一種中成藥的應(yīng)用及制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種中成藥在制備抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，中成藥的制備方法為：取萱草根100g、板藍(lán)根150g、茵陳250g、丹參150g、大棗100g，以上五味，板藍(lán)根粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩；茵陳用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；其余萱草根等三味加水煎煮兩次，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至稠膏狀；與上述粉末混勻，制成顆粒，加入茵陳油，混勻，壓片，或包糖衣，即得1000片。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種中成藥的應(yīng)用及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種中成藥的應(yīng)用及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中成藥健肝片記載于衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)，制備方法為:取萱草根100g、板藍(lán)根150g、茵陳250g、丹參150g、大棗100g，以上五味，板藍(lán)根粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩；茵陳用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；其余萱草根等三味加水煎煮兩次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至稠膏狀；與上述粉末混勻，制成顆粒，加入茵陳油，混勻，壓片，或包糖衣，即得1000片，現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有其在抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種中成藥的應(yīng)用及制備方法。
[0004]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
[0005]一種中成藥在制備抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，中成藥的制備方法為:取萱草根100g、板藍(lán)根150g、茵陳250g、丹參150g、大棗100g，以上五味，板藍(lán)根粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩；茵陳用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；其余萱草根等三味加水煎煮兩次，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至稠膏 狀；與上述粉末混勻，制成顆粒，加入茵陳油，混勻，壓片，或包糖衣，即得1000片。
[0006]上述中成藥在制備抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8-12倍量，煎煮l_2h，第二次加水為藥材重量的6-10倍量，煎煮1-2h。
[0007]中成藥的名稱(chēng)為健肝片。
[0008]有益效果:中成藥能抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖，能用于制備抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0009]以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0010]實(shí)施例1
[0011]取萱草根100g、板藍(lán)根150g、茵陳250g、丹參150g、大率100g,以上五味,板藍(lán)根粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩；茵陳用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；其余萱草根等三味加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8倍量，煎煮lh，第二次加水為藥材重量的6倍量，煎煮lh，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至稠膏狀；與上述粉末混勻，制成顆粒，加入茵陳油，混勻，壓片，或包糖衣，即得1000片。[0012]實(shí)施例2
[0013]取萱草根100g、板藍(lán)根150g、茵陳250g、丹參150g、大棗100g，以上五味，板藍(lán)根粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩；茵陳用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；其余萱草根等三味加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的10倍量，煎煮1.5h，第二次加水為藥材重量的8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至稠膏狀；與上述粉末混勻，制成顆粒，加入茵陳油，混勻，壓片，或包糖衣，即得1000片。
[0014]實(shí)施例3
[0015]取萱草根100g、板藍(lán)根150g、茵陳250g、丹參150g、大棗100g，以上五味，板藍(lán)根粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩；茵陳用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；其余萱草根等三味加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的12倍量，煎煮2h，第二次加水為藥材重量的10倍量，煎煮2h，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至稠膏狀；與上述粉末混勻，制成顆粒，加入茵陳油，混勻，壓片，或包糖衣，即得1000片。
[0016]實(shí)施例4:健肝片抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0017]I實(shí)驗(yàn)材料
[0018]1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0019]LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0020]1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0021]研究藥物:本發(fā)明健肝片:按實(shí)施例3方法制備。
[0022]藥液儲(chǔ)液:稱(chēng)取IOOmg健肝片，溶于5ml無(wú)水乙醇中，0.2 μ m濾器過(guò)濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0.2 μ` m濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0023]1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0024]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào):2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號(hào):2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號(hào):2010382);無(wú)水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào):080310182);MTT(Biosharp批號(hào):0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；
[0025]1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0026]萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào):DM1L);可見(jiàn)-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司型號(hào):SPECTRA MAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào):3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào):SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào):S/N020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司型號(hào):P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào):DHG9123A);冰箱(西門(mén)子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào):2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào):ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào):SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0027]2實(shí)驗(yàn)方法
[0028]I) LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(10cm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。
[0029]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0030]3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%_70%，加入健肝片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0031]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0032]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
[0033]6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0034]7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示:
[0035]細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0036]3統(tǒng)計(jì)處理
[0037]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0038]4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
·[0039]MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)B16細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0040]表1健肝片對(duì)LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖抑制影響研究(I土SD)
【權(quán)利要求】
1.一種中成藥在抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于這種中成藥的制備方法為:取萱草根100g、板藍(lán)根150g、茵陳250g、丹參150g、大棗100g，以上五味，板藍(lán)根粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩；茵陳用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；其余萱草根等三味加水煎煮兩次，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至稠膏狀；與上述粉末混勻，制成顆粒，加入茵陳油，混勻，壓片，或包糖衣，即得1000片。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種中成藥在抑制LEWIS小鼠肺癌細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8-12倍量，煎煮1-2h，第二次加水為藥材重量的6-10倍量，煎煮l_2h。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103705695SQ201310699412
【公開(kāi)日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】李強(qiáng) 申請(qǐng)人:青島琴誠(chéng)醫(yī)藥技術(shù)有限公司