一種聚乙二醇修飾的抑制vegfr2酪氨酸激酶多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性，治療實(shí)體腫瘤的多肽。此多肽經(jīng)過了聚乙二醇修飾，其序列為mPEG-SC10k-MVIVEFCK是全新的序列，它們可以在體外抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性，并在體內(nèi)試驗(yàn)中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【專利說明】一種聚乙二醇修飾的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及聚乙二醇修飾的VEGFR2酪氨酸激酶抑制劑及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性、可治療實(shí)體腫瘤的的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]研究表明，實(shí)體瘤的生長依賴于新生血管生成，新生血管不僅可以提供腫瘤所需要的營養(yǎng)和氧氣，排泄代謝產(chǎn)物，而且是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的途徑。因此，阻斷新生血管形成可能成為阻止腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的手段，從而激發(fā)了對(duì)促血管生成分子和抗血管生成分子的廣泛研究。
[0003]相比傳統(tǒng)腫瘤治藥物療，腫瘤血管生成抑制劑最大優(yōu)點(diǎn)在于:①選擇性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，全身毒副作用??；②靶細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞，藥物易從血液中到達(dá)與之接觸發(fā)生作用；+1'血管內(nèi)皮細(xì)胞無或少突變，不易產(chǎn)生耐藥性，可長期用藥；?可與放化療方法聯(lián)合應(yīng)用并減輕后者的毒副反應(yīng)。
[0004] 血管內(nèi)皮生長因子受體2 (VEGFR2)亦稱含激酶插入域的受體(KDR)，屬于受體酪氨酸激酶超家族。血管內(nèi)皮生長因子受體2在新生血管生成過程中起著主要的作用。其配體VEGF通過刺激細(xì)胞表面VEGFR2活化內(nèi)皮細(xì)胞，發(fā)生生化信號(hào)的復(fù)雜級(jí)聯(lián)與細(xì)胞外基質(zhì)組分和可溶性因子相互作用，導(dǎo)致腔管形成并且分化成成熟的血管。另外，這些被活化的細(xì)胞經(jīng)過細(xì)胞增殖過程，來提高細(xì)胞粘附分子的表達(dá)，增加蛋白水解酶的分泌，增加細(xì)胞遷移和侵襲。目前，靶向KDR的抑制劑已成為開發(fā)新興抗血管新生藥物的研究熱點(diǎn)。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的血管內(nèi)皮生長因子受體2酪氨酸激酶多肽抑制劑問世，用于治療實(shí)體瘤。
[0005]MVIVEFCK是一個(gè)全新的序列，前期的研究表明，該多肽經(jīng)反復(fù)體內(nèi)外活性評(píng)價(jià)證實(shí)具有較好的抑瘤效果，能夠顯著抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性。然而上述多肽的半衰期短，擬用臨床人的給藥是每天靜脈滴注，這給患者帶來了一定的痛苦。
[0006]文獻(xiàn)報(bào)道中，對(duì)分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾或改造是解決半衰期較短、需連續(xù)給藥問題的常用方法，其中以化學(xué)修飾應(yīng)用最為廣泛，常用的化學(xué)修飾劑有聚乙二醇(polye thyleneglycol, PEG)、葡聚糖、聚氨基酸、聚酸酐等。PEG具有無毒、無免疫原性、水溶性好的特點(diǎn)，被美國食品與藥物管理局(FDA)認(rèn)可作為藥品的輔助原料和修飾劑。蛋白質(zhì)類藥物經(jīng)PEG修飾后，分子量增加，腎小球的濾過率減少，PEG的屏障作用保護(hù)了蛋白質(zhì)不易被蛋白水解酶水解，同時(shí)減少了中和抗體的產(chǎn)生，這些均有助于蛋白質(zhì)類藥物生物半衰期的延長。目前已有多種PEG修飾的蛋白質(zhì)類藥物上市銷售。但PEG修飾同時(shí)也可能影響蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，其影響大小與修飾劑、修飾條件及蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)。對(duì)于具體的蛋白質(zhì)，其最佳修飾需通過制備PEG修飾的蛋白質(zhì)及生物活性研究來決定。合成小分子多肽的PEG修飾研究起步較晚，但已引起不少研究者的關(guān)注。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]發(fā)明目的
本發(fā)明針對(duì)mPEG-SC-MVIVEFCK做了進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)其在降低給藥頻率的情況下對(duì)多種腫瘤有治療作用。
[0008]技術(shù)方案
一種聚乙二醇修飾的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽，其特征在于其序列為mPEG-SC1(lk-MVIVEFCK。mPEG-SC 的分子量為 5000-20000。一種聚乙二醇修飾的抑制 VEGFR2酪氨酸激酶多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為起源于人的胃部、皮膚、頭頸部、甲狀腺、胰腺、肺臟、食管、乳腺、腎臟、膽囊、結(jié)腸/直腸、卵巢、子宮、子宮頸、前列腺、膀胱、睪丸的原發(fā)/繼發(fā)的癌或肉瘤。
[0009]有益效果
為了延長多肽MVIVEFCK的半衰期，我們采用不同分子量的聚乙二醇(PEG)對(duì)此多肽進(jìn)行了修飾，發(fā)現(xiàn)mPEG-SC1Qk-MVI VEFCK具有延長半衰期，但又不影響其體內(nèi)外活性的特點(diǎn)。一個(gè)多肽的修飾產(chǎn)物屬于一個(gè)新型分子，往往與修飾前的分子在活性上產(chǎn)生不同的效果。本發(fā)明針對(duì)上述聚乙二醇修飾的VEGFR2酪氨酸激酶抑制劑mPEG-SC1Qk-MVIVEFCK對(duì)多種腫瘤有治療作用進(jìn)行了大量的體內(nèi)外活性研究，發(fā)現(xiàn)給藥頻率降低的情況下，mPEG-SC10k-MVIVEFCK對(duì)抑制多種腫瘤生長保持了很好的活性，拓展了其社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0010]本發(fā)明涉及多肽由吉爾生化(上海)有限公司合成。
[0011]實(shí)施例1` 聚乙二醇修飾的VEGFR2酪氨酸激酶抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的生長和存活I(lǐng)C50。
[0012]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長的U937細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物聚乙二醇修飾的VEGFR2酪氨酸激酶抑制劑和陽性對(duì)照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)4811，分別在他、211、811、1411、2011、2411、3611、，4811每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為2.23 μ M。
[0013]實(shí)施例2
用腫瘤模型檢測聚乙二醇修飾的VEGFR2酪氨酸激酶抑制劑的體內(nèi)活力。
[0014]建立U937腫瘤模型，陽性對(duì)照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑，實(shí)驗(yàn)組設(shè)3個(gè)劑量:0.75、1.5 μ Μ、3 μ M mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計(jì)算存活率。結(jié)果顯示，聚乙二醇修飾的VEGFR2酪氨酸激酶抑制劑可有效地保護(hù)小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達(dá)到89.1%。
【權(quán)利要求】
1.一種聚乙二醇修飾的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽，其特征在于其序列為mPEG-SC-MVIVEFCK。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇修飾的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量為10000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇修飾的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為起源于人的胃部、皮膚、頭頸部、甲狀腺、胰腺、肺臟、食管、乳腺、腎臟、膽囊、結(jié)腸/直腸、卵巢、子宮、子宮頸、前列腺、膀胱、睪丸的原發(fā)/繼發(fā)的癌或肉瘤。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103739672SQ201310748724
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月31日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請(qǐng)人:羅瑞雪