一種耐胃酸的多肽-多糖納米顆粒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種新型的、耐苛刻胃酸環(huán)境的多肽-多糖納米顆粒及其制備的方法。這種納米顆粒能夠應(yīng)用于醫(yī)藥、食品工業(yè)中，作為藥物和食品功能因子的口服輸送載體。本發(fā)明應(yīng)用天然交聯(lián)劑京尼平交聯(lián)殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒，通過優(yōu)化其交聯(lián)反應(yīng)條件、離心分離純化條件，表征交聯(lián)后的納米顆粒在胃酸環(huán)境中的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，成功地制備了能夠耐苛刻胃酸環(huán)境的新型高分子納米顆粒。本發(fā)明的工藝方法具有反應(yīng)條件溫和、不使用任何有機(jī)試劑、成本低、對(duì)環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)。更重要的是，應(yīng)用天然京尼平交聯(lián)殼聚糖納米顆粒避免了應(yīng)用化學(xué)合成交聯(lián)劑所帶來的巨大毒副作用，因此，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種耐胃酸的多肽-多糖納米顆粒及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及高分子口服輸送載體制備的【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種新型的、耐胃酸環(huán)境的高分子納米顆粒的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]因?yàn)楠?dú)特的納米尺寸效應(yīng)，生物相容性以及腸道促吸收特性，殼聚糖聚合電解質(zhì)納米顆粒是一種非常具有潛力的高效口服輸送載體。但是，復(fù)雜而苛刻的人體消化道PH環(huán)境對(duì)口服納米輸送載體是一個(gè)嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。尤其是在強(qiáng)胃酸(PH1.2)環(huán)境下，殼聚糖聚合電解質(zhì)納米顆容易解離，無法到達(dá)腸道，實(shí)現(xiàn)其腸道靶向輸送和促吸收的功能。京尼平是我國傳統(tǒng)中藥材杜仲和桅子中的主要藥用成分之一。作為一種水溶性雙向交聯(lián)劑，京尼平能夠與含有氨基的高分子，如殼聚糖、蛋白質(zhì)等，迅速反應(yīng)，產(chǎn)生高分子凝膠。與常用的化學(xué)合成交聯(lián)劑(戊二醛、乙二醇二縮水甘油醚、二異氰酸酯等)相比，京尼平更加安全、沒有生理毒性。因此，京尼平能夠交聯(lián)殼聚糖、蛋白質(zhì)、膠原和明膠等，提高這些生物高分子材料(微球、高分子膜等)的結(jié)構(gòu)功能與穩(wěn)定性。但是，國內(nèi)外，關(guān)于應(yīng)用京尼平交聯(lián)高分子納米顆粒，從而增強(qiáng)其耐胃酸穩(wěn)定性的研究尚未見報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的旨在提供一種簡(jiǎn)單、綠色、高效的交聯(lián)高分子納米顆粒的方法，以增強(qiáng)其耐苛刻胃酸環(huán)境的性能。殼聚糖與酪蛋白磷酸肽之間通過靜電相互作用，形成高分子納米顆粒。通過京尼平與殼聚糖和酪蛋白磷酸肽分子中氨基的交聯(lián)反應(yīng)，在多糖、多肽分子之間形成多重交聯(lián)，從而增強(qiáng)納米顆粒自身的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。通過優(yōu)化納米顆粒的離心與復(fù)分散條件，獲得納米顆粒的最優(yōu)分離純化條件。應(yīng)用該離心純化條件有效終止京尼平對(duì)納米顆粒的交聯(lián)反應(yīng)。通過對(duì)比經(jīng)京尼平交聯(lián)的和未經(jīng)京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒在胃酸PH環(huán)境中的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，驗(yàn)證京尼平交聯(lián)反應(yīng)對(duì)增強(qiáng)納米顆粒耐胃酸環(huán)境的能力。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0004]圖1殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒㈧和京尼平交聯(lián)后的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒⑶在強(qiáng)胃酸(PH1.2)環(huán)境中2小時(shí)后的透射電鏡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0005]本發(fā)明的具體實(shí)施方案如下:
[0006](I)、將殼聚糖溶于I %的醋酸溶液，直至完全溶解，調(diào)節(jié)pH到6.2 ；
[0007](2)、將酪蛋白磷酸肽溶于去離子水中，調(diào)節(jié)溶液pH為6.2 ;
[0008](3)、將京尼平溶于50%乙醇溶液中，加熱到37°C，攪拌直至其完全溶解；
[0009](4)、攪拌條件下，將步驟(1)中的殼聚糖溶液逐滴加入步驟(2)中的酪蛋白磷酸肽溶液中，直至殼聚糖與酪蛋白磷酸肽質(zhì)量比為1: 3，溶液呈現(xiàn)乳光。
[0010](5)、將步驟(3)中的京尼平溶液逐滴加入步驟(4)中所制備的乳濁液中，直至京尼平與殼聚糖質(zhì)量比為1: 8，于37°C條件下，保溫反應(yīng)3小時(shí)，溶液呈現(xiàn)藍(lán)色。
[0011](6)、分別將步驟(4)和步驟(5)中反應(yīng)后的溶液在4°C，2500g離心力條件下，離心45分鐘，去上清液，用去離子水中洗滌、離心3次，分別得到純化后未交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒和京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒。 [0012](7)、將步驟(6)中所得到的未交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒和京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒分別復(fù)分散在PH1.2,0.1N的稀鹽酸溶液(模擬胃酸環(huán)境)中，在37°C條件下，2小時(shí)后應(yīng)用透射電鏡觀測(cè)其納米顆粒形貌變化(圖1)。從圖1的結(jié)果可以清晰地看出，未經(jīng)過京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒在胃酸環(huán)境中完全解離了，而經(jīng)過京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒在胃酸環(huán)境中非常穩(wěn)定，呈完整的納米球形。因此，京尼平交聯(lián)能夠顯著地增強(qiáng)殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒在苛刻胃酸環(huán)境中結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，是一種綠色、高效、簡(jiǎn)單的增強(qiáng)高分子納米顆粒耐胃酸性能的方法。
【權(quán)利要求】
1.一種耐苛刻胃酸環(huán)境的多肽-多糖納米顆粒的制備方法，其特征在于包括以下操作步驟: (1)、將殼聚糖溶于I%的醋酸溶液，直至完全溶解，調(diào)節(jié)PH到6.2 ； (2)、將酪蛋白磷酸肽溶于去離子水中，調(diào)節(jié)溶液pH為6.2 ； (3)、將京尼平溶于50%乙醇溶液中，加熱到37°C，攪拌直至其完全溶解； (4)、攪拌條件下，將步驟(1)中的殼聚糖溶液逐滴加入步驟(2)中的酪蛋白磷酸肽溶液中，直至殼聚糖與酪蛋白磷酸肽質(zhì)量比為1: 3，溶液呈現(xiàn)乳光。 (5)、將步驟(3)中的京尼平溶液逐滴加入步驟(4)中所制備的乳濁液中，直至京尼平與殼聚糖質(zhì)量比為1: 8，于37°C條件下，保溫反應(yīng)3小時(shí)，溶液呈現(xiàn)藍(lán)色。 (6)、分別將步驟(4)和步驟(5)中反應(yīng)后的溶液在4°C，2500g離心力條件下，離心45分鐘，去上清液，用去離子水中洗滌、離心3次，分別得到純化后未交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒和京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒。 (7)、將步驟(6)所得到的未交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒和京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒分別復(fù)分散在PH1.2,0.1N的稀鹽酸溶液(模擬胃酸環(huán)境)中，在37°C條件下，2小時(shí)后應(yīng)用透射電鏡和動(dòng)態(tài)光散射表征納米顆粒的形態(tài)和粒徑變化。
2.京尼平交聯(lián)的殼聚糖-酪蛋白磷酸肽納米顆粒。其特征是:粒徑230-270nm，表面Zeta電位32-34mV，耐苛刻胃酸環(huán)境。
【文檔編號(hào)】A61K31/352GK103705938SQ201310727566
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月26日
【發(fā)明者】曾曉雄, 胡冰 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)