用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的山豆根提取物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及分離自山豆根的用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的提取物。更具體地說，本發(fā)明涉及包含山豆根提取物的藥物，它們具有極佳的抑制氣道收縮、呼吸道感染5-脂氧合酶活性、磷酸二酯酶4活性、氣道高反應性和氣道重建的作用；對白細胞三烯D4的拮抗活性；和止咳作用，由此用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病，諸如哮喘、急性或慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、急性上呼吸道感染和急性下呼吸道感染等。
【專利說明】用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的山豆根提取物
[0001]本申請是申請日為2005年10月21，申請?zhí)枮?00580039937.9，發(fā)明題目為“用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的山豆根提取物”的分案申請。
發(fā)明領域
[0002]本發(fā)明涉及用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的山豆根(Sophorae Radix)提取物。本發(fā)明還涉及包含山豆根提取物的用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物，所述的預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病是因這些藥物在預防氣道收縮、呼吸道感染、5-脂氧合酶、磷酸二酯酶4、氣道高反應性或氣道重建、白細胞三烯D4以及具有止咳作用中的極佳作用所致。
[0003]發(fā)明背景
[0004]哮喘是具有呼吸困難、咳嗽和喘鳴的反復和間歇性的癥狀的典型呼吸系統(tǒng)疾病。約30%的兒科哮喘患者在初生I年中就開始表現(xiàn)出癥狀，而約80%的哮喘患者在4-5歲時表現(xiàn)出癥狀。在韓國，哮喘的暴發(fā)率在約10%。
[0005]哮喘的發(fā)病率根據(jù)國家、種族、年齡等的不同可以在一定程度上變化。根據(jù)1991年英國的報告，約7%的成年人和13.5%的兒童患有哮喘。在韓國，哮喘患者的數(shù)量因生活方式和環(huán)境條件，諸如嚴重的污染和蓄積的緊張狀態(tài)的劇烈改變而在增加。近來因環(huán)境污染，諸如污染物而導致發(fā)生哮喘的年齡下降且其癥狀已經(jīng)延長。
[0006]作為哮喘特征之 一的呼吸阻塞通過3步發(fā)生:即支氣管平滑肌收縮；肺粘膜胼胝體形成和支氣管及細支氣管中粘液蓄積。在它們中，支氣管平滑肌收縮更易于恢復。
[0007]在外因性(過敏性)哮喘發(fā)作中，已知IgE起極為重要的作用并且還通常涉及IgG。IgE通過活化肥大細胞誘導超敏反應釋放介體(組胺、SRS-A, ECF-A, NCF、PAF、激肽、PGs等)。對內因性(非過敏性)哮喘仍然并不了解,但這種類型的哮喘看起來由自主神經(jīng)介導。在內源性哮喘患者中，膽堿能刺激可以直接釋放介體，諸如來自肥大細胞的組胺，杯狀細胞的分泌增加，肺血管擴張和氣管、支氣管和大的細支氣管收縮，由此導致支氣管痙攣和粘液釋放增加。
[0008]迄今為止，仍然沒有治愈哮喘。盡管存在用于預防因哮喘導致的痙攣和并發(fā)癥的許多方法和藥物，但是它們仍然不令人滿意。預防哮喘發(fā)作的最有效的方式之一可能在于發(fā)現(xiàn)涉及導致哮喘的確切因素。已經(jīng)用于治療哮喘的治療劑的實例為吸入支氣管擴張藥、口服或可注射支氣管擴張藥(交感神經(jīng)刺激劑和茶堿類)、類固醇制劑(吸入、口服和可注射形式等)、白細胞三烯拮抗劑(孟魯司特、普侖司特、齊留通等)、抗過敏藥(色甘酸鈉、酮替芬等)等。
[0009]支氣管炎可以為急性或慢性的。根據(jù)其原因的不同，將支氣管炎分成過敏性、感染性和外因性支氣管炎，而從病理學上說，它是傳統(tǒng)的卡他性支氣管炎、化膿性支氣管炎、閉塞性支氣管炎、潰瘍性支氣管炎和浸潤性支氣管炎。支氣管炎的最常見的原因在于因感染細菌、病毒、真菌等所致。正常情況下不感染上述病原體的人在其免疫系統(tǒng)低下時可以被感染。過敏性支氣管炎可以為因吸入過敏原導致的直接過敏反應或因全身過敏反應導致的部分癥狀。外因性支氣管炎可以因化學刺激物，諸如氯和二氧化硫氣體或因物理刺激物，諸如粉塵而發(fā)生。生活在具有污染空氣的大城市中的人易發(fā)生呼吸道感染。就急性支氣管炎而言，從病理學觀點來看，易于觀察到紅核、腫脹和干燥病，并且還有粘液或膿液分泌。一般而言，哮喘可以恢復而無不能治愈的并發(fā)癥。然而，如果它發(fā)展成慢性哮喘，那么它可產(chǎn)生腫脹、胼胝體和萎縮。在延長的慢性哮喘中，它導致纖維增生、支氣管狹窄或肺氣腫。支氣管炎的最特有的癥狀為咳嗽和粘痰。如果支氣管炎的原因是感染，那么通常發(fā)生發(fā)熱和胸痛，而如果它是因外因所致，那么通常發(fā)生對口腔、鼻、眼等粘膜的刺激。在療法中，認為咳嗽是一種身體防御且由此并不推薦有意識地止咳。必需的情況是實施針對所述原因的療法與其它措施。在冬季，需要增加室溫并且給予少量可待因、阿托品、麻黃堿、抗組安藥等。類固醇或茶堿類在治療感染中的應用并不令人滿意。
[0010]鼻部過敏性炎癥通常指的是鼻變態(tài)反應或過敏性鼻炎。它使人發(fā)生猝然連續(xù)的咳嗽的癥狀，流大量澄清的鼻粘液，鼻部不通氣，頭重，流淚等癥狀。當這些癥狀類似，但未確定過敏原時，它是血管痙攣性鼻卡他。例如，上述癥狀在體溫于早晨短暫降低時發(fā)生并且它們通常在幾小時內恢復，并且這些癥狀通常在寒冷季節(jié)中的人中觀察到。這種情況有時可能與鼻部感冒混淆，但它不同于感冒且通常伴隨哮喘和蕁麻疹。
[0011]過敏性鼻炎中的過敏反應為抗原-抗體超敏反應,其中組胺從肥大細胞和嗜堿粒細胞的細胞壁中釋放，并且釋放花生四烯酸以通過環(huán)加氧酶(COX)和5-脂氧合酶(5-L0)產(chǎn)生前列腺素和白細胞三烯，由此介導在接觸抗原后2-90分鐘發(fā)生的初步反應和此后4-8小時發(fā)生的后反應。最初的反應通過介導物質進行，而后反應由細胞浸潤介導。此后，過敏性和非-過敏性鼻炎均作為發(fā)生哮喘的危險因素。
[0012]在療法中，當清楚地鑒定了抗原時，進行脫敏。其它療法，諸如使用藥物、手術、物理療法，但并不將它們視為可完全治愈的手段。
[0013]存在各種因諸如化膿菌、特殊細菌(結核分支桿菌、白喉棒桿菌、螺旋體等)、病毒、真菌導致的呼吸道感染，并且還將它們分成急性和慢性呼吸道感染。當鼻腔、咽和喉獨立地受到感染時，根據(jù)相應器官的名稱命名疾病。然而，當上述器官作為整體受到感染時，它們稱作上呼吸道感染，并且有代表性的實例為上呼吸道疾病。除此之外，就特殊細菌或真菌導致的感染情況而言，它們還通常稱作上呼吸道結核病、上呼吸道白喉、上呼吸道念珠菌病等。
[0014]如上所述，呼吸系統(tǒng)疾病,諸如哮喘、過敏性鼻炎、急性和慢性支氣管炎在其原因或癥狀方面不同，但它們在以下幾個方面中具有共同的特征。
[0015]首先，它們均為炎性疾病。這些呼吸系統(tǒng)疾病由過敏原、感染等導致，但炎癥在疾病的加劇和治療中起關鍵作用。即過敏原、感染等刺激的白細胞引入呼吸道并且在其中活化和從白細胞和炎性介體中釋放的各種細胞因子使疾病惡化并且影響治療。
[0016]其次，呼吸道收縮和舒張無法正常進行，由此使得呼吸困難。即呼吸道受到損傷，由此對正常刺激物產(chǎn)生過度的反應(哮喘)或它變得過于狹窄而無法進行正常的支氣管呼吸，由此需要適當治療。
[0017]第三，在主要的藥物療法中，抗炎藥、抑制呼吸道收縮的活性劑、支氣管擴張藥、抑制呼吸道舒張的活性劑起重要作用并且其它治療藥也通常聯(lián)用。例如，通常使用抗組胺藥、抗膽堿能藥、β 2受體激動劑、類固醇、白細胞三烯D4受體拮抗劑、茶堿的磷酸二酯酶4抑制劑。雖然如此，但是支氣管擴張藥，諸如抗膽堿能藥、β 2受體激動劑等在治療炎癥中無效，它們僅可以單純緩解癥狀。因此，長期使用治療藥物可以產(chǎn)生耐藥性并且仍然存在惡化的風險。已知類固醇可有效治療炎癥，但它們具有嚴重副作用，并且不適合于長期使用且還證實它們在治療慢性支氣管炎中無效。因此，開據(jù)上述兩種藥物的處方以便聯(lián)合給藥，而因類固醇藥物的副作用，已經(jīng)將其配制成非口服給藥形式的吸入劑型，由此因給藥困難而造成依從性降低。因此，需要研發(fā)一種可以解決上述目前使用治療藥物的局限并且有效改善癥狀的新的治療藥物。然而，如上所述，各種白細胞或不同細胞因子或炎性介體涉及呼吸系統(tǒng)疾病，難以使用單一組分化學物質治療呼吸系統(tǒng)疾病且由此具有各種活性組分和機制的天然提取物能夠用作有效的治療藥物。
[0018]此外，看起來存在許多導致呼吸系統(tǒng)疾病，諸如哮喘、支氣管炎、過敏性鼻炎、急性下呼吸道感染(支氣管炎、細支氣管炎等)、急性上呼吸道感染(扁桃體炎、咽喉炎)的原因，但是治療它們僅是短暫緩解，并且通常在治療后存在疾病復發(fā)的問題。因此，預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病已經(jīng)上升為醫(yī)學科學中需要實現(xiàn)的最重要的任務之一，并且研發(fā)呼吸系統(tǒng)疾病的基礎預防和治療的新的治療藥物是迫切的需求。
[0019]作為原料藥使用的本發(fā)明山豆根為具有l(wèi)-2m高的灌木。它具有約2-5條具有淡棕黃色的圓柱狀根。其莖具有圓柱形，在表面上具有溝并且覆蓋有致密的短和軟的體毛，其中莖的上部分一般為彎曲的，成中文的"之"字形式。在干燥后用作藥物的根具有長的圓柱形并且略為彎曲，具有10-25-35cm長，直徑為0.3-lcm。其表面為棕色或暗棕色，具有垂直形成的皺紋和具有少許旋光性的長皮孔。其主要產(chǎn)地在中國的廣西省。在東方醫(yī)學中，它已經(jīng)用于治療腫瘤、水腫、疼痛、黃疸、腹瀉、痔等。其活性組分為:生物堿類，諸如苦參堿、氧化苦參堿、臭豆堿、甲基野靛堿等；和黃酮類，諸如廣豆根素、廣豆根酮、環(huán)廣豆根素、環(huán)廣豆根酮等(Chinese Medicine Encyclopedia, Jungdam Publishing, pp.2627-2632，1998)。然而，山豆根提取物對呼吸系統(tǒng)疾病的作用尚未研究。
[0020]發(fā)明概述
[0021]本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)進行了廣泛深入的努力以便研發(fā)有效治療呼吸系統(tǒng)疾病的治療藥物并且作為結果，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)山豆根提取物具有極佳的抑制呼吸道收縮、呼吸道感染、5-脂氧合酶、磷酸二酯酶4、氣道高反應性和氣道重建的活性；對白細胞三烯D4的拮抗活性；和止咳作用。因此，本發(fā)明的目的在于提供用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的包含山豆根提取物作為活性組分的治療藥物。
[0022]附圖簡述
[0023]本發(fā)明的上述方面和其它特征在下文的描述中結合附圖解釋，其中:
[0024]附圖1為表示對氣道高反應性的作用的示意圖[SAL:鹽水，0VA:卵清蛋白，S0S:制備實施例2中制備的提取物];
[0025]附圖2A-F為表示制備實施例2中制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠肺組織中氣道粘液表達的作用的照片；
[0026]附圖3為表示制備實施例2制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠肺組織中氣道粘液表達的作用的直方圖；
[0027]附圖4A-F為表示制備實施例2制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠肺組織中α-平滑肌表達的作用的照片；
[0028]附圖5為表示制備實施例2制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠肺組織中α-平滑肌表達的作用的直方圖；
[0029]附圖6A-F為表示制備實施例2制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠肺組織中支氣管周圍纖維化的作用的照片；
[0030]附圖7為表示制備實施例2制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠肺組織中纖維化的作用的直方圖；
[0031]附圖8為表示制備實施例2制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠總肺膠原蛋白含量的作用的直方圖；且
[0032]附圖9為表示制備實施例2制備的提取物(SOS)或孟魯司特對OVA-致敏的和-攻擊的小鼠肺組織中IL-4、IL-5和IL-13蛋白質表達的作用的蛋白質印跡結果。
[0033]發(fā)明詳述
[0034]本發(fā)明在一個方面中涉及用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的山豆根提取物。本發(fā)明在另一個方面中涉及包含山豆根提取物作為活性組分的藥物，其具有極佳的抑制呼吸道收縮、呼吸道感染、5-脂氧合酶、磷酸二酯酶4活性、氣道高反應性的作用和抑制氣道重建的活性；對白細胞三烯D4的拮抗活性；止咳作用；由此用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病，諸如哮喘、急性和慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、急性下呼吸道感染(支氣管炎、細支氣管炎等)、急性上呼吸道感染(咽喉炎、扁桃體炎、喉炎)等。
[0035]在下文中更具體地描述本發(fā)明。
[0036]制備本發(fā)明山豆根提取物的方法如下。
[0037]I)通過使用相對于山豆根重量約7 - 10倍的水或醇溶液經(jīng)回流且然后過濾提取山豆根粗粉。通過加入相對于合并的山豆根重量約4 - 7倍的水或醇溶液，隨后加熱且然后過濾再次提取殘渣。因此，將獲`得的兩次濾液彼此合并并且過濾。
[0038]2)通過使用等量的水飽和的低級醇或非極性溶劑且然后在50-60°C和減壓下濃縮使上述步驟I)中獲得的濾液進行相分離。
[0039]3)通過加入相對于上述步驟2)中獲得的濃縮物總重約20 - 50倍的水使上述濃縮物進行共沸濃縮，將其均勻地懸浮于等量的水中且然后在凍干下放置。
[0040]更具體地說，向最初的山豆根粗粉中加入水或醇溶液并且在回流狀態(tài)下提取2 -5小時，其中水或醇溶液的量優(yōu)選約為山豆根粗粉重量的7 - 10倍。然后過濾上述提取物。然后向濾液中加入約山豆根粗粉重量4 一 7倍的水或醇溶液，加熱，再提取2-5小時，過濾并且與先前獲得的濾液合并，由此增加提取效率。
[0041]在本文中，如果水量過少，那么就不能提供充分的攪拌并且還降低了所得提取物的溶解度，由此降低了提取效率；而如果水量過多，那么在接下來的純化步驟中使用的低級醇和非極性溶劑的量就會增加，由此造成浪費且還增加了操作問題。
[0042]在本發(fā)明中，提取由首次提取或二次提取組成。當批量產(chǎn)生提取物粗品時，它通常含有大量水分，這是因盡管進行了有效過濾，但是藥物粗粉自身原因導致。因此，本發(fā)明防止了因僅進行首次提取獲得的相對低的提取效率的問題。此外，本發(fā)明的本
【發(fā)明者】對提取效率的進一步研究證實通過二次提取獲得總提取物的約80-90%，這提示二次以上的提取的額外提取不一定必要并且也是浪費。
[0043]過濾如上所述進行的首次和二次提取獲得的提取物，濃縮且然后純化而可以除去不需要的雜質，諸如蛋白質、多糖類、脂肪酸等。在本發(fā)明中，向濾液中加入等量的低級醇或非極性溶劑以便進行2-4次相分離，由此獲得溶劑級分，同時分離了雜質。在本文中，低級醇的實例包括具有I一 6個碳原子的醇，優(yōu)選丁醇、丙醇或異丙醇。非極性溶劑的實例為乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或甲基乙基酮。當?shù)图壌蓟蚍菢O性溶劑的量低于濾液的量時，通常因存在雜質，諸如脂肪酸而產(chǎn)生顆粒且由此不能有效地進行相分離，并且對活性組分的提取效率也變得相對低，由此無效。在50-60°C和減壓下濃縮作為上述相分離結果獲得的低級醇或非極性溶劑的級分以便除去樣本中剩余的溶劑。使用相對于濃縮物總重約25-50倍的水使由此獲得的濃縮物進行2-3次共沸濃縮且然后通過加入等量的水使其均勻懸浮。進行共沸濃縮的主要原因在于可有效控制剩余低級醇的含量，以便將藥物粗粉的提取物用作藥物的原料。
[0044]此外，除上述方法外，還可以通過用水，水飽和的低級醇或非極性溶劑提取，隨后純化來獲得本發(fā)明的山豆根提取物。低級醇的實例包括具有I 一 6個碳原子的醇，優(yōu)選丁醇、丙醇或異丙醇。非極性溶劑的實例為乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或甲基乙基酮。
[0045]因此，將獲得的山豆根提取物進行凍干且然后獲得粉末形式的最終提取物。這種最終的提取物具有極佳的抑制呼吸道收縮、呼吸道炎癥、5-脂氧合酶、磷酸二酯酶4活性、氣道高反應性和氣道重建的活性；對白細胞三烯D4的拮抗活性；止咳作用等；且由此預計可用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病。
[0046]在臨床研究中，可以通過各種口服或非腸道劑型給予本發(fā)明的山豆根提取物。當配制它們時，使用稀釋劑，諸如填充劑、填料、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑等或賦形劑。
[0047]用于口服給藥的固體制劑包括片劑、丸劑、粉劑、顆粒、膠囊、藥片、栓劑等。通過將至少一種選自淀粉、碳酸鈣、蔗糖或乳糖、明膠等的賦形劑加入到木聚糖和內酯化合物或其衍生物的混合物中制備這些固體制劑。除簡單的賦形劑之外，還可以使用潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、滑石粉等。栓劑用基質`為硬脂甘油三酯類、聚乙二醇、聚山梨醇酯、可可油、月桂精油、甘油、明膠等。
[0048]口服給藥用液體制劑為混懸液、溶液(糖漿劑、飲料等)、乳劑等。例如，除最常用的稀釋劑，諸如水或液體石蠟外，還可以使用各種賦形劑，諸如濕潤劑、增甜劑、矯味劑和防腐劑。
[0049]非腸道給藥用制劑為無菌溶液、非水溶液、混懸液、乳劑、凍干粉。用于非水溶液、混懸液或乳劑的溶劑為植物油、丙二醇、聚乙二醇、橄欖油和油酸乙酯。
[0050]本發(fā)明的山豆根提取物已經(jīng)作為民間驗方使用了較長時間并且其安全性已經(jīng)被毒性試驗證實。山豆根提取物的劑量取決于各種因素，諸如身體吸收率、體重、年齡、性別、健康狀況、受試者的膳食或給藥所需的時間、給藥方法、排泄率、疾病嚴重性等。正如在藥理實驗中證實的，優(yōu)選給予約l_15mg/kg體重的山豆根提取物。因此，應考慮到藥物功效的有效范圍生產(chǎn)用作藥物活性組分的本發(fā)明山豆根提取物且由此可以在定期間隔或/或按照醫(yī)學專家監(jiān)督或受試者要求特定療法給予生產(chǎn)的單位劑型的藥物制劑。
[0051]參照下列實施例更具體地描述本發(fā)明，然而，不應將它們視為對本發(fā)明范圍的限制。
[0052]制備實施例1:山豆根提取物的制備[0053]充分混合粉碎成約1.0cm大小的250g山豆根并且向其中加入2L水且然后在攪拌的同時加熱提取5小時。收集所得濾液并且向殘渣中加入1.5L水并且加熱提取3小時。合并上述兩次濾液且然后濃縮至最終的1.5L體積。向上述濃縮物中加入等體積的水飽和的正丁醇并且進行3次相分離。僅收集正丁醇級分并且在58°C和減壓下濃縮至提取物變干燥。在蒸發(fā)大部分正丁醇和水后，加入0.1L水并且進行3次共沸濃縮。將所得物質重新懸浮于等量的蒸餾水中且然后凍干至最終獲得粉末形式的山豆根提取物。
[0054]制備實施例2:山豆根提取物的制備
[0055]用水清潔山豆根并且干燥。向250g山豆根中加入2L50%(v/v)乙醇溶液并且在攪拌的同時回流提取6小時。收集所得濾液并且向殘渣中加入1.5L30%(v/v)乙醇溶液并且加熱提取3小時。合并上述兩次濾液且然后濃縮至最終的1.5L體積。向上述濃縮物中加入等體積的水飽和的正丁醇并且進行3次相分離。僅收集正丁醇級分并且在58°C和減壓下濃縮至提取物變干燥。在蒸發(fā)大部分正丁醇和水后，加入0.2L水并且進行3次共沸濃縮。將所得物質重新懸浮于等體積的蒸餾水中且然后凍干至最終獲得粉末形式的山豆根提取物。
[0056]制備實施例3:山豆根提取物的制備
[0057]用水清潔山豆根并且干燥。向250g山豆根中加入2L水飽和的正丁醇溶液并且在攪拌的同時回流提取6小時。收集所得濾液并且向殘渣中加入1.5L水飽和的正丁醇溶液并且加熱提取3小時。合并上述兩次濾液且然后在58°C和減壓下濃縮至提取物變干燥。在蒸發(fā)大部分正丁醇和水后，加入0.2L水并且進行3次共沸濃縮。將所得物質重新懸浮于等體積的蒸餾水中且然后凍干至最終獲得粉末形式的山豆根提取物。
[0058]實施例1:有關抑制氣道收縮的實驗(體外)
[0059]為了評價制備實施例1-3中制備的山豆根提取物對氣道收縮的抑制作用，如下所述使用切除的支氣管進行實驗且結果如表1中所示。
[0060][方法]
[0061]通過靜脈內注射1.5mL/kg抗卵清蛋白抗血清使Hartely雄性豚鼠(400-450g，SLC，Japan)致敏。致敏后48小時，通過放血處死豚鼠且然后分離其氣管。在Krebs-Heseleit溶液中除去與支氣管粘連的其它組織并且切下環(huán)形的支氣管，使得它含有2-3個軟骨。保持支氣管肌肉的完整性，但是切下環(huán)的軟骨部分并且用兩側上的縫合線連接且吊在器官浴槽中。在穩(wěn)定后，放入它以便通過添加10 μ g/mL卡巴膽堿誘導最大收縮。用Krebs-Heselei t溶液洗漆支氣管并且使其穩(wěn)定。加入吲哚美辛(2 μ moles)并且在I分鐘后將測試物質‘X’加入器官浴槽。在5分鐘內加入10 μ g/mL卵清蛋白(OVA)以便誘導收縮。通過比較用卡巴膽堿和OVA誘導的收縮計算氣道收縮率。通過使用與力傳感器(FT4, BioPAC系統(tǒng))連接的生理活性測定裝置(MP150，BioPAC系統(tǒng))測定氣道收縮/舒張。
[0062]表1
【權利要求】
1.山豆根提取物制備用于預防和治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物的用途，其中通過如下方式制備山豆根提取物: a)用水或醇溶液提取山豆根，隨后用水飽和的丁醇或非極性溶劑純化來制備所述的山豆根提取物，或 b)用水或水飽和的丁醇或非極性溶劑提取山豆根，隨后使用這些溶劑純化來制備所述的山豆根提取物。
2.權利要求1所述的用途，其中所述非極性溶劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或甲基乙基酮。
3.權利要求1所述的用途，其中所述的呼吸系統(tǒng)疾病為哮喘、急性或慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、急性上呼吸道感染和急性下呼吸道感染。
4.權利要求1所述的用途，其中所述的呼吸系統(tǒng)疾病因氣道收縮、呼吸道感染、5-脂氧合酶、磷酸二酯酶4、氣道 高反應性或氣道重建、白細胞三烯D4和止咳作用導致。
【文檔編號】A61P11/06GK103690594SQ201310628185
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2005年10月21日 優(yōu)先權日:2004年10月27日
【發(fā)明者】韓昌均, 鄭基遠, 柳憲昇, 趙龍白, 柳根鎬, 白惠娟, 金澤洙, 鄭仁鎬, 郭義宗 申請人:Sk化學株式會社