呋喃并吡啶衍生物的制作方法
【專利摘要】其中R1、R2和R4具有權(quán)利要求1中表明的含義的式I化合物為Syk的抑制劑，并且可尤其用于治療癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和/或系統(tǒng)性狼瘡。
【專利說(shuō)明】映喃并吡啶衍生物
[0001] 發(fā)明背景 本發(fā)明的目的在于發(fā)現(xiàn)具有有價(jià)值性質(zhì)的新化合物，尤其是可用于制備藥物的那些新 化合物。
[0002] 本發(fā)明涉及化合物和化合物在激酶（尤其是酪氨酸激酶）抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的用途，進(jìn)一步涉及包含這些化合物的藥物組合物，并涉及所述化合物用于治 療激酶引起的疾病的用途。
[0003] 因?yàn)榈鞍踪|(zhì)激酶調(diào)節(jié)包括新陳代謝、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和細(xì)胞存活在內(nèi)的幾乎 所有細(xì)胞過(guò)程，因此它們是用于治療性干涉各種疾病狀態(tài)的有吸引力的靶標(biāo)。例如，其中蛋 白質(zhì)激酶起關(guān)鍵作用的細(xì)胞循環(huán)控制和血管發(fā)生為與許多病況相關(guān)的細(xì)胞過(guò)程，所述病況 例如但不限于癌癥、炎性疾病、血管發(fā)生異常和與其相關(guān)的疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、黃斑變性、 糖尿病、肥胖和疼痛。
[0004] 肥大細(xì)胞活化后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵事件之一是酪氨酸激酶Syk的活化。肥大 細(xì)胞通過(guò)釋放促炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子而在哮喘和變應(yīng)性病癥中起重要作用?？乖閷?dǎo)的 Fc ε RJ (IgE的高親和力受體）聚集導(dǎo)致肥大細(xì)胞的活化。這觸發(fā)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件， 其導(dǎo)致包括組胺、蛋白酶、白細(xì)胞三烯和細(xì)胞因子的介質(zhì)的釋放。這些介質(zhì)引起血管通透性 增加、粘液產(chǎn)生、支氣管收縮、組織降解和炎癥，從而在哮喘和變應(yīng)性病癥的病因?qū)W和癥狀 中起重要作用。Syk激酶起引起介質(zhì)釋放的所有后續(xù)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要引發(fā)劑的作用。Syk 激酶在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的重要作用經(jīng)通過(guò)含Syk激酶的SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)完全抑制介質(zhì) 釋放而得到證實(shí)，該蛋白質(zhì)起Syk激酶抑制劑的作用（J. A. Taylor等，Molec. and Cell Biol, 15: 4149-4157 (1995)。
[0005] Syk (脾酪氨酸激酶）是72 KDa的非受體酪氨酸激酶，其屬于尤其包括ZAP70、 ?7讓2、4131、1162、1(01?和冊(cè)1?在內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶亞家族。371^是？^?$(^1?1、11、111、 Fc ε RI、Fc a R)和BCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要調(diào)節(jié)物，并且在整個(gè)造血譜系中表達(dá)，以及在成纖維 細(xì)胞、破骨細(xì)胞、肝細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)。除了 C端激酶結(jié)構(gòu)域之外，Syk還顯 示兩個(gè)SH2結(jié)構(gòu)域和超過(guò)10個(gè)自磷酸化位點(diǎn)1。
[0006] 通過(guò)其兩個(gè)SH2結(jié)構(gòu)域，SYK被特異性募集到磷酸化的ITAM (免疫受體基于酪氨 酸的活化基序，其存在于免疫受體例如Fc γ RI、IIA、IIIA、Fc a R、Fc ε RI和BCR上，由單核 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和Β細(xì)胞表達(dá)）上，并特異性介導(dǎo)由在肥大細(xì)胞、 Β細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、ΝΚ細(xì)胞、DC細(xì)胞、血小板和破骨細(xì) 胞中這些受體的活化觸發(fā)的免疫受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)u。
[0007] BCR交聯(lián)后，Iga /Igi3的細(xì)胞溶質(zhì)尾的ITAM基序上的酪氨酸殘基被Src家族激 酶Lyn磷酸化，形成SYK的對(duì)接位點(diǎn)，SYK從而募集到BCR免疫復(fù)合物上。然后，SYK被Src 家族激酶Lyn磷酸化和活化?；罨螅琒YK將銜接蛋白BLNK磷酸化，這允許其通過(guò)BTK和 PLC γ 2各自的SH2結(jié)構(gòu)域與BTK和PLC γ 2兩者相互作用。SYK磷酸化并由此活化的BTK進(jìn) 而將PLC γ 2磷酸化和活化，導(dǎo)致IP3形成、Ca2+活動(dòng)、PKC和MAPK活化以及隨后的NFAT、AP-1 和NF κ B轉(zhuǎn)錄因子活化，導(dǎo)致活化和表面標(biāo)記表達(dá)、細(xì)胞因子釋放、B細(xì)胞的存活和增殖3。 在肥大細(xì)胞中，變應(yīng)原活化的Fc ε RI被LYN和FYN磷酸化，并募集SYK，其進(jìn)而被LYN磷酸 化并進(jìn)一步自磷酸化，變成完全活化?；罨腟YK將兩個(gè)銜接分子NTAL和LAT磷酸化，產(chǎn) 生針對(duì)含SH2蛋白質(zhì)（例如PLC γ pvav和PI3K的p85調(diào)節(jié)亞基）的更多對(duì)接位點(diǎn)，導(dǎo)致肥 大細(xì)胞脫粒和細(xì)胞因子產(chǎn)生'Syk在肥大細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的重要作用通過(guò)以下可重現(xiàn)的 觀察結(jié)果證實(shí)：不能脫粒的來(lái)自人供體的嗜堿粒細(xì)胞（循環(huán)肥大細(xì)胞）的10-15%具有降低 量的Syk蛋白 5'6。此外，SYK對(duì)破骨細(xì)胞的骨再吸收活性是必需的。破骨細(xì)胞被a v β 3整 聯(lián)蛋白刺激后，SYK最可能被c-Src以DAP-12 / Fc γ RII依賴性機(jī)制磷酸化，導(dǎo)致SPL-76 和Vav3磷酸化和隨后的細(xì)胞骨架重組。SYK缺陷的破骨細(xì)胞是無(wú)活性的，顯示有缺陷的細(xì) 胞骨架重組。與此關(guān)聯(lián)，SYK缺陷胚胎顯示有缺陷的骨骼塊 7'8。
[0008] 在淋巴結(jié)中BCR介導(dǎo)的B細(xì)胞活化以及在關(guān)節(jié)中FcR介導(dǎo)的樹(shù)突細(xì)胞、單核細(xì)胞、 巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞活化是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)期間發(fā)生的細(xì)胞病理生 理機(jī)制的必要組成。此外，破骨細(xì)胞的活化導(dǎo)致骨和軟骨的破壞，這是該病理學(xué)的標(biāo)志 9。因 此，SYK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)應(yīng)在關(guān)節(jié)炎發(fā)生期間在外周和炎癥位點(diǎn)均起關(guān)鍵作用1(1。實(shí)際上，口服可 用的Syk抑制劑R460 (由Rigel開(kāi)發(fā)）引起臨床評(píng)分的顯著改善，并在RA的鼠模型中顯 著降低血清細(xì)胞因子濃度以及骨侵蝕n' 12。此外，該抑制劑顯示在人類的RA II期研究中具 有功效（ACR評(píng)分改善）和良好的耐受13'14'15。
[0009] 在SLE中，B細(xì)胞本質(zhì)上通過(guò)產(chǎn)生自身抗體促進(jìn)發(fā)病，所述自身抗體導(dǎo)致免疫復(fù)合 物形成，刺激Fc受體，并最終導(dǎo)致過(guò)度和慢性的炎癥活化。在SLE的鼠模型中，用Syk抑制 劑治療導(dǎo)致類型轉(zhuǎn)變的（class-switched)生發(fā)中心、邊緣區(qū)、新形成的濾泡B細(xì)胞的數(shù)量 降低，并由此導(dǎo)致疾病緩和效果 18。
[0010] 盡管在胸腺細(xì)胞和天然τ細(xì)胞中TCR信號(hào)通過(guò)細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶ZAP-70傳遞，數(shù) 個(gè)研究表明，分化型效應(yīng)T細(xì)胞例如涉及多發(fā)性硬化（MS)或系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE)的病理 生理學(xué)的那些，顯示TCR ζ鏈減量調(diào)節(jié)和伴隨的TCR/⑶3鏈及其與FcR γ相互作用的增量 調(diào)節(jié)。這些研究表明，在效應(yīng)細(xì)胞中TCR/⑶3/FcRy復(fù)合物募集并活化Syk酪氨酸激酶，而 不是ZAP-70酪氨酸激酶。在TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中該病理學(xué)轉(zhuǎn)變?nèi)堪l(fā)生在效應(yīng)細(xì)胞中，而不是 在天然或記憶T細(xì)胞中 16'17'18。然后并不令人驚訝的是，SYK抑制劑已表明延緩疾病進(jìn)展和 提高SLE鼠模型的存活 17，18，19,2°，21。
[0011] SYK抑制劑亦可用于哮喘、變態(tài)反應(yīng)癥、多發(fā)性硬化和其它疾病例如血小板減少性 紫癜和T或B細(xì)胞淋巴瘤a22_ 35。
[0012] 用Syk抑制劑治療患病前的NZB/W小鼠防止腎病的發(fā)生，其通過(guò)降低腎小球硬化、 腎小管損傷、蛋白尿和BUN水平得到證實(shí) 18。
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[0014] 除了肥大細(xì)胞，Syk還在包括B細(xì)胞在內(nèi)的其它造血細(xì)胞中表達(dá)，其中認(rèn)為Syk 在轉(zhuǎn)導(dǎo)不成熟B細(xì)胞轉(zhuǎn)變成成熟循環(huán)B細(xì)胞所必需的信號(hào)中起重要作用（M. Turner等， Immunology Today, 21: 148 (2000)。已報(bào)道B細(xì)胞在一些炎性病況例如狼瘡（0. T. Chan 等，Immunological Rev, 169: 107-121 (1999)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（A. Gause 等， Biodrugs, 15(2): 73-79 (2001)中起重要作用。
[0015] 還報(bào)道Syk是引起產(chǎn)生神經(jīng)毒性產(chǎn)物的β淀粉樣蛋白和朊病毒原纖維的信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)級(jí)聯(lián)放大的元件（C. Κ. Combs 等，J. Neuroscl, 19: 928-939 (1999)。此外，Syk 抑 制劑阻斷產(chǎn)生這些神經(jīng)毒性產(chǎn)物。因此，呋喃并吡啶衍生物將可能用于治療阿爾茨海默氏 病和相關(guān)的神經(jīng)炎性疾病。另一報(bào)道（Y. Kuno等，Blood, 97，1050-1055 (2001)證實(shí) Syk在惡性進(jìn)展中起重要作用。發(fā)現(xiàn)TEL-Syk融合蛋白轉(zhuǎn)變?cè)煅?xì)胞，這表明其在造血惡性 腫瘤的發(fā)病中起作用。因此，呋喃并吡啶衍生物可用于治療某些類型的癌癥。
[0016] 涉及在造血惡性腫瘤中的其它蛋白酪氨酸激酶包括ABL (ABL1)、ARG (ABL2)、 PDGF β R、PDGFaR、JAK2、TRKC、FGFR1、FGFR3、FLT3 和 FRK。
[0017] Janus激酶（JAK)是由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2組成的酪氨酸激酶家族。JAK在 細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。JAK激酶家族的下游底物包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子 (STAT)蛋白。JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)涉及許多異常免疫反應(yīng)的介導(dǎo)，例如變態(tài)反應(yīng)、哮喘、自身 免疫疾病例如移植物（異體移植物）排斥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肌萎縮性側(cè)索硬化和多發(fā)性硬 化、以及實(shí)體和血液惡性腫瘤例如白血病和淋巴瘤（JAK/STAT途徑的藥物干預(yù)的綜述參見(jiàn) Frank, Mol. Med. 5，432:456 (1999)和 Seidel 等，Oncogene 19，2645-2656 (2000)。 JAK2是已證實(shí)的治療骨髓增生病癥（MPD)的強(qiáng)有力靶標(biāo)，所述病癥包括真性紅細(xì)胞增多 癥（PV)、特發(fā)性血小板增多癥、慢性特發(fā)性骨髓纖維化、伴隨有骨髓纖維化的骨髓樣組織變 性、慢性髓細(xì)胞樣白血病、慢性髓性單核細(xì)胞白血病、慢性嗜酸細(xì)胞性白血病、嗜酸細(xì)胞增 多綜合征和系統(tǒng)性肥大細(xì)胞疾病。
[0018] Fms樣酪氨酸激酶3 (FLT3)，其亦稱為FLK-2 (胎肝激酶2)和STK-I (干細(xì)胞激 酶1)，在造血干細(xì)胞的增殖和分化中起重要作用。FLT3受體激酶在正常造血細(xì)胞、胎盤、 性腺和腦中表達(dá)。然而，該酶在超過(guò)80%的骨髓性患者的細(xì)胞和部分急性成淋巴細(xì)胞性白 血病細(xì)胞中以極高水平表達(dá)。此外，該酶亦可見(jiàn)于淋巴樣胚細(xì)胞危象的慢性髓細(xì)胞樣白血 病患者的細(xì)胞上。已報(bào)道FLT3激酶在30%的急性髓細(xì)胞樣白血?。ˋML)以及在急性成淋 巴細(xì)胞性白血?。ˋLL)的子集中突變（Gilliland等，Blood 100，1532-1542 (2002); Stirewalt 等，Nat. Rev. Cancer, 3，650-665 (2003)。FLT3 的最常見(jiàn)的活化突變是 在近膜區(qū)內(nèi)固有的串聯(lián)復(fù)制，激酶結(jié)構(gòu)域的點(diǎn)突變、插入或缺失較少見(jiàn)。這些突變的FLT3 激酶的一些是組成型活性的。FLT3突變與預(yù)后差有關(guān)（Malempati等，Blood，104，11 (2004)。開(kāi)發(fā)了超過(guò)12個(gè)已知的FLT3抑制劑，并且一些已顯示出針對(duì)AML具有前景的臨 床效果（Levis 等 Int. J. Hematol, 52，100- 107 (2005)。
[0019] 已報(bào)道小分子FLT3抑制劑中的一些在具有FLT3活化突變的細(xì)胞系中有效誘導(dǎo) 細(xì)胞凋亡并延長(zhǎng)在小鼠骨髓細(xì)胞中表達(dá)突變體FLT3的小鼠存活（Levis等，Blood，99， 3885-3891 (2002); Kelly等，Cancer Cell, 1，421-432 (2002); Weisberg等，Cancer Cell, 1，433-443 (2002); Yee 等，Blood, 100，2941-2949 (2002)。
[0020] 具體而言，本發(fā)明涉及化合物，并涉及其中Syk抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)起 作用的化合物的用途。
[0021] 因此，通過(guò)酪氨酸激酶特別是Syk特異性抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子 化合物的合成是合乎需要的，并且是本發(fā)明的目標(biāo)。
[0022] 此外，本發(fā)明的目標(biāo)在于合成用于預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性狼瘡、哮 喘、變應(yīng)性鼻炎、ITP、多發(fā)性硬化、白血病、乳腺癌和惡性黑素瘤的新化合物。令人驚訝的 是，我們已鑒定選擇性抑制SYK、BTK、KDR、Src、Zap70、Fak、Pyk2、Flt3或Jak或者抑制從 這些激酶中選擇的一些的呋喃并吡啶。
[0023] 此外，式I化合物抑制絲氨酸激酶GCN2。
[0024] 實(shí)體瘤的癌癥治療的許多策略集中在盡可能地手術(shù)移除腫瘤塊和隨后通過(guò)放射 療法和用更特異性靶向癌細(xì)胞途徑的抑制劑或者細(xì)胞毒性劑的化學(xué)療法根除任何殘留腫 瘤細(xì)胞。然而，這樣的方法的成功性有限并且經(jīng)常不可持續(xù)。這主要是由于所述細(xì)胞毒性劑 狹窄的治療窗（特異性和副作用）和癌癥細(xì)胞適應(yīng)由細(xì)胞毒性劑或其它抑制劑施加的選擇 壓力的能力造成。獲得對(duì)起始治療的抵抗力的小量腫瘤（干）細(xì)胞的存活可足以播種腫瘤 的再生長(zhǎng)。這些復(fù)發(fā)存在于與初始腫瘤相比更難治療的大多數(shù)病例中。結(jié)果，對(duì)腫瘤細(xì)胞的 更成功祀向可能需要祀向腫瘤細(xì)胞的平行的多重存活和逃脫機(jī)制（Muller & Prendegast 2007)。
[0025] 惡性腫瘤的發(fā)生伴有較多細(xì)胞生理學(xué)的參與。在該過(guò)程期間，癌癥細(xì)胞獲得是 無(wú)限增殖化或?qū)ιL(zhǎng)抑制信號(hào)不敏感基礎(chǔ)的數(shù)個(gè)性質(zhì)。此外，腫瘤細(xì)胞還改變與微環(huán)境 的相互作用等。后者領(lǐng)域包括腫瘤細(xì)胞自免疫監(jiān)督逃脫的策略（Muller & Prendegast 2007)。免疫監(jiān)督限制惡性生長(zhǎng)，但同時(shí)提供觸發(fā)避免免疫反應(yīng)的機(jī)制進(jìn)化的選擇壓力，如 [Dunn等2004]所綜述?；旧弦呀?jīng)常觀察到T細(xì)胞免疫性的去除足以增加腫瘤發(fā)生率 [Shankaran等2001]，并且認(rèn)為免疫逃脫在影響腫瘤潛伏（相對(duì)于進(jìn)展），促進(jìn)侵入和轉(zhuǎn)移， 并且負(fù)面影響治療反應(yīng)。
[0026] 數(shù)個(gè)機(jī)理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，免疫逃脫與腫瘤微環(huán)境內(nèi)的代謝改變具有重要的界面。此 處，介導(dǎo)對(duì)抗原的免疫耐受的重要作用與必需氨基酸色氨酸和精氨酸的分解代謝（分別由 酶吲哚胺2, 3-二加氧酶（ID0)和精氨酸酶I (ARG)進(jìn)行）相關(guān)（Bronte和Zanovello， 2005; Muller 等，2005b; Muller 和 Prendergast, 2007; Munn 和 Mellor, 2007; Popovic 等，2〇〇7)。
[0027] IDO是催化色氨酸降解成犬尿氨酸的單鏈氧化還原酶。IDO不負(fù)責(zé)分解代謝過(guò)量 膳食色氨酸，而是負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)在局部環(huán)境中的色氨酸水平。癌癥患者中色氨酸分解代謝的提 高以顯著改變的色氨酸或分解代謝物血清濃度顯示，并且這與通常在腫瘤和引流淋巴結(jié) 中升高的ID0相關(guān)。根據(jù)數(shù)個(gè)出版物，ID0過(guò)表達(dá)與癌癥預(yù)后差有關(guān)[Okamoto等2005; Brandacher 等，2006]。
[0028] T細(xì)胞似乎優(yōu)先對(duì)ID0活化敏感，使得當(dāng)對(duì)色氨酸饑餓時(shí)，它們不能分開(kāi)，結(jié)果不 能通過(guò)呈遞給它們的抗原活化。Munn和Mellor以及他們的同事揭露，ID0通過(guò)阻抑T細(xì)胞 活化和通過(guò)對(duì)腫瘤抗原產(chǎn)生外周耐受來(lái)調(diào)節(jié)免疫性（Mellor和Munn, 2004)。這些機(jī)制包 括由腫瘤細(xì)胞募集到其直接微環(huán)境或腫瘤-引流淋巴結(jié)的免疫細(xì)胞的破壞。此處，通過(guò)抗 原呈遞細(xì)胞清除的腫瘤抗原被交叉呈遞到適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。除了是直接耐受產(chǎn)生之外，成 熟的DC還具有擴(kuò)繁調(diào)節(jié)T細(xì)胞（Treg)的能力[Moser 2003]。
[0029] 除了色氨酸分解代謝之外，在腫瘤條件的微環(huán)境中精氨酸轉(zhuǎn)變?cè)黾?，并且很多?bào) 道表明，在腫瘤生長(zhǎng)和發(fā)展期間精氨酸酶活化的作用。在腫瘤侵潤(rùn)的骨髓細(xì)胞中，精氨酸通 過(guò)精氨酸酶I (ARG1)、精氨酸酶II (ARG2)轉(zhuǎn)變成脲和鳥(niǎo)氨酸，并且通過(guò)誘導(dǎo)形式的氧化氮 合酶（N0S2)氧化成瓜氨酸和一氧化氮（NO)。
[0030] 在結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌患者中經(jīng)常觀察到ARG活性增加 [Cederbaum 2004]，其與前列腺癌中存在的ARG和NOS過(guò)表達(dá)相關(guān)[Keskinege等2001，Aaltoma等 2001，Wang等2003]。已顯示侵潤(rùn)巨噬細(xì)胞中的ARG活性損害抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)和 CD3受體的表達(dá)。此外，骨髓細(xì)胞相關(guān)腫瘤中ARG和N0S的累積活性可對(duì)最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡 的抗原特異性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抑制信號(hào)[Bronte 2003 a; 2003b]。
[0031] 與IDO和ARG有關(guān)的機(jī)制兩者在檢測(cè)到各自氨基酸濃度的衰竭濃度的點(diǎn) 時(shí)合并。在氨基酸剝奪期間，被稱為一般性控制非不可抑制2 (general control nonderepressible 2 (GCN2))的eIF2激酶EIF2AK4與細(xì)胞內(nèi)聚集的脫酰tRNA相互作 用。因此，認(rèn)為GCN2從自抑制改變成活性構(gòu)象，并進(jìn)一步通過(guò)自磷酸化被活化。然后，唯 一已知的底物蛋白質(zhì)eIF2a被磷酸化并且結(jié)果用于翻譯起始的復(fù)合物被抑制[Harding等 2000]。這減少一般Cap依賴性翻譯起始和由此減少相應(yīng)蛋白質(zhì)產(chǎn)生。另一方面，這誘導(dǎo)應(yīng) 激相關(guān)靶基因主要通過(guò)經(jīng)由活化轉(zhuǎn)錄因子4 (ATF4)的cap非依賴性起始的特異表達(dá)。通 過(guò)表達(dá)相應(yīng)的應(yīng)激反應(yīng)蛋白例如在氨基酸代謝中的酶，細(xì)胞試圖補(bǔ)償特定的細(xì)胞應(yīng)激[Wek 等2006]。如果應(yīng)激持續(xù)，通過(guò)轉(zhuǎn)錄促細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白 (CHOP)，同一途徑轉(zhuǎn)變以促進(jìn)細(xì)胞凋亡[Oyadomari 2004]。已顯示色氨酸饑餓觸發(fā)GCN2 依賴性應(yīng)激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。在T細(xì)胞中，改變eIF2a磷酸化和翻譯起始導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)停止 (Munn等2005)。Sharma等[2007]公布成熟Treg的直接ID0誘導(dǎo)活化和GCN2依賴性活 化。類似地，F(xiàn)allarino 等[2006]發(fā)現(xiàn) CD4+CD25-細(xì)胞至 CD25+FoxP3+ Treg 的 GCN2 依賴 性轉(zhuǎn)變，后者產(chǎn)生IL-10和TGFi3。Rodriguez等[2007]鑒定，通過(guò)色氨酸或精氨酸耗盡的 GCN2途徑的活化連同TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致CD3 ζ鏈減量調(diào)節(jié)、細(xì)胞周期停止和無(wú)反應(yīng)性。
[0032] 重要的是，GCN2途徑不僅對(duì)腫瘤免疫逃脫是重要的，而且在直接調(diào)節(jié)腫瘤存活中 起積極作用。Ye等[2010]發(fā)現(xiàn)在人實(shí)體瘤中前述轉(zhuǎn)錄因子ATF4過(guò)量表達(dá)，這表明在腫瘤 進(jìn)展中的重要作用。氨基酸和葡萄糖剝奪是實(shí)體瘤中存在的典型應(yīng)激，并活化GCN2途徑以 增量調(diào)節(jié)涉及氨基酸合成和運(yùn)輸?shù)腁TF4靶基因。與正常組織相比，在人類和小鼠腫瘤中觀 察到GCN2活化/過(guò)表達(dá)和磷酸-eIF2a增加，并且ATF4或GCN2表達(dá)的廢除顯著抑制體內(nèi) 腫瘤生長(zhǎng)。得出結(jié)論，GCN2-eIF2a-ATF4途徑對(duì)維持腫瘤細(xì)胞中的代謝動(dòng)態(tài)平衡是關(guān)鍵的。
[0033] 現(xiàn)有生物學(xué)通過(guò)適應(yīng)性機(jī)制全面干擾對(duì)制動(dòng)腫瘤免疫逃脫有吸引力的ARG/ID0 途徑。此處GCN2功能的干擾特別引人關(guān)注，因?yàn)槠涫莾煞N途徑即ID0和ARG途徑的合并點(diǎn)， 以及其為直接阻礙腫瘤代謝提供另外的機(jī)會(huì)。
[0034] 數(shù)種途徑抑制劑已被考慮為免疫調(diào)節(jié)劑。這些抑制劑主要針對(duì)ID0或ARG蛋白的 酶功能（Muller和Scherle, 2006)。精氨酸酶抑制劑N-輕基-nor-L-Arg的施用阻斷小鼠 中s. c. 3LL肺癌的生長(zhǎng)[Rodriguez 2004]。貢獻(xiàn)N0的阿司匹林例如NCX 4016 (2-(乙酰 基氧基）苯甲酸3-(硝基氧基甲基）苯基酯）已被報(bào)道干擾骨髓細(xì)胞的抑制酶活性?？诜?給予的N0阿司匹林使荷瘤宿主的免疫狀態(tài)正常化，增加腫瘤抗原特異性T淋巴細(xì)胞的數(shù)量 和功能，并且提高由癌接種引發(fā)的抗腫瘤免疫的預(yù)防和治療有效性（DeSanto 2005)。
[0035] 底物類似物1甲基-色氨酸（1MT)和相關(guān)分子在癌癥背景和其它環(huán)境下已廣泛用 于革巴向IDCLFriberg等（2002)和Uyttenhove等（2003)的研究證實(shí)，1MT可限制過(guò)表達(dá)ID0 的腫瘤的生長(zhǎng)。然而，在數(shù)個(gè)腫瘤模型中1MT不能引起腫瘤消退，暗示著當(dāng)ID0抑制用作單 一療法只有不高的抗腫瘤功效。相比之下，用1MT和多種細(xì)胞毒性化學(xué)治療劑的組合治療 引起建立的MMTV-neu/HER2腫瘤消退，所述腫瘤對(duì)任何單一作用劑療法反應(yīng)差[Muller等 2005a]。治療之前，小鼠的CD4+或CD8+ T細(xì)胞的免疫耗竭廢除該模型中觀察到的組合功 效，證實(shí)1MT間接通過(guò)活化T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫性而起作用的預(yù)期。IDO靶向是1MT作 用所必需的重要證據(jù)由以下論證提供：在遺傳缺乏IDO的小鼠中1MT缺乏抗腫瘤活性[Hou 等，2007]。
[0036] GCN2的抑制使得能夠?qū)被狃囸I誘導(dǎo)的免疫編輯的兩種途徑分支合并，并減少 腫瘤避開(kāi)抑制任一分支的選擇。此外，如上文詳述，GCN2抑制提供干擾腫瘤代謝的機(jī)會(huì)，同 時(shí)可提高單一療法或與其它抗癌方法的組合療法的功效。
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[0038] 本發(fā)明具體涉及抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)經(jīng)由Syk的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的式I化合物，涉及包 含這些化合物的組合物，涉及將其用于治療Syk誘導(dǎo)的疾病和癥狀的方法。
[0039] 式I化合物可進(jìn)一步用于分離和研究Syk的活性或表達(dá)。此外，它們特別適合用 于與Syk活性不調(diào)或阻礙有關(guān)的疾病的診斷方法。
[0040] 宿主或患者可屬于任何哺乳動(dòng)物物種，例如靈長(zhǎng)類物種，特別是人類；嚙齒類動(dòng) 物，包括小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠；兔；馬、牛、狗、貓等。對(duì)實(shí)驗(yàn)研究而言，動(dòng)物模型具有吸引力，只 要是用于治療人類疾病的模型。
[0041] 特定細(xì)胞對(duì)用本發(fā)明化合物治療的易感性可通過(guò)體外試驗(yàn)測(cè)定。通常將細(xì)胞培養(yǎng) 物與各種濃度的本發(fā)明化合物混合一段時(shí)間，所述時(shí)間足以允許活性作用劑例如抗IgM誘 發(fā)細(xì)胞反應(yīng)例如表面標(biāo)志物表達(dá)，通常在約1小時(shí)和1周之間?？墒褂脕?lái)自血液或活檢樣 本的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)。所表達(dá)的表面標(biāo)志物的量通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)使用識(shí)別該標(biāo)志物 的特異性抗體來(lái)評(píng)價(jià)。
[0042] 劑量根據(jù)所用的具體化合物、具體疾病、患者狀況等而改變。治療劑量通常足以顯 著降低靶組織中不需要的細(xì)胞群，同時(shí)患者的成活力得以維持。治療通常持續(xù)直到發(fā)生顯 著降低（例如細(xì)胞負(fù)荷降低至少約50%)，并且可以持續(xù)直到機(jī)體內(nèi)基本上不再有不需要的 細(xì)胞被檢測(cè)到。
[0043] 對(duì)于鑒定信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和檢測(cè)各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之間的相互作用，許多科學(xué)家已 開(kāi)發(fā)了合適的模型或模型系統(tǒng)，例如細(xì)胞培養(yǎng)模型（例如Khwaja等，ΕΜΒ0，1997，16， 2783-93)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型（例如 White 等，Oncogene, 2001，20，7064-7072)。對(duì)于 確定信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)中的某些階段，可利用相互作用化合物以調(diào)節(jié)信號(hào)（例如Stephens等， Biochemical J.，2000，351，95-105)。本發(fā)明化合物還可在動(dòng)物和/或細(xì)胞培養(yǎng)模型中 或在本申請(qǐng)?zhí)峒暗呐R床疾病中用作測(cè)試激酶依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的試劑。
[0044] 激酶活性的測(cè)量是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)。使用底物例如組蛋白（例如 Alessi等，F(xiàn)EBS Lett. 1996，399，3，333-338頁(yè)）或堿性髓磷脂蛋白測(cè)定激酶活性的 一般性測(cè)試系統(tǒng)，描述于文獻(xiàn)（例如 Campos-Gonzdilez，R.和 Glenney, Jr.，J. R. 1992， J. Biol. Chem. 267，14535 頁(yè)）。
[0045] 對(duì)于鑒定激酶抑制劑，可利用各種測(cè)定系統(tǒng)。在閃爍迫近測(cè)定法（scintillation proximity assay) (Sorg 等，J. of. Biomolecular Screening, 2002, 7, 11-19)和閃 光板（flashplate)測(cè)定法中，測(cè)量用γΑΤΡ對(duì)作為底物的蛋白質(zhì)或肽的放射性磷酸化。在 抑制化合物的存在下，可檢測(cè)到放射性信號(hào)減少或根本沒(méi)有。此外，均相時(shí)間分辨熒光共 振會(huì)泛量傳遞（homogeneous time-resolved fluorescence resonance energy transfer, HTR-FRET)和熒光偏振（FP)技術(shù)適宜作為測(cè)定方法（Sills等，J. of Biomolecular Screening, 2002， 191-214)。
[0046] 其它非放射性ELISA測(cè)定法使用特異性磷酸-抗體（磷酸-AB)。磷酸-AB僅結(jié) 合磷酸化底物?？赏ㄟ^(guò)化學(xué)發(fā)光使用第二過(guò)氧化物酶綴合的抗山羊抗體檢測(cè)該結(jié)合（Ross 等，2002，Biochem. J.)。 現(xiàn)有技術(shù)
[0047] 其它雜環(huán) Syk 抑制劑描述于 W02008/118823、W02009/136995、W0 2010/027500。
[0048] 發(fā)明簡(jiǎn)述 本發(fā)明涉及式I化合物和其藥學(xué)上可用的溶劑合物、鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體（包 括其以所有比例的混合物）： 其中
【權(quán)利要求】
1. 式I的化合物和其藥學(xué)上可接受的溶劑合物、鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括 其以所有比例的混合物，
其中 R1 表示 Ar1 或 Het1, R2 表示 Ar2、Het2、NH (CH2) nAr2、0 (CH2) nAr2、NH (CH2) nHet2、NHCONHA、CONH2 或 N3， R4表示H或F， Ar1 表示苯基，其是未取代的或被 Hal、A、[C(R3)2]nCN、（CH2) nOH、（CH2)nOA、（CH2)nCOOH、 (CH2) nCOOA、S (0) _/、（CH2) nHet3、CON (R3) 2、CONH (CH2) nC (R3) 2N (R3) 2 和 / 或 CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3] (CH2)p0R3 -、二或三取代， Ar2 表示苯基，其是未取代的或被 A、Hal、（CH2)n0H、（CH2)n0A、（CH 2)nNH2、（CH2)nNHA、 (CH2)nNA2、S02NH2、S0 2NHA、S02NA2、（CH2)nC0NH 2、（CH2)nC0NHA、（CH2)nC0NA 2、[C(R3)2]nN(R3) 2、 CONH (CH2) PCH [ (CH2) nN (R3) 2] (CH2) P0R3、CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3] NHS02A、CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3]0R3、C0NH(CH2)p[(CH(0R 3)]pCH20R3、CONHR4、CONH(CH 2)pCH[(CH2)nN(R3) 2]Cyc、C0NH(CH2) nC (R3) 2N (R3) 2 和 / 或 CONHC (R3) 2 (CH2) P0R3 -、二或三取代， Het1表示苯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基或吲唑基，其各自是未取代的或被A -取代， Het2表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、嗎啉基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、 噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、四唑基、噁二唑基、噻二唑 基、噠嗪基、吡嗪基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、呋喃并吡啶基或吲唑基，其各自是未取 代的或被他1、順(〇1 2)丨6七4、六、（〇12)110!1、（〇12) 11(^、（〇12)11順2、（〇12) 1^祖、（〇12)11隱2和/或 =0-、二或三取代， Het3表示四唑基或噁二唑基，其各自是未取代的或被A、（CH2)nNH 2、（CH2)nNHA、（CH2)nNA 2 和/或=0-或二取代， Het4表示哌啶基或四氫呋喃基，其各自是未取代的或被A或NH2 -取代， R3表示Η或具有1、2、3或4個(gè)C原子的烷基， Α表示非支鏈的或支鏈的具有1-10個(gè)C原子的烷基，其中1-7個(gè)Η原子被F和/或C1 置換，和/或其中一個(gè)或兩個(gè)非鄰近的CH2基團(tuán)可被0和/或ΝΗ置換， 或者 具有3-7個(gè)C原子的環(huán)狀烷基，其可以是未取代的或被OH、NHC0A或NH2 -取代， Cyc表示具有3-7個(gè)C原子的環(huán)狀烷基， m表示0、1或2， η 表示 0、1、2、3 或 4， Ρ表示1、2、3或4。
2. 權(quán)利要求1的化合物和其藥學(xué)上可接受的溶劑合物、鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其以所有比例的混合物，所述化合物選自

3.權(quán)利要求1-2的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體的制備方法，其特征在于 a)將式Ila的化合物與式Ilia的化合物以Suzuki型偶聯(lián)進(jìn)行反應(yīng)，得到式IVa的化 合物
其中R4具有權(quán)利要求1中表明的含義； f-L Ilia 其中R1具有權(quán)利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團(tuán)；
其中R1和R4具有權(quán)利要求1中表明的含義； 隨后將式IVa的化合物與式Va的化合物以Suzuki型偶聯(lián)進(jìn)行反應(yīng)， R2-L Va 其中R2具有權(quán)利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團(tuán)； 或者 b) 將式lib的化合物與式Va的化合物以Suzuki型偶聯(lián)進(jìn)行反應(yīng)，得到式IVb的化合 物，
其中R4具有權(quán)利要求1中表明的含義； R2-L Va 其中R2具有權(quán)利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團(tuán)；
其中R2和R4具有權(quán)利要求1中表明的含義； 隨后將IVb的化合物與式Ilia的化合物以Suzuki型偶聯(lián)進(jìn)行反應(yīng)， RiL Ilia 其中R1具有權(quán)利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團(tuán)； 或者 c) 通過(guò)用溶劑分解劑或氫解劑處理將其自其官能衍生物之一釋放， 和/或 將式I的堿或酸轉(zhuǎn)化成其鹽之一。
4. 藥物，其包含：至少一種式I的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變 異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其以所有比例的混合物；和任選的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑 或溶媒。
5. 式I的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體的藥 物，包括其以所有比例的混合物，其用于治療和/或預(yù)防炎性病況、免疫學(xué)病況、自身免疫 病況、變應(yīng)性病況、風(fēng)濕性病況、血栓形成病況、癌癥、傳染病、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)炎性疾 病、心血管疾病和代謝病況，該方法包括給予有需要的受試者有效量的式I化合物。
6. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防癌癥，其中所述待治療的癌癥是實(shí)體 瘤或血液和免疫系統(tǒng)腫瘤。
7. 權(quán)利要求6的化合物，其中所述實(shí)體瘤源自于上皮、膀胱、胃、腎、頭和頸、食道、宮 頸、甲狀腺、腸、肝、腦、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系統(tǒng)、胃、喉、骨包括軟骨肉瘤和尤因肉瘤、 生殖細(xì)胞包括胚胎組織腫瘤和/或肺的腫瘤，源自于單核細(xì)胞性白血病、肺腺癌、小細(xì)胞性 肺癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維瘤、血管肉瘤、乳腺癌和/或惡性黑素瘤。
8. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性狼瘡、哮 喘、多發(fā)性硬化、骨關(guān)節(jié)炎、缺血性損傷、巨大細(xì)胞動(dòng)脈炎、炎性腸病、糖尿病、囊性纖維化、 銀屑病、舍格倫綜合征和移植器官排斥的疾病。
9. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防選自阿爾茨海默病、唐氏綜合征、伴有 Dutch型淀粉樣變性的遺傳性腦出血、大腦淀粉樣血管病、克雅病、額顳癡呆、亨廷頓病、帕 金森病的疾病。
10. 權(quán)利要求5的化合物，其用于治療和/或預(yù)防選自利什曼原蟲(chóng)、分枝桿菌包括麻風(fēng) 分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌和/或鳥(niǎo)分枝桿菌、利什曼原蟲(chóng)、痕原蟲(chóng)、人免疫缺陷病毒、Epstein Barr病毒、單純皰疫病毒、丙型肝炎病毒的疾病。
11. 藥物，其包含：至少一種式I的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物和立 體異構(gòu)體的藥物，包括其以所有比例的混合物；和至少一種另外的藥物活性成分。
12. 由以下的分開(kāi)包裝組成的套裝（藥盒）： (a) 有效量的式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、鹽和立體異構(gòu)體，包括 其以所有比例的混合物， 和 (b) 有效量的另外的藥物活性成分。
【文檔編號(hào)】A61P33/00GK104114558SQ201380010420
【公開(kāi)日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2013年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月21日
【發(fā)明者】L.布格多夫, T.羅斯, C.多伊奇 申請(qǐng)人:默克專利股份公司