一種具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒、制備方法及其用途
【專利摘要】本發(fā)明利用葉酸與表面表達(dá)葉酸受體的巨噬細(xì)胞的高親和力來(lái)實(shí)現(xiàn)靶向性顯影，提供了一種在磁共振成像中能特異性使類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎顯像的造影劑。該磁共振造影劑采用化學(xué)連接的方法（二環(huán)己基碳二亞胺/4-二甲氨基吡啶法，DCC/DMAP法），將聚乙二醇（PEG）-b-聚丙烯酸（PAA）修飾的超順磁性顆粒與葉酸分子偶聯(lián)，獲得了粒徑在20nm左右、特異性高且對(duì)比效果強(qiáng)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位成像的磁共振成像造影劑。
【專利說(shuō)明】一種具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒、制備方法及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒及其制備方法，還涉及含該超順磁性顆粒的特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]核磁共振成像技術(shù)(MRI)是目前應(yīng)用最為廣泛的影像學(xué)檢查方法之一，在臨床MRI檢測(cè)中大約30%以上的診斷需用磁共振成像造影劑以提高成像對(duì)比度，使原來(lái)缺乏對(duì)比差異的組織結(jié)構(gòu)顯示得更加清晰，從而更好的顯示體內(nèi)組織器官的結(jié)構(gòu)和病變的性質(zhì)及功能狀態(tài)，能夠大大提高診斷的準(zhǔn)確性和早期性。
[0003]MRI造影劑按增強(qiáng)類型可分為陽(yáng)性和陰性造影劑二大類。陽(yáng)性造影劑使組織的Tl弛豫時(shí)間縮短，在圖像上顯示信號(hào)增強(qiáng)，目前常用的順磁性造影劑主要是釓系元素的螯合物，如Gd-DTAP (磁顯葡胺)、Gd-DTAP-BMA等。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎成像中，Gd系造影劑存在著一些顯而易見(jiàn)的缺點(diǎn):首先，小分子的Gd系造影劑特異性差。在靜脈注射之后，Gd-DTPA會(huì)快速?gòu)浬?。除了病變關(guān)節(jié)，在正常關(guān)節(jié)中也會(huì)富集一定量的Gd系分子，因而降低了 Gd分子造影的特異性，同時(shí)也減弱了病變部位的對(duì)比度；其次，小分子造影劑會(huì)很快被腎臟所清除，有研究表明，Gd造影劑的信號(hào)強(qiáng)度最大值出現(xiàn)在造影劑注射后的3-5min內(nèi)，而在體內(nèi)的半衰期在30min左右，對(duì)MRI成像和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)都造成了不便；最后，由于Gd元素具有一定的生物毒性且小分子的磁顯葡胺類物質(zhì)成像所需濃度較高，因而容易導(dǎo)致體內(nèi)滲透壓過(guò)高，甚至可能導(dǎo)致腎臟組織的纖維化。
[0004]超順磁性造影劑較Gd系造影劑敏感性高，具有生物相容性。更重要的是，其作為納米尺寸材料所具有的特殊性質(zhì)使得人們可以從細(xì)胞和分子水平上對(duì)RA (類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)進(jìn)行更早期、快速、準(zhǔn)確的診斷。`通過(guò)揭示RA的細(xì)胞和分子學(xué)機(jī)制，在被巨噬細(xì)胞所吞噬后，SPIO (超順磁性氧化鐵粒子)可以更好的對(duì)早期RA過(guò)程中所出現(xiàn)的滑膜炎以及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)及時(shí)檢測(cè)。目前應(yīng)用于RA的超順磁性造影劑幾乎都是傳統(tǒng)的商品化產(chǎn)品。然而，傳統(tǒng)的商品化產(chǎn)品存在的一個(gè)嚴(yán)重缺陷是對(duì)RA部位的靶向能力不佳，由于缺少特有的靶向分子，商品化產(chǎn)品在體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)所識(shí)別，從而沉積在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞豐富的組織和器官中，因而使得肝臟、淋巴結(jié)等的信號(hào)增強(qiáng)。而往往最后進(jìn)入類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的造影劑組分很少。因此，利用病變細(xì)胞對(duì)靶向配體的特異性，開(kāi)發(fā)RA特異性的磁共振造影劑，提高成像效率和信噪比顯得十分必要。
[0005]利用葉酸受體在腫瘤和關(guān)節(jié)炎細(xì)胞的過(guò)度表達(dá)，使藥物與葉酸結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)靶向診斷。而且，已有技術(shù)(范彩霞，新型腫瘤靶向的葉酸-羧甲基殼聚糖-超順磁氧化鐵納米粒的合成及評(píng)價(jià)，南方醫(yī)科大學(xué)，2010年)公開(kāi)了將葉酸-羧甲基殼聚糖-超順磁顆粒用于腫瘤造影。但是已有的造影劑大多適用于淋巴或者肝臟靶向造影，其對(duì)關(guān)節(jié)靶向造影的能力不足，往往需要加大劑量使造影劑的量達(dá)到20mg/kg體重才可實(shí)現(xiàn)造影。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)目前商品化造影劑對(duì)于關(guān)節(jié)炎部位靶向能力不足，造影能力受限制的現(xiàn)狀，本發(fā)明提供了一種能夠靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的MRI造影劑。
[0007]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案:
[0008]一種具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒，所述超順磁性顆粒包括位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在納米粒子表面的PEG-b-PAA，PEG-b-PAA表面偶聯(lián)有葉酸分子。
[0009]即，所述超順磁性顆粒的內(nèi)核為四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子，納米粒子表面結(jié)合PEG-b-PAA，PEG-b-PAA表面偶聯(lián)有葉酸分子。所述納米粒子表面結(jié)合PEG-b-PAA實(shí)現(xiàn)了 PEG-b-PAA包覆在納米粒子表面。
[0010]本發(fā)明通過(guò)由表面修飾有PEG-b-PAA的納米粒子與特異性靶向巨噬細(xì)胞的葉酸分子偶聯(lián)，構(gòu)成FA-PEG-b-PAA@SPIO體系，得到上述經(jīng)葉酸配體修飾的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒。
[0011]所述PEG-b-PAA即聚乙二醇-聚丙烯酸嵌段共聚物，F(xiàn)A為葉酸，SPIO為超順磁性納米氧化鐵顆粒。
[0012]以下作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選技術(shù)方案，但不作為本發(fā)明提供的技術(shù)方案的限制，通過(guò)以下技術(shù)方案，可以更好的達(dá)到和實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的和有益效果。
[0013]優(yōu)選地，在本發(fā)明提供的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述PEG-b-PAA表面通過(guò)DCC/DMAP方法與葉酸分子進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)。
[0014]示例性的一種具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒，所述超順磁性顆粒的內(nèi)核為四氧化三鐵納米粒子，該粒子表面結(jié)合有PEG-b-PAA，PEG-b-PAA表面通過(guò)DCC/DMAP方法與葉酸進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)構(gòu)成FA-PEG-b-PAA@SPIO體系。
[0015]所述四氧化三鐵和三氧化二鐵納米粒子的粒徑均獨(dú)立地為I~lOOnm，例如I~20nm、15 ~30nm、45 ~60nm、10 ~50nm、20 ~60nm、30 ~65nm、30 ~80nm、50 ~lOOnm、45 ~95nm 或 40 ~90nm。
[0016]優(yōu)選地，所述PEG的數(shù)均分子量為3000~9000的任意整數(shù)，PAA的數(shù)均分子量為200~10000的任意整數(shù)。長(zhǎng)鏈段的PEG可以提高體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，避免被體內(nèi)清除，但是過(guò)長(zhǎng)的修飾會(huì)導(dǎo)致超順磁性氧化鐵的弛豫性能減弱，選用本發(fā)明的分子量的PEG能保證長(zhǎng)循環(huán)且保持較好磁性能。
[0017]本發(fā)明的目的之二在于提供一種如上所述的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒的制備方法，所述方法包括如下步驟:
[0018](I)將葉酸活化；
[0019](2)制備由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的懸浮液；
[0020](3)將步驟(2)得到的懸浮液和步驟(1)得到的活化后的葉酸混合，使PEG-b-PAA與葉酸發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，得到具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒。
[0021]優(yōu)選地，步 驟(1)葉酸活化方法為:將葉酸溶于無(wú)水DMSO中，然后加入等當(dāng)量的DCC,使葉酸濃度保持在 1 -1 Ommol/I,,例如 2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L>8mmol/L或9mmol/L,避光在保護(hù)性氣氛下發(fā)生活化反應(yīng)。
[0022]所述DMSO為二甲基亞砜，DCC為二環(huán)己基碳二亞胺。
[0023]優(yōu)選地，所述保護(hù)性氣氛為氮?dú)狻?br> [0024]優(yōu)選地，所述活化反應(yīng)的時(shí)間為6_18h，例如7h、8h、9h、10h、llh、12h、13h、14h、15h、16h 或 17h。
[0025]優(yōu)選地，步驟(2)所述懸浮液的濃度為l-10mg/ml，例如2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml 或 9mg/ml,即每 ml 懸浮液中含有 1-1Omg 的步驟(2)的超
順磁性顆粒。
[0026]優(yōu)選地，步驟(2)所述懸浮液的溶劑為DMSO。
[0027]優(yōu)選地，步驟(2)所述由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的制備方法為:
[0028]I)將乙酰丙酮鐵與PEG-b-PAA溶解于四甘醇中，其中乙酰丙酮鐵和PEG_b_PAA的質(zhì)量比為1:1~1:2，PEG數(shù)均分子量為3000-9000的任意整數(shù)，PAA數(shù)均分子量為200-10000的任意整數(shù)；
[0029]2)在惰性氣體保護(hù)下攪拌并同時(shí)加熱到160~270°C回流3h，隨后升溫至310~420°C，回流 3h ；
[0030]3)將步驟2)得到的溶液冷卻至室溫，加入2~10倍溶液體積的乙酸乙酯使溶液凝絮沉淀，然后用磁鐵將沉淀物聚集分離并重復(fù)3次，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒，即PEG-b-PAA@SP10粒子。
[0031]優(yōu)選地，步驟(3)采用DCC/DMAP方法使PEG_b_PAA與葉酸發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。
[0032]優(yōu)選地，所述DMAP的加入量為0.1倍DCC當(dāng)量。
[0033]所述DMAP即4- 二甲氨基吡啶。
[0034]優(yōu)選地，步驟(3)活化后的葉酸和懸浮液中超順磁性顆粒的質(zhì)量比為1:1。
[0035]優(yōu)選地，步驟(3)所述反應(yīng)的溫度為室溫，即25°C。
[0036]優(yōu)選地，步驟(3)所述反應(yīng)的時(shí)間為6_18h。
[0037]DCC/DMAP方法即二環(huán)己基碳二亞胺/4- 二甲氨基吡啶方法。
[0038]示例性的一種如上所述的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒的制備方法，所述方法包括如下步驟:
[0039]0-)葉酸活化:取葉酸溶解于無(wú)水DMSO中，然后加入等當(dāng)量的DCC，使葉酸濃度保持在2mmol/L，避光在氮?dú)鈿夥障掳l(fā)生活化反應(yīng)；
[0040](2’)制備由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的懸浮液:取超順磁性顆粒，分散于無(wú)水DMSO中，保持懸浮液的濃度為10mg/mL ；
[0041](3’)將步驟(2’)制備的懸浮液加入步驟(1)得到的溶液中，懸浮液中的超順磁性顆粒和活化后的葉酸的質(zhì)量比為1:1，并加入0.1倍DCC當(dāng)量的DMAP，室溫條件下反應(yīng)6_18h，得到具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒。
[0042]其中(2’)所述由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的制備方法如下:[0043]I’)將乙酰丙酮鐵與PEG-b-PAA高分子溶解于四甘醇中，其中乙酰丙酮鐵和PEG-b-PAA的質(zhì)量比為1:1~1: 2，PEG數(shù)均分子量為3000-9000的任意整數(shù)，PAA數(shù)均分子量為200-10000的任意整數(shù)。
[0044]2’)在惰性氣體保護(hù)下攪拌并同時(shí)加熱到160~270°C回流3h，隨后升溫至310~420°C，回流 3h。
[0045]3’)將步驟2’)得到的溶液冷卻至室溫，加入2~10倍溶液體積的乙酸乙酯使溶液凝絮沉淀，然后用磁鐵將沉淀物聚集分離并重復(fù)3次，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得超順磁性顆粒。
[0046]本發(fā)明的目的之三在于提供一種特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑，所述造影劑包含如上所述的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒。
[0047]所述造影劑的粒徑為20nm。
[0048]本發(fā)明的目的之四在于提供一種如上所述的特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑的制備方法，所述方法包括如下步驟:
[0049]將如上所述的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒分散于緩沖溶液中形成穩(wěn)定的分散體系，特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑。
[0050]優(yōu)選地，所述緩沖溶液為磷酸緩沖溶液(PBS)。
[0051]示例性的一種如上所述的特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑的制備方法，所述方法包括如下步驟:`[0052]0-)葉酸活化:取葉酸溶解于無(wú)水DMSO中，然后加入等當(dāng)量的DCC，使葉酸濃度保持在1-lOmmol/L，避光在氮?dú)鈿夥障掳l(fā)生活化反應(yīng)；
[0053](2’)制備由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的懸浮液:取超順磁性顆粒，分散于無(wú)水DMSO中，保持懸浮液的濃度為10mg/mL ；
[0054](3’)將步驟(2’)制備的懸浮液加入步驟(1)得到的溶液中，懸浮液中的超順磁性顆粒和活化后的葉酸的質(zhì)量比為1:1，并加入0.1倍DCC當(dāng)量的DMAP，室溫條件下反應(yīng)6_18h，得到具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒；
[0055](4)將上述具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒分散于PBS中，得到特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑。
[0056]其中(2’)所述由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的制備方法如下:
[0057]I’)將乙酰丙酮鐵與PEG-b-PAA溶解于四甘醇中，其中乙酰丙酮鐵和PEG_b_PAA的質(zhì)量比為1:1~1:2，PEG數(shù)均分子量為3000-9000的任意整數(shù)，PAA數(shù)均分子量為200-10000的任意整數(shù)。
[0058]2’)在惰性氣體保護(hù)下攪拌并同時(shí)加熱到160~270°C回流3h，隨后升溫至310~420°C，回流 3h。
[0059]3’)將步驟2’)得到的溶液冷卻至室溫，加入2~10倍溶液體積的乙酸乙酯使溶液凝絮沉淀，然后用磁鐵將沉淀物聚集分離并重復(fù)3次，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得超順磁性顆粒。[0060]與已有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
[0061]本發(fā)明利用葉酸與表面表達(dá)葉酸受體的巨噬細(xì)胞的高親和力來(lái)實(shí)現(xiàn)靶向性顯影，提供了一種在磁共振成像中能特異性使類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎顯像的造影劑。葉酸受體作為巨噬細(xì)胞被激活的重要標(biāo)志而被廣泛應(yīng)用于炎癥部位的巨噬細(xì)胞靶向上。由于SPIO在RA部位的成像很大程度上依賴于巨噬細(xì)胞對(duì)于SPIO的吞噬作用，因而通過(guò)把SPIO與葉酸分子(folic acid, FA)連接在一起,將大大提高SPIO造影劑的祀向能力，從而提升類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位MRI的成像能力和信噪比。
[0062]所述造影劑特異性高且對(duì)比效果強(qiáng)，造影劑的用量很少，劑量為4mg/kg體重即可實(shí)現(xiàn)對(duì)關(guān)節(jié)炎部位的造影。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0063]圖1 是 FA-PEG-b-PAA@SPIO 與 PEG-b-PAAOSPIO 紫外圖譜。
[0064]圖2 是 FA-PEG-b-PAA@SPIO 與 PEG-b_PAA@SP10 傅里葉紅外圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0065]下面結(jié)合附圖并通過(guò)【具體實(shí)施方式】來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0066]實(shí)施例1
[0067](I)活化葉酸:取0.45g葉酸和0.21g DCC溶解于10.6mL無(wú)水DMSO中，避光通氮?dú)夥磻?yīng)6h ；
[0068](2)制備超順磁性顆粒懸浮液:取超順磁性顆粒90mg,分散于9mL無(wú)水DMSO中，保持終濃度為lmg/mL ；
[0069](3)將步驟⑵制備的懸浮液加入步驟⑴獲得到的溶液中，并加入12.9mg的DMAP,室溫條件下反應(yīng)6h ；
[0070](4)分離:反應(yīng)后5000rpm/min離心30min獲得產(chǎn)物并重分散于PBS中，即獲得所
需造影劑。
[0071]其中(2)所述超順磁性顆粒的制備方法如下:將作為1400mg的乙酰丙酮鐵(Fe (acca)3)和Ig的PEG550-b_PAA1000溶解于三甘醇中，在惰性氣體保護(hù)下攪拌溶液，同時(shí)加熱到160°C，回流，再加熱溶液c至320°C，回流。待回流后的溶液冷卻至室溫后加入溶液體積2~10倍的乙酸乙酯，待溶液凝絮沉淀后用磁鐵聚集分離沉淀物，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得PEG-b-PAA@SP10粒子。
[0072]實(shí)施例2
[0073](I)活化葉酸:取4.5g葉酸和2.1g DCC溶解于10.6mL無(wú)水DMSO中，避光通氮?dú)夥磻?yīng)6h ；
[0074](2)制備超順磁性顆粒懸浮液:取超順磁性顆粒900mg,分散于9mL無(wú)水DMSO中，保持終濃度為10mg/mL ；
[0075](3)將步驟⑵制備的懸浮液加入步驟⑴獲得到的溶液中，并加入129mg的DMAP,室溫條件下反應(yīng)6h ；
[0076](4)分離:反應(yīng)后5000rpm/min離心30min獲得產(chǎn)物并重分散于PBS中，即獲得所
需造影劑。[0077]其中(2)所述超順磁性顆粒的制備方法如下:將作為1400mg的乙酰丙酮鐵(Fe (acca)3)和Ig的PEG550-b_PAA1000溶解于三甘醇中，在惰性氣體保護(hù)下攪拌溶液，同時(shí)加熱到160°C，回流，再加熱溶液c至320°C，回流。待回流后的溶液冷卻至室溫后加入溶液體積2~10倍的乙酸乙酯，待溶液凝絮沉淀后用磁鐵聚集分離沉淀物，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得PEG-b-PAA@SP10粒子。
[0078]實(shí)施例3
[0079](I)活化葉酸:取4.5g葉酸和2.1g DCC溶解于10.6mL無(wú)水DMSO中，避光通氮?dú)夥磻?yīng)18h ；
[0080](2)制備超順磁性顆粒懸浮液:取超順磁性顆粒900mg,分散于9mL無(wú)水DMSO中，保持終濃度為10mg/mL ；
[0081](3)將步驟⑵制備的懸浮液加入步驟⑴獲得到的溶液中，并加入129mg的DMAP，室溫條件下反應(yīng)18h ；
[0082](4)分離:反應(yīng)后5000rpm/min離心30min獲得產(chǎn)物并重分散于PBS中，即獲得所
需造影劑。
[0083]其中(2)所述超順磁性顆粒的制備方法如下:將作為1400mg的乙酰丙酮鐵(Fe (acca)3)和Ig的PEG550-b_PAA1000溶解于三甘醇中，在惰性氣體保護(hù)下攪拌溶液，同時(shí)加熱到160°C，回流，再加熱溶液c至320°C，回流。待回流后的溶液冷卻至室溫后加入溶液體積2~10倍的乙酸乙酯，待溶液凝絮沉淀后用磁鐵聚集分離沉淀物，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得PEG-b-PAA@SPIO粒子。
[0084] 申請(qǐng)人:聲明，本發(fā)明通過(guò)上述實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的詳細(xì)方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細(xì)方法才能實(shí)施。所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任`何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開(kāi)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒，所述超順磁性顆粒包括位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在納米粒子表面的PEG-b-PAA，PEG-b-PAA表面偶聯(lián)有葉酸分子。
2.如權(quán)利要求1所述的超順磁性顆粒，其特征在于，PEG-b-PAA表面通過(guò)DCC/DMAP方法與葉酸分子進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)； 優(yōu)選地，所述PEG的數(shù)均分子量為3000~9000的任意整數(shù)，PAA的數(shù)均分子量為200~10000的任意整數(shù)； 優(yōu)選地，所述四氧化三鐵和三氧化二鐵納米粒子的粒徑均獨(dú)立地為I~lOOnm。
3.—種如權(quán)利要求1或2所述的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒的制備方法，所述方法包括如下步驟: (1)將葉酸活化； (2)制備由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的懸浮液； (3 )將步驟(2 )得到的懸浮液和步驟(1)得到的活化后的葉酸混合，使PEG-b-PAA與葉酸發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，得到具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(1)葉酸活化方法為:將葉酸溶于無(wú)水DMSO中，然后加入等當(dāng)量的D CC，使葉酸濃度保持在1-lOmmol/L，避光在保護(hù)性氣氛下發(fā)生活化反應(yīng)； 優(yōu)選地,所述保護(hù)性氣氛為氮?dú)猓? 優(yōu)選地，所述活化反應(yīng)的時(shí)間為6-18h。
5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述懸浮液的濃度為1-1Omg/ml ； 優(yōu)選地，步驟(2)所述懸浮液的溶劑為DMSO ； 優(yōu)選地，步驟(2)所述超順磁性顆粒的制備方法為: 1)將乙酰丙酮鐵與PEG-b-PAA溶解于四甘醇中，其中乙酰丙酮鐵和PEG-b-PAA的質(zhì)量比為1:1~1:2，PEG數(shù)均分子量為3000-9000的任意整數(shù)，PAA數(shù)均分子量為200-10000的任意整數(shù)； 2)在惰性氣體保護(hù)下攪拌并同時(shí)加熱到160~270°C回流3h，隨后升溫至310~420°C，回流 3h ； 3)將步驟2)得到的溶液冷卻至室溫，加入2~10倍溶液體積的乙酸乙酯使溶液凝絮沉淀，然后用磁鐵將沉淀物聚集分離并重復(fù)3次，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得超順磁性顆粒。
6.如權(quán)利要求3-5之一所述的方法，其特征在于，步驟(3)采用DCC/DMAP方法使PEG-b-PAA與葉酸發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)； 優(yōu)選地，所述DMAP的加入量為0.1倍DCC當(dāng)量； 優(yōu)選地，步驟(3)活化后的葉酸和懸浮液中超順磁性顆粒的質(zhì)量比為1:1 ; 優(yōu)選地，步驟(3)所述反應(yīng)的溫度為室溫； 優(yōu)選地，步驟(3)所述反應(yīng)的時(shí)間為6-18h。
7.如權(quán)利要求3-6之一所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟:(I，)葉酸活化:取葉酸溶解于無(wú)水DMSO中，然后加入等當(dāng)量的DCC，使葉酸濃度保持在2mmol/L，避光在氮?dú)鈿夥障掳l(fā)生活化反應(yīng)； (2’)制備由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的懸浮液:取超順磁性顆粒，分散于無(wú)水DMSO中，保持懸浮液的濃度為10mg/mL ； (3’)將步驟(2’)制備的懸浮液加入步驟(1)得到的溶液中，懸浮液中的超順磁性顆粒和活化后的葉酸的質(zhì)量比為1: 1，并加入0.1倍DCC當(dāng)量的DMAP，室溫條件下反應(yīng)6-18h，得到具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒； 其中(2’)所述由位于核心的四氧化三鐵或/和三氧化二鐵納米粒子及包覆在其表面的PEG-b-PAA組成的超順磁性顆粒的制備方法如下: I’ )將乙酰丙酮鐵與PEG-b-PAA溶解于四甘醇中，其中乙酰丙酮鐵和PEG-b-PAA的質(zhì)量比為1:1~1:2，PEG數(shù)均分子量為3000-9000的任意整數(shù)，PAA數(shù)均分子量為200-10000的任意整數(shù)； 2’ )在惰性氣體保護(hù)下攪拌并同時(shí)加熱到160~270°C回流3h，隨后升溫至310~420°C，回流 3h ； 3’)將步驟2’)得到的溶液冷卻至室溫，加入2~10倍溶液體積的乙酸乙酯使溶液凝絮沉淀，然后用磁鐵將沉淀物聚集分離并重復(fù)3次，最后將獲得的沉淀物真空干燥即獲得超順磁性顆粒。
8.一種特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑，其特征在于，所述造影劑包含權(quán)利要求1或2所述的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒。
9.如權(quán)利要求8所述的造影劑，其特征在于，所述造影劑的粒徑為20nm。`
10.一種如權(quán)利要求8所述的特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: 將權(quán)利要求1或2所述的具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位靶向作用的超順磁性顆粒分散于緩沖溶液中形成穩(wěn)定的分散體系，得到特異性靶向于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位的超順磁性磁共振造影劑。
【文檔編號(hào)】A61K49/18GK103690971SQ201310712788
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】張欣, 代鳳英, 鐘硯琦, 何艷, 劉穎果 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所