用于調(diào)節(jié)放射敏感性的her3抑制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及HER-3的抑制劑與放射治療組合用于治療過度增生性疾病的用途。
【專利說明】用于調(diào)節(jié)放射敏感性的HER3抑制劑
[0001]描述
[0002]本發(fā)明涉及HER-3的抑制劑與放射治療組合用于治療過度增生性疾病的用途。
[0003]人表皮生長因子受體3 (HER-3，也稱作ErbB3)是一種受體蛋白酪氨酸激酶并屬于受體蛋白酪氨酸激酶的表皮生長因子受體(EGFR)亞家族，所述亞家族還包括HER-1(也稱作EGFR)、HER-2和HER-4 (Plowman等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.87 (1990)，4905-4909 ；Kraus 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86 (1989)，9193-9197 ;和 Kraus 等人，Proc.NatI.Acad.Sci.U.S.A.90(1993)，2900-2904)。如同原型表皮生長因子受體，跨膜受體HER-3由一個胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(ECD)、一個在ECD內(nèi)部的二聚化結(jié)構(gòu)域、一個跨膜結(jié)構(gòu)域、一個胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域(TKD)和一個C末端磷酸化結(jié)構(gòu)域組成。
[0004]配體神經(jīng)生長因子(HRG)與HER-3的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合并且通過促進(jìn)與其他人表皮生長因 。HER家族成員之間的二聚體形成擴展了 HER-3的信號傳導(dǎo)潛力并且是用于信號多樣化和信號放大的手段。例如，HER-2/HER-3異二聚體在HER家族成員之間誘導(dǎo)最重要的促有絲分裂信號之一。
[0005]已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HER-3在幾個類型的癌癥如乳腺癌、胃腸癌和胰腺癌中過量表達(dá)。有趣地，已經(jīng)顯示在HER-2/HER-3表達(dá)和從非浸潤期進(jìn)展至浸潤性期之間的相關(guān)性(Alimandi等人，OncogenelO, 1813-1821 ；deFaz1 等人，Cancer87, 487-498 ；Naidu 等人，Br.J.Cancer78, 1385-1390)。因此，需要干擾HER-3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的藥物。已經(jīng)報道鼠HER-3抗體或嵌合 HER-3 抗體，如在 US5968511、US5480968 和 WO 03013602 中。
[0006]本發(fā)明的目的是提供基于抑制HER-3治療過度增生性疾病，尤其癌癥，這比從現(xiàn)有技術(shù)已知是更有效的。通過使用與放射治療組合用于治療過度增生性疾病的HER-3抑制劑，解決這個目的。
[0007]根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及HER-3的抑制劑與放射治療組合用于治療過度增生性疾病的用途。
[0008]HER-3抑制劑和放療法組合的治療導(dǎo)致協(xié)同效應(yīng)，所述協(xié)同效應(yīng)超過單獨用HER-3抑制劑或放療法治療的優(yōu)勢。
[0009]本發(fā)明的HER-3抑制劑根據(jù)可以在蛋白質(zhì)水平或在核酸水平發(fā)揮作用。在核酸水平發(fā)揮作用的抑制劑的例子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且包含反義分子、RNAi分子和/或核酶。
[0010]在蛋白質(zhì)水平發(fā)揮作用的抑制劑的例子是抗HER-3抗體或其抗原結(jié)合片段以及支架蛋白。作為抗HER-3抗體或其片段、尤其其抗原結(jié)合片段的抑制劑代表本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“抗體片段”包含前文提到的抗體的任何部分，優(yōu)選地其抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)。
[0011]如本文所用，“支架蛋白”表示具有抗體樣結(jié)合活性的蛋白質(zhì)或抗體即抗HER-3抗體。在本發(fā)明的上下文中，如本文所用，術(shù)語“支架蛋白”意指具有其中高度可耐受氨基酸插入、置換或缺失的暴露表面區(qū)域的多肽或蛋白質(zhì)?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明使用的支架蛋白的例子是來自金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的蛋白A、來自大菜粉蝶(Pierisbrassicae)的膽汁三烯結(jié)合蛋白或其他脂籠蛋白、錨蛋白重復(fù)序列蛋白和人纖連蛋白(綜述于Binz和Pliickthun, Curr Opin B1technol.，459-69)。此外，具有抗體樣結(jié)合活性的支架蛋白可以源自含有支架結(jié)構(gòu)域的接納體多肽(acceptor polypeptide),其中所述接納體多肽可以用供體多肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域移植，以賦予供體多肽結(jié)合到含有支架結(jié)構(gòu)域的接納體多肽上的特異性。
[0012]本發(fā)明的抗HER-3抗體可以是單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。特別優(yōu)選使用單克隆抗體。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉怎樣產(chǎn)生這類抗體。單克隆抗體可以例如通過任何合適的方法如Kiihler和Millstein 的方法(Nature, 1975 ；256:495-497)產(chǎn)生。
[0013]本發(fā)明的抗體片段根據(jù)優(yōu)選地是Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、雙體抗體或單鏈抗體分子?！癋ab片段”因在重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基端處附加額外幾個殘基(包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個或多個半胱氨酸)而與“Fab’片段”不同?！癋(ab’)2片段“最初作為一對在其之間具有鉸合部半胱氨酸的“Fab’片段”產(chǎn)生。根據(jù)本發(fā)明，“Fv片段”是含有完整抗原識別和結(jié)合位點的最小抗體片段。
[0014]根據(jù)本發(fā)明使用的抗體可以優(yōu)選地是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體類型。
[0015]抗體的人源化形式代表又一個優(yōu)選的實施方案并且可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法如人源化或CDR移植來產(chǎn)生。用于產(chǎn)生人源化抗體的替代性方法是本領(lǐng)域熟知的并且例如在EP O 239 400和WO 90/07861中描述。人抗體避免了與異種抗體(例如擁有小鼠或大鼠可變區(qū)和/或恒定區(qū)的抗體)相關(guān)的某些問題。單克隆人源化抗HER-3抗體代表本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案。
[0016]根據(jù)又一個優(yōu)選的實施方案，該抗體針對HER-3的胞外結(jié)構(gòu)域?？笻ER-3抗體優(yōu)選地與HER-3胞外部分中的至少一個表位相互作用。所述表位優(yōu)選地位于作為氨基端結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域L1(AA19-184)中、位于兩個半胱氨酸豐富結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域SI (AA185-327)和S2 (AA500-632)中或位于旁側(cè)分布有這兩個半胱氨酸豐富結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域L2 (328-499)中。所述表位也可以位于結(jié)構(gòu)域的任何組合中，如，但不限于，由LI和S2的部分構(gòu)成的表位。
[0017]所用的抗HER-3抗體可以與效應(yīng)子基團(tuán)和/或標(biāo)記基團(tuán)偶聯(lián)。相應(yīng)偶聯(lián)和/或標(biāo)記技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的?？梢赃B接這類效應(yīng)子基團(tuán)和/或標(biāo)記基團(tuán)用于藥物打靶、成像應(yīng)用和/或診斷性應(yīng)用。
[0018]如本文所用，術(shù)語“標(biāo)記基團(tuán)”指可檢測標(biāo)記，例如放射標(biāo)記的氨基酸或可以通過標(biāo)記的抗生物素蛋白檢測到的生物素基部分(例如與熒光標(biāo)記結(jié)合的鏈霉親和素或可以通過光學(xué)方法或比色方法檢測到的酶活性)。合適的標(biāo)記基團(tuán)的例子包括但不限于以下:放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、9°Y、99Tc、mIn、1251、131I)、熒光基團(tuán)(例如FITC、羅丹明、鑭系元素磷光體)、酶促基團(tuán)(例如辣根過氧化物酶、(β_半乳糖苷酶、螢光素酶、堿性磷酸酶)、化學(xué)發(fā)光基團(tuán)、生物素基團(tuán)或由第二(secondary)報道分子識別的預(yù)定多肽表位(例如亮氨酸拉鏈對序列、第二抗體結(jié)合位點、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、表位標(biāo)簽)。在某些方面，可能想要的是標(biāo)記基團(tuán)由各種長度的間隔臂連接以減少潛在的空間位阻。
[0019]可選地，根據(jù)本發(fā)明使用的抗HER-3抗體可以與效應(yīng)子基團(tuán)偶聯(lián)。如本文所用，術(shù)語“效應(yīng)子基團(tuán)”指細(xì)胞毒性基團(tuán)如放射性同位素或放射性核素、毒素、治療性基團(tuán)或本領(lǐng)域已知的其他效應(yīng)子基團(tuán)。合適的效應(yīng)子基團(tuán)的例子是放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、9°Y、99Tc、mIn、1251、mI)、刺孢霉素、海兔毒素(dolastatin)類似物如澳瑞司他汀、和化療藥如格爾德霉素及美坦辛衍生物，包括DMl。在某些方面，可能想要的是效應(yīng)子基團(tuán)由各種長度的間隔臂連接以減少潛在的空間位阻。
[0020]除抑制HER-3之外，根據(jù)又一個優(yōu)選的實施方案可以通過用上文所概述的相應(yīng)效應(yīng)子基團(tuán)如放射性同位素或放射性核素標(biāo)記抗HER-3抗體，實施或支持放射治療。
[0021]另外，所用的HER-3抑制劑和尤其根據(jù)本發(fā)明使用的抗HER-3抗體可以進(jìn)一步表征，在于它與HER-3的結(jié)合減少HER-3介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。根據(jù)本發(fā)明，HER-3介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)減少可以例如由導(dǎo)致至少部分HER-3分子從細(xì)胞表面消失的HER-3下調(diào)引起或由穩(wěn)定化細(xì)胞表面上的HER-3處于基本上無活性的形式(即，與非穩(wěn)定化形式相比展示出較低信號傳導(dǎo)的形式)引起?？蛇x地，也可以通過例如以下方式引起HER-3介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)減少:減少或抑制配體或HER家族的另一個成員與HER-3的結(jié)合、GRB2與HER-2的結(jié)合或GRB2與SHC的結(jié)合、抑制受體酪氨酸磷酸化、AKT磷酸化、PYK2酪氨酸磷酸化或ERK2磷酸化或減少腫瘤侵入性?？蛇x地，也可以通過例如以下方式引起HER-3介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)減少:減少或抑制與其他HER家族成員形成含有HER-3的二聚體。連同其他例子，一個例子可以是減少或抑制HER3-EGFR蛋白質(zhì)復(fù)合物形成。
[0022]優(yōu)選的根據(jù)本發(fā)明使用的抗HER-3抗體在PCT/EP2006/012632中描述。
[0023]根據(jù)一個特別優(yōu)選的實施方案，該抗體包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含選自以下 CDR 的至少一個 CDR: (a)如 SEQ ID NOs: 2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 中所示的 CDRHl ； (b)如 SEQ ID NOs: 2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 中所示的 CDRH2 ;和(c))如 SEQID N0s:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、I12、I16、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 中所示的CDRH3
[0024]或與根據(jù)(a)至(C)的CDR 之一顯示至少 90 %、92 %、94 %、96 %、97 %、98 %、99 %
同源性的重鏈氨基酸序列。
[0025]根據(jù)又一個優(yōu)選的實施方案，該抗體包含輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含選自以下 CDR 的至少一個CDR: (d)如 SEQ ID N0s:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的 CDRLl ;(e)如 SEQ ID NOs:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的 CDRL2 ;和(f)如 SEQ ID NOs:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的 CDRL3,或
[0026]與根據(jù)(d)至(f)的CDR 之一顯示至少 90 %、92 %、94 %、96 %、97 %、98 %、99 % 同源性的輕鏈氨基酸序列。
[0027]在本發(fā)明的又一個實施方案中，該抗體包含了包含選自以下⑶R的至少一個⑶R的重鏈氨基酸序列:
[0028](a)如 SEQ ID NOs:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226和230中所示的CDRHl ；
[0029](b)如 SEQ ID NOs:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226和230中所示的CDRH2 ;和
[0030](c)如 SEQ ID NOs:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226和230中所示的CDRH3，
[0031]和包含選自以下⑶R的至少一個⑶R的輕鏈氨基酸序列
[0032](d)如 SEQ ID NOs:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的CDRLl ；
[0033](e)如 SEQ ID NOs:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的⑶RL2:和
[0034](f)如 SEQ ID NOs:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的CDRL3。
[0035]根據(jù)又一個優(yōu)選的實施方案，該抗體包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3。
[0036]根據(jù)又一個優(yōu)選的實施方案，根據(jù)本發(fā)明使用的抗HER-3抗體包含選自SEQ IDN0s:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、I12、I16、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 的重鏈氨基酸序列。
[0037]又一個優(yōu)選的實施方案涉及抗HER-3抗體的用途，所述抗HER-3抗體包含選自SEQID N0s:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 的輕鏈氨基酸序列。
[0038]根據(jù)又一個優(yōu)選的實施方案，根據(jù)本發(fā)明使用的抗HER-3抗體包含選自SEQ IDN0s:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、I12、I16、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 的重鏈氨基酸序列;和選自 SEQ ID N0s:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 的輕鏈氨基酸序列。
[0039]特別優(yōu)選的實施方案涉及抗HER-3抗體，所述抗HER-3抗體包含SEQ ID NO:42的重鏈氨基酸序列和SEQ ID NO:44輕鏈氨基酸序列，或包含SEQ ID N0:54的重鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 56輕鏈氨基酸序列，或包含SEQ ID NO: 70的重鏈氨基酸序列和SEQ IDNO:72輕鏈氨基酸序列。
[0040]特別地，抗HER-3抗體選自Ul-1抗體、U1-2抗體、U1-3抗體、U1-4抗體、U1-5抗體、U1-6抗體、U1-7抗體、U1-8抗體、U1-9抗體、U1-10抗體、Ul-1l抗體、U1-12抗體、U1-13抗體、U1-14抗體、U1-15抗體、U1-16抗體、U1-17抗體、U1-18抗體、U1-19抗體、U1-20抗體、U1-21抗體、U1-22抗體、U1-23抗體、U1-24抗體、U1-25抗體、U1-26抗體、U1-27抗體、U1-28 抗體、U1-29 抗體、U1-30 抗體、U1-31 抗體、U1-32 抗體、U1-33 抗體、U1-34 抗體、U1-35抗體、U1-36抗體、U1-37抗體、U1-38抗體、U1-39抗體、U1-40抗體、U1-41抗體、U1-42抗體、U1-43抗體、U1-44抗體、U1-45抗體、U1-46抗體、U1-47抗體、U1-48抗體、U1-49抗體、U1-50 抗體、U1-51 抗體、U1-52 抗體、U1-53 抗體、U1-55.1 抗體、U1-55 抗體、U1-57.1 抗體、U1-57抗體、U1-58抗體、U1-59抗體、U1-61.1抗體、U1-61抗體、U1-62抗體或具有所述抗體的至少一條重鏈或輕鏈的抗體。特別優(yōu)選的是抗體Ul-49 (SEQ ID N0.42/44)、U1_53(SEQID NO:54/56)和Ul-59 (SEQ ID NO: 70/72)或具有所述抗體的至少一條重鏈或輕鏈的抗體?？贵wU1-59是特別優(yōu)選的。
[0041]根據(jù)本發(fā)明待治療的疾病是過度增生性疾病。這種過度增生性疾病優(yōu)選地是癌癥，尤其鱗狀細(xì)胞癌。
[0042]優(yōu)選地根據(jù)本發(fā)明治療的癌癥的例子選自乳腺癌、胃腸道癌、胰癌癥、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、膀胱癌、膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、睪丸癌、軟組織肉瘤、頭頸癌、表達(dá)或過量表達(dá)HER-3的其他癌癥和腫瘤轉(zhuǎn)移形成。
[0043]根據(jù)一個特別優(yōu)選的實施方案，癌癥是肺部、頭部和/或頸部的鱗狀細(xì)胞癌。
[0044]本發(fā)明的放射治療優(yōu)選地選自熱療法、外束放射療法、近距離放射療法和/或放射性同位素療法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以決定何種放射治療并且特別地決定哪個種類的將用于特定待治療患者的福射源。
[0045]外束放射療法是最常見形式的放療法。與內(nèi)部放療法(近距離放射療法)相反，外束放射療法從身體外部將輻射指向腫瘤。待使用的電壓可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員決定并且尤其取決于待治療腫瘤的種類。例如，千伏X射線可以用于治療皮膚癌和淺表結(jié)構(gòu)，而兆伏X射線可以用于治療位于深部的腫瘤(例如，前列腺、肺或腦腫瘤)。盡管X射線和電子束是迄今最廣泛使用的外束放射療法源，不過還可以使用更重的粒子束如質(zhì)子束。
[0046]如上文已經(jīng)概述，近距離放射療法又稱作內(nèi)部放療法。它是放療法的一種形式，其中將輻射源置于需要治療的區(qū)域內(nèi)或與之毗鄰。在近距離放射療法中，將輻射源精確地直接放置在癌性腫瘤的旁側(cè)。這意味著輻射僅影響有限局部區(qū)域，這提供勝過X射線束放射療法的優(yōu)點。例如，可以用極高劑量的局限化輻射處理腫瘤，同時降低不必要損傷周圍健康組織的概率。用于近距離放射療法的輻射源的例子包括125I/1(l3Pd、9°Y以及選擇性內(nèi)部放射療法(SIRT)。SIRT包括使用微球，可能例如注射所述微球。這類種微球可以由樹脂或玻璃制成。在微球內(nèi)部可以安置輻射源如釔-90。已經(jīng)使用的微球的例子是ThereSphere和SIR-球狀體，它們在每個球狀體的放射性活度和栓塞效應(yīng)方面差異。當(dāng)然，還構(gòu)思使用與輻射源連接的任何其他適宜載體。近距離放射療法中使用的藥物的其他例子包括SAV1、MammoSite、Contura、Proxcelan 和 1-SeecL
[0047]放射性同位素療法代表又一種形式的靶向療法。靶向作用可以歸因于同位素的化學(xué)特性。放射性同位素可以例如通過輸注或攝入來遞送。用于治療的放射性同位素的例子包括碘-131、镥-177和釔-90、鍶-89和釤-153。
[0048]可以根據(jù)本發(fā)明使用的放射治療和/或放射療法可以基于單次劑量或分次劑量的輻射。當(dāng)然，還可能變動放射療法的持續(xù)時間。持續(xù)時間可以取決于待治療腫瘤的位置、待治療腫瘤的尺寸和患者的身體狀況。
[0049]本發(fā)明的HER-3抑制劑和放射療法和/或治療的組合構(gòu)思同時用HER-3抑制劑和放射療法以及適時變換的組合治療。根據(jù)一個優(yōu)選實施方案，在放射治療之前通過HER-3抑制劑使待治療的腫瘤細(xì)胞放射敏感，即在放射治療/療法之前施用HER-3抑制劑。
[0050]本發(fā)明可以與又一種活性化合物如又一種化療化合物如細(xì)胞毒藥物如多柔比星、順鉬或卡鉬、細(xì)胞因子或抗腫瘤藥組合使用。
[0051]本發(fā)明的另一個方面涉及HER-3的抑制劑用于調(diào)節(jié)細(xì)胞的放射敏感性的用途。
[0052]附圖簡述
[0053]圖1:
[0054](A)多個癌細(xì)胞系中的HER3概況。
[0055]在相關(guān)培養(yǎng)基中培養(yǎng)5個人肺癌細(xì)胞系(NC1-H226、H292、H358、H520和A549)、5個結(jié)直腸癌細(xì)胞系(Caco2、SW48、LS180、Lovo和HCT116)和5個頭頸癌細(xì)胞系(SCC1、SCC6、SCC11A、SCC38和SCC1483)。用裂解緩沖液獲得完整細(xì)胞裂解物。使用Bradford法將蛋白質(zhì)定量，通過SDS凝膠分離并隨后用所示的抗體免疫印跡。
[0056](B) HER3的基礎(chǔ)活性被U1-59阻斷。
[0057]具有高p-HER3的4個頭頸癌細(xì)胞系(SCC6、SCC11A、SCC38、SCC1483)和兩個肺癌細(xì)胞系(H226和A549)用U1-59的劑量處理24小時。分離完整細(xì)胞裂解物并隨后用所示的抗體免疫印跡。U1-59以劑量依賴性方式抑制這些細(xì)胞中的HER3活性和其下游信號。
[0058]圖 2:
[0059]輻射誘導(dǎo)的HER3激活被U1-59阻斷。(A，D)HER3在所示的時間期間被輻射短暫激活并被U1-59阻斷。在輻射之前，將SCC6和H226細(xì)胞與或不與U1-59 (20 μ g/ml) 一起溫育24小時。在暴露于4Gy輻射后，將完整細(xì)胞裂解物在所示的時間分離，隨后用p-HER、P-AKT和ρ-ΜΑΡΚ抗體免疫印跡。(B，E)U1_59在輻射后24小時和48小時依舊阻斷AKT和MAPK的激活。(C，F(xiàn))在SCC6和H226細(xì)胞中顯示HER3的免疫熒光由輻射激活并且被U1-59阻斷(輻射后30分鐘)。
[0060]圖3.
[0061](A，F(xiàn))U1_59以劑量依賴性方式抑制細(xì)胞增殖。
[0062]將SCC6和H226細(xì)胞接種在96孔板中并且與多個劑量的U1-59溫育72小時。使用CCK8檢測細(xì)胞增殖72小時。
[0063](B, G)Ul-59對SCC6細(xì)胞響應(yīng)于輻射的致敏效應(yīng)。
[0064]將SCC6和H226與U1-59溫育4小時，并用所示的劑量照射?？寺y定法如所述那樣進(jìn)行。對照曲線在無U1-59處理的情況下暴露于輻射。
[0065](C，H)U1_59對細(xì)胞周期的影響。
[0066]將SCC6和H226細(xì)胞與U1-59 (20 μ g/ml)溫育48小時，隨后暴露于6Gy輻射。在輻射后24小時，使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期(用PI染色)并通過Flowjo分析。U1-59造成Gl停滯并且輻射造成G2停滯。U1-59和輻射的組合使處于細(xì)胞周期內(nèi)的細(xì)胞重配，引起處于Gl和G2的細(xì)胞積累，并減少處于S期的細(xì)胞群體
[0067](D，I)Ul-59對細(xì)胞凋亡的影響。
[0068]使用流式細(xì)胞儀檢測并通過Flowjo分析凋亡(用膜聯(lián)蛋白V/PI染色)。U1-59與輻射的組合增加凋亡細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。
[0069](E，J)Ul-59 有助于 Y -H2AX 灶形成。
[0070]SCC6和H226在4Gy輻射之前與U1-59溫育24小時。在輻射后4小時，將細(xì)胞固定并進(jìn)行免疫熒光染色。與單獨的藥物或輻射相比，在采用與U1-59組合的XRT處理的細(xì)胞中檢測到增加數(shù)目的Y -H2AX灶，展示由U1-59所致的增強的DNA損傷。
[0071]圖4.
[0072]與輻射組合的U1-59對無胸腺小鼠中異體移植腫瘤的抗腫瘤作用。SCC6、SCC1483和H226異體移植如“材料和方法”中所述進(jìn)行。㈧小鼠用單次劑量的IgG、福射(1Gy或16Gy)、Ul-59(8mg/kg)或二者組合處理。數(shù)據(jù)點表述為平均腫瘤尺寸土SD。結(jié)果圖示為腫瘤生長曲線和Kaplan Meir存活曲線。(B)小鼠用分次劑量的IgG、輻射、U1-59 (100 μ g/小鼠)或二者組合一周2次如所示那樣處理。結(jié)果圖示為腫瘤生長曲線和Kaplan Meir存活曲線。
[0073]圖5.
[0074]U1-59抑制異體移植腫瘤中HER3的基礎(chǔ)激活和輻射誘導(dǎo)的激活。在輻射后或在分次處理組中末次輻射后24小時收集SCC6、SCC1483和H226異體移植腫瘤。從腫瘤分離蛋白質(zhì)并且通過蛋白質(zhì)印跡法分析P-HER3。照射過的腫瘤中存在增加的P-HER3并且用U1-59處理或聯(lián)合處理過的腫瘤中存在減少的P-HER3。
[0075]圖6.
[0076]U1-59抑制細(xì)胞存活信號并且與輻射組合時增強對無胸腺小鼠中的異體移植腫瘤上的DNA損傷。單次劑量輻射處理(16Gy)、Ul-59(8mg/kg)或二者組合治療的SCC6異體移植腫瘤，處理后24小時收獲腫瘤。如“材料和方法”中所述進(jìn)行IHC染色。在采用U1-59或聯(lián)合治療的腫瘤中檢測到減少的p-MAPK、p-S6和PCNA染色、減少的PCNA陽性細(xì)胞和增加的Y-H2AX陽性細(xì)胞。
實施例
[0077]材料和方法
[0078]細(xì)胞培養(yǎng)物和藥物
[0079]5個人肺癌細(xì)胞系(NC1-H226、H292、H358、H520和A549)以及5個結(jié)直腸癌細(xì)胞系(Caco2、SW48、LS180、Lovo和HCTl 16)從ATCC(馬納薩斯，VA，美國)購買并且維持在含有10%胎牛血清(FBS)的含有I %青霉素和鏈霉素RPMI1640或DMEM(Mediatech Inc.，馬納薩斯，VA，美國)中。5 個頭頸癌細(xì)胞系(UM-SCC1，UM-SCC4，UM-SCC6，UM-SCCllAjPUM-SCC1483細(xì)胞)從密歇根大學(xué)獲得并且維持在含有10%胎牛血清(FBS)的補充有1%氫化可的松的 DMED (Invitrogen, Carlsbad, CA，美國)中。
[0080]使用抗HER-3 抗體 U1-59。
[0081]細(xì)胞增殖測定法
[0082]將細(xì)胞接種在96孔板中并且暴露于多個劑量的U1-59持續(xù)72小時。通過細(xì)胞計數(shù)試劑盒 _8 (Dojindo Molecular Technologies, Gaithersbury, MD,美國)檢驗細(xì)胞增殖。
[0083]克隆生成測定法
[0084]將指定數(shù)目的細(xì)胞接種至六孔組織培養(yǎng)平板的每個孔中。在允許細(xì)胞貼壁時間(6小時)后，將U1-59或溶媒對照(PBS)以指定的濃度添加。接種后10至14日，將平板隨后以劑量2、4、6、8Gy照射4小時，集落用結(jié)晶紫染色，確定含有至少50個細(xì)胞的集落的數(shù)目并計算存活分?jǐn)?shù)。針對U1-59單獨產(chǎn)生的細(xì)胞毒性歸一化后，產(chǎn)生存活曲線。展示的數(shù)據(jù)是來自至少三次獨立實驗的均數(shù)土 SD。
[0085]細(xì)胞周期分析
[0086]將細(xì)胞與U1-59 (20 μ g/mL)溫育48小時，隨后6Gy輻射。在24小時后，將細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化并用PBS洗滌，在90%乙醇中固定并在4°C貯存過夜。通過離心移除乙醇后，將細(xì)胞用 PI 染液緩沖劑(50 μ g/mL ΡΙ,100μ g/ml RNA 酶 A，0.1 % Triton X-100)染色。通過 FACSCalibur 流式細(xì)胞儀(BD B1sciences, San Jose, CA,美國)分選細(xì)胞。用 FlowJo軟件(Tree Star Inc., Ashland, OR,美國)進(jìn)行方圖分析。
[0087]凋亡
[0088]使用膜聯(lián)蛋白V/PI試劑盒檢測凋亡。在處理后，將100 μ I染色緩沖液中含有IxlO5個細(xì)胞的細(xì)胞懸液與5μ I膜聯(lián)蛋白V和PI溫育。通過FACSCalibur流式細(xì)胞儀(BDB1sciences, San Jose, CA,美國)分選細(xì)胞。用FlowJo軟件進(jìn)行群體分析。
[0089]免疫印跡法分析
[0090]在處理后，將細(xì)胞用緩沖液(50mMHEPES, pH7.4,150mM NaCl,0.1% Tween-20,10% 甘油，2.5mM EGTA, ImM EDTA, ImM DTT，ImM PMSF 和 10 μ g/mL 亮肽素和抑蛋白酶肽)裂解。使用標(biāo)準(zhǔn)Bradford吸光度測定法定量蛋白質(zhì)。通過SDS-PAGE分離等量的蛋白質(zhì)。此后，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜并通過與適宜的第一抗體溫育進(jìn)行分析。通過與HRP綴合的第二抗體溫育及ECL化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)檢測蛋白質(zhì)。使用NIH ImageJ程序來測量蛋白質(zhì)印跡條帶的光密度。這項研究中使用的抗體如下:HER3、AKT、MAPK、辣根過氧化物酶綴合的山羊抗兔 IgG 和山羊抗小鼠 IgG 從 Santa Cruz B1technology Inc.(Santa Cruz, CA,美國)購買。p-HER3 (Tyr 1289)、p_AKT 和 p-MAPK 從 Cell Signaling Technology (Beverly,MA,美國)獲得，α -微管蛋白來自Calb1chem(San Diego, CA,美國)。
[0091]免疫熒光測定法
[0092]將大約2xl03個細(xì)胞接種在4孔玻璃腔式載玻片(Nalgene Nunc,Naperville, IL,美國)上。48小時后，將細(xì)胞用PBS洗滌3次并用2%甲醛固定在室溫15分鐘。將細(xì)胞在冰冷的100%甲醇中在-20°C溫育10分鐘并用含有0.3% Triton X100的PBS溶液中的5%正常血清在室溫封閉I小時并且與P-HER3或λ -Η2ΑΧ抗體在4°C溫育過夜。接下來，將細(xì)胞與含有0.3% Triton X100和1% BSA的PBS中FITC綴合的適宜第二抗體溫育2小時。使用帶DAPI的ProLong金(Invitrogen)封裝蓋玻片。通過共聚焦顯微術(shù)或突光顯微術(shù)捕獲照片。
[0093]小鼠異體移植模型
[0094]無胸腺裸鼠(4至6周齡；雄性)從Harlan實驗室(印第安納波利斯,IN,美國)獲得。全部動物流程和維護(hù)均根據(jù)威斯康星大學(xué)機構(gòu)指南實施。將細(xì)胞在第O日在小鼠的背腹部雙側(cè)注射(2*106個細(xì)胞)。一旦腫瘤達(dá)到期望體積，將小鼠用l)IgG、2)Ul-59、3)輻射或4)組合單次劑量處理或分次劑量處理。通過數(shù)字式卡尺評價量值并且由式(n)/6X(大直徑)x(小直徑)計算。
[0095]免疫組織化學(xué)
[0096]異體移植腫瘤固定在中性福爾馬林中并包埋在石蠟中。
[0097]針對PCNA、p-MAPK, p_AKT、p_S6和Y -H2AX進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。簡言之，將標(biāo)本常規(guī)地脫石蠟并復(fù)水，隨后在水浴中通過檸檬酸鹽緩沖液在98°C修復(fù)抗原15分鐘，在3%過氧化氫中溫育10分鐘，3% BSA封閉30分鐘。如下進(jìn)行染色:在4°C在稀釋于推薦的抗體稀釋劑中的第一抗體中溫育過夜，在室溫在生物素?；牡诙贵w中溫育30分鐘，使用Dakocytomat1n液DAB+底物生色原系統(tǒng)進(jìn)行過氧化物酶可視化，在蘇木精中復(fù)染，例行脫水和清潔，用蓋玻片封裝。
[0098]統(tǒng)計分析
[0099]將異體移植腫瘤生長作圖并使用GraphPad Prism5 (GraphPad, San Diego, CA)分析。
[0100]結(jié)果
[0101]HER3在多種實體瘤細(xì)胞系中表達(dá)
[0102]人表皮生長因子受體3 (HER3)是HER家族的關(guān)鍵二聚化配偶物并激活致瘤信號傳導(dǎo)途徑。它在許多實體瘤中的過量表達(dá)已經(jīng)與不良預(yù)后相關(guān)。在圖1A中，我們對源自非小細(xì)胞肺癌(H226、H292、H358、H520 和 A549)、結(jié)直腸癌(Caco2、SW48、LS180、Lovo 和 HCTl 16)和頭頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC1、SCC6、SCC11A、SCC38和SCC1483)的15個細(xì)胞系表征HER3和P-HER3的表達(dá)。HNSCC細(xì)胞系和NSCLC細(xì)胞系均含有激活型HER3，表明HER3可能正在增強它們的致腫瘤表型。
[0103]U1-59可以抑制HER3的基礎(chǔ)活性和輻射誘導(dǎo)的HER3激活
[0104]HER3缺少內(nèi)在酪氨酸激酶活性。然而，與多個配體,如heregulin(神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1)結(jié)合時，HER3可以與其他HER家族成員受體形成異二聚體以啟動強烈影響細(xì)胞增殖和存活的多條信號傳導(dǎo)途徑的激活。U1-59是與HER3結(jié)合并失活HER3致瘤信號傳導(dǎo)途徑的全人單克隆抗體。在圖1B中，我們顯示用遞增劑量的U1-59處理多個HNSCC和NSCLC細(xì)胞系可以成功地抑制HER3和AKT的激活(圖1B)。此外，使用免疫印跡法和免疫熒光測定法，我們發(fā)現(xiàn)對HNSCC細(xì)胞系SCC6和NSCLC細(xì)胞系H226的放射處理增加激活形式的HER3 (圖2A、2C、2D和2F)。輻射治療后HER3的短暫激活還伴隨SCC6和H226細(xì)胞系中ERK和AKT二者激活的增加(圖2A和圖2D)。在圖2B和2E中，我們顯示輻射可以導(dǎo)致SCC6和H226細(xì)胞系中在放射處理24小時和48小時后HER3、AKT和ERK的持續(xù)激活。我們隨后顯示，在放射處理前SCC6或H226細(xì)胞系與U1-59預(yù)溫育24小時可能阻止輻射誘導(dǎo)的HER3、ERK和AKT激活(圖2A、2C、2D和2F)。另外，U1-59可能導(dǎo)致在放射處理后24小時和48小時HER3、ERK和AKT活化的持續(xù)抑制(圖2B和圖2E)?？傮w上，這些數(shù)據(jù)表明在放射處理前細(xì)胞與U1-59的預(yù)溫育可以阻止輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞存活和增殖途徑激活。
[0105]U1-59可以在體外輻射致敏HNSCC和NSCLC細(xì)胞系
[0106]在圖2中，我們展示U1-59可以阻止輻射誘導(dǎo)的HER3及后續(xù)下游效應(yīng)器ERK和AKT激活，因此，我們假設(shè)U1-59可增強HNSCC細(xì)胞系和NSCLC細(xì)胞系的放射敏感性。首先，我們在圖3A和圖3F中展示U1-59可以按劑量依賴性方式抑制SCC6細(xì)胞系和H226細(xì)胞系的生長。為了評價與輻射組合的U1-59的體外作用，我們實施如“材料和方法”中所述的克隆生成測定法。我們將SCC6和H226細(xì)胞與U1-59預(yù)溫育4小時，隨后使細(xì)胞接受用所示的劑量輻射。如圖3B和3G中所示，U1-59增加輻射曲線的斜率，展示U1-59對SCC6和H226細(xì)胞響應(yīng)于輻射的致敏作用。對照曲線在無U1-59處理的情況下暴露于輻射。
[0107]U1-59可以在體外與放射治療組合時促進(jìn)細(xì)胞周期停滯和凋亡
[0108]我們進(jìn)一步假設(shè)U1-59還可以增強HNSCC和NSCLC細(xì)胞系對輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯和凋亡。為了研究這一點，我們將SCC6和H226細(xì)胞與U1-59預(yù)溫育48小時，隨后暴露于6Gy輻射。輻射后24小時，我們通過PI和膜聯(lián)蛋白V染色法分析細(xì)胞周期時相分布水平和凋亡水平。如圖3C和圖3H中所示，與對照細(xì)胞相比，U1-59預(yù)處理的細(xì)胞展示Gl相停滯，而輻射處理的細(xì)胞展示G2相停滯。我們觀察S-相隨任一種處理而減少。眾所周知，處于Gl相的細(xì)胞對放射治療更敏感，而S-相細(xì)胞更有抵抗性。因此我們通過膜聯(lián)蛋白V染色法展示，在輻射處理的與U1-59預(yù)溫育的細(xì)胞中凋亡確實增強(圖3D和圖31)，顯示由U1-59誘導(dǎo)的Gl相停滯可以促進(jìn)SCC6和H226 二者的放射敏感性。此外，通過y_H2AX染色，我們進(jìn)一步在輻射之前用U1-59預(yù)處理的SCC6和H226細(xì)胞中顯示增強的DNA雙鏈斷口水平(圖3E和圖3J)。總之，這些數(shù)據(jù)顯示與輻射組合的U1-59的增強的抗腫瘤作用。
[0109]與輻射組合的U1-59可以在HNSCC和NSCLC小鼠腫瘤異體移植物中具有抗腫瘤作用
[0110]為了進(jìn)一步評價與U1-59組合的放療法的功效，我們將SCC6、SCC1483和H226細(xì)胞系接種至無胸腺小鼠中。一旦腫瘤達(dá)到100-200mm3，將腫瘤分割用于單次劑量和分次劑量的輻射。在單劑量處理組中，向異體移植小鼠施用IgG、Ul-59(8mg/kg)，輻射(XRT16Gy或XRTlOGy)或二者的組合(圖4A)。在分次處理組中，向異體移植小鼠施用IgG、Ul-59 (100 μ g/小鼠)、輻射(按所示劑量一周2次)或組合(圖4B)。全部三種異體移植模型均展示與單一療法治療的小鼠或IgG對照治療的小鼠相比，用與單次劑量輻射或分次劑量輻射組合的U1-59治療時，腫瘤體積明顯減小。另外，用U1-59和單次劑量輻射或分次劑量輻射治療的異體移植物展示出清晰的存活優(yōu)勢，如通過Kaplan Meir存活曲線分析所述。
[0111]為了驗證U1-59可能有效地在體內(nèi)抑制激活HER3，我們從源自每個處理組的各種腫瘤中分離蛋白質(zhì)并對總HER3和激活形式的HER3進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。在圖5A中，我們顯示，從用U1-59單獨處理或與單次劑量輻射組合的U1-59處理的小鼠分離的腫瘤具有較低水平的HER3激活。在SCC1483和H226異體移植模型中，U1-59處理的腫瘤還含有較低的HER3蛋白總量(圖5A)，這在用U1-59體外處理的這些細(xì)胞系中沒有觀察到。另外，當(dāng)給予單次劑量輻射時，從5A圖中每個異體移植模型分離的兩種腫瘤的至少一者顯示明顯的HER3活化，所述HER3活化在U1-59處理的腫瘤中被阻斷。在圖5B中，我們進(jìn)一步顯示與分次劑量輻射組合的U1-59處理的腫瘤還含有減少的激活型HER3水平和HER3總水平；U1-59還阻斷HER3被分次劑量輻射激活。總體上，與對照或任一種單獨處理相比，采用與單劑量輻射或分次劑量輻射組合的U1-59處理的異體移植腫瘤均顯示明顯的生長延遲，同時腫瘤體積明顯減小，顯示激活型HER3表達(dá)水平和總HER3表達(dá)水平的損失均可以輻射致敏HNSCC 和 NSCLC 腫瘤。
[0112]與輻射組合的U1-59可以在體內(nèi)阻止細(xì)胞存活信號的激活并增強DNA損傷
[0113]為了進(jìn)一步分析與放射處理組合的U1-59的生長抑制作用，我們通過免疫組織化學(xué)分析SCC6處理的腫瘤中ERK、AKT、S6激酶和、-H2AX的激活(圖6)。我們顯示，用U1-59和單次劑量輻射處理的SCC6細(xì)胞可以具有下游效應(yīng)器分子ERK、AKT和S6激酶的較低激活水平。另外，U1-59 處理的腫瘤展示減少的PCNA陽性細(xì)胞水平。最后，用U1-59和輻射二者處理的SCC6腫瘤中存在增加的Y -H2AX水平?？傮w，這些數(shù)據(jù)表明除增強DNA損傷之外，與輻射組合的U1-59可以有效地抑制細(xì)胞存活和增殖途徑。這些數(shù)據(jù)為與輻射組合的U1-59的增強的體內(nèi)抗腫瘤作用提供機理性證據(jù)。
[0114]這些實驗的結(jié)果表明，U1-59和輻射的組合在使用單次劑量輻射或分次劑量輻射的研究中對腫瘤生長具有強烈影響。腫瘤分析表明體內(nèi)放射治療激活的HER3和U1-59能夠消除這種激活?？傊?，我們的體外和體內(nèi)研究結(jié)果表明，通過延遲細(xì)胞周期進(jìn)展、增加凋亡和增加DNA損傷，與輻射組合的U1-59對細(xì)胞和腫瘤生長具有影響。這些研究結(jié)果表明HER3可以在響應(yīng)于放射療法時發(fā)揮重要作用，并且阻斷其活性可能在人腫瘤中具有強的治療益處。
[0115]⑶R序列表
[0116]
【權(quán)利要求】
1.HER-3的抑制劑與放射治療組合用于治療過度增生性疾病的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述抑制劑是抗體或其抗原結(jié)合片段。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項所述的用途，其中所述抗體是單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。
4.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途，其中所述抗體片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、雙體抗體或單鏈抗體分子。
5.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途，其中所述抗體與效應(yīng)子基團(tuán)和/或標(biāo)記基團(tuán)偶聯(lián)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述效應(yīng)子基團(tuán)是放射性同位素、放射性核素、毒素、治療性基團(tuán)和/或化療基團(tuán)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述標(biāo)記基團(tuán)是放射性同位素或放射性核素、熒光基團(tuán)、酶促基團(tuán)、化學(xué)發(fā)光基團(tuán)、生物素基團(tuán)或預(yù)定的多肽表位。
8.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途，其中所述抗體針對HER-3的胞外結(jié)構(gòu)域。
9.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途， 其中所述抗體包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含選自以下CDR的至少一個CDR: (a)如 SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和230 中所示的 CDRHl ;(b)如 SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 中所示的 CDRH2 ;和(c))如 SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 中所示的 CDRH3 或與根據(jù)(a)至(c)的CDR之一顯示至少90%同源性的重鏈氨基酸序列。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的用途， 其中所述抗體包含輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含選自以下⑶R的至少一個CDR:(d)如 SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的CDRLl；(e)如 SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的CDRL2 ;和(f)如 SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的⑶RL3，或與根據(jù)(d)至(f)的⑶R之一顯示至少90%同源性的輕鏈氨基酸序列。
11.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途，其中所述抗體包含包含選自以下CDR的至少一個CDR的重鏈氨基酸序列
(a)如SEQ ID N0:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、.74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、.154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和.230中所示的⑶RHl ；
(b)如SEQ ID N0:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、.74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、.154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和.230中所示的⑶RH2 ;和
(c)如SEQ ID N0:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、.74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、.154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和.230中所示的CDRH3， 和包含選自以下⑶R的至少一個⑶R的輕鏈氨基酸序列
(d)如SEQ ID N0:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、.86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、.168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的CDRLl ；
(e)如SEQ ID N0:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、.86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、.168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的CDRL2:和
(f)如SEQ ID N0:4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、.86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、.168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 中所示的CDRL3。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途， 其中所述抗體包含 CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2 和 CDRL3。
13.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途， 其中過度增生性疾病是癌癥，尤其鱗狀細(xì)胞癌。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途， 其中癌癥選自乳腺癌、胃腸道癌、胰腺癌癥、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、膀胱癌、膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、睪丸癌、軟組織肉瘤、頭頸癌、表達(dá)或過量表達(dá)HER-3的其他癌癥和腫瘤轉(zhuǎn)移形成。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的用途， 其中所述癌癥是肺部、頭部和/或頸部的鱗狀細(xì)胞癌。
16.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途， 其中放射治療選自熱療法、外束放射療法、近距離放射療法和/或放射性同位素療法。
17.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途，其中放射治療基于單次劑量或分次劑量的輻射。
18.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途， 其中與另一種活性化合物如化療化合物組合。
19.根據(jù)先前權(quán)利要求中任一項所述的用途， 其中所述抗體包含SEQ ID NO: 70的重鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 72的輕鏈氨基酸序列。
20.HER3的抑制劑用于調(diào)節(jié)細(xì)胞的放射敏感性的用途。
【文檔編號】A61P35/00GK104136464SQ201380010479
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2013年2月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月23日
【發(fā)明者】D·L·惠勒, T·黑特曼 申請人:U3制藥有限公司