一種清肺抑火片的應(yīng)用及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供清肺抑火片在制備抑制A2780人卵巢癌細胞增殖藥物中的應(yīng)用，清肺抑火片的制備方法為：取黃芩245g、梔子140g、黃柏70g、大黃210g、苦參105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黃粉碎成細粉；桅子、知母加水煎煮兩次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成膏；前胡、苦參、黃柏、黃芩用60％乙醇加熱回流提取6小時，天花粉用25％乙醇加熱回流提取6小時，合并醇液，回收乙醇，濃縮成膏，與上述濃縮膏合并，加入桔梗等粉末及輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1088片，即得。
【專利說明】一種清肺抑火片的應(yīng)用及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種清肺抑火片的應(yīng)用及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]清肺抑火片記載于衛(wèi)生部標準，制備方法為:取黃芩245g、桅子140g、黃柏70g、大黃210g、苦參105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黃粉碎成細粉；桅子、知母加水煎煮兩次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成膏；前胡、苦參、黃柏、黃芩用60%乙醇加熱回流提取6小時，天花粉用25%乙醇加熱回流提取6小時，合并醇液，回收乙醇，濃縮成膏，與上述濃縮膏合并，加入桔梗等粉末及輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1088片，即得，現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有其在制備抑制A2780人卵巢癌細胞增殖藥物中的應(yīng)用報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種清肺抑火片的應(yīng)用及制備方法。
[0004]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的:
[0005]清肺抑火片在制備抑制A2780人卵巢癌細胞增殖藥物中的應(yīng)用，清肺抑火片的制備方法為:取黃芩245g、桅子140g、黃柏70g、大黃210g、苦參105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黃粉碎成細粉；桅子、知母加水煎煮兩次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成膏；前胡 、苦參、黃柏、黃芩用60%乙醇加熱回流提取6小時，天花粉用25%乙醇加熱回流提取6小時，合并醇液，回收乙醇，濃縮成膏，與上述濃縮膏合并，加入桔梗等粉末及輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1088片，即得。
[0006]上述一種清肺抑火片在制備抑制A2780人卵巢癌細胞增殖藥物中的應(yīng)用，桅子、知母加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8-12倍量，煎煮l_2h，第二次加水為藥材重量的6-10倍量，煎煮1-2h。
[0007]有益效果:清肺抑火片能抑制A2780人卵巢癌細胞增殖，可用于制備抑制B16小鼠黑色素瘤細胞增殖藥物。
【具體實施方式】
[0008]以下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0009]實施例1
[0010]取黃芩245g、桅子140g、黃柏70g、大黃210g、苦參105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黃粉碎成細粉；桅子、知母加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8倍量，煎煮lh，第二次加水為藥材重量的6倍量，煎煮lh，合并煎液，濾過，濾液濃縮成膏；前胡、苦參、黃柏、黃芩用60%乙醇加熱回流提取6小時，天花粉用25%乙醇加熱回流提取6小時，合并醇液，回收乙醇，濃縮成膏，與上述濃縮膏合并，加入桔梗等粉末及輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1088片，即得。
[0011]實施例2
[0012]取黃芩245g、桅子140g、黃柏70g、大黃210g、苦參105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黃粉碎成細粉；桅子、知母加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的10倍量，煎煮1.5h，第二次加水為藥材重量的8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濾過，濾液濃縮成膏；前胡、苦參、黃柏、黃芩用60%乙醇加熱回流提取6小時，天花粉用25%乙醇加熱回流提取6小時，合并醇液，回收乙醇，濃縮成膏，與上述濃縮膏合并，加入桔梗等粉末及輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1088片，即得。
[0013]實施例3
[0014]取黃芩245g、桅子140g、黃柏70g、大黃210g、苦參105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黃粉碎成細粉；桅子、知母加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的12倍量，煎煮2h，第二次加水為藥材重量的10倍量，煎煮2h，合并煎液，濾過，濾液濃縮成膏；前胡、苦參、黃柏、黃芩用60%乙醇加熱回流提取6小時，天花粉用25%乙醇加熱回流提取6小時，合并醇液，回收乙醇,濃縮成膏，與上述濃縮膏合并,加入桔梗等粉末及輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1088片，即得。
[0015]實施例4:清肺抑火片抑制A2780人卵巢癌細胞增殖的實驗研究資料
[0016]I實驗材料
[0017]1.1實驗用細胞株
[0018]A2780人卵巢癌細胞，南京醫(yī)科大學實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0019]1.2實驗藥物
[0020]研究藥物:本發(fā)明清肺抑火片:按實施例3方法制備。
[0021]藥液儲液:稱取IOOmg清肺抑火片，溶于5ml無水乙醇中，0.2μπι濾器過濾，500μ Idoff管分裝，-20°C存儲，同時0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0022]1.3實驗試劑
[0023]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號:2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號:080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配)；
[0024]1.4實驗器材
[0025]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號:3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIPORE型號:SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0026]2實驗方法
[0027]I) A2780人卵巢癌細胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm培養(yǎng)皿)，當細胞生長至對數(shù)期時，收集細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細胞懸液濃度3X 104個/ml。
[0028]2)將細胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0029]3)根據(jù)細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入清肺抑火片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0030]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0031]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0032]6)同時設(shè)置本底(不加細胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復孔。
[0033]7)結(jié)果以藥物對細胞的抑制率表示:
[0034]細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。
`[0035]3統(tǒng)計處理
[0036]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0037]4實驗結(jié)果
[0038]MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對B16細胞增殖抑制有差異(p〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0.01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0039]表1清肺抑火片對Α2780人卵巢癌細胞增殖抑制影響研究(X土 SD)
【權(quán)利要求】
1.清肺抑火片在抑制A2780人卵巢癌細胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于清肺抑火片的制備方法為:取黃芩245g、桅子140g、黃柏70g、大黃210g、苦參105g、天花粉140g、知母105g、桔梗140g、前胡70g，以上九味，桔梗、大黃粉碎成細粉；桅子、知母加水煎煮兩次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成膏；前胡、苦參、黃柏、黃芩用60%乙醇加熱回流提取6小時，天花粉用25%乙醇加熱回流提取6小時，合并醇液，回收乙醇，濃縮成膏，與上述濃縮膏合并，加入桔梗等粉末及輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1088片，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種清肺抑火片在抑制A2780人卵巢癌細胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于桅子、知母加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8-12倍量，煎煮1-2h，第二次加水為藥材重量的6-10倍量，煎煮l_2h。
【文檔編號】A61P35/00GK103690756SQ201310706662
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】李強 申請人:青島琴誠醫(yī)藥技術(shù)有限公司