部分mhc構(gòu)建體及使用方法
【專利摘要】本文公開了分離的主要組織相容性復(fù)合物(MHC)II類α1結(jié)構(gòu)域多肽和使用方法。在一些實(shí)施方案中，所述分離的多肽包含MHC?II類α1結(jié)構(gòu)域多肽(或其一部分)或由其組成，并且不包含MHC?II類α2、β1和β2結(jié)構(gòu)域。所公開的MHC?II類α1結(jié)構(gòu)域多肽用于治療或抑制受試者中的疾病，例如炎性和/或自身免疫性疾病。還公開了評估使用多肽治療受試者的功效或優(yōu)化所述治療的方法，所述多肽包含MHC?II類α1結(jié)構(gòu)域多肽(或其一部分)或包含MHC?II類α1結(jié)構(gòu)域和β1結(jié)構(gòu)域的多肽(例如β1α1RTL)。
【專利說明】部分MHC構(gòu)建體及使用方法
[〇〇〇1] 相關(guān)專利申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2012年1月6日提交的美國臨時申請No. 61/584,045的優(yōu)先權(quán)，該臨 時申請以引用的方式全文納入本文。 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003] 本公開涉及部分主要組織相容性復(fù)合物多肽和使用方法，特別是在治療或抑制炎 性或自身免疫性疾病中的使用方法。
[0004] 政府資助的聲明
[0005] 本發(fā)明在美國國立衛(wèi)生研究院（National Institutes of Health)授予的基金號 NS47661、AI43960和DK0688861以及由退伍軍人事務(wù)部授予的Merit Review和研究增強(qiáng) 獎勵計(jì)劃基金（Research Enhancement Award Program grants)的美國政府資助下完成。 美國政府在本發(fā)明中享有某些權(quán)利。 【背景技術(shù)】
[0006] 哺乳動物中針對特異性抗原的免疫應(yīng)答的起始是通過將所述抗原呈遞至T細(xì)胞 引起的。在主要組織相容性復(fù)合物（MHC)的背景下抗原被呈遞至T細(xì)胞。MHC位于抗原呈 遞細(xì)胞（APC)表面上；MHC的三維結(jié)構(gòu)包括適合所呈遞的抗原進(jìn)入的溝（groove)或裂隙 (cleft)。當(dāng)在存在必需的共刺激信號的情況下T細(xì)胞上的適當(dāng)受體與APC上的MHC/抗原 復(fù)合物相互作用時，所述T細(xì)胞被刺激，觸發(fā)充分表征的免疫系統(tǒng)激活事件的級聯(lián)的多個 方面，包括誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞功能、誘導(dǎo)B細(xì)胞功能和刺激細(xì)胞因子產(chǎn)生。
[0007] 多發(fā)性硬化的病理學(xué)特征在于針對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的異常免疫應(yīng)答。具體地，認(rèn)為 對髓磷脂抗原具有反應(yīng)性的T淋巴細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)起始炎癥應(yīng)答。所產(chǎn)生的炎癥應(yīng) 答包括募集T淋巴細(xì)胞，活化巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞。由這些炎癥細(xì)胞釋放的可溶 性介質(zhì)導(dǎo)致脫髓鞘并且在較輕的程度上導(dǎo)致軸突變性。類似地，許多自身免疫性疾病中的 炎癥應(yīng)答導(dǎo)致常常會不斷加重的組織損傷。盡管最近有一些進(jìn)展，但是仍需要對自身免疫 性和炎性疾病有效的療法。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本文公開的是分離的主要組織相容性復(fù)合物（MHC) II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽和使用方 法。在一些實(shí)施方案中，所述分離的多肽包含MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽（或其一部分）或 由其組成，并且不包含MHC II類α2、β?和β2結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)例中，所述MHC II類 α 1結(jié)構(gòu)域與抗原決定簇共價(jià)連接，例如通過肽接頭、化學(xué)接頭或直接的共價(jià)鍵。
[〇〇〇9] 所公開的MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽用于治療或抑制受試者中的疾病，所述疾病包 括炎性和/或自身免疫性疾病。在一些實(shí)施方案中，給予患有炎性和/或自身免疫性疾病 或病癥的受試者對治療或抑制所述疾病有效的量的所述MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽（例如 α 1多肽或具有抗原肽的α 1多肽）或其一部分。在一些實(shí)例中，所述MHC II類α 1結(jié)構(gòu) 域多肽降低⑶74的表達(dá)和/或活性。
[〇〇1〇] 還公開了確定或評估使用多肽治療受試者的功效或優(yōu)化所述治療的方法，所述多 肽包含MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域或包含MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域（或其部分）和β 1結(jié)構(gòu)域（例 如β 1 α 1多肽）。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括確定來自所述受試者的樣品中的⑶74 表達(dá)或活性，將所述CD74表達(dá)或活性與對照進(jìn)行比較，以及基于CD74表達(dá)和/或活性水平 確定所述治療的功效或確定是否應(yīng)該調(diào)整所述多肽的劑量。
[〇〇11] 從參照附圖進(jìn)行的以下詳細(xì)描述中，本公開的上述和其他特征將變得更加清楚。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 在附圖和整個說明書中，以下術(shù)語互換使用：pDR2/mM0G-35-55與RTL342M互換 使用；PDR2/無肽與RTL302-5D互換使用；pDR2/MBP-85-99與RTL340互換使用；pDR2/ hM0G35-55 與 RTL1000 互換使用。
[0013] 圖1A的兩幅圖示出了用mM0G-35-55肽/弗氏完全佐劑（CFA) /Ptx免疫的 DR*1501-Tg小鼠的平均臨床EAE每日得分（左）或累積疾病指數(shù)（CDI ;右）。當(dāng)疾病發(fā)作 時（臨床EAE得分彡2)，使用指示的載體、pDR2/mM0G-35-55、pDR2/無肽或pDR2/MBP-85-99 治療小鼠。箭頭指示對小鼠進(jìn)行治療的日期。對于pDR2/mM0G-35-55相對于載體、pDR2/ MBP-85-99 和 pDR2/ 無肽，*ρ〈0· 003。
[0014] 圖1Β的兩幅圖示出了用hM0G-35-55肽/CFA/Ptx免疫的DR*1502-Tg小鼠的平均 臨床EAE每日得分（左）或CDI(右）。當(dāng)疾病發(fā)作時（臨床EAE得分>2)，使用指示的載 體、pDR2/mM0G-35-55、pDR2/無肽或pDR2/MBP-85-99治療小鼠。箭頭指示對小鼠進(jìn)行治療 的日期。對于 pDR2/hM0G-35-55 相對于載體、pDR2/MBP-85-99 和 pDR2/ 無肽，*ρ〈0· 0023。
[0015] 圖2Α的兩幅流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖示出了用于鑒定單核細(xì)胞的單核細(xì)胞門的設(shè)置。 當(dāng)細(xì)胞落入左圖所示的前向散射/側(cè)向散射散點(diǎn)圖中的圓圈所示的區(qū)域中時，就將其鑒定 為單核細(xì)胞，并且如右圖中所示排除碘化丙啶（ΡΙ)陽性的死細(xì)胞。
[0016] 圖2Β示出了在注射500 μ g的標(biāo)記的pDR2之前和注射15分鐘后從首次用于實(shí) 驗(yàn)的DR*1501-Tg小鼠采集的血液的流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖，根據(jù)所述單核細(xì)胞門和用于觀察 ⑶lib (首行）、⑶19 (第二行）、⑶11c (第三行）和⑶3 (底端行）的表達(dá)的藻紅蛋白染色 和用于觀察標(biāo)記的PDR2衍生物的結(jié)合的FITC染色（X-軸）來進(jìn)行分選。左圖示出了無 RTL對照的結(jié)合，中間圖出了 RTL342M(pDR2/mM0G-35-55)的結(jié)合，右圖示出了 RTL1000(單 體 pDR2/hM0G-35-55)的結(jié)合。
[0017] 圖2C示出了采集自首次用于實(shí)驗(yàn)的DR*1501-Tg小鼠并與500μ g的標(biāo)記的pDR2 體外孵育的血液的流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖，根據(jù)單核細(xì)胞門和用于觀察CDI lb (首行）、CD19 (第 二行）、CDllc (第三行）和CD3 (底端行）表達(dá)的藻紅蛋白染色和用于觀察標(biāo)記的pDR2衍 生物的結(jié)合的FITC染色（X-軸）來進(jìn)行分選。左圖示出了無 RTL的對照的結(jié)合，中間圖示 出了 RTL342M的結(jié)合，右圖示出了 RTL1000的結(jié)合。
[0018] 圖2D為來自用10 μ g/ml標(biāo)記有Alexa-546的RTL342M治療40分鐘的DR*1501/ GFP轉(zhuǎn)基因小鼠的GFP+⑶llb+細(xì)胞并通過熒光顯微術(shù)進(jìn)行評估所得的數(shù)字圖像。
[0019] 圖3A的兩幅散點(diǎn)圖示出了通過前向散射和側(cè)向散射分析的淋巴細(xì)胞門的設(shè)置。 當(dāng)細(xì)胞落入左圖所示的前向散射/側(cè)向散射散點(diǎn)圖中的圓圈所示的區(qū)域中時，就將其鑒定 為單核細(xì)胞，并且如右圖所示排除碘化丙啶（PI)陽性的死細(xì)胞。
[0020] 圖3B示出了在注射500 μ g的標(biāo)記的RTL之前和注射后15分鐘從首次用于實(shí)驗(yàn)的 DR*1501-Tg小鼠采集的血液的流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖，根據(jù)淋巴細(xì)胞門和用于觀察CDllb (首 行）、CD19(第二行）、CDllc (第三行）和CD3(底端行）表達(dá)的藻紅蛋白（PE)染色和用于 觀察標(biāo)記的PDR2衍生物的結(jié)合的FITC染色（X-軸）來進(jìn)行分選。左圖示出了無 RTL對照 的結(jié)合，中間圖示出了 RTL342M的結(jié)合，右圖示出了 RTL1000的結(jié)合。
[0021] 圖3C示出了采集自首次用于實(shí)驗(yàn)的DR*1501-Tg小鼠并與500 μ g的標(biāo)記的RTL 體外孵育的血液的流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖，根據(jù)所述淋巴細(xì)胞門和用于觀察CDllb (首行）、 CD19(第二行）、CDllc(第三行）和CD3(底端行）表達(dá)的藻紅蛋白（PE)染色和用于觀察 標(biāo)記的RTL衍生物的結(jié)合的FITC染色（X-軸）來進(jìn)行分選。左圖示出了無 RTL對照的結(jié) 合，中間圖示出了 RTL342M的結(jié)合，右圖示出了 RTL1000的結(jié)合。
[0022] 圖4A包括一組從首次用于實(shí)驗(yàn)的DR*1501_Tg小鼠采集的外周血單核細(xì)胞（PBMC) 的流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖（左）和條狀圖（右）。所述流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖根據(jù)圖2A的單核 細(xì)胞門來進(jìn)行設(shè)門，在將所述外周血單核細(xì)胞與單獨(dú)的載體（左圖）、所述PDR特異的 Fablbll (中間圖）或所述對照FabD2(右圖）孵育90分鐘后進(jìn)行染色用于觀察⑶lib的 表達(dá)和FITC-DR2構(gòu)建體的結(jié)合。所述條狀圖代表被歸一化為不存在Fab的情況下pDR2/ mM0G-35-55 的結(jié)合的百分?jǐn)?shù)的 pDR2/mM0G-35-55 的結(jié)合。*#ρ〈(λ 0001。
[0023] 圖4Β的兩幅圖示出了在疾病發(fā)作時每天使用如圖所示的載體、RTL342M、 RTL342M+Fab lb 11、RTL342M+FabD2 或單獨(dú)的 Fab lb 11 治療 3 天的患有 ΕΑΕ 的 DR* 1501-Tg 小 鼠的每日平均臨床EAE得分（上圖）和⑶I (下圖）。在治療之前將Fab片段與pMHC進(jìn)行 孵育。*Ρ〈〇· 05 ;***ρ〈0· 0001 ;#ρ〈0· 0005。
[0024] 圖4C，上圖為將RTL342M與FablBll或與對照FabD2進(jìn)行預(yù)孵育后，或不使用RTL 或者使用單獨(dú)的FablBll的CD74的平均熒光強(qiáng)度（MFI)的直方圖。下圖為對來自所述上 圖的數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)的條狀圖。*Ρ〈〇· 05 ;#ρ〈0· 005, *#ρ〈0· 0005。
[0025] 圖4D左圖為在臨床體征發(fā)作時每天靜脈注射100 μ g RTL342M(pDR2/ mM0G-35-55)、等摩爾（10 μ g)游離mM0G-35-55多肽或載體治療5天的患有mM0G-35-55/ CFA/Ptx誘導(dǎo)的EAE的DR*1501-Tg小鼠的臨床EAE得分的線圖。右圖為示出了所述相 同動物的累積疾病指數(shù)的條狀圖。相對于載體治療的組或游離mM0G35-55治療的組， *ρ〈0· 05 (每日得分）#ρ〈0· 01 (CDI 得分）。
[0026] 圖5Α為RTL1000與脾細(xì)胞的結(jié)合的線圖。將首次用于實(shí)驗(yàn)的脾細(xì)胞與指示濃度的 AlexaFluor4g8?標(biāo)記的RTL1000進(jìn)行孵育。將細(xì)胞裂解于6M尿素中，通過SDSPAGE分 離所述蛋白，并通過熒光光密度測定法對所述蛋白進(jìn)行定量。所述數(shù)據(jù)最佳擬合2個結(jié)合 位點(diǎn)的模型（R 2 = 〇. 998)。所述兩個結(jié)合位點(diǎn)的KD值，對于較高親和力的位點(diǎn)為2. 65ηΜ， 對于較低親和力的位點(diǎn)為131. ΟηΜ。
[0027] 圖5Β的線圖示出了在量遞增的所指示的未標(biāo)記競爭物的存在下標(biāo)記的RTL1000 與分離自DR*1501-Tg小鼠的全細(xì)胞的結(jié)合。
[0028] 圖5C的線圖示出了在量遞增的所指示的未標(biāo)記競爭物的存在下標(biāo)記的RTL1000 與分離自敲除MHC II類的小鼠的全細(xì)胞的結(jié)合。
[0029] 圖6為兩幅與pDR2結(jié)合的蛋白的免疫沉淀物印跡的數(shù)字圖像。對來自DR*1501_Tg 小鼠的脾細(xì)胞進(jìn)行表面生物素化，然后用含有CHAPS的緩沖液進(jìn)行裂解。將裂解物與 RTL1000進(jìn)行孵育，然后向所述裂解物中加入DR2特異的單克隆抗體TU39。洗滌免疫復(fù)合 物以去除未結(jié)合的物質(zhì)，通過在還原性電泳樣品緩沖液中煮沸8-10分鐘而將所述結(jié)合蛋 白從所述免疫復(fù)合物中分離。將從免疫沉淀物中回收的蛋白通過SDS-PAGE分離，印跡至濾 膜上，然后用鏈親和素 PE (左）或Quantum-Red標(biāo)記的DR2HK14抗體（右）進(jìn)行探測。
[0030] 圖7的曲線圖示出了通過表面等離子體共振測量的RTL1000與組蛋白復(fù)合物的 結(jié)合。通過胺偶聯(lián)使組蛋白復(fù)合物與CD5傳感芯片結(jié)合，并將所述指示濃度的RTL1000與 所述復(fù)合物結(jié)合。結(jié)合曲線擬合具有漂移基線的1:1朗繆爾（Langmuir)結(jié)合模型（Ka = 5.74父103]?^;1((1 = 3.3\10^;1-- = 223冊；〇112 = 9.89)，產(chǎn)生的近似親和力常數(shù) KD 為 575nM。
[0031] 圖8A為與⑶74結(jié)合的蛋白的免疫沉淀物的蛋白質(zhì)印跡的數(shù)字圖像。對來自 DR*1501-Tg小鼠的脾細(xì)胞進(jìn)行表面生物素化并裂解。將裂解物與綴合至CD74抗體的蛋白 L微珠混合。將這些在4°C下孵育過夜。將蛋白從所述免疫復(fù)合物中回收并印跡，并使用鏈 親和素-PE進(jìn)行可視化。Μ指示分子量標(biāo)記物；T指示總裂解物；CD74IP指示免疫沉淀的 CD74。
[0032] 圖8Β為兩幅⑶74蛋白復(fù)合物的SDS-PAGE凝膠的數(shù)字圖像，從表面生物素化的 DR* 1501-Tg脾細(xì)胞中免疫沉淀出所述CD74蛋白復(fù)合物，然后將所述CD74蛋白復(fù)合物與25 納摩爾的指示的FITC標(biāo)記的RTL分子進(jìn)行孵育。對所述凝膠進(jìn)行掃描以鑒定FITC的存在。
[0033] 圖9A為⑶74蛋白復(fù)合物的SDS-PAGE凝膠的數(shù)字圖像，從表面生物素化的 DR*1501_Tg脾細(xì)胞中免疫沉淀出所述⑶74蛋白復(fù)合物，然后在存在未標(biāo)記的DR-α 1和 DR2-i3 1的情況下將所述⑶74蛋白復(fù)合物與FITC標(biāo)記的RTL1000分子進(jìn)行孵育。
[0034] 圖9B的圖示出了 DR- a 1以劑量依賴的方式抑制RTL1000的結(jié)合。使用Bio-Rad Imager FX?掃描儀檢測聚丙烯酰胺凝膠上的FITC標(biāo)記的RTL1000條帶，接著通過光密度 測定法使用Quantity One?軟件對所述RTL1000條帶進(jìn)行定量。將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化并相 對于DR- α 1的濃度進(jìn)行標(biāo)繪，使用GraphPad Prism?軟件將所述曲線擬合一個位點(diǎn)或兩 個位點(diǎn)的競爭模型。最佳擬合為一個位點(diǎn)的競爭方程，EC5(I為447nM，R 2為0. 956。
[0035] 圖10A的曲線圖示出了當(dāng)與免疫吸附的CD74進(jìn)行孵育時，遞增量的FITC標(biāo)記的 RTL1000、RTL342M、RTL340 (pDR2/MBP-85-99)、RTL302-5D (單體 pDR2/ 無肽）和 DR- α 1 的 結(jié)合情況。使用GraphPad Prism⑩軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行一個位點(diǎn)或兩個位點(diǎn)結(jié)合的分析，對于 所有結(jié)合配體來說R2>〇. 95。
[0036] 圖10B的曲線圖示出了當(dāng)與富集的MHC II類進(jìn)行孵育時，遞增量的FITC標(biāo)記的 尺111000、1?113421、1?11340、1?11302-^)和01?-〇1的結(jié)合情況，所述腿(：11類是通過綴合至 L243單克隆抗體的蛋白-L微珠從CD74耗盡的裂解物中免疫吸附出來的。
[0037] 圖11A的直方圖示出了相對于首次用于實(shí)驗(yàn)的小鼠，EAE小鼠中單核細(xì)胞上的 ⑶74的表達(dá)。插圖示出了來自首次用于實(shí)驗(yàn)的小鼠 （η = 4)和mM0G-35-55免疫的患有EAE 的小鼠 （η = 4)的單核細(xì)胞中⑶74表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度的平均值。**p〈0. 01。
[0038] 圖11B的條狀圖示出了用載體或RTL342M(100l·! g)治療的患有EAE的小鼠的血液 和脾中CD74表達(dá)。*ρ〈0·05。
[0039] 圖11C的兩幅散點(diǎn)圖示出了使用載體（左）或Κ--342Μ(100μ8;右）治療的小鼠 的脊髓中的單核細(xì)胞中CD74表達(dá)。
[0040] 圖12Α的一組散點(diǎn)圖示出了用指示濃度的RTL1000處理的⑶llb+單核細(xì)胞中的 RTL1000FITC結(jié)合（上）和CDM表達(dá)（下）。
[0041] 圖12B的一組線圖示出了⑶74表達(dá)和指示的RTL的結(jié)合百分?jǐn)?shù)。右下圖是所有 所述構(gòu)建體的線性回歸分析，示出了 RTL結(jié)合與CD74表達(dá)之間的逆相關(guān)。
[0042] 圖13A的一組散點(diǎn)圖示出了使用載體處理（無 pMHC處理）的⑶llb+人單核細(xì)胞 上的RTL結(jié)合（上）和⑶74表達(dá)（下）。
[0043] 圖13B的一組散點(diǎn)圖示出了⑶llb+人單核細(xì)胞上的1 μ g RTL342M的結(jié)合（上） 和CD74表達(dá)（下）。
[0044] 圖13C的一組散點(diǎn)圖示出了⑶llb+人單核細(xì)胞上的1 μ g RTL1000的結(jié)合（上） 和CD74表達(dá)（下）。
[0045] 圖13D的一組散點(diǎn)圖示出了⑶llb+人單核細(xì)胞上的5μ g RTL1000的結(jié)合（上） 和CD74表達(dá)（下）。
[0046] 圖13E的一組散點(diǎn)圖示出了⑶llb+人單核細(xì)胞上的5yg RTL340的結(jié)合（上） 和CD74表達(dá)（下）。
[0047] 圖13F的線圖示出了在分析之前在培養(yǎng)物中用不同濃度的RTL1000處理的人單核 細(xì)胞中的RTL1000的結(jié)合相對于⑶74表達(dá)的線性回歸。原始數(shù)據(jù)示于圖13A-E。
[0048] 圖14A的線圖示出了通過使用MBP-85-99免疫而誘導(dǎo)了 EAE的小鼠的平均臨床 EAE每日得分（左），條狀圖示出了所述小鼠的CDI(右）。疾病發(fā)作后（圖上由箭頭所指 示）使用載體、RTL342M、RTL1000、RTL340 或 RTL302-? 對 MBP-TCR/DR2-Tg 小鼠進(jìn)行 5 天 的治療。對于EAE每日平均得分和峰值疾?。ㄗ髨D），對于RTL342M相對于載體*p〈0. 02， 對于RTL340和RTL1000相對于載體，***p〈0. 002。對于CDI (右圖），對于RTL342M相對于 載體#ρ〈0· 0014,對于 RTL340 和 RTL1000 相對于載體，*#ρ〈0· 001。
[0049] 圖14Β的線圖示出了通過使用mM0G-35-55免疫而誘導(dǎo)了 ΕΑΕ的小鼠的平均臨床 EAE每日得分（左），條狀圖示出了所述小鼠的⑶I (右）。在發(fā)作時使用RTL340 (100 μ g)、 尺113421(10(^8)、1?11302-50(10(^8,5次每日治療），或1?11302-50(111^)或 RTL342M(100 μ g，2次每日治療）對患有EAE的DR*1501小鼠進(jìn)行治療。所述載體組和未 治療組彼此之間沒有顯著差異而被合并。對于EAE每日平均得分和峰值疾?。ㄗ髨D），相 對于載體 / 未治療，*P〈〇.〇4, RTL302-5D(lmgX2)，***p〈0.0001，RTL342M(100ygX5)， #ρ〈0·01，RTL342M(100ygX2);對于 CDI，相對于載體 / 未治療，*#ρ〈0·0001。 RTL342M(100y gX2,5 次每日治療），ρ〈0· 013, RTL302-5D(lmgX2 次每日治療）。
[0050] 圖14C的圖示出了圖14B中所示的小鼠組的⑶llb+細(xì)胞上的⑶74水平與平均 ⑶I之間的關(guān)系。
[0051] 圖15的線圖示出了使用具有共價(jià)連接的mM0G-35-55的pDR2(100y g)、不具有肽 的pDR2 (1000 μ g)、DR- α 1 (750 μ g)或單獨(dú)的載體治療的小鼠的臨床EAE得分（上），條狀 圖示出了所述小鼠的⑶I (下）。每個治療組由三只小鼠組成。*P〈〇. 〇5pDR2mMOG-35-55相 對于未治療；#P〈〇. 〇5pDR2/無肽相對于未治療；Φρ〈0. 05DR-a 1相對于未治療。
[0052] 圖16的線圖示出了使用載體（未治療）、修飾的不具有肽的pDR2 (RTL302-5D)、修 飾的具有共價(jià)結(jié)合的mM〇G-35-55的pDR2 (RTL342M)或DR- α 1治療的小鼠的臨床EAE得分 (上部），條狀圖示出了所述小鼠的CDI (下部）。每個治療組由三只小鼠組成。
[0053] 圖17的一系列條狀圖示出了在來自按指示治療的EAE DR2_Tg小鼠的脊髓的 ⑶llb+單核細(xì)胞上的⑶74(圖17A)、ICAM(圖17B)和⑶80(圖17C)的表達(dá)。
[0054] 圖18A的圖示出了通過實(shí)時PCR測量的在分離自三只首次用于實(shí)驗(yàn)的DR*1501_Tg 小鼠的脾細(xì)胞中的ICAM-1的相對表達(dá)，所述小鼠是用10μ g/ml RTL342M或緩沖液治療1 小時，接著在使用或不使用l〇〇ng/ml MIF的情況下進(jìn)行10ng/ml LPS刺激持續(xù)1小時所得 到的。*Ρ〈〇·〇5。
[0055] 圖 18Β 是來自用 50μ g/ml RTL342M 治療的 DR*1501/GFP-Tg 小鼠的 GFP+CDllb+ 細(xì)胞的持續(xù)2個小時的平均追軌跡速度的條狀圖。通過實(shí)時熒光顯微術(shù)對10個慢速拍攝 區(qū)域（5個未治療的區(qū)域，5個治療的區(qū)域）進(jìn)行成像。***p〈0. 0005。
[0056] 圖18C是如圖18B所述分離和治療的細(xì)胞的平均軌跡位移長度的條狀圖。 ***ρ〈0· 0005〇
[0057] 圖18D的兩幅圖示出了來自4個有代表性的區(qū)域的單個細(xì)胞（每個區(qū)域中9-11 個細(xì)胞）的軌跡。細(xì)胞是如圖18Β所述分離和治療所得到的。
[0058] 圖19的MHC II類α鏈氨基酸序列的一部分的示例性比對示出了所述DRAa 1氨 基酸第 38-58 位區(qū)域（加框）。所述序列如下：DR2(SEQ ID N0:110)、DR4(SEQ ID N0:111)、 DP2(SEQ ID N0:112)、DQ2(SEQ ID N0:113)、IAs(SEQ ID N0:114)、IAg7(SEQ ID N0:115) 和 RT1.B(SEQ ID N0:116)。
[0059] 圖20的蛋白質(zhì)印跡的圖像，它證實(shí)了 RTL構(gòu)建體不干擾⑶74抗體與⑶74的結(jié)合。 將DR*1501裂解物與無配體、15μ g的RTL342M或DR-a 1在4°C下進(jìn)行預(yù)孵育15小時。將 所述裂解物加入到吸附至蛋白/微珠的ln-lAb中。對免疫復(fù)合物用1% CHAPS/TEN緩沖 液洗滌4次，然后用TEN洗滌4次。通過在含有2 % SDS的樣品緩沖液中煮沸7-9分鐘而 將物質(zhì)從微珠上洗脫。然后將樣品在10-20%聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行分析，轉(zhuǎn)到PVDF，再用 抗-CD74mAb Ιη-IFITC 探測以檢測 CD74。
[0060] 圖21是一組三幅散點(diǎn)圖，X軸為⑶74表達(dá)，Y軸為⑶lib表達(dá)。在臨床體征發(fā)作 時，每天使用100 μ g RTL342M, 500 μ g DR2- β 1或載體治療患有mM0G35-55/CFA/Ptx誘導(dǎo) 的EAE的DR*1501-Tg小鼠持續(xù)三天。*p〈0. 05。
[0061] 圖22左圖的線圖示出了如圖21所述進(jìn)行治療的小鼠的臨床EAE得分。右圖的條 狀圖為所述相同小鼠的的累積疾病指數(shù)。**P〈〇. 01，***P〈〇. 〇〇1。
[0062] 圖23左圖的線圖示出了在臨床體征發(fā)作時使用載體、?Κ2-β1(50〇μ8)、 DR-a 1(1〇〇μ g)、DR_a 1(300μ g)、DR_a 1(500μ g)、DR_a 1(1〇〇〇μ g)或RTL342M(100y g) 治療的患有mM〇G-35-55/CFA/Ptx誘導(dǎo)的EAE的DR*1501-Tg小鼠的臨床EAE得分。 *ρ〈0· OOTR a 1 相對于載體；δ ρ〈〇· 04RTL342M、DR- a 1 (300 μ g)、DR- a 1 (500 μ g)、 DR- a 1 (1000 μ g)相對于 DR2- β 1 ;#p〈0. 0003RTL342M、DR- a 1 (300 μ g)、DR- a 1 (500 μ g)、 DR- a 1 (1000 μ g)相對于載體；φ p<0.05 DR- a 1 (100 μ g)相對于 DR2- β 1。右圖的條形 圖示出了所述相同動物的累積疾病指數(shù)。*Ρ〈〇. 05 ;**p〈0. OOOTR-a 1(1〇〇μ g)相對于載體 vehicle ;***ρ〈0· 0005 相對于載體。
[0063] 序列表
[0064] 本文及所附序列表中列出的任何核酸和氨基酸序列都用如37C. F. R. § 1. 822所 定義的核苷酸堿基的標(biāo)準(zhǔn)字母縮寫和氨基酸的三字母編碼來顯示。至少在一些情況下，只 顯示了每個核酸序列一條鏈，但是應(yīng)該理解為任何對所顯示的鏈提及均包含了互補(bǔ)鏈。
[0065] SEQ ID N0:1-49為示例性MHC II類α鏈多肽的氨基酸序列。
[0066] SEQ ID Ν0:50-85為示例性抗原決定簇肽的氨基酸序列。
[0067] SEQ ID勵:86-108為來自與？01?2/1^(?35-55結(jié)合的蛋白的肽的氨基酸序列。
[0068] SEQIDN0:109為MHCDRA38-58 位殘基片段的氨基酸序列。
[0069] SEQ ID N0:110-116為MHC II類α鏈氨基酸序列的部分氨基酸序列。 【具體實(shí)施方式】
[〇〇7〇] 先前已經(jīng)證明了包含共價(jià)連接的MHC II類β 1和α 1結(jié)構(gòu)域的有兩個結(jié) 構(gòu)域的MHC構(gòu)建體（β?α 1多肽，也稱為重組Τ細(xì)胞受體配體（RTL))能夠在不存 在共刺激分子的情況下直接與同源Τ細(xì)胞受體相互作用（McMahan et al.，J. Biol. Chem. 278:30961-30970, 2003)，充當(dāng)部分T細(xì)胞受體激動劑，并觸發(fā)欠佳的下游信號傳 導(dǎo)和細(xì)胞因子改變（Burrows et al.，J. Immunol. 167:4386-4395,2001 ;Wang et al.，J. Immunol. 171:1934-1940,2003)。參見，例如，美國專利 No. 6,270,772 ;美國專利公開 No. 2005/0142142和2009/0280135 ;這些文獻(xiàn)以引用的方式納入本文。以前已經(jīng)成功地利 用RTL--包含系在一起的髓磷脂肽--來治療患有實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的小鼠 (Burrows, Curr. Drug Targets Inf lamm. Allergy4:185-193, 2005)，也在多發(fā)性硬化患者 中進(jìn)行的 I 期試驗(yàn)中利用了所述RTL(Yadav et al.，Neurol.74:A293-294,2010;0ffner et al. , J. Neuroimmunol. 231:7-14, 2011) 〇
[0071] 如本文所公開的，目前已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)所述兩個結(jié)構(gòu)域的RTL與復(fù)合物結(jié)合，所 述復(fù)合物包含MHC II類不變鏈（⑶74)、細(xì)胞表面組蛋白和MHC II類本身。具體地，與⑶74 的結(jié)合涉及MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域與CD74之間的相互作用，所述相互作用導(dǎo)致單核細(xì)胞上 CD74的快速的劑量依賴性的下調(diào)。這種下調(diào)是由兩個結(jié)構(gòu)域的RTL和單獨(dú)的α 1結(jié)構(gòu)域引 起的。此外，已經(jīng)出乎意料地發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)使用MHC II類α?結(jié)構(gòu)域進(jìn)行的治療降低了小鼠 中ΕΑΕ的嚴(yán)重程度，表明所述α 1結(jié)構(gòu)域可用作例如用于炎性和/或自身免疫性疾病的治 療組合物。
[0072] 包含MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域而不包含其他MHC II類結(jié)構(gòu)域的治療劑的一個優(yōu)點(diǎn) 是減少了在治療之前對患者進(jìn)行HLA亞型歸類的需求。在HLA-DR的情況下尤其如此，所 述HLA-DR具有單個α鏈多肽，該α鏈多肽與所有DRi3鏈多肽相互作用。因此，認(rèn)為可將 DRa 1結(jié)構(gòu)域多肽給予所有個體而不需要進(jìn)行HLA分型，而目前使用含有DRi3 1結(jié)構(gòu)域的多 肽的治療則需要進(jìn)行HLA分型。對于其他HLA亞型，只需要對所述α結(jié)構(gòu)域等位基因進(jìn)行 亞型歸類，而不需要對α和β等位基因都進(jìn)行亞型歸類。并且，由于所公開的MHC II類 a 1結(jié)構(gòu)域多肽的大小比包含β1結(jié)構(gòu)域的多肽（例如β 1 a 1多肽）更小，因此可以更加 快速和低價(jià)地大量生產(chǎn)所公開的MHC II類a 1結(jié)構(gòu)域多肽，并且可以以合成肽的形式生產(chǎn) 所述a 1結(jié)構(gòu)域的片段，甚至進(jìn)一步提高生產(chǎn)的簡便性和速度。
[〇〇73] 發(fā)現(xiàn)MHC II類β 1 a 1多肽和a 1結(jié)構(gòu)域多肽在治療小鼠中的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性 腦脊髓炎（EAE)中的功效與其意想不到的下調(diào)CD74的能力緊密相關(guān)，如下文的實(shí)施例中所 示。因此，可以利用⑶74水平（例如⑶74表達(dá)或活性）作為在受試者中使用MHC II類 β?α多肽或MHC II類α?結(jié)構(gòu)域多肽進(jìn)行治療的治療功效的標(biāo)記物。類似地，可以使用 ⑶74水平來優(yōu)化使用MHC II類β 1 α 1多肽或MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽對受試者進(jìn)行的 治療（例如優(yōu)化或調(diào)整劑量）。
[0074] I.縮寫
[0075] APC 抗原呈遞細(xì)胞
[0076] CDI 累積疾病指數(shù)
[0077] ΕΑΕ 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎
[0078] HLA 人白細(xì)胞抗原
[0079] ΜΒΡ 髓磷脂堿性蛋白
[0080] MIF 巨噬細(xì)胞游走抑制因子
[0081] MHC 主要組織相容性復(fù)合物
[0082] M0G 髓磷脂少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白
[0083] PBMC外周血單核細(xì)胞
[0084] pMHC 部分 MHC ( β 1 α 1)多肽
[0085] PLP 蛋白脂質(zhì)蛋白
[0086] RTL 重組T細(xì)胞受體配體
[0087] II.術(shù)語
[0088] 除非另有說明，技術(shù)術(shù)語以常規(guī)用法使用。分子生物學(xué)中的常用術(shù) 語的定義可見于 Benjamin Lewin, genes V,由 Oxford University Press 出 版，1994(ISBN0-19-854287-9) ;Kendrew 等（eds. ), The Encyclopedia of Molecular Biology,由 Blackwell Science Ltd.出版，1994(ISBN0-632-02182-9)和 Robert A. Meyers(ed. ), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference,由 VCH Publishers, Inc.出版，1995 (ISBN1-56081-569-8)。
[0089] 除非另有說明，本文所用的所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語的含義與本公開所屬技術(shù)領(lǐng) 域普通技術(shù)人員通常所理解的相同。除非上下文中另有明確說明，單數(shù)術(shù)語"一"、"一個"和 "該"包括復(fù)數(shù)指代物。類似地，除非上下文中另有明確說明，詞語"或"意欲包括"和"。因 此，"包含A或B"意指包括A或B，或A和B。還應(yīng)該理解，給出的核酸或多肽的全部堿基大 小或氨基酸大小以及全部分子量或分子質(zhì)量值是近似值，并用于表述目的。下文描述了適 合的方法和材料，但是與本文描述的方法和材料相似或等價(jià)的方法和材料可以用于本公開 的實(shí)施或測試。
[0090] 本文提到的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻(xiàn)以引用的方式全文納入 本文。本文提到的所有GenBank登錄號以引用的方式全文納入本文，如同在2012年1月6 日存在于GenBank中一樣。如果出現(xiàn)沖突，以本說明書（包括對術(shù)語的解釋）為準(zhǔn)。另外， 材料、方法和實(shí)例僅是示例性的，不意欲進(jìn)行限制。
[0091] 為了便于閱讀本公開的各個實(shí)施方案，提供了以下對具體術(shù)語的解釋：
[0092] 抗原：可在動物體內(nèi)刺激抗體產(chǎn)生或T細(xì)胞應(yīng)答的化合物、組合物或物質(zhì)，包括被 注射或吸收進(jìn)入動物體內(nèi)的組合物。抗原與特異性體液免疫或細(xì)胞免疫的產(chǎn)物反應(yīng)，所述 產(chǎn)物包括由異源免疫原誘導(dǎo)的那些。術(shù)語"抗原"包括所有相關(guān)的抗原表位。"表位"或"抗 原決定簇"是指抗原上B細(xì)胞和/或T細(xì)胞對其作出應(yīng)答的的位點(diǎn)。在一個實(shí)施方案中，當(dāng) 表位與MHC分子一同呈遞時，Τ細(xì)胞對表位作出應(yīng)答。表位可以由連續(xù)的氨基酸或由于蛋 白質(zhì)的三級折疊而并排的不連續(xù)的氨基酸形成。由連續(xù)的氨基酸形成的表位暴露在變性溶 劑后通常仍然存在，而三級折疊形成的表位在用變性溶劑處理后通常不再存在。表位在獨(dú) 特的空間構(gòu)象中一般包括至少3個并且更常見地至少8個氨基酸（例如約8-50或8-23個 氨基酸）。確定表位空間構(gòu)象的方法包括，例如X-射線晶體法和二維核磁共振。
[〇〇93] 抗原可為組織特異性抗原，或疾病特異性抗原。這些術(shù)語不是排他性的，因?yàn)榻M織 特異性抗原也可以是疾病特異性抗原。組織特異性抗原在有限量的組織例如單個組織中表 達(dá)。組織特異性抗原可由多于一種組織表達(dá)，例如，但不限于，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng) 系統(tǒng)中表達(dá)的抗原。
[0094] ⑶74 :也稱為⑶74分子，主要組織相容性復(fù)合物、II類不變鏈或Π 。⑶74是為免 疫應(yīng)答調(diào)節(jié)抗原呈遞的伴侶分子。其還是巨噬細(xì)胞游走抑制因子（MIF)的細(xì)胞表面受體。
[0095] ⑶74的核酸和蛋白質(zhì)序列是公眾可得的。例如，GenBank登錄號ΝΜ_001025158、 ΝΜ_004355和ΝΜ_001025159公開了示例性的人CD74核酸序列，GenBank登錄號 NP_001020329、NP_004346和NP_001020330公開了示例性人CD74氨基酸序列。類似地， GenBank登錄號ΝΜ_001042605和ΝΜ_010545公開了示例性小鼠 Cd74核酸序列，GenBank登 錄號ΝΡ_001036070和NP_034675公開了示例性小鼠 Cd74氨基酸序列。這些序列各自以引 用的方式納入本文，如同在2012年1月6日存在于GenBank中一樣。
[〇〇96] 保守變體：氨基酸殘基被具有類似生物化學(xué)性質(zhì)的另一個氨基酸殘基置換。"保守 的"氨基酸置換為那些基本上不影響或不降低MHC II類多肽（例如MHC II類α 1多肽） 的活性的置換。多肽可以包括一個或多個氨基酸置換，例如1-10個保守置換、2-5個保守置 換、4-9個保守置換，例如1、2、5或10個保守置換。保守置換的具體非限制性實(shí)例包括以下 實(shí)例：
[0097] 原始氨基酸 保守置換 Ala Set Arg Lys Am Gin. His A,sp Glu Cys Set Gin Asn Glu Asp Hh Asn： Gin He Leu. ￥al Leu lie; Val Lys Arg; Glo; Glu Met Leu; lie Phe Met: Leu; Tyr Ser Thr Thr Ser Tip Tyr Tyr Tip: Phe Val lie; Leu
[0098] 對照："對照"是指用于與實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行比較的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品。在一些實(shí)施方案 中，對照為從健康受試者或健康受試者群體獲得的樣品。在其他實(shí)施方案中，對照為歷史對 照或標(biāo)準(zhǔn)參考值或值域（例如以前測試的對照樣品，例如代表基線或正常值的樣品組，例 如健康受試者中CD74表達(dá)或活性的水平）。在其他實(shí)例中，對照來自接受治療前的受試者 (例如在使用MHC II類β 1 α 1多肽或MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽進(jìn)行治療之前的⑶74表 達(dá)水平或活性水平）。
[〇〇99] 結(jié)構(gòu)域：多肽或蛋白質(zhì)的氨基酸序列的不連續(xù)部分。其可等同于特定功能。例如， 組成MHC II類分子的α和β多肽各自都被認(rèn)為具有2個結(jié)構(gòu)域，分別為α 1、α 2和β 1、 β 2。各個結(jié)構(gòu)域一般通過連接氨基酸序列（linking amino acid sequence)來連接。在 一個實(shí)施方案中，通過將序列延伸以包括全部或部分接頭或相鄰結(jié)構(gòu)域，而將整個結(jié)構(gòu)域 序列包括在重組分子中。例如，當(dāng)選擇MHC II類分子的α?結(jié)構(gòu)域時，所選擇序列可從所 述α鏈的第1位氨基酸殘基延伸，通過整個α 1結(jié)構(gòu)域并包括位于約第76-90位氨基酸殘 基的接頭序列（在α 1結(jié)構(gòu)域的羧基末端，α 1和α 2結(jié)構(gòu)域之間）的全部或一部分。各 個MHC分子結(jié)構(gòu)域中的氨基酸的精確數(shù)目根據(jù)哺乳動物的物種而有所不同，以及在種內(nèi)不 同類基因之間也有所不同。選擇用于重組分子中的序列的關(guān)鍵方面是保持結(jié)構(gòu)域功能，而 不是基于氨基酸數(shù)目進(jìn)行精確結(jié)構(gòu)定義。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，即使使用了略少于 所選擇結(jié)構(gòu)域全長氨基酸序列的序列，也可以保持結(jié)構(gòu)域功能。例如，可以刪除α 1結(jié)構(gòu)域 氨基或羰基末端的一些氨基酸，而不會影響結(jié)構(gòu)域功能。
[0100] 可以在本公開提供的MHC II類多肽（例如α 1或β 1 α 1多肽）的背景下評估所 具體選擇的結(jié)構(gòu)域的功能活性，例如Τ細(xì)胞增殖和/或CD74結(jié)合測定。
[〇1〇1] 有效量：指定的化合物足以抑制疾病或病癥的進(jìn)展，或引起疾病或病癥的消退，或 者能夠緩解由疾病或病癥引起的癥狀的劑量或量。例如，有效量可為治療或抑制疾病例如 炎性疾病和/或自身免疫性疾病所必需的公開的MHC分子的量或劑量。在一個實(shí)施方案 中，有效量為單獨(dú)或與一種或多種額外的治療劑一起在受試者中誘導(dǎo)所期望的應(yīng)答（例如 治療或抑制炎性疾病或自身免疫性疾病或其他疾病或病癥）的量。
[0102] 炎癥：由組織損傷引起的局部保護(hù)性應(yīng)答，其起到隔絕致炎因子（inflammatory agent)的作用。炎癥是由血管組織對有害刺激物產(chǎn)生的復(fù)雜生物學(xué)應(yīng)答所精細(xì)安排的，所 述有害刺激物例如病原體、損傷細(xì)胞或刺激劑（irritant)。炎癥是生物體為組織去除有害 刺激物以及起始愈合過程所作出的保護(hù)性努力。炎癥應(yīng)答由白細(xì)胞在全身或在炎癥部位的 局部累積來表征?？赏ㄟ^許多本領(lǐng)域熟知的方法測量炎癥應(yīng)答，所述方法例如白細(xì)胞的數(shù) 目、多形核中性白細(xì)胞（PMN)的數(shù)目、PMN激活程度的測量例如魯米那（luminal)增強(qiáng)的化 學(xué)發(fā)光法，或細(xì)胞因子存在量的測量。原發(fā)性炎癥疾病是由所述炎癥自身引起的疾病。繼 發(fā)性炎癥疾病是由另一疾病引起的炎癥。炎癥可導(dǎo)致許多炎性疾病，所述炎性疾病包括但 不限于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、炎性肺?。ò宰枞苑尾。?、炎性腸病（包括潰瘍性 結(jié)腸炎和克羅恩?。⒀乐懿?、風(fēng)濕性多肌痛、動脈粥樣硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化 病、肖格倫綜合征（Sjogren's Syndrome)、哮喘、變應(yīng)性鼻炎和皮膚病（包括皮肌炎和銀屑 ?。┑鹊?。包括炎性部分的自身免疫性疾?。òǖ幌抻诙喟l(fā)性硬化）也可被認(rèn)為是炎 性疾病。
[0103] 抑制或治療疾?。?抑制"疾病是指抑制疾病的充分發(fā)展，例如在已知易患上疾病 (例如炎性疾病或自身免疫性疾?。┑娜酥?。抑制疾病的范圍可從部分抑制疾病到基本上 完全抑制（預(yù)防）疾病，例如在患有疾病或病癥或具有患上疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者中。 在一些實(shí)例中，術(shù)語"抑制"是指減輕或推遲疾病的發(fā)生和發(fā)展。待給予有效量的藥物化合 物以抑制或治療疾病或病癥的受試者可通過這類病癥的標(biāo)準(zhǔn)診斷技術(shù)（例如基本家族史、 或患上所述疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)因素）來鑒定。與之不同，"治療"是指在疾病或病理狀態(tài)開 始出現(xiàn)之后減輕其征兆或癥狀的治療性介入。
[0104] 分離的："分離的"生物組分（例如核酸、肽或蛋白質(zhì)）已被從該組分存在的生物 體的細(xì)胞中的其他生物組分基本上分離開、單獨(dú)產(chǎn)生或純化出來，所述其他生物組分例如 染色體DNA和RNA和染色體外DNA和RNA以及蛋白質(zhì)。因此，已經(jīng)"分離的"核酸、肽和蛋 白質(zhì)包括通過標(biāo)準(zhǔn)純化方法純化的核酸和蛋白質(zhì)。該術(shù)語還包括通過在宿主細(xì)胞中重組表 達(dá)制備的核酸、肽和蛋白質(zhì)，以及化學(xué)合成的核酸。
[0105] 接頭：共價(jià)連接兩個分子（例如2個多肽）的分子。接頭（例如肽接頭或化 學(xué)接頭）可包含在本公開的重組MHC多肽中，例如在α?結(jié)構(gòu)域與抗原肽之間。通常 長度為2-25個氨基酸的肽接頭序列是本領(lǐng)域公知的，并且包括但不限于Chaudhary et al. (Nature339:394-397，1989)描述的甘氨酸（4)-絲氨酸間隔物。類似地，化學(xué)接頭（例 如巰基鍵或交聯(lián)劑）是本領(lǐng)域公知的。
[0106] MHC II類：MHC II類分子由2個非共價(jià)連接的蛋白質(zhì)--α鏈和β鏈形成。所 述α鏈包含α 1和α 2結(jié)構(gòu)域，所述β鏈包含β1和β 2結(jié)構(gòu)域。通過α 1和β1結(jié)構(gòu) 域的相互作用形成適合抗原進(jìn)入的裂隙。α 2和β 2結(jié)構(gòu)域是跨膜的免疫球蛋白（Ig)折疊 樣結(jié)構(gòu)域，其將α鏈和β鏈錨定到APC細(xì)胞膜中。當(dāng)MHC II類復(fù)合物與抗原連接時（并 且在適當(dāng)?shù)墓泊碳ば盘柕拇嬖谙拢?，MHC II類復(fù)合物刺激CD4T細(xì)胞。CD4T細(xì)胞的主要功 能是起始炎性應(yīng)答，以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中的其他細(xì)胞，以及幫助Β細(xì)胞進(jìn)行抗體合成。
[0107] 可藥用載體：用于本公開的可藥用載體是常規(guī)的。Remington:The Science and Practice of Pharmacy, The University of the Sciences in Philadelphia, Editor, Lip pincott, Williams, &Wilkins, Philadelphia, PA, 21st Edition (2005)描述了適用于本文所 公開的蛋白質(zhì)的藥物遞送的組合物和劑型。
[0108] 多肽：其中單體是通過酰胺鍵連接在一起的氨基酸殘基的聚合物。當(dāng)氨基酸是 α -氨基酸時，可使用L-光學(xué)異構(gòu)體或D-光學(xué)異構(gòu)體，優(yōu)選L-異構(gòu)體。本文使用的術(shù)語 "多肽"、"蛋白質(zhì)"或"肽"意欲涵蓋任何氨基酸序列，包括修飾的序列，例如糖蛋白。術(shù)語 "多肽"或"蛋白質(zhì)"或"肽"特別地意欲包括天然存在的蛋白質(zhì)以及那些通過重組或合成產(chǎn) 生的蛋白質(zhì)。應(yīng)該注意的是，術(shù)語"多肽"或"蛋白質(zhì)"包括天然存在的修飾形式的蛋白質(zhì)， 例如糖基化形式、磷酸化形式或泛素化形式。
[〇1〇9] 純化的：術(shù)語純化的不需要絕對純，而是意圖用作相對的術(shù)語。因此，例如純化的 肽制備物是其中所述肽或蛋白比所述肽或蛋白在其環(huán)境中（例如細(xì)胞中或制備物中）更富 集的制備物。優(yōu)選地，制備物被純化，以使所述蛋白或肽占所述制備物中總肽或蛋白含量的 至少50 %。在一些實(shí)施方案中，純化的制備物含有至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少 85 %、至少90 %、至少95 %或更多的所述蛋白或肽。
[〇11〇] 重組的：重組的核酸或多肽是指具有非天然存在的序列或具有通過人工結(jié)合兩個 或多個原本分離的序列片段來制造的序列的核酸或多肽。所述人工結(jié)合通常通過化學(xué)合成 來實(shí)現(xiàn)或者更常見地通過對分離的核酸片段進(jìn)行人工操作例如通過遺傳工程技術(shù)來實(shí)現(xiàn)。
[0111] 樣品：從受試者中獲得的含有核酸（例如，DNA或RNA (包括mRNA))、蛋白質(zhì)或它們 的組合的生物樣品。實(shí)例包括但不限于外周血、細(xì)針抽吸物（fine needle aspirate)、尿、唾 液、組織活檢、手術(shù)標(biāo)本和尸體剖檢材料。在一個實(shí)例中，樣品包括血液樣品（例如血液；血 液的衍生物和血液的一部分，例如血清）或分離的或純化的細(xì)胞群（例如，T細(xì)胞、B細(xì)胞、 PBMC、淋巴細(xì)胞等，包括部分分離的或部分純化的細(xì)胞群）。
[0112] 序列同一性：兩個核酸序列或兩個氨基酸序列之間的相似性以序列之間的相似性 表示，也被稱為序列同一性。序列同一性通常根據(jù)百分比同一性（或相似性或同源性）來 度量；百分比越高，兩個序列越相似。
[0113] 比對序列以進(jìn)行比較的方法是本領(lǐng)域公知的。多種程序和比對算法描 述于：Smith&Waterman, AdV. Appl. Math. 2:482，1981 ;Needleman&Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970 ；Pearson&Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA85:2444, 1988 ；Higgins& Sharp, Gene, 73:237-244, 1988 ；Higgins&Sharp, Comput. Appl. Biosci. 5:151-153, 1989 ； Corpet et al. , Nucl. Acids Res. 16, 10881-90, 1988 ；Huang et al. , Comput. Appl. Biosci. 8, 155-65, 1992;和 Pearson, Methods Mol. Biol. 24:307-331，1994。Altschul et al. (J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990)提出了對序列比對方法和同源性計(jì)算 的詳細(xì)見解。NCBI的基本局部比對搜索工具（BLAST) (Altschul et al.，J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990)可以從幾個來源獲得，所述來源包括美國國家生物技術(shù)信息中心 (NCBI，Bethesda，MD)和互聯(lián)網(wǎng)，用于與序列分析程序 blastp、blastn、blastx、tblastn 和 tblastx結(jié)合使用。
[0114] 由于遺傳密碼的簡并性，未表現(xiàn)出高度序列同一性的核酸序列卻可以編碼相似的 氨基酸序列。應(yīng)理解，使用這種簡并性可以改變核酸序列，以產(chǎn)生都基本上編碼相同蛋白質(zhì) 的多種核酸分子。
[0115] 受試者：活的多細(xì)胞脊椎生物--一個包括人和非人哺乳動物的類別。
[0116] 111.]\^(：11類〇1多肽
[0117] 本文公開的是包括MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域或其片段并且不包括MHC II類 α2、β 1或β2結(jié)構(gòu)域的分離的多肽。哺乳動物MHC II類α和β鏈蛋白的氨基酸 序列以及編碼這些蛋白的核酸是本領(lǐng)域公知的，并可獲自很多來源（包括GenBank)。 不例性序列提供于 Auffray et al· (Nature308:327-333, 1984)(人 HLA DQa); Larhammar et al· (Proc. Natl. Acad. Sci. USA80:7313-7317，1983)(人 HLA DQβ); Das et al· (Proc. Natl. Acad. Sci. USA80:3543-3547，1983)(人 HLA DR a) ;Tonnelle et al· (ΕΜΒ0 J. 4:2839-2847, 1985)( AHLADRP);Lawranceetal.(Nucl. Acids Res. 13: 7515-7528, 1985)(人 HLA DP a) ;Kelly and Trowsdale (Nucl. Acids Res. 13:1607-1621，1985)(人 HLA DPP) ;Syha et al· (Nucl. Acids Res. 17:3985, 1989) (大鼠 RTl.Ba) ;Syha_Jedelhauser et al· (Biochim.Biophys.Actal089:414_416，1991) (大鼠 RTl.BP);Benoist et al· (Proc. Natl. Acad. Sci. USA80:534-538, 1983)(小鼠 I-A a ) ;Estess et al· (Proc. Natl. Acad. Sci. USA83:3594-3598, 1986)(小鼠 Ι-Αβ)中， 所有這些參考文獻(xiàn)以引用的方式納入本文。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可從公共數(shù)據(jù)庫鑒定其 他MHC II類α和β鏈多肽，所述數(shù)據(jù)庫例如頂GT/HLA數(shù)據(jù)庫（可在萬維網(wǎng)ebi.ac.uk/ imgt/hla/ 上得到）。
[0118] 在一些實(shí)施方案中，公開的多肽包括MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域，例如DR-α l、DP_a 1、 DQ-a 1、DM-a 1或D〇-a 1結(jié)構(gòu)域，或其一部分。在具體的實(shí)施方案中，所述MHC II類a 1 結(jié)構(gòu)域是人HLA-DRA多肽。所述a 1結(jié)構(gòu)域是在哺乳動物MHC II類a鏈蛋白中是明確定 義的。在一些實(shí)例中，MHC II類a鏈包括前導(dǎo)序列，所述前導(dǎo)序列參與運(yùn)輸所述多肽，并 且經(jīng)過蛋白水解而被去除以產(chǎn)生成熟的a多肽。通常認(rèn)為所述a 1結(jié)構(gòu)域包含所述成熟 (經(jīng)蛋白水解處理的）a鏈的約第1-90位殘基。所述MHC II類蛋白中a 1和a 2結(jié)構(gòu)域之 間的天然肽接頭區(qū)的范圍為從所述成熟a鏈的約第76位氨基酸至約第93位氨基酸，這取 決于具體考慮的a鏈。本文提供了示例性的MHC II類a多肽（例如SEQ ID N0:1-49)。 因此，a 1結(jié)構(gòu)域可包括所述成熟a鏈的約第1-90位氨基酸殘基，但本領(lǐng)域普通技術(shù)人員 應(yīng)理解，沒有必要精確界定該結(jié)構(gòu)域的C末端界限（cut-off)，并且，例如，該界限可能存在 于所述成熟a鏈的第70-100位氨基酸殘基之間的任意一點(diǎn)。在一個實(shí)例中，所述al結(jié) 構(gòu)域包括成熟的 MHC II 類 a 結(jié)構(gòu)域的第 1-70、1-71、1-72、1-73、1-74、1-75、1-76、1-77、 卜 78、1-79U-80、1-81U-82、1-83U-84、1-85U-86、1-87U-88、1-89、1-90、1-91U_92、 1-93、1-94、1-95、1-96、1-97、1-98、1-99或1-100位氨基酸。在其他實(shí)例中，a 1結(jié)構(gòu)域包 括全長MHC II類a多肽（例如本文公開的SEQ ID N0:1-49)的約第20-120位殘基（例 如約第 20-110、24-110、24-109、25-100、25-109、26-110、26-109、30-120、32-120、32-115、 26-90、26-85、26-84位殘基，或其他重疊區(qū)域）。在一些實(shí)例中，所述MHC II類al結(jié)構(gòu)域 不包括N末端甲硫氨酸；然而，可以存在N末端甲硫氨酸，例如由于在細(xì)菌、酵母或哺乳動物 系統(tǒng)中表達(dá)。
[0119] 在其他實(shí)例中，所述a 1結(jié)構(gòu)域可包括在5' -和/或3' -末端缺失或添加少許氨 基酸，例如從5' -或3' -末端添加或缺失約1-10個氨基酸，例如添加或缺失1、2、3、4、5、 6、7、8、9或10個氨基酸，或它們的組合（例如從一個末端缺失并且在另一末端添加）。所 述a 1結(jié)構(gòu)域的組成還可在這些參數(shù)之外變化，這取決于哺乳動物物種和考慮的具體a 鏈。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，所述氨基酸序列的精確個數(shù)參數(shù)不如結(jié)構(gòu)域功能（例如， ⑶74結(jié)合或下調(diào)）的保持重要。
[0120] 在其他實(shí)例中，所述a 1結(jié)構(gòu)域多肽包含所述a 1結(jié)構(gòu)域的一部分或由所述a 1 結(jié)構(gòu)域的一部分組成，例如能夠結(jié)合⑶74和/或降低⑶74的表達(dá)或活性的所述a 1結(jié)構(gòu) 域的一部分。例如，所述MHC II類al多肽可包含或由以下組成：成熟HLA-DRA多肽的第 38-58位氨基酸（例如，KKETVWRLEEFGRFASFEAQG ;SEQ ID N0:109)或其一部分（例如其5個 或更多個連續(xù)氨基酸，例如，5-16、8-15、8-10或12-15個連續(xù)氨基酸），或HLA-DP、HLA-DQ、 HLA-DM或HLA-D0多肽的同源區(qū)。示例性比對示于圖19中。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可鑒定其 他MHC II類a結(jié)構(gòu)域多肽的同源區(qū)，例如利用多序列比對工具。
[0121] 在一些實(shí)施方案中，MHC II類a多肽包含SEQ ID N0:1-49所示的氨基酸序列或 由其組成。在另外的實(shí)施方案中，MHC II類a多肽的序列具有與SEQ ID N0:1-49之一所 示的氨基酸序列或其片段至少75%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。 例如，所述多肽的氨基酸序列具有與SEQ ID N0:1-49所示的氨基酸序列之一或其片段至少 85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。可使用可在互聯(lián)網(wǎng)上容易得到的計(jì)算 機(jī)程序和本文示出的氨基酸序列獲得示例性序列。在一些實(shí)例中，所述多肽保持所述MHC II類α 1多肽的功能，例如結(jié)合CD74。示例性MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽包括表1所示的 那些序列。
[0122] 表1.示例性MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域多肽
[0123]
【權(quán)利要求】
1. 一種分離的多肽，包含： 主要組織相容性復(fù)合物（MHC) II類α 1結(jié)構(gòu)域，其中所述多肽不包含MHC II類α 2、 β1或β 2結(jié)構(gòu)域；或 MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域的一部分，其中所述MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域的一部分能夠與⑶74 結(jié)合或降低⑶74的表達(dá)或活性。
2. 權(quán)利要求1的分離的多肽，其中所述α 1結(jié)構(gòu)域包括人MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域。
3. 權(quán)利要求2的分離的多肽，其中所述α 1結(jié)構(gòu)域包括DR-α l、DQ_a l、DP_a 1、 DM-a 1或DO-a 1結(jié)構(gòu)域。
4. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的分離的多肽，其中所述MHC II類a 1結(jié)構(gòu)域包含成熟MHC II 類α鏈的第1-75位氨基酸殘基，或其至少5個連續(xù)的氨基酸。
5. 權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的分離的多肽，其中所述a 1結(jié)構(gòu)域包含來自α鏈的a 1結(jié)構(gòu) 域，所述α鏈包含SEQ ID NO: 1-49的任一條序列所示的氨基酸序列。
6. 權(quán)利要求1的分離的多肽，其中所述MHC II類a 1結(jié)構(gòu)域的一部分包含成熟DR-a 鏈的第38-58位氨基酸殘基或其一部分，或者DP α或DQ α的同源區(qū)。
7. 權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的分離的多肽，還包含抗原決定簇。
8. 權(quán)利要求7的分離的多肽，其中所述抗原決定簇與所述a 1結(jié)構(gòu)域共價(jià)連接。
9. 權(quán)利要求6的分離的多肽，其中所述共價(jià)連接包括肽接頭或化學(xué)交聯(lián)劑。
10. 權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)的分離的多肽，其中所述抗原決定簇包括髓磷脂蛋白肽抗原、 乳糜瀉病相關(guān)的肽抗原、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的肽抗原、葡萄膜炎相關(guān)的肽抗原或I型糖尿 病相關(guān)的肽抗原。
11. 權(quán)利要求10的分離的多肽，其中所述抗原決定簇為包括髓磷脂少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋 白（M0G)肽、髓磷脂堿性蛋白（MBP)肽或蛋白脂質(zhì)蛋白（PLP)肽的髓磷脂蛋白肽抗原。
12. 權(quán)利要求11的分離的多肽，其中所述髓磷脂蛋白肽抗原包括M0G35-55、MBP85-99、 MBP149-171 或PLP139-151。
13. 權(quán)利要求10的分離的多肽，其中所述抗原決定簇為包含胰島素 B: 16-23的I型糖 尿病相關(guān)的肽抗原。
14. 編碼權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的多肽的分尚的核酸分子。
15. -種載體，包含可操作地與啟動子連接的權(quán)利要求14的分離的核酸分子。
16. -種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的分離的多肽或權(quán)利要求14或權(quán)利要 求15的分尚的核酸分子和可藥用載體。
17. 治療或抑制受試者中的疾病的方法，所述方法包括將有效量的權(quán)利要求1-13任一 項(xiàng)的分離的多肽、權(quán)利要求14或權(quán)利要求15的分離的核酸分子、或權(quán)利要求16的藥物組 合物給予所述受試者，從而治療或抑制所述疾病。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中所述疾病包括炎性和/或自身免疫性疾病。
19. 權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性和/或自身免疫性疾病包括多發(fā)性硬化、乳糜瀉 病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、炎性腸病、強(qiáng)直性脊柱炎、肺出血性腎炎綜合征、橋本氏甲狀 腺炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病、葡萄膜炎、視神經(jīng)炎。
20. 權(quán)利要求17的方法，其中所述疾病包括視網(wǎng)膜疾病、中風(fēng)或物質(zhì)成癮。
21. 權(quán)利要求20的方法，其中所述物質(zhì)成癮包括安非他明濫用。
22. 權(quán)利要求17-21任一項(xiàng)的方法，其中所述多肽、核酸或藥物組合物是經(jīng)胃腸外給予 或口服給予的。
23. 權(quán)利要求17-22任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者被給予約10 μ g-約lg的所述多 肽、核酸或藥物組合物。
24. 權(quán)利要求17-22任一項(xiàng)的方法，其中所述治療或抑制所述疾病包括與對照相比時 降低⑶74的表達(dá)或活性。
25. 權(quán)利要求17-24任一項(xiàng)的方法，還包括確定來自所述受試者的樣品中的⑶74表達(dá) 水平或活性水平。
26. 權(quán)利要求24或25的方法，其中所述⑶74表達(dá)水平包括⑶74RNA和/或蛋白表達(dá) 水平。
27. 權(quán)利要求24或權(quán)利要求25的方法，其中所述CD74活性水平包括NF κ B活性、細(xì)胞 增殖、細(xì)胞凋亡、或其中兩種或多種的組合。
28. 權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的方法，其中來自所述受試者的樣品包括單核細(xì)胞、B細(xì)胞、 ⑶llb+細(xì)胞、⑶34+細(xì)胞、⑶4+細(xì)胞、⑶19+細(xì)胞、⑶74+細(xì)胞、或其中兩種或多種的組合。
29. 權(quán)利要求25-28任一項(xiàng)的方法，還包括將所述⑶74表達(dá)水平或活性水平與對照進(jìn) 行比較，并且如果所述CD74表達(dá)水平或活性水平比所述對照高，那么就增加所述分離的多 肽、所述分離的核酸或所述藥物組合物的劑量或頻率。
30. 確定使用多肽治療受試者中的疾病的功效的方法，所述多肽包含MHC II類α?結(jié) 構(gòu)域、MHC II類β 1結(jié)構(gòu)域、或它們的組合，其中所述多肽不包含α 2結(jié)構(gòu)域或β 2結(jié)構(gòu)域， 所述方法包括： 確定來自所述受試者的樣品中的CD74表達(dá)或活性； 將所述CD74表達(dá)水平或活性水平與對照進(jìn)行比較；和 確定治療的功效，其中如果所述CD74表達(dá)水平或活性水平比所述對照低或與所述對 照相等，那么就認(rèn)為所述治療是有效的。
31. 優(yōu)化治療受試者中的疾病的功效的方法，所述方法包括： 給予患有所述疾病的受試者多肽，所述多肽包含MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域、MHC II類β 1 結(jié)構(gòu)域、或它們的組合，其中所述多肽不包含α 2結(jié)構(gòu)域和β 2結(jié)構(gòu)域； 確定來自所述受試者的樣品中的CD74表達(dá)水平或活性水平； 將所述CD74表達(dá)水平或活性水平與對照進(jìn)行比較；和 確定隨后給予所述受試者的多肽的劑量，其中比所述對照高的CD74表達(dá)水平或活性 水平表明應(yīng)該增加所述多肽的劑量，其中比所述對照低或與所述對照相等的CD74表達(dá)水 平或活性水平表明應(yīng)該減少所述多肽的劑量，從而優(yōu)化治療所述受試者中的所述疾病的功 效。
32. 治療或抑制受試者中的疾病的方法，所述方法包括： 給予患有所述疾病的受試者一定劑量的多肽，所述多肽包含MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域、MHC II類β 1結(jié)構(gòu)域、或它們的組合，其中所述多肽不包含α 2結(jié)構(gòu)域和β 2結(jié)構(gòu)域，其中如果 來自所述受試者的樣品中的CD74表達(dá)水平或活性水平比對照高，那么就增加所述多肽的 劑量，或者，如果來自所述受試者的樣品中的CD74表達(dá)水平或活性水平比對照低或與對照 相等，那么就減少所述多肽的劑量。
33. 權(quán)利要求30-32任一項(xiàng)的方法，其中所述⑶74表達(dá)水平包括⑶74RNA和/或蛋白 表達(dá)水平。
34. 權(quán)利要求30-32任一項(xiàng)的方法，其中所述⑶74活性水平包括NF κ B活性、細(xì)胞增 殖、細(xì)胞凋亡、或它們的組合。
35. 權(quán)利要求30-34任一項(xiàng)的方法，其中所述多肽包含： 主要組織相容性復(fù)合物（MHC) II類α 1結(jié)構(gòu)域，其中所述多肽不包含MHC II類α 2、 β1和β 2結(jié)構(gòu)域；或 MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域的一部分，其中所述MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域的一部分能夠與⑶74 結(jié)合或降低⑶74的表達(dá)或活性。
36. 權(quán)利要求30-34的方法，其中所述多肽包含MHC II類β 1和MHC II類α 1結(jié)構(gòu) 域，其中所述α 1結(jié)構(gòu)域的氨基末端與所述β 1結(jié)構(gòu)域的羧基末端共價(jià)連接，并且其中所述 多肽不包含α 2和β 2結(jié)構(gòu)域。
37. 權(quán)利要求35或權(quán)利要求36的方法，其中所述α 1結(jié)構(gòu)域包括人MHC II類α 1結(jié) 構(gòu)域。
38. 權(quán)利要求37的方法，其中所述α 1結(jié)構(gòu)域包括DR-α、DQ_a l、DP_a l、DM_a 1、或 DO-a 1結(jié)構(gòu)域。
39. 權(quán)利要求35-38任一項(xiàng)的方法，其中所述MHC II類a 1結(jié)構(gòu)域包含所述MHC II類 α鏈的第1-75位氨基酸殘基，或其至少5個連續(xù)的氨基酸。
40. 權(quán)利要求37-39任一項(xiàng)的方法，其中所述a 1結(jié)構(gòu)域包含來自α鏈的a 1結(jié)構(gòu)域， 所述α鏈包含SEQ ID NO: 1-49的任一條序列所示的氨基酸序列。
41. 權(quán)利要求37的方法，其中所述MHC II類a 1結(jié)構(gòu)域的一部分包含所述DR-α鏈的 第38-58位氨基酸殘基，或者DP-α或DQ α的同源區(qū)。
42. 權(quán)利要求41的方法，其中所述β 1結(jié)構(gòu)域包括DR、DQ或DP β 1結(jié)構(gòu)域。
43. 權(quán)利要求30-42任一項(xiàng)的方法，其中所述多肽還包含抗原決定簇。
44. 權(quán)利要求43的方法，其中所述抗原決定簇是與所述a 1結(jié)構(gòu)域共價(jià)連接的。
45. 權(quán)利要求44的方法，其中所述共價(jià)連接包括肽接頭或化學(xué)交聯(lián)劑。
46. 權(quán)利要求43-45任一項(xiàng)的方法，其中所述抗原決定簇包括髓磷脂蛋白肽抗原、乳糜 瀉病相關(guān)的肽抗原、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的肽抗原、葡萄膜炎相關(guān)的肽抗原或I型糖尿病相 關(guān)的肽抗原。
47. 權(quán)利要求46的方法，其中所述抗原決定簇為包括髓磷脂少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白 (M0G)肽、髓磷脂堿性蛋白（MBP)肽、或蛋白脂質(zhì)蛋白（PLP)肽的髓磷脂蛋白肽抗原。
48. 權(quán)利要求47的方法，其中所述髓磷脂蛋白肽抗原包括M0G35-55、MBP85-99、 MBP149-171、或 PLP139-151。
49. 權(quán)利要求47的方法，其中所述抗原決定簇是包括胰島素 B: 16-23的I型糖尿病相 關(guān)的肽抗原。
50. 權(quán)利要求30-49任一項(xiàng)的方法，其中來自所述受試者的樣品包括單核細(xì)胞、B細(xì)胞、 ⑶11B+細(xì)胞、⑶34+細(xì)胞、⑶4+細(xì)胞、⑶19+細(xì)胞、⑶74+細(xì)胞、或它們的組合。
51. 權(quán)利要求30-50任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病包括炎性和/或自身免疫性疾病。
52. 權(quán)利要求51的方法，其中所述炎性和/或自身免疫性疾病包括多發(fā)性硬化、乳糜瀉 病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、炎性腸病、強(qiáng)直性脊柱炎、肺出血性腎炎綜合征、橋本氏甲狀 腺炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病、葡萄膜炎、視神經(jīng)炎。
53. 權(quán)利要求30-50任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病包括視網(wǎng)膜疾病、中風(fēng)或物質(zhì)成癮。
54. 權(quán)利要求30-53任一項(xiàng)的方法，還包括將后續(xù)劑量的所述多肽給予所述受試者，其 中所述劑量基于所述⑶74表達(dá)水平或活性水平進(jìn)行調(diào)整。
55. 降低細(xì)胞中的CD74表達(dá)水平或活性水平的方法，所述方法包括將所述細(xì)胞與多肽 接觸，所述多肽包含： 主要組織相容性復(fù)合物（MHC) II類α 1結(jié)構(gòu)域，其中所述多肽不包含MHC II類α 2、 β1和β 2結(jié)構(gòu)域；或 MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域的一部分，其中所述MHC II類α 1結(jié)構(gòu)域的一部分能夠與⑶74 結(jié)合或降低⑶74的表達(dá)或活性。
56. 權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的分離的多肽、權(quán)利要求14或權(quán)利要求15的分離的核酸分 子、或所述藥物組合物在治療或抑制受試者中的疾病中的用途。
57. 權(quán)利要求56的用途，其中所述疾病包括炎性和/或自身免疫性疾病、視網(wǎng)膜疾病、 中風(fēng)或物質(zhì)成癮。
【文檔編號】A61K39/00GK104105503SQ201380004958
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2013年1月4日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月6日
【發(fā)明者】A·A·范登巴克, G·G·伯羅斯, R·梅薩-羅梅羅, G·貝內(nèi)德克, S·安德魯, J·穆尼 申請人:俄勒岡健康科學(xué)大學(xué), 由退伍軍人事務(wù)部代表的美國政府