幫助傷口愈合的制劑的制作方法
【專利摘要】本申請公開了一種幫助傷口愈合的制劑，包括堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGFβ)、粒細(xì)胞集落刺激生長因子(GM-CSF)、肝細(xì)胞生長因子(HGF)、血小板衍生因子(PDGF)、白介素2(IL2)和白介素10(TL10)。本制劑提供一種富含豐富的營養(yǎng)因子的組合物，能夠幫助加速傷口愈合并且不留瘢痕和色素沉著。
【專利說明】幫助傷口愈合的制劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，特別涉及傷口愈合。
【背景技術(shù)】
[0002]皮膚創(chuàng)傷是人們在日常生活中經(jīng)常碰到的傷害，皮膚愈合過程慢，處理不當(dāng)還會發(fā)生感染、潰爛而經(jīng)久不愈。各種原因造成的深度皮膚挫傷、擦傷，外科手術(shù)、婦科手術(shù)、美容整形手術(shù)的傷口在愈合過程中都容易形成瘢痕，給人們帶來極大的憂慮和煩惱。如何在加快傷口愈合的同時使得皮膚愈合平整，一直是醫(yī)學(xué)科研人員試圖解決的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種富含豐富的營養(yǎng)因子幫助加速傷口愈合的組合物。
[0004]在一些實施方式中，幫助傷口愈合的制劑，包括堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGFβ)、粒細(xì)胞集落刺激生長因子(GM-CSF)Jf細(xì)胞生長因子(HGF)、血小板衍生因子(TOGF)、白介素2 (TL2)和白介素10 (ILlO)。
[0005]其中，bFGF的生物學(xué)作用十分強(qiáng)烈，是重要的促有絲分裂因子，也是新生皮膚細(xì)胞形態(tài)發(fā)生和分化的誘導(dǎo)因子，能促進(jìn)創(chuàng)傷愈合與組織修復(fù)、促進(jìn)組織再生。在皮膚再生的過程中，bFGF能夠改善細(xì)胞生長的微環(huán)境，促進(jìn)彈性纖維和膠原蛋白的合成，使肌膚富有彈性，使皮膚處于滑嫩的狀態(tài)。bFGF還能夠降低皮膚細(xì)胞中黑色素和有色細(xì)胞的含量，減輕皮膚色素的沉著。bFGF具有很強(qiáng)的刺激皮膚肉芽組織的形成和促進(jìn)肉芽組織的上皮化，調(diào)節(jié)膠原降解及更新，從而縮短創(chuàng)傷愈合時間以及減少疤痕形成的作用。
[0006]VEGF是最有效的促血`管生長因子，是一種選擇性促內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，它能增加血管通透能力，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并通過受體的結(jié)合數(shù)量調(diào)節(jié)血管的發(fā)展，促進(jìn)血管和淋巴管的生成，為皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程提供足夠的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，被認(rèn)為是組織再生的基礎(chǔ)。
[0007]TGF-β是一種多肽生長因子，其生物功能是影響細(xì)胞的增殖、分化，還在胞外基質(zhì)形成、組織形成和重建等方面起著重要作用。TGF-β還特別在增強(qiáng)細(xì)胞的免疫功能起到重要作用。
[0008]GM-CSF不僅是一種多潛能的造血生長因子，而且能有效地促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。由于創(chuàng)傷愈合是一個包含免疫以及血管生成的過程，GM-CSF作用于造血祖細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、分化，并刺激其向外周血釋放，可維持造血祖細(xì)胞的存活。近年的研究已表明，內(nèi)皮祖細(xì)胞參與血管新生。因此，GM-CSF通過促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖、分化和遷移，促進(jìn)新生皮膚細(xì)胞和組織的生成及發(fā)育。
[0009]HGF是刺激肝細(xì)胞的DNA合成，在肝再生過程中起重要作用一種蛋白激活因子。近年來愈來愈多的報道表明，HGF不只是作用于肝再生，而且對許多組織和細(xì)胞的生長、分化起重要調(diào)控作用。HGF具有強(qiáng)大的促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用，作用明顯強(qiáng)于bFGF和VEGF。HGF還可通過刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖而促進(jìn)受傷組織的血管新生。[0010]PDGF是多種細(xì)胞的主要有絲分裂刺激原，特別能刺激鄰近的結(jié)締組織細(xì)胞生長。這些結(jié)締組織細(xì)胞是重建受損組織、愈合創(chuàng)口的先鋒隊。實驗表明F1DGF在創(chuàng)面愈合的全過程中起重要作用，加強(qiáng)肉芽組織的形成，促進(jìn)傷口愈合并縮短愈合時間。PDGF還能促進(jìn)膠原蛋白的合成，使得新生皮膚具有良好的彈性。
[0011]TL2和TLlO是白細(xì)胞介素因子家族的兩個重要成員，它們在免疫細(xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)等一系列過程中均發(fā)揮重要作用，此外它們還參與機(jī)體的多種生理及病理反應(yīng)，在創(chuàng)傷修復(fù)中起到重要作用。本發(fā)明的幫助傷口愈合的制劑包含上述生長因子幫助加速傷口愈合并且不留瘢痕和色素沉著。
[0012]本發(fā)明通過發(fā)明人科研人員的組合上述生長因子獲得了一種速傷口愈合并且不留瘢痕和色素沉著的組合物。
[0013]在一些實施方式中，幫助傷口愈合的制劑中堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)濃度為50ng / ml、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)濃度為20pg、轉(zhuǎn)化生長因子(TGFi3)350ng /ml、粒細(xì)胞集落刺激生長因子(GM-CSF)濃度為65ng / ml、肝細(xì)胞生長因子(HGF)濃度為
0.65ng / ml、血小板衍生因子濃度為(F1DGF)ISpg / ml、白介素2(TL2)濃度為40pg / ml和白介素IO(TLlO)濃度為45pg / ml。
[0014]由于上述的各種生長因子有著很強(qiáng)的生物活性，本發(fā)明組合使用這些組分只需使用很低的濃度就可以達(dá)到所需的效果。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1本發(fā)明效果實驗生理鹽水對照組皮膚創(chuàng)傷愈合后組織切片圖。
[0016]圖2本發(fā)明效果實驗實驗組創(chuàng)傷愈合后組織切片圖。
【具體實施方式】
[0017]下面結(jié)合附圖對發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0018]實施例1幫助傷口愈合的制劑制備
[0019]配制出如下的溶液IL以生理鹽水配制并過濾除菌，得溶液A。
[0020]幫助傷口愈合的制劑中堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)濃度為50ng / ml、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)濃度為20pg、轉(zhuǎn)化生長因子(TGFi3)350ng / ml、粒細(xì)胞集落刺激生長因子(GM-CSF)濃度為65ng / ml、肝細(xì)胞生長因子(HGF)濃度為0.65ng / ml、血小板衍生因子濃度為O3DGF) 15pg / ml、白介素2(TL2)濃度為40pg / ml和白介素IO(ILlO)濃度為 45pg / ml ο
[0021]1、幫助傷口愈合的制劑于動物實驗
[0022]皮膚創(chuàng)傷模型制備:選取大鼠20只，隨機(jī)分成2組(實驗組和空白對照組)，每組10只。麻醉大鼠后，將其四肢展平俯臥位固定于板面上，將背部正中左側(cè)1.5cm、尾部向上8cm的區(qū)域，共計3cmX8cm的臀背部區(qū)域作為手術(shù)區(qū)。術(shù)區(qū)體毛要盡量剪除、剔凈，同時避免造成皮膚受 傷異常。在備好的皮膚區(qū)域用紫藥水進(jìn)行切口標(biāo)記。切口設(shè)計在其臀背部，分別標(biāo)出1.5cmX2.0cm大小的矩形創(chuàng)面，然后全背部用酒精反復(fù)消毒3次后，用手術(shù)刀片去除全真皮，但不損傷肌肉表面的深筋膜，去除組織量使初始創(chuàng)腔容積均達(dá)到1ml，以保證每個傷口的初次用藥量達(dá)到一致。后用止血海綿填塞創(chuàng)腔并充分壓迫止血，后為成模動物。[0023]治療給藥:制作與皮膚創(chuàng)面大小相一致的消毒棉球，每個棉球能飽吸Iml的治療用液體，即生理鹽水(空白對照組)、溶液A(A組)，制成治療棉球分別填充于創(chuàng)腔之中，注意操作時切勿讓治療液被擠壓溢出，影響藥量。
[0024]皮膚病理和創(chuàng)面組織學(xué)觀察:在手術(shù)后21天犧牲20只動物，取創(chuàng)面周圍皮膚組織用于組織病理研究，包括組織包埋，切片制作，HE染色和病理觀察拍照和半定量評價。評價指標(biāo)包括:
[0025](1)炎性反應(yīng):白細(xì)胞浸潤。
[0026](2)肉芽組織
[0027](3)膠原纖維束數(shù)量和排列(半定量)
[0028](4)表皮細(xì)胞分化程度及分層情況
[0029]根據(jù)病變輕重程度，依次半定量為輕度“ + ”，中度“++”，重度“+++”，或無病變樣。
[0030]2、動物皮膚創(chuàng)面組織學(xué)觀察
[0031]空白對照組:本組中3例(其中一例組織切片如圖1)皮膚均可見局部表皮上覆蓋痂皮，出血(+)，表皮復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞中度變性、壞死、糜爛(++)。真皮層見少量炎細(xì)胞浸潤(+)，真皮纖維結(jié)締組織增生(++)，皮膚附件明顯減少(++)。4例皮膚均可見表皮復(fù)層鱗狀上皮，真皮層見少量炎細(xì)胞浸潤(+)，真皮纖維結(jié)締組織增生(++)，皮膚附件明顯減少(++)。。
[0032]實驗組:本組皮膚均無可見局部表皮上覆蓋痂皮(其中一例組織切片圖如圖2)。僅I例表皮鱗狀上皮細(xì)胞中度變性(+)，真皮層見少量炎細(xì)胞浸潤(+)，毛細(xì)血管增生(+)，真皮纖維結(jié)締組織增生(++)，皮膚附件明顯減少(++) ;1例皮膚均可見表皮復(fù)層鱗狀上皮組織結(jié)構(gòu)，真皮層見少量炎細(xì)胞浸潤(+)，真皮纖維結(jié)締組織增生(+)，皮膚附件明顯減少(+)。
[0033]3、對愈合速度影響
[0034]取健康成年sD大鼠，190~220g，SPF級，雌雄各半，每只動物臀背部用手術(shù)刀切出1.5cm x2.0cm大小的矩形創(chuàng)面,去除全真皮,但不損傷肌肉表面的深筋膜,制成一側(cè)重度皮膚損傷模型。將皮膚損傷動物隨機(jī)分成兩組:“a”組為空白對照組，將飽蘸生理鹽水的棉球填充于創(chuàng)腔之中。“b”組為治療組，將飽蘸1.0mL的實施例1幫助傷口愈合的制劑填充于創(chuàng)腔之中。2天后，每兩天用透明有機(jī)玻璃置創(chuàng)面上方，描畫其形狀，觀察創(chuàng)面情況，并將其圖形復(fù)制到透明玻璃紙上，在圖像分析儀上精確測量出創(chuàng)面面積，計算創(chuàng)面愈合速度。實驗中主要觀察指標(biāo)為大體觀察各組大鼠創(chuàng)面愈合情況及平均愈合時間和速度。實驗持續(xù)到a組實驗動物的傷口完全愈合為止。結(jié)果如表1。
[0035]表1各組動物皮膚創(chuàng)傷愈合時間和速度
[0036]
【權(quán)利要求】
1.幫助傷口愈合的制劑，其特征在于，包括堿性成纖維細(xì)胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、粒細(xì)胞集落刺激生長因子、肝細(xì)胞生長因子、血小板衍生因子、白介素2和白介素10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的幫助傷口愈合的制劑，其特征在于，所述堿性成纖維細(xì)胞生長因子濃度為50ng / ml、血管內(nèi)皮生長因子濃度為20pg / ml、轉(zhuǎn)化生長因子350ng / ml、粒細(xì)胞集落刺激生長因子濃度為 65ng / ml、肝細(xì)胞生長因子濃度為0.65ng / ml、血小板衍生因子濃度為15pg / ml、白介素2濃度為40pg / ml和白介素10濃度為45pg / ml。
【文檔編號】A61P17/02GK103751768SQ201310629784
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】焦陽 申請人:焦陽, 王澤宇, 張智海