一種抗豬流感病毒的中藥復(fù)方的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種有效抗豬流感病毒的中藥復(fù)方，包括中藥復(fù)方的中藥種類和含量。中藥復(fù)方由下列藥物組成：麻黃20～30重量份，杏仁10～15重量份，炙甘草10-15重量份，石膏15～25重量份，連翹10～15重量份。體內(nèi)和體外試驗(yàn)證明，本發(fā)明的中藥復(fù)方制劑能有效抗豬流感病毒。
【專利說明】一種抗豬流感病毒的中藥復(fù)方
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于獸用中藥領(lǐng)域，涉及一種體內(nèi)和體外抑制豬流感病毒的中藥復(fù)方。
【背景技術(shù)】
[0002]豬流感(swine influenza，SI)又稱豬流行性感冒，是由正黏病毒科A型流感病毒屬的豬流感病毒(swine influenza virus, SIV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性呼吸道傳染病，臨床以突發(fā)、高熱、咳嗽、呼吸困難、反復(fù)發(fā)作、發(fā)病率高、死亡率低為特征。此病在世界各地都有發(fā)生，危害嚴(yán)重，經(jīng)濟(jì)損失巨大，并對(duì)人類的健康構(gòu)成威脅。其突出的流行特點(diǎn)是常以亞臨床形式存在并常引起其他呼吸道細(xì)菌和病毒的繼發(fā)或混合感染，如豬繁殖與呼吸綜合癥、豬圓環(huán)病毒病和豬傳染性胸膜肺炎等，使疫情變得復(fù)雜，死亡率增高。[0003]在臨床實(shí)踐豬流感的防治上，由于抗生素具有控制并發(fā)癥的特點(diǎn)而被廣泛使用，同時(shí)配合大量的解熱鎮(zhèn)痛、糖皮質(zhì)激素類等藥物。然而在抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)的同時(shí)也加深了免疫抑制，導(dǎo)致病情更加的惡化。中草藥作為天然產(chǎn)物，具有藥源豐富，殘毒較低或無殘毒，副作用小，不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)；同時(shí)能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，抑制病毒復(fù)制，改善臨床癥狀，在治療病毒感染性疾病上應(yīng)用廣泛。因此，應(yīng)用中草藥防治豬流感，前景極為廣闊。
[0004]縱觀現(xiàn)在中藥復(fù)方抗病毒的實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)人甲型流感病毒和禽流感病毒的研究多，而對(duì)豬流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究較少。并且大多分別采用體內(nèi)試驗(yàn)或體外試驗(yàn)的方法獨(dú)立研究，不能全面評(píng)價(jià)中藥復(fù)方抗豬流感病毒的效果。
[0005]為解決上述問題，迫切需要篩選出有效抗豬流感病毒的中藥復(fù)方。并且同時(shí)采用體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)，從作用機(jī)理和臨床實(shí)際上綜合研究中藥復(fù)方抗豬流感病毒的效果，為臨床防治提供理論和實(shí)際依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種有效防治豬流感的中藥復(fù)方。
[0007]本發(fā)明所提供的用于抗豬流感病毒的中藥復(fù)方，其組成為:麻黃20-30重量份，杏仁10-15重量份，炙甘草10-15重量份，石膏15~25重量份，連翹10-?5重量份。
[0008]作為更具體實(shí)施的中藥復(fù)方，可以由如下重量份的中藥構(gòu)成:包含如下藥物:麻黃30重量份，杏仁15重量份，炙甘草15重量份，石膏25重量份，連翹15重量份。
[0009]所述的復(fù)方是指所含的中藥種類及其中藥比重。
[0010]本申請(qǐng)書所述的重量份是指復(fù)方中各種藥物占整個(gè)復(fù)方的重量比例。
[0011]作為本發(fā)明的另一目的，還包括一種用于抗豬流感病毒的中藥復(fù)方的提取方法，采用水煎煮方法進(jìn)行粗提，具體步驟是:
(1)按麻黃30重量份、杏仁15重量份、炙甘草15重量份、石膏25重量份和連翹15重量份比例，稱取各中藥，組成100g中藥復(fù)方；
(2)將100g中藥復(fù)方粉碎到20目，浸泡lh，水煎2次，每次煮沸30min，合并2次煎
液；(3)將煎液在常壓真空抽濾及濃縮，定容至200mL水煎液，每毫升相當(dāng)于0.5g生藥(SP500mg/mL)；
(4)將水煎液進(jìn)行高壓滅菌，保存至溫度為4°C冰箱內(nèi)備用。
[0012]本發(fā)明采用的麻黃:性溫，味辛、微苦，具有發(fā)汗解表、平喘、利水等功效；常用于治療風(fēng)寒表癥、麻疹初期透發(fā)不暢、咳嗽氣喘等病癥，是中醫(yī)臨床常用的藥物之一；經(jīng)發(fā)明的研究表明:麻黃對(duì)H1N1和H3N2亞型豬流感病毒具有阻斷、抑制和直接殺滅作用。
[0013]本發(fā)明采用的杏仁:微苦、性溫、微毒，具有祛痰止咳、平喘、潤(rùn)腸和下氣開痹等功效。
[0014]本發(fā)明采用的炙甘草:性平，味甘，歸十二經(jīng)；為雙子葉植物豆科甘草、脹果甘草或光果甘草的根及根莖，主要功效為補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛；
本發(fā)明采用的石膏:性寒，味甘辛，入肺、胃經(jīng)。具有清熱瀉水、除煩止渴等功效，是最常見的礦物性中藥之一。
[0015]本發(fā)明采用的連翹:性寒，味辛苦，入肺、心、膽經(jīng)。具有清熱解毒，散結(jié)消腫，疏散風(fēng)熱的功效，是臨床常用傳統(tǒng)清熱解毒中藥。連翹對(duì)H1N1亞型豬流感具有阻斷和直接殺滅作用，對(duì)H3N2亞型豬流感病毒具有阻斷作用。
[0016]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明提供的中藥復(fù)方可以有效抗豬流感病毒，并在臨床上可有效防治豬流感。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0018]一種用于抗豬流感病毒的中藥復(fù)方，包含如下藥物:麻黃20-30重量份，杏仁10-15重量份，炙甘草10-15重量份，石膏15~25重量份，連翹10-?5重量份。
[0019]所述的復(fù)方是指所含的中藥種類及其中藥比重。
[0020]所述的重量份是指復(fù)方中各種藥物占整個(gè)復(fù)方的重量比例。
[0021]下述實(shí)施例中所用實(shí)驗(yàn)材料如下:
(一)試驗(yàn)動(dòng)物
9^11日齡SPF雞胚購(gòu)自廣東大華農(nóng)禽蛋有限公司；SPF級(jí)15g±2g BALB/c小鼠購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0022](二)溶液或試劑配制
1.PBS 的配制:稱取 NaCl 8.0g、Na2HP04 3.63g、KCl 0.2g KH2P04 0.24g 溶于適量超純水，調(diào)pH值至7.4，定容至1000mL ； 100ml/瓶分裝，15磅高壓滅菌30min，4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0023]2.1%雞紅細(xì)胞懸液的配制:先用滅菌注射器吸取3.8%枸櫞酸鈉溶液(其用量為所需血量的1/5)，從雞翅靜脈抽血至所需要血量，置滅菌離心管內(nèi)，加滅菌PBS為抗凝血的2倍，以2000r/min離心lOmin,棄上清液,再加生理鹽水懸浮血球，同上法離心沉淀，如此將紅細(xì)胞洗滌三次，最后根據(jù)所需用量，用滅菌PBS配成1%懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0024]3.中藥的提取:采用水煎煮方法進(jìn)行粗提，具體步驟是:
(1)按麻黃30重量份、杏仁15重量份、炙甘草15重量份、石膏25重量份和連翹15重量份比例，稱取各中藥，組成100g中藥復(fù)方；(2)將100g中藥復(fù)方粉碎到20目，浸泡lh，水煎2次，每次煮沸30min，合并2次煎液；
(3)將煎液在常壓真空抽濾及濃縮，定容至200mL水煎液，每毫升相當(dāng)于0.5g生藥(SP500mg/mL)；
(4)將水煎液進(jìn)行高壓滅菌，保存至溫度為4°C冰箱內(nèi)備用。
[0025]實(shí)施例1中藥復(fù)方制劑的體外抗豬流感病毒效果1.SIV對(duì)雞胚半數(shù)感染量(EID50 )的測(cè)定
將病毒液依次作10倍倍比稀釋，接種于10日齡雞胚尿囊腔內(nèi)，每個(gè)稀釋度接種0.2ml/枚，作4個(gè)重復(fù)，同時(shí)設(shè)正常雞胚對(duì)照。置37°C恒溫箱內(nèi)孵化72h，棄去24h內(nèi)死亡胚，收獲24h后死亡胚及72h活胚的尿囊液，進(jìn)行HA效價(jià)的測(cè)定。按Reed_Muench兩氏法計(jì)算EID50。
[0026]2.中藥復(fù)方制劑對(duì)雞胚的最大安全濃度的測(cè)定
將中藥提取液依次作2倍倍比稀釋，稀釋成原濃度、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64等7個(gè)濃度，然后接種于10日齡雞胚尿囊腔內(nèi)，每個(gè)稀釋度接種0.2ml/枚，作4個(gè)重復(fù)，同時(shí)設(shè)生理鹽水對(duì)照。置37°C恒溫箱孵育72 h，每天觀察存活情況，棄去24h內(nèi)死亡胚。雞胚全部存活的最高藥物濃度為正式試驗(yàn)的起始濃度，即中藥對(duì)雞胚的最大安全濃度。
[0027]3.中藥復(fù)方制劑在雞胚內(nèi)抗豬流感病毒的試驗(yàn)將雞胚隨機(jī)分成三組，采用三種加藥方式:
方式一、先加中藥再加病毒(中藥對(duì)SIV的阻斷作用):先將各中藥提取液接種于10日齡雞胚，0.2ml/枚，作4個(gè)重復(fù)，置37°C恒溫箱孵育2h，然后接種100EID50病毒液0.2ml/枚，37 °C恒溫培養(yǎng)72h，測(cè)定雞胚尿囊液的血凝(HA)效價(jià)。
[0028]方式二、先加病毒再加中藥(中藥對(duì)SIV的抑制作用):先將100EID50病毒液接種于10日齡雞胚，0.2ml/枚，作4個(gè)重復(fù)，置37°C恒溫箱孵育2h，然后接種各中藥提取液
0.2ml/枚，37°C恒溫培養(yǎng)72h，測(cè)定雞胚尿囊液的血凝(HA)效價(jià)。
[0029]方式三、中藥病毒混合后一起加(中藥對(duì)SIV的直接殺滅作用):先將各中藥提取液與等量100EID50病毒液混合后，置37°C 2h后，接種于10日齡雞胚，0.2ml/枚，作4個(gè)重復(fù)。37°C恒溫培養(yǎng)72h，測(cè)定雞胚尿囊液的血凝(HA)效價(jià)。
[0030]同時(shí)設(shè)立病毒對(duì)照和陰性對(duì)照。
[0031]4.數(shù)據(jù)處理
數(shù)據(jù)以X(—)土 S.E表示，用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。
[0032]如表一所示:
表1中藥復(fù)方制劑在雞胚內(nèi)抗豬流感病毒的效果
【權(quán)利要求】
1.一種用于抗豬流感病毒的中藥復(fù)方，包含如下藥物:麻黃20-30重量份，杏仁10-15重量份，炙甘草10-15重量份，石膏15~25重量份，連翹10-15重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方，其特征在于，包含如下藥物:麻黃30重量份，杏仁15重量份，炙甘草15重量份，石膏25重量份，連翹15重量份。
3.如權(quán)利要求廣2所述的一種用于抗豬流感病毒的中藥復(fù)方，其特征在于，所述的復(fù)方是指所含的中藥種類及其中藥比重。
4.如權(quán)利要求2所述一種用于抗豬流感病毒的中藥復(fù)方，所述的重量份是指復(fù)方中各種藥物占整個(gè)復(fù)方的重量比例。
5.一種用于抗豬流感病毒的中藥復(fù)方的提取方法，其特征在于，采用水煎煮方法進(jìn)行粗提，具體步驟是: (1)按麻黃30重量份、杏仁15重量份、炙甘草15重量份、石膏25重量份和連翹15重量份比例，稱取各中藥，組成100g中藥復(fù)方；(2)將100g中藥復(fù)方粉碎到20目，浸泡lh，水煎2次，每次煮沸30min，合并2次煎液；(3)將煎液在常壓真空抽濾及濃縮，定容至200mL水煎液，每毫升相當(dāng)于0.5g生藥(SP500mg/mL)；(4)將水煎液進(jìn)行高壓滅菌，保存至溫度為4°C冰箱內(nèi)備用。
【文檔編號(hào)】A61K33/06GK103638147SQ201310649172
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月6日
【發(fā)明者】王丙云, 陳勝鋒, 陳志勝, 計(jì)慧琴, 徐振娜, 冼瓊珍 申請(qǐng)人:佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院