克有限公司(Mallinckrodt Baker, Inc.);新澤西州菲利斯堡(PhiIIipsburg,NJ))。緩沖鹽水為ρΗ5.8的琥珀酸鹽(5mM)和NaCl (0.85% )?
[0119]如下所述在不同表面活性劑濃度(吐溫80 ;0.001%、0.005%、0.01%和0.05%重量/體積)下調(diào)配13vPnC(500mL總體積):將0.85%鹽水(150mM NaCl)添加到I升派熱克斯(Pyrex?)玻璃燒杯中 ，隨后添加50mM琥珀酸鹽緩沖液(最終濃度5mM)和13vPnC。各血清型連結(jié)物的最終濃度為4.4 μ g / mL (血清型6B除外，其為8.8 μ g / mL)。隨后將13vPnC調(diào)配物分到5個(gè)單獨(dú)玻璃小瓶(每瓶50mL)中，其中將0.0%、0.001 %、0.005%、0.01%或0.05%吐溫80(w / V)添加到5個(gè)小瓶中的一個(gè)中，且使各溶液過(guò)濾通過(guò)0.22 μ m杜魯珀(Durapore?)過(guò)濾器(密理博公司(Millipore);馬薩諸塞州畢萊卡(Billerica,MA))。接著，將0.65mL各溶液填充于分開(kāi)的具有w4432灰色塞子的3mL BD海派SCF?玻璃注射器(BD醫(yī)療器械公司(BD Medical Pharmaceutical Systems);新澤西州弗蘭克林湖(Franklin Lakes, NJ))中，并在2°C到8°C下將注射器放于水平旋轉(zhuǎn)式振蕩器(60cpm)上達(dá)100小時(shí)。
[0120]目視檢查觀察到(資料未顯示)，在2—8°C下當(dāng)經(jīng)由水平旋轉(zhuǎn)式振蕩器輕柔攪動(dòng)后，在不存在吐溫80 (即0.0% )的情況下調(diào)配的13vPnC將在10分鐘內(nèi)自溶液中沉淀析出。相比之下，在0.001%,0.005%,0.01%或0.05%吐溫80中調(diào)配且在2 — 8°C下輕柔攪動(dòng)的13vPnC可穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)25天，而無(wú)可見(jiàn)的沉淀跡象(資料未顯示)。因此，此資料表明，將表面活性劑(例如，吐溫80)添加到免疫原性組合物調(diào)配物中會(huì)增強(qiáng)免疫原性組合物的穩(wěn)定性。
[0121]關(guān)于13vPnC的第二穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，將表面活性劑添加到調(diào)配物中會(huì)顯著增強(qiáng)13vPnC的穩(wěn)定性。在此實(shí)驗(yàn)中，在存在和不存在0.05%吐溫80的情況下調(diào)配13vPnC。在不存在吐溫80(即0.0% )的情況下調(diào)配的13vPnC制備如下:將0.85%鹽水(150mM NaCl)添加到I升派熱克斯玻璃燒杯中，隨后添加50mM琥珀酸鹽緩沖液(最終濃度5mM)和13vPnC，總體積為500mL。具有0.05%吐溫80的13vPnC調(diào)配物制備如下:將0.85%鹽水(150mM NaCl)添加到I升派熱克斯玻璃燒杯中，隨后添加50mM琥珀酸鹽緩沖液(最終濃度5mM)、0.05%吐溫80和13vPnC，總體積為500mL。500mL調(diào)配物中各血清型連結(jié)物的最終濃度為4.4μ g / mL(血清型6B除外，其為8.8 μ g / mL)。經(jīng)由轉(zhuǎn)子/定子均質(zhì)機(jī)以6，OOOrpm(2—80C )將500mL調(diào)配物均質(zhì)化120分鐘。均質(zhì)化過(guò)程產(chǎn)生空氣-液體界面(具有氣泡)。
[0122]如下評(píng)定2小時(shí)時(shí)間段內(nèi)具有(表1)和不具有(表1)0.05%吐溫80的13vPnC調(diào)配物的穩(wěn)定性:在0、30分鐘和120分鐘時(shí)將樣本(20— 30mL)從0.0%和0.05 %吐溫80調(diào)配物中移出，將樣本以1:2稀釋于蛋白質(zhì)稀釋劑(Array.360蛋白質(zhì)稀釋劑(目錄號(hào)663630);貝克曼庫(kù)爾特有限公司(Beckman Coulter, Inc.);加州富爾頓(Fullerton,CA))中，且在Array? 360系統(tǒng)上分析13vPnC的所有13種血清型的抗原性。
[0123]如表1中所示，在2小時(shí)的分析中，13種血清型多糖(未用吐溫80調(diào)配)的抗原性顯著降低。然而，特別引人注目的是，包含0.05%吐溫80 (表1)的13vPnC調(diào)配物在2小時(shí)的抗原性分析中展現(xiàn)穩(wěn)固的穩(wěn)定性，不存在抗原性的降低。
[0124]表1
[0125]具有和不具有吐溫80的13vPNC調(diào)配物的穩(wěn)定性分析
[0126]無(wú)吐溫80的13vPnC具有0.05%吐溫80的13vPnC
[0127]
【權(quán)利要求】
1.一種使多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物穩(wěn)定的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i)pH值緩沖鹽溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；(ii)表面活性劑；和(iii) 一種或多種多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物。
2.一種抑制聚硅氧誘導(dǎo)的硅化容器裝置中所包含的多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物聚集的調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(i) PH值緩沖鹽溶液，其中所述緩沖液具有約3.5到約7.5的pKa值；(?)鋁鹽；和(iii) 一種或多種多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的調(diào)配物，其中所述pH值緩沖鹽溶液具有5.5—7.5的pH值。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其中所述緩沖液為磷酸鹽、琥珀酸鹽、組氨酸或檸檬酸鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其中pH緩沖鹽溶液中的鹽包含氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉或其組合
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其中所述緩沖液為最終濃度為ImM到IOmM且pH值為5.8到6.0的琥珀酸鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的調(diào)配物，其中所述pH值緩沖鹽溶液具有5.5—7.5的pH值，其中所述緩沖液是組氨酸以及其中所述PH值緩沖鹽溶液中的鹽為氯化鈉。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其包括表面活性劑，所述表面活性劑選自如下構(gòu)成的群組: 聚山梨醇酯20 (polysorbate20)(吐溫20 (Tween?20))、聚山梨醇酯40 (吐溫40)、聚山梨醇酯60 (吐溫60)、聚山梨醇酯65 (吐溫65)、聚山梨醇酯80 (吐溫80)、聚山梨醇酯85 (吐溫 85)))、曲通 N—101 (Triton?N一 101)、曲通 X-100、氧托夕醇 40 (oxtoxynol40)、壬苯醇醚-9 (nonoxynol-9)、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸鹽、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG —15，索羅托H15 (Solutol H15))、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(克林莫佛EL (Cremophor EL?))、大豆卵磷月旨(soy lecithin)和泊洛沙姆(poloxamer)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的調(diào)配物，其中所述表面活性劑為聚山梨醇酯80。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物中的所述聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積所述調(diào)配物至少0.01重量％到10重量％聚山梨醇酯80。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物中的所述聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積所述調(diào)配物0.01重量％聚山梨醇酯80。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物中的所述聚山梨醇酯80的最終濃度為每體積所述調(diào)配物0.05重量％聚山梨醇酯80。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物另外包含一種或多種佐劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的調(diào)配物，其中所述佐劑為鋁鹽。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的調(diào)配物，其中所述鋁鹽為氫氧化鋁、磷酸鋁或硫酸鋁。
16.根據(jù)權(quán)利 要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其中所述多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物包含一種或多種肺炎球菌多糖。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其另外包含一種或多種腦膜炎球菌多糖、一種或多種腦膜炎球菌抗原蛋白或其組合。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其另外包含一種或多種鏈球菌多糖、一種或多種鏈球菌抗原蛋白或其組合。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的調(diào)配物，其中所述一種或多種肺炎球菌多糖包含肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)血清型4多糖、肺炎鏈球菌血清型6B多糖、肺炎鏈球菌血清型9V多糖、肺炎鏈球菌血清型14多糖、肺炎鏈球菌血清型18C多糖、肺炎鏈球菌血清型19F多糖和肺炎鏈球菌血清型23F多糖、肺炎鏈球菌血清型I多糖、肺炎鏈球菌血清型3多糖、肺炎鏈球菌血清型5多糖、肺炎鏈球菌血清型6A多糖、肺炎鏈球菌血清型7F多糖和肺炎鏈球菌血清型19A多糖。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物，其中所述多糖-蛋白質(zhì)連結(jié)物調(diào)配物為13價(jià)肺炎球菌連結(jié)物(13vPnC)調(diào)配物，其包含肺炎鏈球菌血清型4多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6B多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型9V多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型14多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型18C多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型19F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型23F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型I多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型3多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型5多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型6A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物、肺炎鏈球菌血清型7F多糖與CRM197多肽的連結(jié)物和肺炎鏈球菌血清型19A多糖與CRM197多肽的連結(jié)物。
21.一種容器裝置，其填充有權(quán)利要求1-20中任一權(quán)利要求所述的調(diào)配物。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的容器裝置，其選自如下構(gòu)成的群組:小瓶、注射器、燒瓶、發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器、管道、導(dǎo)管、袋子、廣□瓶、安瓿、藥筒和一次性筆。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的容器裝置，其中所述容器由玻璃、金屬或聚合物制備。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的容器裝置，所述容器為注射器。
25.根據(jù)權(quán)利要求22所述的容器裝置，所述容器為玻璃注射器。
26.根據(jù)權(quán)利要求21-25中任一權(quán)利要求所述的容器裝置，所述容器裝置經(jīng)硅化。
【文檔編號(hào)】A61K47/12GK103768615SQ201310587301
【公開(kāi)日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2007年4月19日 優(yōu)先權(quán)日:2006年4月26日
【發(fā)明者】拉克希米·坎德克, 陳英, 漢揚(yáng)·韓, 羅伯特·詹塞·小賽義德, 金照偉, 吉·隆·盧克, 羅納德·馬隆, 楊旭東 申請(qǐng)人:惠氏公司