抗輻射和輔助抗腫瘤藥物及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗輻射和輔助抗腫瘤藥物及應(yīng)用，是由從天然植物人參、香菇和松茸中通過水提醇沉法提取獲得的人參多糖、香菇多糖和松茸多糖作為活性成分以1:1:1質(zhì)量比混合制得。以該活性成分輔以任何藥學(xué)上可接受的載體或輔料制成任何一種常規(guī)的口服劑型，如片劑、口服液、膠囊等。本發(fā)明藥物具有提高機(jī)體免疫功能、輔助抗腫瘤和抗輻射作用，與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用的抗腫瘤療效明顯優(yōu)于單獨(dú)使用化療藥物，并且能夠治療化學(xué)治療引起的機(jī)體損傷，能清除體內(nèi)自由基，保護(hù)造血功能，適用于預(yù)防和治療輻射引起的機(jī)體損傷。
【專利說明】抗輻射和輔助抗腫瘤藥物及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種由天然植物提取物作為活性成分的抗輻射和輔助抗腫瘤藥物，特別是一種能輔助抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、對輻射危害有保護(hù)功能的多糖合劑。
【背景技術(shù)】:
[0002]惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，在我國，近20年來腫瘤死亡率上升近3成，已成為死亡率最高的疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，隨著世界人口日趨老齡化，預(yù)計全世界癌癥死亡人數(shù)將繼續(xù)上升，到2030年可能將超過1310萬。由于惡性腫瘤發(fā)病原因不明，目前尚無有效的預(yù)防辦法，加之環(huán)境惡化，人群壽命延長，惡性腫瘤的發(fā)病率居高不下。惡性腫瘤的治療目前仍以手術(shù)治療、放療、化療為主要方法。然而放射治療和化學(xué)治療存在著特異性較差，且能夠?qū)C(jī)體免疫功能造成損傷的弊端。因此研制出毒性低、療效好的抗癌活性成分且可提高腫瘤患者免疫功能，尤其是提高患者的細(xì)胞免疫功能，進(jìn)而減輕放、化療的毒副作用的制劑，對于預(yù)防腫瘤的發(fā)生，提高腫瘤的治療效果具有重要意義。
[0003]多糖廣泛存在于動物、植物及微生物的細(xì)胞壁中，是由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接在一起的天然大分子物質(zhì)，是所有生命有機(jī)體的重要組成成分，并與維持生命所必須的多種功能有關(guān)。大量的研究表明，植物多糖具有抗腫瘤作用，這些多糖在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時，對正常的動物細(xì)胞幾乎沒有殺傷作用。故多糖已成為當(dāng)今抗腫瘤新藥發(fā)展的主要方向之一。香菇多糖是典型的T淋巴細(xì)胞激活劑，體內(nèi)外均能增強(qiáng)正?；蛎庖吖δ艿拖滦∈蟮倪t發(fā)型超敏反應(yīng)、促進(jìn)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生、提高CTL的殺傷活力。同時，香菇多糖還能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種具有免疫活性的細(xì)胞因子，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，促進(jìn)抗體生成，使巨噬細(xì)胞溶酶體酶和IL-1分泌量增加，從而起到對腫瘤細(xì)胞的防御與殺傷作用。人參多糖能誘生內(nèi)源性腫瘤壞死因子，增強(qiáng)NK細(xì)胞和CTL細(xì)胞的活性，對正常小鼠及荷瘤小鼠機(jī)體免疫功能有增強(qiáng)和激活作用，減輕腫瘤放化療引起的副作用。松茸多糖生物活性國內(nèi)外雖有報道，但都未進(jìn)行系統(tǒng)的分析研究。本課題組的前期動物實驗研究結(jié)果顯示松茸多糖對輻射所致的小鼠免疫功能損傷有明顯的保護(hù)作用。由于不同的多糖通過不同的機(jī)制提高機(jī)體的抗腫瘤作用，為此我們提出這樣的假設(shè)，把不同的多糖按一定的比例配制成混合物，進(jìn)入機(jī)體后將通過不同的途徑提高機(jī)體的抗腫瘤和抗輻射作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種能輔助抗腫瘤、抗輻射和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能且無毒副作用的抗輻射和輔助抗腫瘤藥物。
[0005]人參(Panax ginseng)為五加科多年生宿根性草本植物,具有抗炎癥、抗應(yīng)激、福射防護(hù)、抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)和抗衰老等作用。香燕(lentinus edodes),亦稱香蕈、冬燕、花燕等，屬擔(dān)子菌綱傘菌科，是食用菌兼藥用菌之一，具有高蛋白、低脂肪、多糖、多種氨基酸和多種維生素特性。松鸞(Tricholoma matsutake)在真菌分類系統(tǒng)中隸屬于擔(dān)子菌門，口蘑屬，屬藥食兩用植物，味道鮮美獨(dú)特，富含多種氨基酸、維生素、微量元素和多糖，營養(yǎng)價值豐富，已有研究表明松茸具有免疫增強(qiáng)活性及較強(qiáng)的抗輻射活性。
[0006]本發(fā)明人通過大量實驗研究發(fā)現(xiàn)，人參中的人參多糖能誘生內(nèi)源性腫瘤壞死因子(TNF)，對腫瘤細(xì)胞有殺傷和抑制作用，對正常小鼠及荷瘤小鼠機(jī)體免疫功能有增強(qiáng)和激活作用，減輕腫瘤放化療引起的副作用。香菇中的香菇多糖進(jìn)入機(jī)體后誘導(dǎo)產(chǎn)生一種具有免疫活性的細(xì)胞因子，在這些細(xì)胞因子的綜合作用下，機(jī)體免疫系統(tǒng)功能增強(qiáng)，能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞起防御與殺傷作用。松茸中的松茸多糖對輻射所致的小鼠免疫功能損傷有明顯的保護(hù)作用。據(jù)此，提出本發(fā)明抗輻射和輔助抗腫瘤藥物。
[0007]本發(fā)明抗輻射和輔助抗腫瘤藥物，由從天然植物人參、香菇和松茸中通過水提醇沉法提取獲得的人參多糖、香菇多糖和松茸多糖作為活性成分以1:1:1質(zhì)量比混合制得。
[0008]以該活性成分輔以任何藥學(xué)上可接受的載體或輔料制成任何一種常規(guī)的口服劑型，如片劑、口服液、膠囊等。
[0009]本發(fā)明藥物具有提高機(jī)體免疫功能、輔助抗腫瘤和抗輻射作用，與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用的抗腫瘤療效明顯優(yōu)于單獨(dú)使用化療藥物，并且能夠治療化學(xué)治療引起的機(jī)體損傷，能清除體內(nèi)自由基，保護(hù)造血功能，適用于預(yù)防和治療輻射引起的機(jī)體損傷。
[0010]本發(fā)明藥物的藥效學(xué)試驗如下:
[0011]一、體外抗腫瘤作用藥效學(xué)實驗
[0012](一)受試藥物對CTL殺傷活性的影響
[0013]1.實驗材料
[0014]RPM1-1640培養(yǎng)液、小牛血清、胰蛋白酶、LDH試劑盒、P815細(xì)胞等。
`[0015]2.實驗步驟
[0016]無菌取出小鼠脾臟，將其磨碎，過200目細(xì)胞篩，加入氯化氨裂解紅細(xì)胞后，加入PBS洗三遍，離心棄上清。加入含10%FBS的RPM1-1640培養(yǎng)基制備脾淋巴細(xì)胞懸液，分別將低(Low dose, 300 μ g/ml )、中(Medium dose, 600 μ g/ml )、高(High dose, 1200 μ g/ml)三個劑量的藥物與淋巴細(xì)胞共同孵育24h，并設(shè)立空白對照組(Control)，用培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度1父107(^118/1111，將脾細(xì)胞懸液加入96孔板中，10(^1/孔。以小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞(P815)作為檢測T細(xì)胞毒活性的靶細(xì)胞，按照效靶比20:1加入96孔板，同時設(shè)靶細(xì)胞自然釋放孔和最大釋放孔，于C02培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)24h后，收集細(xì)胞上清液，加入LDH試劑，待反應(yīng)完全后，檢測490nm處的光吸收值。使用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理。
[0017]細(xì)胞毒活性(%) = [(實驗釋放孔-自發(fā)釋放孔)/(最大釋放孔-自發(fā)釋放孔)]X100
[0018]3.實驗結(jié)果
[0019]受試物對CTL殺傷活性的影響實驗結(jié)果詳見圖1。圖中所示，*表示與Control組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與Medium dose組相比，P〈0.05，有顯著性差異。與Control組相比，低劑量、中劑量和高劑量藥物均能夠顯著增強(qiáng)CTL的殺傷活性(P〈0.05)，中劑量藥物組的CTL的殺傷活性顯著高于低劑量和高劑量組(P〈0.05)，因此以中劑量藥物組的效果最明顯。
[0020](二)受試藥物對NK殺傷活性的影響
[0021]1.實驗材料
[0022]RPM1-1640培養(yǎng)液、小牛血清、胰蛋白酶、LDH試劑盒、YAC-1細(xì)胞等。[0023]2.實驗步驟
[0024]祀細(xì)胞為小鼠淋巴瘤細(xì)胞株(YAC-1),其余步驟同(一)。
[0025]3.實驗結(jié)果
[0026]受試物對對NK殺傷活性的影響實驗結(jié)果詳見圖2。圖中所示，*表示與Control組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與Medium dose組相比，P〈0.05，有顯著性差異。與ContiOl組相比，低劑量、中劑量和高劑量藥物均能夠顯著增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性(P〈0.05)，中劑量藥物組的NK細(xì)胞的殺傷活性顯著高于低劑量和高劑量組(P〈0.05)，因此以中劑量藥物組的效果最明顯。 [0027]二、體內(nèi)抗腫瘤作用藥效學(xué)實驗
[0028](一)受試物對荷瘤小鼠的抑瘤作用
[0029]1.實驗材料
[0030]ICR小鼠，H22細(xì)胞，RPM1-1640培養(yǎng)液，小牛血清，胰蛋白酶等。
[0031]2.實驗步驟
[0032]清潔級ICR小鼠，雌雄各半，購于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部動物中心，20±2g，40只，將H22瘤細(xì)胞懸液接種于小鼠背部皮下，1.5X105H22cells/只，將小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，即腫瘤模型對照組(mode I)、化療藥組(FU )、藥物組(PM)、藥物+化療藥組(PM+FU );腫瘤細(xì)胞移植后24h，分別給予不同的處理因素，化療藥通過腹腔注射給藥(30mg/kg)，藥物通過灌胃的方式給藥。20天后，眼球取血，脫白處死小鼠，取出腫瘤，稱重并測量其體積，取脾組織用于后續(xù)免疫功能的檢測實驗。使用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理。
[0033]3.實驗結(jié)果
[0034]受試物對荷瘤小鼠的抑瘤作用實驗結(jié)果詳見圖3。圖中所示，*表示與model組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與PM組相比，P〈0.05，有顯著性差異；+表示與FU組相t匕，P〈0.05，有顯著性差異。與model組相比，PM組、FU組和FU+PM組腫瘤重量和體積顯著減少(Ρ〈0.05)，F(xiàn)U+PM組的抑瘤效果明顯優(yōu)于PM組和FU組(Ρ〈0.05)。
[0035](二)受試物對荷瘤小鼠的免疫功能的影響
[0036]1.實驗材料
[0037]RPM1-1640培養(yǎng)液、小牛血清、胰蛋白酶、LDH試劑盒、Ρ815細(xì)胞、YAC-1細(xì)胞等。
[0038]2.實驗步驟
[0039](I)受試藥物對CTL殺傷活性的影響:實驗步驟同“一、(一)”。
[0040](2)受試藥物對NK殺傷活性的影響:實驗步驟同“一、(一)”。
[0041]3.實驗結(jié)果
[0042](I)受試藥物對CTL殺傷活性的影響實驗結(jié)果見圖4。圖中所示，*表示與model組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與PM組相比，P〈0.05，有顯著性差異；+表示與FU組相比，P〈0.05，有顯著性差異。與model組相比，PM組和FU+PM組的CTL殺傷活性顯著升高(P〈0.05), FU組CTL殺傷活性顯著降低(P〈0.05)。PM能夠顯著增強(qiáng)CTL殺傷活性。
[0043](2)受試藥物對NK殺傷活性的影響實驗結(jié)果見圖5。圖中所示,*表示與model組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與PM組相比，P〈0.05，有顯著性差異；+表示與FU組相t匕，P〈0.05，有顯著性差異。與model組相比，PM組和FU+PM組的NK細(xì)胞殺傷活性顯著升高(P〈0.05)，F(xiàn)U組NK細(xì)胞殺傷活性顯著降低(P〈0.05)。PM能夠顯著增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性。
[0044](三)受試物對荷瘤小鼠的免疫功能相關(guān)細(xì)胞因子活性的影響
[0045]1.實驗材料
[0046]TNF- a ELISA 試劑盒、IL-2ELISA 試劑盒、IL-4ELISA 試劑盒和 IFN- y ELISA 試劑盒等
[0047]2.實驗步驟
[0048]將小鼠眼球取血，離心，獲得血清。測定血清中的TNF- a，IL_2，IL_4和IFN- Y水平。使用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理。
[0049]3.實驗結(jié)果
[0050](I)受試物對荷瘤小鼠血清中TNF-α水平的影響實驗結(jié)果見圖6。圖中所示，*表示與model組相比，Ρ〈0.05，有顯著性差異；#表示與PM組相比，Ρ〈0.05，有顯著性差異；+表示與FU組相比，Ρ〈0.05，有顯著性差異。與model組相比，PM組和FU+PM組血清中TNF-α水平顯著升高(Ρ〈0.05)，F(xiàn)U組TNF-α水平顯著降低(Ρ〈0.05)。PM能夠顯著提高荷瘤小鼠體內(nèi)的TNF-α水平。
[0051](2)受試物對荷瘤小鼠血清中IL-2水平的影響驗結(jié)果見圖7。圖中所示，*表示與model組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與PM組相比，P〈0.05，有顯著性差異；+表示與FU組相比，P〈0.05，有顯著性差異。與model組相比，PM組和FU+PM組血清中IL-2水平顯著升高(P〈0.05)，F(xiàn)U組IL-2水平顯著降低(P〈0.05)。PM能夠顯著提高荷瘤小鼠體內(nèi)的IL-2水平。
[0052](3)受試物對荷瘤小鼠血清中IL-4水平的影響驗結(jié)果見圖8。圖中所示，*表示與model組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與PM組相比，P〈0.05，有顯著性差異；+表示與FU組相比，P〈0.05，有顯著性差異。與model組相比，PM組和FU+PM組血清中IL-4水平顯著降低(P〈0.05)，F(xiàn)U組IL-4水平顯著升高(P〈0.05)。PM能夠顯著降低荷瘤小鼠體內(nèi)的IL-4水平。
[0053](4)受試物對荷瘤小鼠血清中IFN-Y水平的影響驗結(jié)果見圖9。圖中所示，*表示與model組相比，P〈0.05，有顯著性差異；#表示與PM組相比，P〈0.05，有顯著性差異；+表示與FU組相比，P〈0.05，有顯著性差異。與model組相比，PM組和FU+PM組血清中IFN- Y水平顯著升高(P〈0.05)，F(xiàn)U組IFN-Y水平顯著降低(P〈0.05)。PM能夠顯著提高荷瘤小鼠體內(nèi)的IFN-Y水平。
[0054]三、體內(nèi)抗輻射作用藥效學(xué)實驗
[0055](一)受試藥物對Y射線照射小鼠氧化功能的保護(hù)作用
[0056]1.實驗材料
[0057]MDA、SOD 和 CAT 試劑盒，ICR 小鼠。
[0058]2.實驗步驟
[0059]清潔級ICR小鼠，雌雄各半，購于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部動物中心，20±2g，150只，隨機(jī)分為正常對照組(NC)、輻射對照組(IC)和藥物低劑量組(600mg/kg)、中劑量組(1200mg/kg)、高劑量組(2400mg/kg)三個受試藥物組，每日灌胃給藥；正常對照組和輻射對照組給予等量的生理鹽水，連續(xù)給藥14天，第15天除正常對照組外均接受4Gy劑量的、射線照射，于照射后第1、3、7天每組各取10只，共50只，眼球取血，離心，獲得血清。測定血清中的MDA、SOD和CAT水平。使用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理。
[0060]3.實驗結(jié)果
[0061]受試物對Y射線照射小鼠氧化功能的保護(hù)作用實驗結(jié)果詳見表1至表3。
[0062]表1-3中所示，*表示與正常對照組相比，Ρ〈0.05，有顯著性差異;#表示與輻射對照組相比，Ρ〈0.05，有顯著性差異。
[0063]表1說明，接受Y射線照射后第1、3天，與正常對照組相比，輻射對照組和三個劑量藥物治療組的MDA水平均顯著升高(Ρ〈0.05)，且照射對照組的MDA水平顯著高于各個劑量的藥物治療組(Ρ〈0.05)。接受Y射線照射后第7天，與正常對照組相比，輻射對照組和低劑量藥物治療組的MDA水平均顯著升高(Ρ〈0.05)，中劑量和高劑量藥物治療組無顯著性差異(PM).05)。
[0064]表2說明，接受Y射線照射后第1、3、7天，與正常對照組相比，輻射對照組和三個劑量藥物治療組的SOD水平均顯著降低(Ρ〈0.05)，且照射對照組的SOD水平顯著低于各個劑量的藥物治療組(Ρ〈0.05)。
[0065]表3說明，接受Y射線照射后第1、3天，與正常對照組相比，輻射對照組和三個劑量藥物治療組的CAT水平均顯著降低(Ρ〈0.05)，且照射對照組的CAT水平顯著低于各個劑量的藥物治療組(Ρ〈0.05)。接受Y射線照射后第7天，與正常對照組相比，輻射對照組和低劑量藥物治療組的CAT水平均顯著降低(Ρ〈0.05)，中劑量和高劑量藥物治療組無顯著性差異(PM).05)。
[0066]表1.受試藥物對Y射線照射小鼠血清中MDA水平的影響(? 土 s，nmol/mL)
[0067]
【權(quán)利要求】
1.一種抗輻射和輔助抗腫瘤藥物，其特征在于，由從天然植物人參、香菇和松茸中通過水提醇沉法提取獲得的人參多糖、香菇多糖和松茸多糖作為活性成分以1:1:1質(zhì)量比混合制得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗輻射和輔助抗腫瘤藥物，其特征在于輔以任何藥學(xué)上可接受的載體或輔料制成任何一種常規(guī)的口服劑型。
3.權(quán)利要求1所述的抗輻射和輔助抗腫瘤藥物在制備具有能輔助抗腫瘤、抗輻射和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功 能藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P37/02GK103599125SQ201310600627
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月22日
【發(fā)明者】李娟 , 任明, 葉伶艷, 徐坤, 齊燕飛, 曲笑峰, 佟瑤, 呂琳 申請人:吉林大學(xué)