一種雷公藤紅素衍生物的制備方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種雷公藤紅素衍生物的制備方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用，該制備方法以雷公藤紅素為微生物代謝藥物，通過特殊誘導(dǎo)子對微生物代謝雷公藤紅素，同時得到多種、高產(chǎn)率的基于雷公藤紅素的羥基、還原或羧基化等取代修飾的雷公藤紅素衍生物。本發(fā)明方法綠色環(huán)保、選擇性強、產(chǎn)率高，能夠大規(guī)模利用微生物制備雷公藤紅素衍生物，且制備的雷公藤紅素衍生物具有高效、低毒等特點，能夠?qū)嶋H地用于腫瘤、病毒性疾病和神經(jīng)損傷性疾病的治療，為雷公藤紅素衍生物提供了廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】—種雷公藤紅素衍生物的制備方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明涉及一種雷公藤紅素衍生物的制備方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用。
【【背景技術(shù)】】
[0002]衛(wèi)矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.),收載于《滇南本草》,其產(chǎn)地主要分布在中國南部，包括浙江、湖南、安徽、云南、福建和臺灣等地，其中以福建泰寧產(chǎn)的雷公藤質(zhì)量為最優(yōu)[1]。而雷公藤紅素(celastrol, CS)，屬醌甲基三萜類化合物，是雷公藤主要的活性成分之一，其在抗癌、抗炎、特別是治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括:阿爾茲海默病(早老性癡呆，AD)、帕金森病(PD)、亨延頓氏退行性疾病(HD)和脊髓損傷、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)疾病等方面表現(xiàn)出了突出的藥理活性，特別是對“全長變異亨延頓神經(jīng)元細(xì)胞顯型的逆轉(zhuǎn)作用十分突出，其對其聚合谷氨酸調(diào)節(jié)積累的半數(shù)抑制率為(IC5(i=2.5um)，這一抑制率與美國國立神經(jīng)疾病研究所(NINDS)，所列出的全部1040個治療HD的藥物中排列于前10位，而在另一方面，雷公藤紅素作為有效的蛋白酶體抑制劑，通過抑制伴侶蛋白(Hsp90)表達(dá)，發(fā)揮誘導(dǎo)腫瘤凋亡，顯示了非常突出的抗腫瘤作用，為此，雷公藤紅素在抑制腫瘤和神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)的藥物開發(fā)方面，顯示了巨大的應(yīng)用前景。然而，雷公藤紅素極低的水溶性所引起制劑困難、對酸堿敏感而引發(fā)的分解、還原和重排，聚合不穩(wěn)定性等都限制了其研發(fā)進(jìn)程和臨床應(yīng)用(引用文獻(xiàn)如下:孫紅莉.雷公藤紅素衍生物的化學(xué)合成及其活性研究[博士論文].暨南大學(xué)，2010)。[0003]鑒于上述問題，國內(nèi)外學(xué)者成功運用化學(xué)法對雷公藤紅素進(jìn)了多種修飾改造，其中化學(xué)合成法合成的衍生物包括:二氫雷公藤紅素及多種雷公藤紅素類似物(公開文獻(xiàn)如下:(Nagase M, Oto J, Sugiyama S，et al.Apoptosis induction inHL_60cells and inhibition of topoisomerase II by triterpene celastrol.Bioscience,biotechnology, and biochemistry, 2003, 67(9):1883-1887)、(Devlin, JP.Derivatives of pentacyclic nortriterpene quinone methides as compounds usefulin the treatment of inflammatory neurodegenerative and neoplastic diseases, USpatent 2004/0220267 Al, 2004-11-04))，雷公藤紅素有機酯類衍生物(雷公藤紅素甲酯、雷公藤紅素乙酯、雷公藤紅素丙酯、雷公藤紅素丁酯、雷公藤紅素卞酯、14N-甲基-哌嗪酸-雷公藤紅素酯、3-乙基雷公藤紅素、3- 丁基雷公藤紅素、3-丙基雷公藤紅素、3-異丁基雷公藤紅素、3-川芎嗪酸雷公藤紅素、28-川芎嗪酸雷公藤紅素、a-硫辛酸雷公藤紅素酯(公開專利為:王玉強，孫紅莉，徐立朋，等。一種雷公藤紅素衍生物及其用途，中國專利20101015042 8.6.2010-04-23)、雷公藤紅素磺酸鈉類衍生物(2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素甲酯，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素丁酯，2，3，7羥基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2-羥基-3乙?；?6磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6磺胺-雷公藤紅素甲酯)(公開專利為:(Zeng JF, Pan JF1Li BY etal.Water-soluble triterpenephenol compound having antitumor activity and thepreparation thereof, US patent 2010/0267983, 2010-10-21), (Zeng JF, Pan JF, Li BYet al.Water-soluble triterpenephenol compound having antitumor activity andthe preparation thereof, European patent，EP，2012/2213679 BI，2012-06-06))和雷公藤紅素酰胺類衍生物(28- (4，-甲氧基)-芐基酰胺雷公藤紅素，28-芐基酰胺雷公藤紅素，28- (3，-吡啶)甲酰胺基雷公藤紅素，28-異丙基酰胺雷公藤紅素、28- (N-甲基)-甲酰胺雷公藤紅素，28-吡咯烷酰胺雷公藤紅素、28-甲氧基乙基酰胺雷公藤紅素、28-嗎啉酰胺雷公藤紅素、28-N-甲基酰胺雷公藤紅素、雷公藤紅素28-N-甲基哌嗪酰胺、雷公藤紅素苯甲酸酯、雷公藤紅素異丙酯)(公開專利為:Ze，ev A, R, Anindita, B, Nicholas DP, C etal.Compositions and methods for inhibiting growth and metastasis melanoma.USpatent 2011/7888355 B2，2011-02-15)。雖然化學(xué)修飾為大規(guī)模制備雷公藤紅素相關(guān)衍生物提供了廣闊的前景，但是但化學(xué)合成法存在得率低、選擇性差、副產(chǎn)品多、過程較繁雜等缺點，而且目前大多數(shù)衍生物的作用與雷公藤紅素相比，還相對較弱，為此，具有一定的局限性。[0004]由于雷公藤紅素水溶性極差，其在體內(nèi)發(fā)揮最用的應(yīng)該以其體內(nèi)代謝產(chǎn)物為主，雖然雷公藤紅素體內(nèi)代謝產(chǎn)物已經(jīng)部分闡明，但是利用化學(xué)方法直接得到與雷公藤代謝相同的成分，比較少，而在另一方面，利用具有仿生代謝能力的微生物直接通過微生物特殊的酶促作用直接轉(zhuǎn)化生物雷公藤紅素產(chǎn)生多種體內(nèi)代謝、減毒后的雷公藤紅素的衍生物已經(jīng)取得了很好的效果，但該代謝的方法在雷公藤紅素方面的應(yīng)用極少，目前尚未見到系統(tǒng)的報道結(jié)果。因此，需要利用生物工程的這項技術(shù)，以此得到更多的雷公藤紅素衍生物。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之一，在于提供一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，該方法綠色環(huán)保、選擇性強、產(chǎn)率高，能夠大規(guī)模利用微生物制備雷公藤紅素衍生物。
[0006]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)上述技術(shù)問題之一的:
[0007]一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，包括以下步驟:
[0008]步驟一:取保存于4°C、土豆斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)的、轉(zhuǎn)化菌種一支，置于25°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天后，以適量無菌水將斜面上的孢子充分吹打下來，使單孢子懸液的濃度調(diào)整至107~108個/mL，既得種子孢子液；
[0009]步驟二:以lOOmL，5mL的接種量，在土豆液體培養(yǎng)基上接種步驟一所得孢子液，在pH至6.0，溫度30°C ±1°C，振蕩速度為200r/min條件下培養(yǎng)12h后；按0.1~4ug的接種量，加入各種不同比例的聯(lián)合誘導(dǎo)子，繼續(xù)培養(yǎng)12h后，再按I~IOug的接種量加入雷公藤紅素，然后繼續(xù)培養(yǎng)5天，每天檢測各種雷公藤紅素衍生物的含量和轉(zhuǎn)化率，當(dāng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率低至0.5~3%時,停止培養(yǎng),過濾后收集菌絲體，然后將濾液于8000r/min,離心IOmin去除沉淀既得到發(fā)酵提取液；
[0010]步驟三:將步驟二所得提取液過濾，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取3遍，合并萃取液；而菌絲體則用重量比為1:3~1:10的乙酸乙酯超聲提取30min，然后濾去菌絲體，所得濾液與萃取液合并，既得分離提取液，提取液濃縮至干，得到提取后殘渣；
[0011]步驟四:將經(jīng)過步驟三處理所得的殘渣，用Img:1~IOmL的比例用丙酮溶解后，采用硅膠拌樣后揮干，稱取20倍于樣品量的硅膠，使用濕法進(jìn)行填柱(硅膠柱，欣維爾，MCT-G-05 ;裝樣量為每mL為20g硅膠)和上樣；首先用5倍柱體積的100%石油醚將樣品中低極性油類物質(zhì)洗脫干凈，然后依次用體積比為:5:2，2:3，2:5，0:5的石油醚:二氯甲烷的洗脫液，體積比為10:0，8:1，6:1，4:1，2:1，1:1，1:2，1:4，1:6，1:8的二氯甲烷:乙酸乙酯洗脫液，以及100%乙酸乙酯洗脫液，依次對柱子進(jìn)行洗脫，TLC控制收集主餾分，最后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將各個餾分的流動相蒸干后，用適量色譜純的甲醇溶解后，用0.22 μ m的有機膜過濾后，得到分離液。
[0012]步驟五:將經(jīng)過步驟四處理所得的分離液，采用高效液相半制備法分離純化，HPLC梯度洗脫法控制收集不同的雷公藤紅素衍生物洗脫液，減壓蒸去溶劑后，用甲醇結(jié)晶后所得到的化合物，即為所述的雷公藤紅素衍生物。
[0013]進(jìn)一步地，所述土豆培養(yǎng)基為:土豆200g/L，葡萄糖20g/L ;配置時將土豆去皮后將其切成小塊，加水加熱煮沸30min，過濾，取濾液定容至1L，加入葡萄糖20g，攪拌溶解后，121°C滅菌30min，即得；[0014]斜面培養(yǎng)基為:取上述土豆培養(yǎng)基1L，加入瓊脂粉各20g，加熱溶解后分裝于玻璃試管中，于121 °C下滅菌30min后取出，傾斜45度，靜置、冷卻既得。
[0015]進(jìn)一步地，所述轉(zhuǎn)化菌種為下述微生物中任意一種:
[0016]短刺小克銀漢霉(Cunninghamellablakesleana)AS3.970;AS3.153;AS3.910 ；AS3.954, AS3.2016 ;AS3.2017 ;AS3.2018 ;AS3.3401;或者刺孢小克銀漢霉(Cunninghamellaechinulata)AS3.154;AS3.952;AS3.953;AS3.1969;AS3.1970;AS3.1971;AS3.1977;AS3.1978;AS3.1979;AS3.1980;AS3.1981;AS3.1987;AS3.1988;AS3.1989;AS3.1990;AS3.2000;AS3.2004;AS3.2005;AS3.2006;AS3.2011;AS3.2015;AS3.2473;AS3.2474;AS3.2475;AS3.2716 ;AS3.400;或者雅致小克銀漢霉(Cunninghamella elegans.) AS3.156;AS3.1207;AS3.1659;AS3.2028;AS3.2031;AS3.2032;AS3.2033;AS3.2041;AS3.2476;AS3.2477;AS3.2717 ;AS3.3402 ;AS3.2476;小克銀漢霉 CFCC5029;或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans(Lendner) Lunn et Shipton,teleomorph ATCC9245 ；ATCC8688a ；ATCC8983 ；或者 Cunninghamella echinulata(Thaxter)Thaxter var.echinulata, teleomorphATCCl1585a；ATCC36190 ；ATCC11585b ；ATCC9244 ；或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans(Lendner)Lunn et Shipton, teleomorph ATCCl1064 ；ATCC10028a ；或者Cunninghamella elegans ATCC36112 ；ATCC26269 ；ATCC10028b ；黑曲霉 Aspergillusniger AS3.40;AS3.315;AS3.316;AS3.350;AS3.429;AS3.739;AS3.879;AS3.939;AS3.940;AS3.1858 ;AS3.2931 ;AS3.3882;AS3.3883;AS3.4303 ; AS3928 ; AS3.4304 ;AS3.4309;AS3.4463;AS3.4304;AS3.4523 ;黃曲霉、刺囊毛霉、細(xì)孢毛霉、鏈格孢、微紫青霉和蕁麻青霉。
[0017]進(jìn)一步地，所述的聯(lián)合誘導(dǎo)子為下述三組物質(zhì)中的至少兩組中的任意一種物質(zhì)組成:
[0018]A組:A1為α -環(huán)糊精，Α2為β _環(huán)糊精，A3為2，6- 二甲基-β -環(huán)糊精，Α4為
2-羥丙基-β -環(huán)糊精，Α5為甲基化-β -環(huán)糊精、Α6為羥乙基-β -環(huán)糊精，Α7為葡萄糖-β -環(huán)糊精，AS為磺丁基-β -環(huán)糊精，Α9為Y -環(huán)狀糊精，AlO為羧甲基-β -環(huán)糊精；
[0019]B組:B1為茉莉酸甲酯，B2為水楊酸，B3為殼聚糖，B4為茉莉酸，B5為真菌聚糖類，B6為β -葡聚糖，Β7為谷胱甘肽，Β8為2-羥乙基茉莉，Β9為油菜素內(nèi)酯，BlO為云酯，Bll為甲殼素；Β12為小克銀漢霉屬AL4粗誘導(dǎo)子；
[0020]C組:C1為卡馬西平，C2為莫達(dá)非尼，C3為奈韋拉平，C4為利福平，C5為貫葉連翹，C6為異煙肼，C7為胰島素，C8為奧美拉唑，C9為苯巴比妥，ClO為潑尼松，Cll為潑尼松龍，C12為地塞米松，C13為倍他米松，C14為倍氯米松，C15為戊酸倍他米松，C16為醋酸地塞米松，C17為9-氣~16 α -甲基11 β , 17- 二羥基_3-氧-1,4-雄二稀-17 β -竣酸等。
[0021]進(jìn)一步地，TLC控制收集主餾分，用體積比為70:12的氯仿和甲醇為展開劑；
[0022]所述產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18柱，其中分析柱內(nèi)徑乘以長度為4.6mmX250mm，粒徑為5μπι;雷公藤紅素檢測波長:427nm，室溫；進(jìn)樣量:10 μ L ;
[0023]所述梯度洗脫法控制不同的雷公藤紅素衍生物的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，其中分析柱內(nèi)徑乘以長度為4.6mmX 250mm，粒徑為5 μ m ;吸收波長:427nm ；
[0024]流動相:甲醇:0.1%磷酸水的體積比和洗脫時間分別如下:27:73、洗脫時間Omin ；5:95、洗脫時間 20min ；17:83、洗脫時間 25min ；27:73、洗脫時間 28min，27:73、洗脫時間30min ；
[0025]上述對應(yīng)的流速為:0.5ml/min ;0.5ml/min ； lml/min ； lml/min ；0.5ml/min ；柱穩(wěn):25°C、進(jìn)樣量:20 μ I。
[0026]進(jìn)一步地，所述方法可用于制備的雷公藤紅素衍生物如下:二氫雷公藤紅素，二氫扁塑藤素，二氫雷公藤酹Β6, 二氫tingenine B4, 二氫雷公藤酸A、二氫雷公藤酸C、二氫pristimerol、雷公藤紅素甲酯、雷公藤紅素乙酯、雷公藤紅素丙酯、雷公藤紅素丁酯、雷公藤紅素卞酯、14N-甲基-哌嗪酸-雷公藤紅素酯、3-乙基雷公藤紅素、3- 丁基雷公藤紅素、
3-丙基雷公藤紅素、3-異丁基雷公藤紅素、3-川芎嗪酸雷公藤紅素、28-川芎嗪酸雷公藤紅素、a-硫辛酸雷公藤紅素酯、2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素甲酯，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素丁酯，2，3，7羥基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2-羥基-3乙?；?6磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6磺胺-雷公藤紅素甲酯、28-(4’_甲氧基)-芐基酰胺雷公藤紅素，28-芐基酰胺雷公藤紅素，28- (3’ -吡啶)甲酰胺基雷公藤紅素，28-異丙基酰胺雷公藤紅素、28- (N-甲基)-甲酰胺雷公藤紅素，28-吡咯烷酰胺雷公藤紅素、28-甲氧基乙基酰胺雷公藤紅素、28-嗎啉酰胺雷公藤紅素、28-N-甲基酰胺雷公藤紅素、雷公藤紅素28-N-甲基哌嗪酰胺、雷公藤紅素苯甲酸酯、雷公藤紅素異丙酯等雷公藤紅素衍生物。
[0027]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之二，在于提供一種雷公藤紅素衍生物，其具有高效、低毒等特點，能夠?qū)嶋H地用于腫瘤、病毒性疾病和神經(jīng)損傷性疾病的治療，為雷公藤紅素衍生物提供了廣闊的應(yīng)用前景。
[0028]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)上述技術(shù)問題之二的:
[0029]一種雷公藤紅素衍生物，所述雷公藤紅素衍生物的結(jié)構(gòu)式a如下:
[0030]
【權(quán)利要求】
1.一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: 步驟一:取保存于4°c、土豆斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)的、轉(zhuǎn)化菌種一支,置于25°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天后，以適量無菌水將斜面上的孢子充分吹打下來，使單孢子懸液的濃度調(diào)整至IO7~IO8個/mL，既得種子孢子液； 步驟二:以100mL，5mL的接種量，在土豆液體培養(yǎng)基上接種步驟一所得孢子液，在pH至 6.0，溫度30°C 土 TC，振蕩速度為200r/min條件下培養(yǎng)12h后；按0.1~4ug的接種量，加入各種不同比例的聯(lián)合誘導(dǎo)子，繼續(xù)培養(yǎng)12h后，再按I~IOug的接種量加入雷公藤紅素，然后繼續(xù)培養(yǎng)5天，每天檢測各種雷公藤紅素衍生物的含量和轉(zhuǎn)化率，當(dāng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率低至0.5~3%時,停止培養(yǎng),過濾后收集菌絲體,然后將濾液于8000r/min,離心IOmin去除沉淀既得到發(fā)酵提取液； 步驟三:將步驟二所得提取液過濾，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取3遍，合并萃取液；而菌絲體則用重量比為1:3~1:10的乙酸乙酯超聲提取30min，然后濾去菌絲體，所得濾液與萃取液合并，既得分離提取液，提取液濃縮至干，得到提取后殘渣； 步驟四:將經(jīng)過步驟三處理所得的殘渣，用Img:1~IOmL的比例用丙酮溶解后，采用硅膠拌樣后揮干，稱取20倍于樣品量的硅膠，使用濕法進(jìn)行填柱和上樣；首先用5倍柱體積的100%石油醚將樣品中低極性油類物質(zhì)洗脫干凈，然后依次用體積比為:5:2，2:3，2:5，0:5的石油醚:二氯甲烷的洗脫液，體積比為10:0，8:1，6:1，4:1，2:1，1:1，1:2，1:4，1:6，1:8的二氯甲烷:乙酸乙酯洗脫液，以及100%乙酸乙酯洗脫液，依次對柱子進(jìn)行洗脫，TLC控制收集主餾分，最后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將各個餾分的流動相蒸干后，用適量色譜純的甲醇溶解后，用0.22 μ m的有機膜過濾后，得到分離液； 步驟五:將經(jīng)過步驟四處理所得的分離液，采用高效液相半制備法分離純化，HPLC梯度洗脫法控制收集不同的雷公藤紅素衍生物洗脫液，減壓蒸去溶劑后，用甲醇結(jié)晶后所得到的化合物，即為所述的雷公藤紅素衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，其特征在于:所述土豆培養(yǎng)基為:土豆200g/L，葡萄糖20g/L ;配置時將土豆去皮后將其切成小塊，加水加熱煮沸30min，過濾，取濾液定容至1L，加入葡萄糖20g，攪拌溶解后，121°C滅菌30min，即得； 斜面培養(yǎng)基為:取上述土豆培養(yǎng)基1L，加入瓊脂粉各20g，加熱溶解后分裝于玻璃試管中，于121 °C下滅菌30min后取出，傾斜45度，靜置、冷卻既得。
3.如權(quán)利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，其特征在于:所述轉(zhuǎn)化菌種為下述微生物中任意一種: 短刺小克銀漢霉(Cunninghamella blakesleana)AS3.970;AS3.153;AS3.910 ；AS3.954, AS3.2016 ;AS3.2017 ;AS3.2018 ;AS3.3401;或者刺孢小克銀漢霉(Cunninghamellaechinulata)AS3.154;AS3.952;AS3.953;AS3.1969;AS3.1970;AS3.1971;AS3.1977;AS3.1978;AS3.1979;AS3.1980;AS3.1981;AS3.1987;AS3.1988;AS3.1989;AS3.1990;AS3.2000;AS3.2004;AS3.2005;AS3.2006;AS3.2011;AS3.2015;AS3.2473;AS3.2474;AS3.2475;AS3.2716 ;AS3.400;或者雅致小克銀漢霉(Cunninghamella elegans.) AS3.156;AS3.1207;AS3.1659;AS3.2028;AS3.2031;AS3.2032;AS3.2033;AS3.2041;AS3.2476;AS3.2477;AS3.2717 ;AS3.3402 ;AS3.2476;小克銀漢霉 CFCC5029;或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans (Lendner)Lunn et Shipton, teleomorph ATCC9245 ；ATCC8688a ；ATCC8983 ；或者 Cunninghamella echinulata(Thaxter)Thaxter var.echinulata, teleomorphATCC11585a；ATCC36190 ；ATCC11585b ；ATCC9244 ；或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans(Lendner)Lunn et Shipton, teleomorph ATCCl1064 ；ATCC10028a ；或者Cunninghamella elegans ATCC36112 ；ATCC26269 ；ATCC10028b ；黑曲霉 Aspergillusniger AS3.40;AS3.315;AS3.316;AS3.350;AS3.429;AS3.739;AS3.879;AS3.939;AS3.940;AS3.1858;AS3.2931 ;AS3.3882 ;AS3.3883 ;AS3.4303 ; AS3928 ; AS3.4304 ;AS3.4309; AS3.4463;AS3.4304;AS3.4523 ;黃曲霉、刺囊毛霉、細(xì)孢毛霉、鏈格孢、微紫青霉和蕁麻青霉。
4.如權(quán)利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，其特征在于:所述的聯(lián)合誘導(dǎo)子為下述三組物質(zhì)中的至少兩組中的任意一種物質(zhì)組成: A組:Al為α -環(huán)糊精，Α2為β -環(huán)糊精，A3為2，6_ 二甲基-β -環(huán)糊精，Α4為2-羥丙基-β -環(huán)糊精，Α5為甲基化-β -環(huán)糊精、Α6為羥乙基-β -環(huán)糊精，Α7為葡萄糖-β -環(huán)糊精，AS為磺丁基-β -環(huán)糊精，Α9為Y -環(huán)狀糊精，AlO為羧甲基-β -環(huán)糊精； B組:B1為茉莉酸甲酯，B2為水楊酸，B3為殼聚糖，B4為茉莉酸，B5為真菌聚糖類，B6為β -葡聚糖，Β7為谷胱甘肽，Β8為2-羥乙基茉莉，Β9為油菜素內(nèi)酯，BlO為云酯，Bll為甲殼素；Β12為小克銀漢霉屬AL4粗誘導(dǎo)子； C組:C1為卡馬西平，C2為莫達(dá)非尼，C3為奈韋拉平，C4為利福平，C5為貫葉連翹，C6為異煙肼，C7為胰島素，C8為奧美拉唑，C9為苯巴比妥，ClO為潑尼松，Cl I為潑尼松龍，C12為地塞米松，C13為倍他米松，C14為倍氯米松，C15為戊酸倍他米松，C16為醋酸地塞米松，C17為9-氟-16 α -甲基11 β，17- 二羥基_3_氧_1，4_雄二烯-17 β -羧酸。
5.如權(quán)利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，其特征在于:TLC控制收集主餾分，用體積比為70:12的氯仿和甲醇為展開劑； 所述產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18柱，其中分析柱內(nèi)徑乘以長度為4.6mmX 250mm,粒徑為5 μ m ;雷公藤紅素檢測波長:427nm，室溫；進(jìn)樣量:10yL ; 所述梯度洗脫法控制不同的雷公藤紅素衍生物的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，其中分析柱內(nèi)徑乘以長度為4.6_X250_，粒徑為5 μ m ;吸收波長:427nm ； 流動相:甲醇:0.1%磷酸水的體積比和洗脫時間分別如下:27:73、洗脫時間Omin ；5:95、洗脫時間20min ；17:83、洗脫時間25min ；27:73、洗脫時間28min，27:73、洗脫時間30min ；
上述對應(yīng)的 '流速為:0.5ml/min ；0.5ml/min ；lml/min ；lml/min ；0.5ml/min ;柱 I急:25°C、進(jìn)樣量:20 μ I。
6.如權(quán)利要求1~5任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物的制備方法，其特征在于: 所述方法可用于制備的雷公藤紅素衍生物如下:二氫雷公藤紅素，二氫扁塑藤素，二氫雷公藤酚Β6，二氫tingenine B4，二氫雷公藤酸A、二氫雷公藤酸C、二氫pristimerol、雷公藤紅素甲酯、雷公藤紅素乙酯、雷公藤紅素丙酯、雷公藤紅素丁酯、雷公藤紅素卞酯、14N-甲基-哌嗪酸-雷公藤紅素酯、3-乙基雷公藤紅素、3- 丁基雷公藤紅素、3-丙基雷公藤紅素、3-異丁基雷公藤紅素、3-川芎嗪酸雷公藤紅素、28-川芎嗪酸雷公藤紅素、a-硫辛酸雷公藤紅素酯、2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素甲酯，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素丁酯，2，3，7羥基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2-羥基-3乙?；?6磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6磺胺-雷公藤紅素甲酯、28- (4’ -甲氧基)-芐基酰胺雷公藤紅素，28-芐基酰胺雷公藤紅素，28- (3’_吡啶)甲酰胺基雷公藤紅素，28-異丙基酰胺雷公藤紅素、28- (N-甲基)-甲酰胺雷公藤紅素，28-吡咯烷酰胺雷公藤紅素、28-甲氧基乙基酰胺雷公藤紅素、28-嗎啉酰胺雷公藤紅素、28-N-甲基酰胺雷公藤紅素、雷公藤紅素28-N-甲基哌嗪酰胺、雷公藤紅素苯甲酸酯、雷公藤紅素異丙酯等雷公藤紅素衍生物。
7.—種雷公藤紅素衍生物，所述雷公藤紅素衍生物是利用權(quán)利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的制備方法制得，其特征在于:所述雷公藤紅素衍生物的結(jié)構(gòu)式a如下:
8.如權(quán)利要求7所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特征在于: 當(dāng)R1是甲基時，基團X1和X2中一個為羥基，一個為氫，或者均為羥基； 當(dāng)R1是羥甲基時，基團X1和X2 —個為羥基，一個為氫，或者均為羥基； 當(dāng)R1是羧基時，基團X1和X2均為羥基，或者均為氫。
9.如權(quán)利要求7所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特征在于: 所述雷公藤紅素衍生物具體為:6_羥基雷公藤紅素、7-羥基雷公藤紅素、6，7- 二羥基雷公藤紅素、23-羥基雷公藤紅素、6，23-雙羥基雷公藤紅素、7，23-雙羥基雷公藤紅素、6，7，23-三羥基雷公藤紅素、6，7- 二羥基-23-羧基-雷公藤紅素、23-羧基雷公藤紅素。
10.如權(quán)利要求7~9任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用于治療與腫瘤相關(guān)的疾病，包括肺癌、肝癌、前列腺癌、人卵巢癌、腺癌、乳腺癌、粒細(xì)胞白血病、結(jié)腸癌、阿霉素敏感的肺癌、乳腺癌、肝癌、阿霉素抗藥的肺癌、乳腺癌、肝癌等腫瘤系統(tǒng)疾病。
11.如權(quán)利要求7~9任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用于治療與病毒相關(guān)的疾病，包括艾滋病、乙肝、皰疹、流感病毒。
12.如權(quán)利要求7~9任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用于治療與神經(jīng)損傷相關(guān)的疾病，包括阿爾茲海默病、帕金森病、亨延頓氏退行性疾病和脊髓損傷和肌萎縮性側(cè)索硬化疾病。
13.—種雷公藤紅素衍生物，所述雷公藤紅素衍生物是利用權(quán)利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的制備方法制得，其特征在于:所述雷公藤紅素衍生物的結(jié)構(gòu)式b如下:
14.如權(quán)利要求13所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特征在于:當(dāng)R/是氫時，基團X/和X2'中，一個為羥基，一個為氫；或基團X/和X2'均為羥基；當(dāng)R/是羥基時，基團X/和中，一個為羥基，一個為氫；或基團X/和均為氫。
15.如權(quán)利要求13所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特征在于:所述雷公藤紅素衍生物具體為:6_氫-7-羥基雷公藤紅素、6-氫-23-羥基雷公藤紅素、6-氫-7，23- 二羥基雷公藤紅素、6-氫-6, 7- 二羥基雷公藤紅素、6, 7,8-三氫-6, 7- 二羥基雷公藤紅素、6-氫-6,23-二羥基雷公藤紅素。
16.如權(quán)利要求13~15任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用于治療與腫瘤相關(guān)的疾病，包括肺癌、肝癌、前列腺癌、人卵巢癌、腺癌、乳腺癌、粒細(xì)胞白血病、結(jié)腸癌、阿霉素敏感的肺癌、乳腺癌、肝癌、阿霉素抗藥的肺癌、乳腺癌、肝癌等腫瘤系統(tǒng)疾病。
17.如權(quán)利要求13~15任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用于治療與病毒相關(guān)的疾病，包括艾滋病、乙肝、皰疹、流感病毒。
18.如權(quán)利要求13~15任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用于治療與神經(jīng)損傷相關(guān)的疾病，包括阿爾茲海默病、帕金森病、亨延頓氏退行性疾病和脊髓損傷和肌萎縮性側(cè)索硬化疾 病。
【文檔編號】A61P25/14GK103642887SQ201310597162
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月21日
【發(fā)明者】張景紅, 謝深霞, 葉龍飛 申請人:華僑大學(xué)