利用發(fā)光二極管和超聲波刺激蜂群提高蜂毒采集量的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用發(fā)光二極管和超聲波刺激蜂群提高蜂毒采集量的方法。具體而言，該方法涉及對野生或養(yǎng)殖的膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲分泌的生物毒素之取毒技術(shù)，在對蜂類昆蟲取毒時，使用安裝在取毒器側(cè)邊及底部的發(fā)光二極管LED燈，通過變換LED燈光閃爍刺激待取毒蜂群攻擊；同時，使用安裝在取毒器上的超聲波發(fā)生器發(fā)出能刺激該蜂群發(fā)怒的超聲波，再將取毒器通電，打開待取毒蜂巢，該昆蟲群在雙重強效刺激下攻擊次數(shù)、力度及排毒量均增加；用該雙重刺激采毒法比常規(guī)法的蜂毒采集量提高21%～34%。本關(guān)鍵技術(shù)能解決包括蜜蜂和胡蜂總科在內(nèi)的蜂類昆蟲蜂毒采集的瓶頸問題，具有顯著的經(jīng)濟價值，可滿足市場短缺和采毒創(chuàng)新技術(shù)的不足。
【專利說明】利用發(fā)光二極管和超聲波刺激蜂群提高蜂毒采集量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，本發(fā)明涉及一種利用發(fā)光二極管LED燈和超聲波雙重剌激待取毒昆蟲提高其生物毒素釆集量的方法。在對野生或養(yǎng)殖的膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲的蜂群取毒時，使用安裝在取毒器側(cè)邊及玻璃底部的LED燈，通過變換LED燈光閃爍剌激待取毒蜂群攻擊；同時，使用安裝在取毒器上的超聲波發(fā)生器發(fā)出能剌激該蜂群發(fā)怒的超聲波，再將取毒器通電，打開蜂巢，待取毒蜂群在雙重強效剌激下攻擊次數(shù)、力度及排毒量均增加；用該雙重剌激釆毒法比常規(guī)法釆集到的蜂毒量提高了21%~34%。該方法可用于膜翅目細腰亞目針尾部蜜蜂總科和胡蜂總科中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科等資源昆蟲毒素的釆集。
【背景技術(shù)】
[0002]膜翅目(Hymenoptera)，細腰亞目(Apocrita)，針尾部(Aculeata)蜂類昆蟲有胡蜂總科(Vespoidea)、泥蜂總科(Sphecoidea)和蜜蜂總科(Apoidea)等3個總科，該類昆蟲的職蜂大都帶有毒囊與螯針，能分泌富含生物活性的蜂毒類生物毒素。
[0003]蜂毒是具有高度生物學活性和藥理學活性的復雜混合物。胡蜂毒不僅具有過敏性，且可以造成血纖維蛋白溶解作用、對骨骼肌的破壞、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和視覺障礙引發(fā)的過敏性休克等(Lombardini，C 等，Am J Emerg Med，2009，153:131-135 ;Patriarca，G等，Intl J Immunopathol Pharmacol，2008，21:669-677 ;Schultze_Werninghaus，C 等，Pediatr Allergy Immunol， 1999， 10:133-137 ;Puchalska_Niedbal，L 等，Ann Acad MedStetin，2007，53Suppl 1:90-93 ;Rocha，T 等，Toxicon, 2007，50:589-599)；胡蜂毒還顯示對心血管活性，以及降壓、抗菌、抑制乙酰膽堿酯酶等許多有前景的生理活性(Rubin，Y等，Cardiovascular haemodynamics of oriental hornet venom sac extract, PharmacolToxicol， 1993，72:268-27`2 ;Ho，CL 等，Structures and biological activities of newwasp venom peptides isolated feom the black-bellied hornet (Vespa basalis)venom，Toxicon， 1998，36:609-617 ;Konno，K 等，Molecular determinants of bindingof a wasp toxin (PMTXs) and its analogs in the Na+channels proteins, NeurosciLett，2000，285:29-32 ;Ho，CL 等，Enhancing the hypotensive effect and diminishingthe cytolytic activity of hornet mastoparan B by D—amino acid substitution，Toxicon, 2001，39:1561-1566 ;Dami，MP 等，Antibacterial and proteolyticactivity in venom from the endoparasitic wasp Pimpla hypochondriaca(Hymenoptera:1chneumonidae), J Insect Physiol，2003，49:945-954 ;Wang，幾等，Isolatedprolongation of activated partial thromboplastin time following wasp sting, ActaPaediatr Taiwan，2005，46:164-165 ;Abt，M 等，Characterization of phenoloxidaseactivity in venom from the ectoparasitoid Nasonia vitripennis(Walker)(Hymenoptera:Pteromalidae).J Invertebr Pathol, 2007，94:108-118 ;Polsinelli，GA等，Insect-specific irreversible inhibitors of acetylcholineesterase inpests including the bed bug,the eastern yellowjacket, German and Americancockroaches, and the confused flour beetle, Chem Biol Interact, 2010，187:142-147 ；Ye, J 等，A defensin antimicrobial peptide from the venoms of Nasonia vitripennis, Toxicon, 2010, 56:101-106)。
[0004]胡蜂是膜翅目細腰亞目針尾部胡蜂總科昆蟲的總稱，世界上已知有5000多種，中國記載的有200余種，我國南部分布著大量的胡蜂種群。胡蜂毒在國際市場上的售價居高不下，國外基本壟斷了其研究和關(guān)鍵技術(shù)。開發(fā)蜂毒系列產(chǎn)品，對于我國戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，以及增進山區(qū)養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟收入、脫貧都具有重要意義。廣闊的醫(yī)藥前景也給蜂毒采集工作者帶來了機遇和挑戰(zhàn)。如何采取得到大量的、質(zhì)量可控的胡蜂蜂毒是擺在我國科研工作者面前的關(guān)鍵技術(shù)之瓶頸。我國目前常見的采取蜂毒的模式是:用捕捉到的職蜂取毒囊分離出蜂毒；或者用電脈沖法刺激職蜂用尾針蟄刺取毒器上的玻璃板，將蜂毒留在取毒器玻璃板上，再予以收集。
[0005]蜜蜂是膜翅目細腰亞目針尾部蜜蜂總昆蟲的通稱，全世界已知約1.5萬種，中國已知約1000種。中華蜜蜂(中蜂)、意大利蜂(意蜂)、東北黑蜂、伊犁黑蜂、卡尼鄂拉蜂、高加索蜂等幾種蜜蜂為重要的資源昆蟲。蜜蜂蜂毒中含有蜂毒肽、蜂毒明肽、肥大細胞脫顆粒肽、心臟肽等，對神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)等分別發(fā)揮不同的藥理作用，有很大的醫(yī)藥價值。2013年3月美國華盛頓大學公開了蜜蜂蜂毒能夠殺死HIV病毒而不傷害正常組織細胞，更是強化了蜂毒類生物活性物質(zhì)對于未來解除疾病折磨的可能性。然而，我國相關(guān)蜂毒采集工作仍是使用上述常規(guī)的電動脈沖采毒器，蜂群由于受到的刺激信息不足，攻擊意愿并不強烈，造成采毒效率不能達到最高水平。由是觀之，隨著蜂毒類生物毒素的生物醫(yī)藥用途日益增多，對蜂毒的需求將會幾何級別的增長，因而，走在世界前面，率先在我國進一步加強蜂毒采集的技術(shù)攻關(guān)是十分必要的 。
[0006]從我國專利技術(shù)發(fā)展的歷史看，李光宏和黃世梅在1986年申請了實用新型專利《封閉式蜜蜂蜂毒采集器》(CN85203663U) ；1989年李鐵生和郭凡修共同申請了實用新型專利《電動閃光型胡蜂蜂毒自動采集器》(CN2037925U);其中描述了使用紅白光束誘使胡蜂排毒的一種儀器。1994年徐文龍等申報的實用新型專利《繼箱型蜂毒采集器》(CN2168397Y)，其原理也是基于通過電流使蜜蜂進入尺寸形狀與蜂箱之繼箱一致的采毒箱進行毒液收集。2000年張金華設(shè)計的實用新型《速凍式蜂毒原液采集器》(CN2391418Y)，其特色是采用液氮冷凍室避免了采集過程中蜂毒的揮發(fā)。2006年，楊雷等公開了一種《自動采集蜂毒的方法及裝置》(CN1714631A)，描述了由電源、自動控制器、收集器組成的采集蜂毒的裝置；2007年，張文禮等設(shè)計并申請了實用新型專利《副蓋式蜜蜂電子取毒器》(CN2927685Y):主要是發(fā)明了將取毒板面向下朝向蜂箱，避免了空氣中塵埃和雜質(zhì)落在采毒的面板上，保證了蜂毒的純度。
[0007]但是，上述方法都無法解決胡蜂蜂毒采毒過程中遭遇到的無法控制胡蜂群攻擊的強烈程度，取毒量小，浪費大，毒素采集成本居高不下等問題。再者，已公開的許多方法都是僅適用于蜜蜂(尤其是中華蜜蜂和意大利蜜蜂)毒素的采集，而對攻擊性較強的胡蜂總科的蜂群采毒并不適用。如何發(fā)明一種有效的采集蜂毒的創(chuàng)新性關(guān)鍵技術(shù)，使之既可以用于提高蜜蜂蜂毒的采集量；又能夠有效解決并提高價值較高的胡蜂蜂毒采集量，使采集或者養(yǎng)殖一窩胡蜂可以得到更多的蜂毒量，擴大農(nóng)村山區(qū)養(yǎng)殖戶的單產(chǎn)量及收入，增加山區(qū)貧困養(yǎng)殖戶的脫貧數(shù)量，已有的報道及經(jīng)驗尚十分缺乏。而市場是急需一批創(chuàng)新性的養(yǎng)殖和采集蜂毒技術(shù)的集成及綜合應(yīng)用的。
[0008]因此，如何巧妙地應(yīng)用昆蟲生理學特性，結(jié)合現(xiàn)代視覺刺激技術(shù)、聲光電干擾生物習性技術(shù)、超聲波刺激蜂群排毒機能等生物學經(jīng)驗特征，結(jié)合利用常規(guī)的電脈沖取毒器手段，從蜂巢中的蜂群中發(fā)掘出新的足量的蜂毒量，是迫在眉睫的?；诖耍景l(fā)明人經(jīng)過長期艱苦而危險的實驗，進入了多批次的實驗，最終找出能夠決定強效刺激蜂群攻擊和排毒、使單位排毒量迅速有效增加的組合式關(guān)鍵技術(shù)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是提供一種在膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲的巢穴附近聯(lián)合使用發(fā)光二極管LED燈刺激誘捕及超聲波“雙重刺激”誘捕獲取該類昆蟲生物毒素的方法；該方法適用于獲取野生或養(yǎng)殖的膜翅目細腰亞目針尾部胡蜂總科、泥蜂總科、蜜蜂總科等蜂類昆蟲分泌的蜂毒；優(yōu)選用于獲取胡蜂和蜜蜂毒類活性物質(zhì)；更優(yōu)選蜜蜂總科的中蜂和意蜂，胡蜂總科中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科的蜂毒。
[0010]本發(fā)明的再一目的是提供了一種使用安裝在取毒器側(cè)邊及玻璃底部的LED燈，同時使用安裝在取毒器側(cè)邊及底部的超聲波發(fā)生器對蜂群雙重刺激配合脈沖電流采毒的一種關(guān)鍵技術(shù)裝置；該裝置可以在夜間或白天使用，優(yōu)選在夜間時增加蜂群攻擊取毒器的準確度。
[0011]本發(fā)明的又一目的是提供了一種從膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲中得到具有經(jīng)濟效益的蜂毒，作為制藥企業(yè)使用的原料藥物。
[0012]發(fā)明人長期觀察后發(fā)現(xiàn):一般來說，胡蜂蜂群對采毒器進行攻擊時，總有30-50%的職蜂不參與積極進攻采毒器的行動。造成攻擊和排毒總量偏小的事實。而提高對蜂群的刺激后，更多的胡蜂職蜂參與到攻擊和排毒進程中來，排毒量就增加。我們?yōu)榱藢ふ屹|(zhì)量更多的總蜂毒多肽類有效部位，嘗試應(yīng)用各種顏色對蜂群進行高強度的刺激，針對蜂群對閃爍的光刺激后產(chǎn)毒的量進行了統(tǒng)計和研究；發(fā)現(xiàn)了在固定其它采毒條件下，使用混合色的發(fā)光二極管閃爍發(fā)光，配合采毒器最能吸引蜂群的攻擊，尤其是夜晚更為奏效。其次，發(fā)明人團隊還發(fā)現(xiàn):使用一定頻率的超聲波作為外源聲音刺激源對蜂群持續(xù)刺激，可以發(fā)現(xiàn)蜂群對發(fā)出超聲波的取毒器比較敏感，易被激怒，誘發(fā)其攻擊力度和頻次，即攻擊取毒板強度增大。在使用同一蜂群、同一取毒器、同一取毒電壓、同一采毒操作員的情況下，用聯(lián)合使用LED燈刺激誘捕及超聲波刺激誘捕獲取胡蜂和蜜蜂蜂毒類活性物質(zhì)時(平行4次試驗)，能使蜜蜂毒采毒量提高22±5%、蜜蜂群攻擊單位時間的職蜂個數(shù)增加30±6%以上；在對胡蜂的實驗中，發(fā)現(xiàn)雙重刺激技術(shù)能使胡蜂職蜂攻擊取毒器次數(shù)平均增加了 29±7%、胡蜂蜂毒采集量比僅僅使用常規(guī)采毒器而不使用刺激因素者提高了 33±7% ;大大提高了蜜蜂和胡蜂職蜂對采集器的攻擊次數(shù)和排毒量，行之有效地刺激了更多的職蜂出巢攻擊取毒器，實現(xiàn)了每次取毒得到的蜜蜂或胡蜂毒素產(chǎn)率得到有效提高，且保證蜂毒質(zhì)量與無刺激源的原常規(guī)形式取毒器采取得到的蜂毒完全一樣。
[0013]本發(fā)明人首次創(chuàng)造性地將上述聲光電多重刺激蜜蜂、胡蜂群的生物物理技術(shù)有機地結(jié)合起來，作為采集蜜蜂和胡蜂蜂毒的關(guān)鍵技術(shù)，從而發(fā)明了創(chuàng)新性的“雙重刺激”技術(shù)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn):使用該“雙重刺激”采毒技術(shù)與僅用常規(guī)采毒器而未采用“雙重刺激”的采毒法相比，每次蜂毒采集量可以高出21%~34%。該取毒效果屬于意想不到的發(fā)現(xiàn)，且對胡蜂蜂群可持續(xù)采毒無影響。該關(guān)鍵技術(shù)對于貧困山區(qū)胡蜂養(yǎng)殖農(nóng)民有著顯著的經(jīng)濟效益和推廣應(yīng)用前景。本發(fā)明人經(jīng)查新發(fā)現(xiàn)，以往國內(nèi)外專利及文章專著中均無同時使用LED燈刺激誘捕及超聲波刺激誘捕對待采毒蜜蜂蜂群或者胡蜂蜂群進行“雙重刺激”、綜合作業(yè)的膜翅目昆蟲生物毒素采集方法的相關(guān)報道。該生理生物采毒技術(shù)具有確切的新穎性和創(chuàng)造性，從而構(gòu)成本發(fā)明。
[0014]本發(fā)明的關(guān)鍵技術(shù)及其有益之處在于:安裝在取毒器側(cè)邊及玻璃底部的LED燈和安裝在取毒器上的超聲波發(fā)生器簡單易行，但是非常有效。蜂群在雙重強效刺激下攻擊次數(shù)、力度及排毒量均增加；用該雙重刺激采毒法比常規(guī)法蜂毒采集量提高21%~34%?？捎糜谀こ崮考氀鼇喣酷樜膊康?個總科昆蟲，優(yōu)選用于蜜蜂總科和胡蜂總科Vespoidea中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科等昆蟲毒素的采集，具有顯著的經(jīng)濟價值，滿足市場的短缺和采毒創(chuàng)新技術(shù)的不足。夜晚和白天均可應(yīng)用本關(guān)鍵技術(shù)對蜂群進行蜂毒采集工作，晚上應(yīng)用效果更佳。本發(fā)明中的技術(shù)及方法使用的原料來源方便易得，制備步驟簡便，利于產(chǎn)業(yè)化。擴大了蜜蜂的用途，減少了秋冬季節(jié)花源不足時蜜蜂需要捕殺造成的損失。更為重要的是:對于開發(fā)市場廣大的生物毒素藥物提供了物質(zhì)基礎(chǔ)來源，以及提供了創(chuàng)新性地獲取蜂類昆蟲蜂毒的普適關(guān)鍵技術(shù)。通過規(guī)范化養(yǎng)殖胡蜂及采毒又能給連片特困地區(qū)的農(nóng)民增加收入、脫貧，具有顯著的巨大社會效益和經(jīng)濟效益。
具體實施方案
[0015]為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面分別用對胡蜂總科中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科的膜翅目昆蟲進行毒素采集的實驗結(jié)果，說明本發(fā)明中的 “雙重刺激”關(guān)鍵技術(shù)在生物毒素研發(fā)領(lǐng)域中的關(guān)鍵制備技術(shù)和功效。必須說明，本發(fā)明的實施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)對本發(fā)明進行的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
[0016]實施例1:胡蜂科金黃虎頭蜂Vespa mandarinia Smith的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗
[0017]1.1胡蜂科金黃虎頭蜂Vespa mandarinia Smith的常規(guī)米毒
[0018]1.1.1采集胡蜂毒地點:云南德宏州梁河縣境內(nèi)高山，海拔1382米，林中。蜂體標本據(jù)云南省大理學院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心毛本勇教授鑒定為Vespa mandarinia Smith (金環(huán)胡蜂，又名金黃虎頭蜂)。
[0019]1.1.2采集胡蜂毒裝置:使用經(jīng)過本工程研究中心改裝的副蓋式蜂毒采集器，木框，長80公分，寬50公分；內(nèi)嵌4片長20公分/寬33公分取毒玻璃；輸入電壓12V,輸出自動間歇脈動電壓。
[0020]1.1.3采集胡蜂毒方法:將采毒器置于蜂巢前，按照常規(guī)采毒規(guī)程，打開取毒器電源開關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引胡蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的胡蜂，收集玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。
[0021]1.1.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被胡蜂攻擊1320次；收集得到的胡蜂蜂毒為871毫克。[0022]1.2胡蜂科金黃虎頭蜂Vespa mandarinia Smith的“雙重刺激”技術(shù)采毒
[0023]1.2.1采集胡蜂毒地點:與本實施例1.1項下的蜂巢距離為1.8公里處，大小及生長狀態(tài)環(huán)境相似的一窩金黃虎頭蜂蜂體，蜂體標本據(jù)云南省大理學院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心毛本勇教授鑒定為Vespa mandarinia Smith (金環(huán)胡蜂,名金黃虎頭蜂)。
[0024]1.2.2采集胡蜂毒裝置:基本裝置同本實施例之1.1.2 ;使用本工程研究中心改裝的同一批次的副蓋式蜂毒采集器，木框，長80公分，寬50公分；內(nèi)嵌4片長20公分/寬33公分取毒玻璃；輸入電壓12V,輸出自動間歇脈動電壓；玻璃板下面加裝一層光電二極管燈泡承載層，使用鄭州恒光科技有限公司LED燈泡，以電線與蓄電池相連。將紅色、白色、橙色LED燈交叉排列；使用閃爍其控制器使各色燈泡以每10秒鐘交替閃爍6次為佳。木框四角以對角形式安裝蓄電池驅(qū)動的小型28千赫茲和40千赫茲的超聲波發(fā)生器各2臺(THD-2012Q小型超聲波發(fā)生器及5120型喇叭超聲波發(fā)生器組合)。
[0025]1.2.3采集胡蜂毒方法:在穿戴好防護設(shè)備后，將超聲波發(fā)生器打開，喇叭對準蜂巢所在位置；同時打開控制LED燈閃爍電源控制器，使安裝在采毒器玻璃板下方的紅色、白色、橙色LED燈依次閃亮，并反復循環(huán)閃爍。之后打開蜂巢口，吸引金黃虎頭蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，先關(guān)掉取毒器開關(guān)，再順次關(guān)閉超聲波發(fā)生器電源和LED燈電源；收集取毒玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。
[0026]1.2.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被胡蜂攻擊1587次；收集得到的胡蜂蜂毒為1210毫克。
[0027]1.3針對常規(guī)采毒法采毒的金黃虎頭蜂交叉使用“雙重刺激”法采毒驗證試驗
[0028]1.3.1采集胡蜂毒地點:本實施例1.1.1中所述采集地。同一窩胡蜂在前次按常規(guī)方法取毒后的第15天以“雙重`刺激”法再次進行采毒。
[0029]1.3.2采集胡蜂毒裝置:采集胡蜂毒裝置同本實施例之1.2.2。嚴格使用了與本實施例之1.2.2同一裝置、與本實施例1.1之同一操作者、與本實施例1.1之完全相同的米毒時間；使用本實施例之1.2.2中所述之玻璃板下面加裝一層光電二極管燈泡承載層，使用閃爍其控制器使紅色、白色、橙色LED燈各色燈泡以每10秒鐘交替閃爍6次。以對角形式安裝小型THD-2012Q小型超聲波發(fā)生器及5120型喇叭超聲波發(fā)生器組合各2臺(調(diào)超聲頻率為28千赫茲和40千赫茲)。
[0030]1.3.3采集胡蜂毒方法:同本實施例之1.2.3。將超聲波發(fā)生器打開，喇叭對準蜂巢所在位置；同時打開控制LED燈閃爍電源控制器，使安裝在采毒器玻璃板下方的紅色、白色、橙色LED燈依次閃亮，并反復循環(huán)閃爍，形成對蜂巢蜂群的強烈刺激信號。打開取毒器電源開關(guān)，之后打開蜂巢口，吸引金黃虎頭蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，先關(guān)掉取毒器開關(guān)，再順次關(guān)閉超聲波發(fā)生器電源和LED燈電源；收集取毒玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。采毒過程為與本實施例1.1和1.2為同一操作人員。
[0031]1.3.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被胡蜂攻擊1622次；收集得到的胡蜂蜂毒為1186毫克。
[0032]1.3.5結(jié)果說明:在本實施例1.1中采用常規(guī)取毒法取毒后的同一窩胡蜂，在換用“雙重刺激”關(guān)鍵技術(shù)進行高強度刺激后，排毒量比前一次(實施例1.1)取毒高出了 28.0% ；大大提高了排毒量。上述實驗結(jié)果說明，使用“雙重刺激”關(guān)鍵技術(shù)采集蜂毒對于胡蜂科昆蟲毒素的規(guī)模化量產(chǎn)具有較大的先進性和實用性。
[0033]1.4針對“雙重刺激”法采毒采毒的金黃虎頭蜂交叉使用常規(guī)采毒法驗證試驗
[0034]1.4.1采集胡蜂毒地點:實施例1.2.1中所述采集地。即離本實施例1.1.1距離為1.8公里處，大小及生長狀態(tài)環(huán)境相似的一窩金黃虎頭蜂。該窩胡蜂在本實施例1.2中實施“雙重刺激”技術(shù)采毒后15天，再次進行采毒實驗(唯一不同者為此次該窩胡蜂是通過使用本實施例1.1所述之常規(guī)采毒技術(shù)實施采毒的)。
[0035]1.4.2采集胡蜂毒裝置:采集胡蜂毒裝置同本實施例之1.1.2。使用經(jīng)過本工程研究中心改裝的副蓋式蜂毒采集器，木框，長80公分，寬50公分；內(nèi)嵌4片長20公分/寬33公分取毒玻璃；輸入電壓12V，輸出自動間歇脈動電壓；本實驗嚴格使用了與本實施例之
1.1.2同一裝置、1.2同一操作者、1.2完全相同的米毒時間。
[0036]1.4.3采集蜂毒方法:同本實施例之1.1.3。將同一取毒器(未經(jīng)涂裝的采毒器)置于蜂巢前，然后用1.2.2所述之同一方法(按照常規(guī)采毒規(guī)程，對該巢蜂群職蜂采毒30分鐘)，打開取毒器電源開關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引胡蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的胡蜂，收集玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。采毒過程為與本實施例1.1和1.2為同一操作人員。
[0037]1.4.4結(jié)果分析:本次采集，經(jīng)高速攝影錄像分析，取毒板共被胡蜂攻擊1207次；收集得到的胡蜂蜂毒為803毫克。
[0038]1.4.5結(jié)果說明:在本實施例1.2中采用常規(guī)取毒法取毒后的同一窩胡蜂，在換用常規(guī)采毒方法后，排毒量比第一次實施“雙重刺激”技術(shù)時(實施例1.2)獲取蜂毒量降低了33.7% ;胡蜂攻擊次數(shù)減少了 23.9%。差別顯著。
[0039]1.5重復試驗:
[0040]1.5.1實驗內(nèi)容:在接下來的2個月內(nèi)，每隔15天對上述2窩金黃虎頭蜂各進行一次取毒實驗；統(tǒng)計胡蜂攻擊次數(shù)和采毒量的變化，檢驗“雙重刺激”技術(shù)對于金黃虎頭蜂取毒與常規(guī)取毒法的效果之差別。
[0041]1.5.2實驗結(jié)果與說明:4次取毒比較的結(jié)果是:使用“雙重刺激”技術(shù)作為單一變量，對于金黃虎頭蜂的取毒量比常規(guī)取毒法高出33±9% ;胡蜂攻擊次數(shù)比常規(guī)采毒法高出22±8%。具有顯著的差異，說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進性和實用性。
[0042]需要說明的是:本發(fā)明所有實施例都是在嚴格控制變量的基礎(chǔ)上進行的。實施例中各實驗所采取之胡蜂毒均經(jīng)過《藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心》質(zhì)檢室進行HPLC (Agilentl200)指紋圖譜檢測，SDS-PAGE電泳檢測。每個實施例中的各平行實驗所獲得之蜂毒均與同一實施例中的其它蜂毒具有相同的品質(zhì)。
[0043]實施例2:馬蜂科黃裙馬蜂(Polistes sagittarius Saussure)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗
[0044]2.1實驗地點:
[0045]云南文山州富寧縣。2窩黃裙馬蜂相距1.5公里左右。山林中。蜂體標本經(jīng)云南省大理學院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心楊自忠教授鑒定為馬蜂科黃裙馬蜂(Polistes sagittarius SaussureX[0046]2.2常規(guī)采毒裝置及方法:
[0047]同實施例1中1.1.2、1.1.3部分。
[0048]2.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:
[0049]同實施例1中1.2.2、1.2.3部分。其關(guān)鍵技術(shù)是:米毒玻璃板下面加裝一層光電二極管燈泡承載層，使用閃爍其控制器使紅色、白色、橙色LED燈各色燈泡以每10秒鐘交替閃爍6次。以對角形式安裝小型THD-2012Q小型超聲波發(fā)生器及5120型喇叭超聲波發(fā)生器組合各2臺(調(diào)超聲頻率為28千赫茲和40千赫茲)。將超聲波發(fā)生器打開，喇叭對準蜂巢所在位置；同時打開控制LED燈閃爍電源控制器，使安裝在采毒器玻璃板下方的紅色、白色、橙色LED燈依次閃亮，并反復循環(huán)閃爍，形成對蜂巢蜂群的強烈刺激信號。打開取毒器電源開關(guān)，之后打開蜂巢口，吸引黃裙馬蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，先關(guān)掉取毒器開關(guān)，再順次關(guān)閉超聲波發(fā)生器電源和LED燈電源；收集取毒玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。
[0050]2.4實驗內(nèi)容:
[0051]同實施例1.1至1.5。具體而言，按照實施例1.1至1.5的實驗設(shè)計思路，進行了黃裙馬蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩黃裙馬蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的黃裙馬蜂毒量。2個月內(nèi)平行進行4次試驗，進行結(jié)果統(tǒng)計。
[0052]2.5實驗結(jié)果與說明:
[0053]使用“雙重刺激”技術(shù)采集黃裙馬蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的黃裙馬蜂毒素平均重量高出32±7% ;黃裙馬蜂攻擊取毒器次數(shù)增加22±6%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集馬蜂科昆蟲毒素有著較大的先進性和實用性。
[0054]實施例3:鈴腹胡蜂科帶鈴腹胡蜂(Popalidia fasciata Fabricius)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗
[0055]3.1實驗地點:
[0056]云南省文山州廣南縣那倫鄉(xiāng)。2窩帶鈴腹胡蜂相距1.3公里左右。海拔890公尺公路邊山林中。蜂體標本經(jīng)云南省大理學院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心楊自忠教授鑒定為膜翅目鈴腹胡蜂科帶鈴腹胡蜂(Popalidia fasciata Fabricius)。
[0057]3.2常規(guī)采毒裝置及方法:
[0058]同實施例1中1.1.2、1.1.3部分。
[0059]3.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:
[0060]同實施例1中1.2.2、1.2.3部分。其關(guān)鍵技術(shù)是在米毒玻璃板下面加裝一層光電二極管燈泡承載層，使用閃爍其控制器使紅色、白色、橙色LED燈各色燈泡以每10秒鐘交替閃爍6次。以對角形式安裝小型THD-2012Q小型超聲波發(fā)生器及5120型喇叭超聲波發(fā)生器組合各2臺(調(diào)超聲頻率為28千赫茲和40千赫茲)。將超聲波發(fā)生器打開，喇叭對準蜂巢所在位置；同時打開控制LED燈閃爍電源控制器，使安裝在采毒器玻璃板下方的紅色、白色、橙色LED燈依次閃亮，并反復循環(huán)閃爍，形成對蜂巢蜂群的強烈刺激信號。打開取毒器電源開關(guān)，之后打開蜂巢口，吸 引帶鈴腹胡蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，先關(guān)掉取毒器開關(guān)，再順次關(guān)閉超聲波發(fā)生器電源和LED燈電源；收集取毒玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。[0061]3.4實驗內(nèi)容:
[0062]同實施例1.1至1.5部分。具體而言，按照實施例1.1至1.5的實驗設(shè)計思路，進行了帶鈴腹胡蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩帶鈴腹胡蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的帶鈴腹胡蜂毒量。2個月內(nèi)平行進行4次試驗，進行結(jié)果統(tǒng)計。3.5實驗結(jié)果與說明:
[0063]實驗結(jié)果顯示:使用“雙重刺激”技術(shù)采集帶鈴腹胡蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的帶鈴腹胡蜂毒素平均重量高出21±5% ;帶鈴腹胡蜂攻擊取毒器次數(shù)增加26±5%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集鈴腹胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進性和實用性。
[0064]實施例4:異腹胡蜂科變側(cè)異腹胡蜂(ParapoIybia varia varia Fabricius)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗
[0065]4.1實驗地點:
[0066]云南省文山州麻栗坡縣。2窩變側(cè)異腹胡蜂相距1.8公里左右。海拔672公尺公路邊山林中。蜂體標本經(jīng)云南省大理學院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心楊自忠教授鑒定為膜翅目異腹胡蜂科變側(cè)異腹胡蜂(Parapolybia varia varia Fabricius)。
[0067]4.2常規(guī)采毒裝置及方法:
[0068]同實施例1中1.1.2、1.1.3部分。 [0069]4.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:
[0070]同實施例1中1.2.2、1.2.3部分。其關(guān)鍵技術(shù)是:米毒玻璃板下面加裝一層光電二極管燈泡承載層，使用閃爍其控制器使紅色、白色、橙色LED燈各色燈泡以每10秒鐘交替閃爍6次。以對角形式安裝小型THD-2012Q小型超聲波發(fā)生器及5120型喇叭超聲波發(fā)生器組合各2臺(調(diào)超聲頻率為28千赫茲和40千赫茲)。將超聲波發(fā)生器打開，喇叭對準蜂巢所在位置；同時打開控制LED燈閃爍電源控制器，使安裝在采毒器玻璃板下方的紅色、白色、橙色LED燈依次閃亮，并反復循環(huán)閃爍，形成對蜂巢蜂群的強烈刺激信號。打開取毒器電源開關(guān)，之后打開蜂巢口，吸引變側(cè)異腹胡蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，先關(guān)掉取毒器開關(guān)，再順次關(guān)閉超聲波發(fā)生器電源和LED燈電源；收集取毒玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。
[0071]4.4實驗內(nèi)容:
[0072]同實施例1.1至1.5。具體而言，按照實施例1.1至1.5的實驗設(shè)計思路，進行了變側(cè)異腹胡蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩變側(cè)異腹胡蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的變側(cè)異腹胡蜂毒量。2個月內(nèi)平行進行4次試驗，進行結(jié)果統(tǒng)計。4.5實驗結(jié)果與說明:
[0073]實驗結(jié)果顯示:使用“雙重刺激”技術(shù)采集變側(cè)異腹胡蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的變側(cè)異腹胡蜂毒素平均重量高出30±7% ;帶鈴腹胡蜂攻擊取毒器次數(shù)增加26±6%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集膜翅目異腹胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進性和實用性。
[0074]實施例5:狹腹胡蜂科光全狹腹胡蜂(Holischnogaster micans Saussure)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗
[0075]5.1實驗地點:[0076]云南省孟連縣勐馬鎮(zhèn)。2窩光全狹腹胡蜂相距1.6公里左右。海拔972公尺鄉(xiāng)村道路路邊山林中。蜂體標本經(jīng)云南省大理學院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心郭云膠教授鑒定為膜翅目狹腹胡蜂科光全狹腹胡蜂(Holischnogaster micansSaussureX
[0077]5.2常規(guī)采毒裝置及方法:
[0078]同實施例1中1.1.2、1.1.3部分。
[0079]5.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:
[0080]同實施例1中1.2.2、1.2.3部分。其關(guān)鍵技術(shù)是:米毒玻璃板下面加裝一層光電二極管燈泡承載層，使用閃爍其控制器使紅色、白色、橙色LED燈各色燈泡以每10秒鐘交替閃爍6次。以對角形式安裝小型THD-2012Q小型超聲波發(fā)生器及5120型喇叭超聲波發(fā)生器組合各2臺(調(diào)超聲頻率為28千赫茲和40千赫茲)。將超聲波發(fā)生器打開，喇叭對準蜂巢所在位置；同時打開控制LED燈閃爍電源控制器，使安裝在采毒器玻璃板下方的紅色、白色、橙色LED燈依次閃亮，并反復循環(huán)閃爍，形成對蜂巢蜂群的強烈刺激信號。打開取毒器電源開關(guān)，之后打開蜂巢口，吸引光全狹腹胡蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，先關(guān)掉取毒器開關(guān)，再順次關(guān)閉超聲波發(fā)生器電源和LED燈電源；收集取毒玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。
[0081]5.4實驗內(nèi)容:
[0082]同實施例1.1至1.5部分。具體而言，按照實施例1.1至1.5的實驗設(shè)計思路，進行了光全狹腹胡蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩光全狹腹胡蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的光全狹腹胡蜂毒量。2個月內(nèi)平行進行4次試驗，進行結(jié)果統(tǒng)計。
`[0083]5.5實驗結(jié)果:
[0084]使用“雙重刺激”技術(shù)采集光全狹腹胡蜂蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的光全狹腹胡蜂蜂毒素平均重量高出22±7%;光全狹腹胡蜂攻擊取毒器次數(shù)增加31±9%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集膜翅目狹腹胡蜂科昆蟲毒素有著較大的先進性和實用性。
[0085]實施例6:意大利密蜂(Apis mellifera ligustica Spinola)的常規(guī)采毒與“雙重刺激”技術(shù)采毒所得蜂毒量的比較試驗
[0086]6.1實驗地點:
[0087]云南省曲靖市羅平縣。2窩光意大利蜜蜂相距3公里左右。海拔965公尺鄉(xiāng)村道路路邊油菜花地中。蜂體標本經(jīng)云南省大理學院藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心毛本勇教授鑒定為膜翅目意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica Spinola)。
[0088]6.2常規(guī)采毒裝置及方法:
[0089]同實施例1中1.1.2、1.1.3部分。
[0090]6.3 “雙重刺激”技術(shù)采毒裝置及方法:
[0091]同實施例1中1.2.2、1.2.3部分。其關(guān)鍵技術(shù)是:米毒玻璃板下面加裝一層光電二極管燈泡承載層，使用閃爍其控制器使紅色、白色、橙色LED燈各色燈泡以每10秒鐘交替閃爍6次。以對角形式安裝小型THD-2012Q小型超聲波發(fā)生器及5120型喇叭超聲波發(fā)生器組合各2臺(調(diào)超聲頻率為28千赫茲和40千赫茲)。將超聲波發(fā)生器打開，喇叭對準蜂巢所在位置；同時打開控制LED燈閃爍電源控制器，使安裝在采毒器玻璃板下方的紅色、白色、橙色LED燈依次閃亮，并反復循環(huán)閃爍，形成對蜂巢蜂群的強烈刺激信號。打開取毒器電源開關(guān)，之后打開蜂巢口，吸引意大利蜜蜂出來攻擊蜂毒采集器。30分鐘后，先關(guān)掉取毒器開關(guān)，再順次關(guān)閉超聲波發(fā)生器電源和LED燈電源；收集取毒玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中，梅特勒十萬分之一電子天平稱重。
[0092]6.4實驗內(nèi)容:
[0093]與實施例1.1至1.5相似內(nèi)容。具體而言，按照實施例1.1至1.5的實驗設(shè)計思路，進行了意大利蜜蜂常規(guī)采毒、常規(guī)采毒后使用“雙重刺激”技術(shù)采毒，比較二者采毒量之差異；再于另外一窩意大利蜜蜂先用“雙重刺激”技術(shù)采毒，14天后用常規(guī)采毒法再次采毒。比較不同技術(shù)采獲的意大利蜜蜂毒量。2個月內(nèi)平行進行4次試驗，進行結(jié)果統(tǒng)計。
[0094]6.5實驗結(jié)果:
[0095]實驗結(jié)果顯示:使用“雙重刺激”技術(shù)采集意大利蜜蜂蜂毒素比常規(guī)采毒法得到的意大利蜜蜂蜂毒素平均重量高出23±4% ;意大利蜜蜂攻擊取毒器次數(shù)增加30±8%。說明使用“雙重刺激”技術(shù)采集膜翅目蜜蜂科昆蟲毒素有著較大的先進性和實用性。
[0096]在上述說明書闡述本發(fā)明時，同時提供了實施例的目的是舉例說明本發(fā)明的實際操作過程和本發(fā)明的意義。在進入本發(fā)明權(quán)利要求和其等同物范圍內(nèi)時，本發(fā)明的實際應(yīng)用包括所有一般變化 、配合，或改進。
【權(quán)利要求】
1.一種獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征為:在昆蟲巢穴口，聯(lián)合使用LED燈刺激誘捕及超聲波刺激誘捕獲取昆蟲生物毒素；其中，昆蟲是指膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲，生物毒素是指該類昆蟲分泌的蜂毒類活性物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征在于所述方法是在取毒器上同時加裝28千赫茲和40千赫茲的超聲波發(fā)生器，單獨或者輪番發(fā)出不同波段的超聲，對待取毒的膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲之蜂群進行刺激，從而惹怒該蜂群使其加強攻擊意愿、增大排毒量和攻擊次數(shù)，并為該蜂群直接攻擊取毒器增加了準確度而得以實現(xiàn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一的獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征在于所述方法是以在夜間對野生或養(yǎng)殖的膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲取毒時，使用安裝在取毒器側(cè)邊及玻璃底部的LED燈，同時，使用安裝在取毒器側(cè)邊及底部的超聲波發(fā)生器，再將取毒器通電，打開待取毒蜂巢，通過變換LED燈光閃爍以及發(fā)出刺激待取毒蜂群發(fā)怒的超聲波，對待取毒蜂群進行雙重強效刺激，從而惹怒該蜂群使其加強攻擊意愿，增大了排毒量和對采毒器的攻擊次數(shù)而得以實現(xiàn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征在于安裝在取毒器玻璃底部的LED燈不斷閃爍、變幻發(fā)出紅色光、藍色光、黃色光、橙色光，使待取毒的膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲在夜間攻擊取毒器時增加準確度。
5.據(jù)權(quán)利要求1-2任一的獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征在于:在白天采毒時應(yīng)用，為待取毒的膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲直接攻擊取毒器增加了定向性和準確度，減少白天采毒時待取毒蜂群攻擊取毒人造成的人員危險及由此造成的蜂毒損失。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一的獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征為:所述膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲是指蜜蜂總科Apoidea、胡蜂總科Vespoidea昆蟲。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征為:所述膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲是指蜜蜂總科Apoidea中的中華蜜蜂、意大利蜜蜂。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的獲取昆蟲生物毒素的方法，其特征為:述膜翅目細腰亞目針尾部蜂類昆蟲是指胡蜂 總科Vespoidea中的長腹胡蜂科、鈴腹胡蜂科、異腹胡蜂科、狹腹胡蜂科、馬蜂科、胡蜂科昆蟲。
【文檔編號】A61P31/18GK103636567SQ201310625072
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】郭云膠, 王斌, 郭娜娜, 張成桂, 趙昱 申請人:大理學院