含有肽的醫(yī)藥組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于，提供一種不根據肽的溶解特性選擇溶劑、而是使用相同的溶劑將1種或多種肽簡便地進行制劑化的手段。本發(fā)明提供一種醫(yī)藥組合物及其制造方法，所述醫(yī)藥組合物含有1種或2種以上的肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸和/或堿。
【專利說明】含有肽的醫(yī)藥組合物

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種含有肽的醫(yī)藥組合物及其制造方法。

【背景技術】
[0002]在含有肽的注射制劑中，由于肽對熱不穩(wěn)定，因此，不能進行依靠高壓蒸汽滅菌的最終滅菌。所以，為了謀求無菌化，無菌過濾工序必不可少。無菌過濾工序作為慣例是通過經由絕對孔徑得到保證的0.22 μ m以下的膜濾器通過而進行的。因此，在過濾前的階段，需要制備完全溶解肽的肽溶液。但是，肽的溶解特性因其氨基酸序列而不同，因此，需要根據肽的溶解特性選擇適當的溶劑。特別是將疏水性高的肽完全溶解于極性溶劑很困難，在溶劑的選擇上極為費力。也可以通過使PH變化來提高溶解性，但作為注射制劑，偏離適當的pH的范圍、或肽變得不穩(wěn)定的情況也很多。
[0003]另外，近年來，含有不只一種肽、而是多種肽作為有效成分的肽疫苗制劑備受關注。認為這種肽疫苗制劑特別是作為癌癥治療用是有利的。
[0004]在癌癥治療用肽疫苗制劑中，為了對癌癥細胞誘導特異的免疫反應，含有腫瘤特異抗原的T細胞表位肽作為有效成分(例如專利文獻I)。這些來自T細胞表位肽的腫瘤特異抗原通過使用癌癥患者的臨床樣品的廣泛表達分析被鑒定為對于每種癌癥類型在癌癥細胞中特異性地進行高表達，在正常細胞中幾乎沒有看到表達的抗原(例如專利文獻2)。但是，由于癌癥細胞具有的多樣性，即使為這樣被鑒定的腫瘤特異抗原也不一定可以說在全部的患者及全部的癌癥細胞中以相同的方式高表達。即，即使在某種患者的癌癥中為高表達的抗原，也在其它患者的癌癥中可以表達沒有那么高。另外，已知有在相同患者中，在細胞水平方面，癌癥細胞為不均勻的細胞集團(非專利文獻I)，即使為在某種癌癥細胞中表達的抗原，也可以有時在其它癌癥細胞中不表達。因此，對于僅含有一種T細胞表位肽的疫苗制劑，有可能存在不能得到充分的抗腫瘤效果的患者。另外，在可得到抗腫瘤效果的患者中，也可以存在不能殺傷的癌癥細胞。另一方面，如果是含有多種T細胞表位肽的疫苗制齊U，則癌癥細胞表達任一種抗原的可能性高。因此，可以在更寬廣的患者中得到抗腫瘤效果，不能殺傷的癌癥細胞存在的可能性也變低。
[0005]組合的T細胞表位肽的種類越多，含有如上所述的多種T細胞表位肽的疫苗制劑的效果越高。但是，如果要含有有效量的多種T細胞肽，則每單位量的肽含量增加，因此，完全溶解全部肽更為困難。另外，由于性質不同的多種肽共存，所以穩(wěn)定地維持全部的肽也更為困難。
[0006]例如，在歐洲公開專利公報第2111867號(專利文獻3)中公開有含有多種T細胞表位肽的癌癥治療用疫苗制劑的冷凍干燥制劑。記載有:該冷凍干燥制劑在冷凍干燥前的肽溶液的制備中，根據其溶解特性，每肽在適當的溶劑中溶解有各肽。而且，在將制備的各肽溶液混合時，為了防止肽的析出，按照決定的順序將各肽溶液混合。這樣，每肽選擇適當的溶劑，研究將各肽溶液混合的順序，肽的種類越多越費力。
[0007]為了避免如上所述的制劑制造上的困難，也考慮對相同患者給藥多種含有一種T細胞表位肽的疫苗制劑的方法。但是，在給藥多種疫苗制劑的情況下，需要向身體多處接種疫苗，對患者的負擔增大。另外，肽疫苗制劑大多在接種后產生被稱為DTH(Delayed TypeHypersensitivity:遲發(fā)型超敏反應)反應的皮膚反應。身體的多處的皮膚反應的發(fā)生使患者的不適感增大。因此，為了減輕疫苗接種中的患者的負擔，優(yōu)選為含有多種T細胞表位肽的疫苗制劑。另外，即使在給藥多種含有一種表位肽的疫苗制劑的情況下，也需要在制造各肽制劑時，對每種肽選擇適當的溶劑的作業(yè)。
[0008]現(xiàn)有技術文獻
[0009]專利文獻
[0010]專利文獻1:國際公開公報第2008/102557號
[0011]專利文獻2:國際公開公報第2004/031413號
[0012]專利文獻3:歐洲公開專利公報第2111867號
[0013]非專利文獻
[0014]非專利文獻l:Kai Wang 等人，BMC B1informatics2009, 10:12.


【發(fā)明內容】

[0015]本發(fā)明的課題在于，提供一種不根據肽的溶解特性選擇溶劑、而是使用相同的溶劑將I種或多種肽簡便地進行制劑化的手段。
[0016]本發(fā)明人等為了解決上述課題，重復進行了潛心研究，結果發(fā)現(xiàn):含有碳酸鈉和/或精氨酸的水溶液可以溶解對水的溶解特性不同的各種肽。另外發(fā)現(xiàn):該水溶液也適于含有多種肽的注射制劑的制備。進而確認:利用該水溶液制備的注射制劑在對于注射制劑為適當的PH的范圍內。本發(fā)明是根據這些見解而完成的發(fā)明。
[0017]S卩，本發(fā)明包含以下的發(fā)明。
[0018][I] 一種醫(yī)藥組合物，其含有I種或2種以上的肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸和/或堿。
[0019][2]如[I]所述的醫(yī)藥組合物，其中，堿性氨基酸為選自由精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、組氨酸、羥基賴氨酸及它們的鹽構成的組中的I種或2種以上的組合。
[0020][3]如[I]或[2]所述的醫(yī)藥組合物，其中，堿為選自由碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙醇胺、氨基丁三醇及葡甲胺構成的組中的I種或2種以上的組合。
[0021][4]如[I]?[3]任一項所述的醫(yī)藥組合物，其中，肽為T細胞表位肽。
[0022][5]如[I]?[3]任一項所述的醫(yī)藥組合物，其中，肽為2種以上的T細胞表位肽直接或經由連接體連接而成的肽。
[0023][6]如[4]或[5]所述的醫(yī)藥組合物，其中，T細胞表位肽為由序列號1、2、3、4或5所示的氨基酸序列構成的肽的任一種或2種以上的肽。
[0024][7]如[4]或[5]所述的醫(yī)藥組合物，其中，T細胞表位肽為由序列號1、2、3或4所示的氨基酸序列構成的肽的全部種類的肽。
[0025][8]如[4]?[7]任一項所述的醫(yī)藥組合物，其為用于誘導對腫瘤的免疫應答的醫(yī)藥組合物。
[0026][9]如[8]所述的醫(yī)藥組合物，其為用于預防或治療癌癥的醫(yī)藥組合物。
[0027][10]如[I]?[9]任一項所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，以非經口制劑的形態(tài)進行制劑。
[0028][11]如[10]所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，非經口制劑為注射劑。
[0029][12] 一種冷凍干燥制劑，其是對[I]?[11]任一項所述的醫(yī)藥組合物進行冷凍干燥而成的。
[0030][13] 一種制造醫(yī)藥組合物的方法，所述醫(yī)藥組合物為[11]所述的注射劑，所述方法包含:將I種或2種以上的肽溶解于含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液的工序。
[0031][14]制造如[12]所述的冷凍干燥制劑的方法，其包含以下的工序:
[0032](I)將I種或2種以上的肽溶解于含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液的工序；及
[0033](2)將(I)中制備的肽溶液進行冷凍干燥的工序。
[0034][15]如[14]所述的制造冷凍干燥制劑的方法，其中，肽為由序列號1、2、3或4所示的氨基酸序列構成的肽的全部種類的肽。
[0035][16] 一種試劑盒，其包含以下的(a)及(b):
[0036](a) [12]所述的冷凍干燥制劑；及
[0037](b) (a)的冷凍干燥制劑的重構溶液。
[0038][17] 一種試劑盒，其包含以下的(a)及(b):
[0039](a)對[6]或[7]所述的醫(yī)藥組合物進行冷凍干燥而成的冷凍干燥制劑；及
[0040](b)含有由序列號5所示的氨基酸序列構成的肽的(a)的冷凍干燥制劑的重構溶液。
[0041][18]如[16]或[17]所述的試劑盒，其還含有以下的(C):
[0042](C) I種或2種以上的佐劑。
[0043][19] 一種試劑盒，其含有以下的(a)及(b):
[0044](a) [I]?[11]任一項所述的醫(yī)藥組合物；
[0045](b) I種或2種以上的佐劑。
[0046]本申請主張2012年3月9日所申請的日本國專利申請2012-072352號的優(yōu)先權，包含該專利申請的說明書中所記載的內容。
[0047]根據本發(fā)明，提供一種醫(yī)藥組合物，其不根據肽的溶解特性選擇溶劑，可以使用相同的溶劑將I種或多種肽簡便地進行制劑化。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以增多能夠組合的肽的種類，因此，如果作為例如組合有多種T細胞表位肽的疫苗制劑提供，則可得到充分的抗腫瘤效果，在癌癥的治療上是非常有效的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0048]圖1表示本發(fā)明的一個實施方式中所述的肽組合冷凍干燥制劑的穩(wěn)定性。
[0049]圖2是通過回歸分析預測本發(fā)明的一個實施方式中所述的肽組合冷凍干燥制劑24個月后的穩(wěn)定性的圖。

【具體實施方式】
[0050]下面，對本發(fā)明具體地進行說明。
[0051]本說明書中使用的“I個(a)”、“l(fā)個(an)”及“其(the) ”這樣的單詞，只要沒有特殊說明，是指“至少I個”。
[0052]本說明書中使用的“肽”這樣的用語是指氨基酸殘基的聚合物。本用語適用于由天然氨基酸殘基構成的氨基酸聚合物、由天然氨基酸殘基和I個或多個氨基酸類似物或氨基酸模擬物等非天然氨基酸殘基構成的氨基酸聚合物、由非天然氨基酸殘基構成的氨基酸聚合物。
[0053]本說明書中使用的“氨基酸”這樣的用語是指天然氨基酸及合成氨基酸、以及與天然氨基酸同樣地起作用的氨基酸類似物及氨基酸模擬物。氨基酸可以為L-氨基酸或D-氨基酸的任一種?！疤烊话被帷边@樣的用語是指:由遺傳密碼編碼的氨基酸及在細胞內翻譯后被修飾的氨基酸(例如羥基脯氨酸、Y -羧基谷氨酸及O-磷酸絲氨酸)。“氨基酸類似物”這樣的用語是指:具有與天然氨基酸相同的基本化學結構(氫、羧基、氨基及結合于R基的α碳)、具有被修飾的R基或被修飾的骨架的化合物(例如高絲氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸、亞砜、蛋氨酸甲基鱗)?！鞍被崮M物”這樣的用語是指:具有與一般的氨基酸不同的結構，但具有同樣的功能的化合物。氨基酸通過在本說明書中IUPAC-1UB生物化學命名法委員會(B1chemical Nomenclature Commiss1n)推薦的、一般公知的3字符或I字符而記載。
[0054]本說明書中使用的“T細胞表位肽”這樣的用語是指:與MHC(主要組織適合相容性復合體:major histocompatibility complex) I類或II類分子結合而在細胞表面上遞呈、經由T細胞受體而被T細胞識別的肽。與MHC I類分子結合的T細胞表位肽通常由8?14個氨基酸構成，典型而言，由9或10個氨基酸構成。由MHC I類分子在細胞表面上所遞呈的肽由⑶8陽性T細胞識別，將⑶8陽性T細胞活化而誘導細胞毒性T細胞(Cytotoxic Tlymphocyte:CTL)。與MHC II類分子結合的T細胞表位肽通常由12?30個氨基酸構成，典型而言，由15?24個氨基酸構成。由MHC II類分子在細胞表面上遞呈的肽由CD4陽性T細胞識別，將⑶4陽性T細胞進行活化。
[0055]本說明書中使用的“腫瘤特異抗原”這樣的用語是指:在腫瘤細胞中表達而在正常細胞中完全或幾乎不表達的抗原。腫瘤特異抗原可以在某種特定的腫瘤細胞(例如胃癌細胞)中被表達，也可以在廣范圍的腫瘤細胞中通用并被表達。另外，在“腫瘤特異抗原”中，也包含在腫瘤細胞和睪丸中特異性地表達的癌癥睪丸抗原。
[0056]1.本發(fā)明的醫(yī)藥組合物
[0057]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物為含有I種或2種以上的肽作為有效成分、且含有堿性氨基酸和/或堿的醫(yī)藥組合物。
[0058]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所含的肽沒有特別限定，只要是具有生理活性的任意的肽即可。作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所含的肽的實例，可列舉例如:T細胞表位及抗體表位等免疫原性肽、顯性負效應肽(dominant negative peptide)、適配體、酶、抗體、scFv、Fab、F(ab’)2及Fv等抗體片段、激素、神經傳遞物質、阿片肽、自身活性物質以及細胞因子等，但并不限定于這些。
[0059]在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有I種或2種以上的T細胞表位肽作為有效成分。迄今為止，就T細胞表位肽而言，MHC I類結合性表位及MHC II類結合性表位的任一種均鑒定多個。因此，可以單獨或適當組合2種以上，將這些公知的T細胞表位肽用作本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的肽。需要說明的是，在組合使用2種以上的T細胞表位肽的情況下，這些T細胞表位肽可以直接或經由連接體而連接。作為可以使用的連接體，可列舉例如AAY (P.M.Daftarian 等人，J Trans Med2007, 5:26)、AAA 及 NKRK (R.P.M.Sutmuller 等人，JImmunol.2000，165:7308-7315)、以及聚賴氨酸(S.0ta 等人，Can Res.62，1471-1476，K.S.Kawamura 等人，JImmuno1.2002，168:5709-5715)等，但并不限定于這些。
[0060]作為可以用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的T細胞表位肽，可列舉例如:來自腫瘤特異抗原的肽、來自HIV等病毒抗原的肽以及來自變應原的肽等，并不限定于此，優(yōu)選為來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽。就來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽而言，與作為人的MHC分子的人白細胞抗原(HLA)結合的表位鑒定多個，在人類中，MHC I類分子存在HLA-A, HLA-B、HLA-C, MHC II 類分子存在 HLA-DR、HLA-DQ, HLA-DP。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所含的T細胞表位肽可以為與任一種HLA抗原結合的T細胞表位肽，但優(yōu)選為與HLA-A抗原結合的T細胞表位肽。迄今為止，與HLA-A抗原結合的分子較多地鑒定。例如，作為與HLA-A抗原等位基因HLA-A2或HLA-A24結合的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽，可列舉:W02003/104275、W02004/018667、W02004/024766、W02006/090810, W02006/093030、W02007/013576, W02007/018199, W02008/047473, W02008/102557, W02009/025117,W02009/025196, W02009/150822, W02009/153992, W02010/013485, W02010/047062,W02010/064430, W02010/070877, W02010/073551, W02010/095428, W02010/100878,W02010/106770、W02011/067920、W02011/089921中所記載的肽等，但可以用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的T細胞表位肽并不限定于這些。
[0061]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所使用的肽可以為由來自天然蛋白質的氨基酸序列構成的肽，也可以為這種肽的修飾肽。一般而言，某種肽中的I個、2個或數個氨基酸殘基的改變對該肽的功能不產生影響，甚至根據情況而增強原來的肽的所期望的功能。實際上，已知有修飾肽(即，與原來的序列相比，由I個、2個或數個氨基酸殘基被改變的(即，進行了置換、缺失、附加、和/或插入)氨基酸序列構成的肽)保持原來的肽的生物學的活性(Mark 等人，Proc Natl Acad Sci USA1984, 81:5662-6 ；Zoller and Smith, NucleicAcids Resl982, 10:6487-500 ;Dalbadie_McFarland 等人，Proc Natl Acad SciUSA1982, 79:6409-13)。因此，與作為來自天然的腫瘤特異抗原的T細胞表位肽被鑒定的肽同樣，其修飾肽還可以在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中優(yōu)選使用。需要說明的是，在本說明書中，“數個”這樣的用語是指優(yōu)選10個以下，更優(yōu)選5個、4個或3個。
[0062]如果是本領域技術人員，則可以理解招致保存原來的肽的特性的結果的氨基酸殘基的置換。這種氨基酸殘基的置換被稱為“保守置換”。表示功能上類似的氨基酸的保守置換在本【技術領域】中眾所周知。保守氨基酸置換是指例如結構的、電的、極性或疏水性等性質類似的氨基酸間的置換。這樣的性質也可以用例如氨基酸側鏈的類似性進行分類。具有堿性側鏈的氨基酸由賴氨酸、精氨酸、組氨酸構成，具有酸性側鏈的氨基酸由天冬氨酸、谷氨酸構成；具有非荷電極性側鏈的氨基酸含有甘氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸等；具有疏水性側鏈的氨基酸含有丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸等；具有分支側鏈的氨基酸由蘇氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸構成，以及具有芳香族側鏈的氨基酸由酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、組氨酸構成。另夕卜，以下的8組分別含有作為相互保守的置換在本【技術領域】中所看到的氨基酸(例如參照Creighton, Proteinsl984)。
[0063]I)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)
[0064]2)天門冬氨酸⑶、谷氨酸(E)
[0065]3)天冬酰胺(N)、谷酰胺(Q)
[0066]4)精氨酸(R)、賴氨酸(K)
[0067]5)異亮氨酸⑴、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、纈氨酸(V)；
[0068]6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸⑴、色氨酸(W)；
[0069]7)絲氨酸(S)、蘇氨酸⑴；及
[0070]8)半胱氨酸(C)、蛋氨酸(M)
[0071]因此，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以含有通過保守置換而改變有原來的肽的肽作為有效成分。但是，可以用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的修飾肽并不限定于這些，修飾肽只要保持原來的肽的特性，就可以含有非保守改變。在此，肽的“特性”是指在醫(yī)藥組合物中所期待的肽的生理活性。例如，在肽為T細胞表位肽的情況下，修飾肽只要保持原來的肽的CTL誘導活性，其改變的種類及被改變的氨基酸殘基的數量沒有限定。
[0072]另外，在通過氨基酸殘基的置換、附加和/或插入而進行肽的改變的情況下，除L-氨基酸之外，可以利用D-氨基酸、或氨基酸類似物或氨基酸模擬物等非天然氨基酸等而進行改變。例如，為了提高肽的人體內穩(wěn)定性，在本【技術領域】中已知有導入D-氨基酸、或氨基酸類似物或氨基酸模擬物等非天然氨基酸。因此，只要修飾肽保持原來的肽的特性，肽可以為含有D-氨基酸、和/或氨基酸類似物或氨基酸模擬物等非天然氨基酸的修飾肽。
[0073]除如上所述的改變之外，只要保持原來的肽的特性，可以在肽上連接其它物質。作為可以與肽連接的其它物質，可列舉例如:其它肽、脂質、糖或糖鏈、乙?；⑻烊换蚝铣傻木酆衔锏?。另外，只要保持原來的肽的特性，可以在肽上進行糖鏈附加、側鏈氧化及磷氧化等修飾。
[0074]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物也可以含有即使為難溶于水等極性溶劑的肽作為有效成分。例如，使用以注射用被制備的滅菌水(例如日本藥典中所規(guī)定的注射用水)作為溶劑的情況下，相對于25°C、1氣壓中的水的溶解度低于lmg/mL(例如低于0.9mg/mL、低于0.8mg/mL、低于0.7mg/mL、低于0.6mg/mL、或低于0.5mg/mL)的肽難以溶解有效量。但是,本發(fā)明的醫(yī)藥組合物即使為對于水的溶解度低的肽，也可以以水溶液的狀態(tài)含有有效量。因此，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中，肽對于水的溶解度沒有特別限定。
[0075]另外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物也可以含有對于水的溶解度不同的多種肽。例如，為用于誘導免疫應答的醫(yī)藥組合物的情況下，與含有I種肽的情況相比，含有多種肽的情況，有時可得到優(yōu)選的效果。例如，在誘導對腫瘤的免疫應答的情況下，因為腫瘤細胞具有的多樣性，大多優(yōu)選使用多種抗原肽。由于腫瘤為不均勻的細胞集團，因此，即使為在某種腫瘤細胞中表達的抗原，也有時在其它腫瘤細胞中不表達。如果使用多種抗原肽，則腫瘤細胞表達任一種抗原的可能性升高，因此，可以期待對于腫瘤的免疫誘導效果升高。在將注射用水用作溶劑的情況下，要含有多種抗原肽時，肽的總量變多，因此，大多難以使全部肽溶解。但是，即使對于水的溶解度為不同的多種肽，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物也可以以水溶液的狀態(tài)含有各肽的有效量。例如，含有多種來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物為用于誘導對腫瘤的免疫應答的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的優(yōu)選的實施方式。
[0076]在優(yōu)選的實施方式中，用于誘導對特定的腫瘤的免疫應答的醫(yī)藥組合物含有多種已知在該腫瘤中進行高表達的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽。例如，誘導對胃癌的免疫應答的醫(yī)藥組合物可以含有多種來自已知在胃癌中進行高表達的腫瘤特異抗原的T細胞表位肽。關于其它癌癥種類也同樣。在此，“進行高表達”是指:與對應的正常臟器的細胞相比，腫瘤細胞中的表達量多。例如，與正常臟器的細胞相比，表達量增加1.5倍以上時，基因被看作在腫瘤細胞中進行高表達。與正常臟器的細胞相比，腫瘤細胞中的表達量優(yōu)選為2倍以上，更優(yōu)選為3倍以上。
[0077]例如，作為已知在胃癌中進行高表達的腫瘤特異抗原，并不限定于這些，可列舉:CDH3、URLC10、CXDRL1、GCUD1、VEGR1、VEGFR2、MPH0SPH1、DEPDC1、KIF20A、及 FOXMl 等。含有選自這些來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽中的多種T細胞表位肽的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適于誘導對胃癌的免疫應答。例如，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物誘導對胃癌的免疫應答的情況下，作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所含的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽的優(yōu)選的實例，可列舉由序列號1、2、3、4或5所示的氨基酸序列構成的肽的任一種或2種以上的肽。另外，由序列號1、2、3、4或5所示的氨基酸序列構成的肽只要具有細胞毒性T細胞誘導能力，就可以為其修飾肽，作為修飾肽，可列舉例如由在序列號1、2、3、4或5的氨基酸序列中I?數個氨基酸被缺失、置換、插入或附加的氨基酸序列構成的肽。在此，“I?數個”的范圍是指I?5個、優(yōu)選I?3個、更優(yōu)選I或2個。氨基酸的缺失是指從序列號1、2、3、4或5所示的氨基酸序列中選擇任意的氨基酸而缺失。另外，氨基酸的附加是指在序列號1、2、3、4或5所示的氨基酸序列的N末端或C末端側附加I?數個氨基酸。作為氨基酸的置換，可列舉例如上述的保守氨基酸置換。
[0078]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所含的肽可以為藥學上允許的鹽的形態(tài)。作為藥學上允許的鹽的實例，可列舉:與堿金屬(鋰、鉀、鈉等)的鹽、與堿土金屬(鈣、鎂等)的鹽、與有機堿(甲胺、乙胺、乙醇胺等)的鹽、與有機酸(甲酸、丙酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、草酸、苯甲酸、甲烷磺酸、苯磺酸等)的鹽及與無機酸(鹽酸、磷酸、醋酸、硫酸、溴化氫酸等)的鹽。作為優(yōu)選的實例，可列舉例如與醋酸的鹽及與鹽酸的鹽。
[0079]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有有效量的肽。“有效量”是指為了使醫(yī)藥組合物產生所期望的效果而充分的肽的量。本領域技術人員可以根據肽的種類而選擇適當的有效量。例如，肽為T細胞表位肽的情況下,在給藥醫(yī)藥組合物的受試者的體內，與沒有給藥的受試者或給藥前相比，可以將顯著地增加與遞呈該T細胞表位肽的細胞特異性地反應的T細胞的量確定為有效量。肽為T細胞表位肽的情況下，肽的有效量為0.1mg?lOOmg、優(yōu)選0.25mg?50mg、更優(yōu)選0.5mg?20mg、進一步優(yōu)選0.5mg?10mg、最優(yōu)選Img?5mg之間的任意的量。在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物作為注射劑被制備的情況下，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中的肽的濃度為
0.lmg/mL ?100mg/mL、優(yōu)選 0.25mg/mL ?50mg/mL、更優(yōu)選 0.5mg/mL ?20mg/mL、進一步優(yōu)選0.5mg/mL?10mg/mL、最優(yōu)選lmg/mL?5mg/mL之間的任意的濃度。
[0080]或者，肽的有效量可以作為摩爾量被選擇。例如，肽為T細胞表位肽的情況下，妝的有效量為0.1 μ moL?100 μ moL、優(yōu)選0.25 μ moL?50 μ moL、更優(yōu)選0.5 μ moL?20 μ moL、進一步優(yōu)選I μ moL?10 μ moL、最優(yōu)選I μ moL?5 μ moL之間的任意的量。在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物作為注射劑被制備的情況下，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中的肽的濃度為
0.1 μ moL/mL ?100 μ moL/mL、優(yōu)選 0.25 μ moL/mL ?50 μ moL/mL、更優(yōu)選 0.5 μ moL/mL ?20 μ moL/mL>3?一步/[尤 0.5 μ moL/mL ~ 10 μ moL/mL、最/[尤 I μ moL/mL ~ 5 μ moL/mL 之|1]的任意的濃度。
[0081]在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有多種肽的情況下，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有分別為有效量的各肽。該情況下，本領域技術人員可以根據肽的種類而選擇適當的有效量。在肽為T細胞表位肽的情況下，各肽的有效量及本醫(yī)藥組合物中的濃度與上述相同。
[0082]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物除肽之外，含有堿性氨基酸和/或堿。通過本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有堿性氨基酸和/或堿，即使為對于水的溶解度低的肽，也可以以水溶液的狀態(tài)含有有效量。另外，即使為多種肽，也可以含有各肽的有效量。
[0083]“堿性氨基酸”是指顯示堿性的氨基酸。具體而言，可列舉:賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸及組氨酸等。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以含有I種或2種以上的這些堿性氨基酸。堿性氨基酸可以為L型、D型的任一種，也可以為外消旋體。另外，堿性氨基酸可以為鹽的形態(tài)。作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中使用的堿性氨基酸的優(yōu)選的實例，可列舉賴氨酸及精氨酸。在優(yōu)選的實施方式中，堿性氨基酸為精氨酸。在更優(yōu)選的實施方式中，堿性氨基酸為L-精氨酸。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中的堿性氨基酸的含量沒有特別限定，在為注射劑的情況下，為2mg/mL以上,優(yōu)選5mg/mL以上，更優(yōu)選7.5mg/mL以上,進一步優(yōu)選10mg/mL以上,最優(yōu)選15mg/mL以上。含量的上限沒有特別限定，可以根據使用的堿性氨基酸的種類及給藥路徑，參照例如《醫(yī)藥品添加物詞典2007》(醫(yī)藥品添加劑協(xié)會編集、藥事日報社)中記載的最大使用量。例如，皮下注射劑的情況，L-精氨酸的I天的最大使用量為20mg。因此，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物為皮下注射劑、且含有L-精氨酸作為堿性氨基酸的情況下，作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中的L-精氨酸的濃度，可以選擇至20mg/mL的濃度(給藥本發(fā)明的醫(yī)藥組合物ImL的情況)。
[0084]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以取代堿性氨基酸、或與堿性氨基酸組合而含有堿。在本說明書中，“堿”是指:根據阿倫尼烏斯的定義、在溶解于水時產生氫氧化物離子的物質。另夕卜，根據勞里-布朗斯特的定義，堿是指接受質子的物質，根據路易斯的定義，堿是指供給電子對而可以形成雙鍵的物質。具體而言，可列舉:氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、三乙醇胺、氨基丁三醇及葡甲胺等。作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中所使用的堿的優(yōu)選的實例，可列舉碳酸鈉及碳酸氫鈉。碳酸鈉及碳酸氫鈉可以為水合物的形態(tài)。在優(yōu)選的實施方式中，堿為碳酸鈉或其水合物(例如Na2CO3* 1H2O)。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中的堿的含量沒有特別限定，在為注射劑的情況下，為0.5mg/mL以上,優(yōu)選lmg/mL以上,更優(yōu)選2mg/mL以上,進一步優(yōu)選3mg/mL以上，最優(yōu)選5mg/mL以上。含量的上限沒有特別限定，可以根據使用的堿的種類及給藥路徑，參照例如《醫(yī)藥品添加物詞典2007》(醫(yī)藥品添加劑協(xié)會編集、藥事日報社)中記載的最大使用量。例如，皮下注射劑的情況下，十水合碳酸鈉(十水合碳酸鈉:Na2CO3.1H2O)的I天的最大使用量為20.8mg(換算為碳酸鈉(Na2CO3)時，為7.7mg)。因此，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物為皮下注射劑、且含有碳酸鈉作為堿的情況下，作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中的十水合碳酸鈉的濃度，可以選擇至20.8mg的濃度，作為碳酸鈉的濃度，可以選擇至7.7mg/mL的濃度(給藥本發(fā)明的醫(yī)藥組合物ImL的情況)。
[0085]在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有I種或2種以上的肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸及堿。在更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有I種或2種以上的肽作為有效成分，且含有精氨酸及碳酸鈉。進一步優(yōu)選的實施方式為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有I種或2種以上的T細胞表位肽作為有效成分，且含有精氨酸及碳酸鈉。
[0086]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以根據需要組合醫(yī)藥品添加物詞典2007 (藥事日報社)中記載的添加劑。作為添加劑，可列舉例如:懸浮劑(氯化苯甲烴銨、月桂基硫酸鈉、月桂基氨基丙酸、單硬脂酸甘油、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素等)、分散劑(檸檬酸鈉、輕質氧化鋁、聚山梨醇酯、聚乙二醇、糊精、低取代度羥丙基纖維素、羥丙基纖維素等)、乳化劑(甘油、丙二醇、鯨蠟醇、卵磷脂、羊毛脂、月桂基硫酸鈉等)、表面活性劑(鯨蠟醇、聚氧乙烯十六烷基醚、聚桂醇等)、等滲劑(葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露醇、甘油、氯化鈉等)、pH調整劑(磷酸鹽、醋酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等緩沖劑、鹽酸、磷酸等無機酸及其鹽、醋酸、檸檬酸、乳酸等有機酸及其鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣等氫氧化物等)、無痛化劑(肌酸酐、芐醇等)、穩(wěn)定劑(牛磺酸、氨基酸、對羥基苯甲酸酯類、芐醇、結晶纖維素、聚乙二醇等)。這些添加劑可以單獨使用或適當組合而使用。
[0087]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以在溶解有堿性氨基酸和/或堿的藥學上允許的水性溶劑中溶解肽后，按照在本【技術領域】中公知的方法進行制劑化。在制劑化時，可以添加如上所述的添加劑。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以根據給藥路徑為例如膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、糖漿制劑、乳劑、栓劑、注射劑等形態(tài)。
[0088]在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物作為注射劑被提供。注射劑可以使用藥學上允許的水性溶劑而制備。例如，作為溶劑，可以使用水、生理鹽水及磷酸緩沖液等，但并不限定于這些。在優(yōu)選的實施方式中，可以將以注射用被制備的滅菌水(注射用水)用作溶劑。注射劑可以適當含有如上所述的緩沖劑、等滲劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、無痛化劑及PH調整劑等。注射劑的PH可以根據需要，利用pH調整劑進行調整。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物為注射劑的情況下，pH優(yōu)選為6.0?11.0的范圍，更優(yōu)選為7.0?10.0的范圍。另外，pH調整劑沒有特別限定，優(yōu)選使用氫氧化鈉及鹽酸。作為注射劑被制備的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以通過皮下注射、皮內注射、靜脈內注射、或肌肉內注射等給藥于受試者。
[0089]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以作為冷凍干燥制劑被提供。冷凍干燥制劑可以通過將如上述的注射劑那樣制備的組合物填充于玻璃瓶等、進行冷凍干燥來制備。在冷凍干燥時，以良好的冷凍干燥餅的生成或肽的穩(wěn)定化為目的，可以添加作為添加劑的單糖類(葡萄糖、赤蘚糖、木酮糖、核酮糖、景天庚酮糖、核糖、甘露糖等)、二糖類(麥芽糖、纖維二糖、龍膽二糖、密二糖、乳糖、松二糖、槐糖(V π * — 7 )、海藻糖、異海藻糖、蔗糖、異蔗糖等)、糖醇(山梨糖醇、核糖醇、甘露醇等)及聚乙烯基吡咯烷酮糖。但是，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中，即使在沒有添加如上所述的添加劑的情況下，也生成良好的冷凍干燥餅，且也維持肽的穩(wěn)定性，因此，通常不需要添加如上所述的添加劑。
[0090]冷凍干燥制劑可以通過使用適當的重構溶液進行重構而經口或非經口地使用。在優(yōu)選的實施方式中，冷凍干燥制劑在重構后用作注射劑。在重構后用作注射劑的情況下，作為重構溶液，可以使用以注射用被制備的滅菌水(注射用水)、生理鹽水等。
[0091]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以對包括人在內的哺乳類(例如小鼠、大鼠、天竺鼠、兔、貓、狗、綿羊、山羊、豬、牛、馬、猴子、狒狒及黑猩猩等)使用。優(yōu)選對人使用。
[0092]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以根據作為有效成分含有的肽的種類適當選擇適用的疾病。例如，在肽為T細胞表位肽的情況下，可以以誘導對該T細胞表位肽所來自的抗原的免疫應答為目的給藥于受試者。例如，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽的情況下，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以在給藥受試者的體內為了誘導對腫瘤的免疫應答而使用。該情況下，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以以治療或預防癌癥為目的給藥于受試者。
[0093]因此，在其它實施方式中，本發(fā)明提供一種醫(yī)藥組合物，其含有I種或2種以上的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸和/或堿，用于誘導對腫瘤的免疫應答。另外，在其它實施方式中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物為一種對腫瘤的免疫應答誘導劑，其含有I種或2種以上的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸和/或堿。另外，在其它實施方式中，本發(fā)明提供一種醫(yī)藥組合物，其含有I種或2種以上的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸和/或堿，用于預防或治療癌癥。
[0094]另外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有I種或2種以上的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽的情況下，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以作為癌癥疫苗被提供。因此，在其它實施方式中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物為一種癌癥疫苗，其含有I種或2種以上的來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸和/或堿。
[0095]在上述的情況下，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物所適用的腫瘤或癌癥沒有特別限定，根據該醫(yī)藥組合物中所含的T細胞表位肽的種類適當選擇。作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以適用的腫瘤或癌癥的實例，可列舉例如:膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、子宮體癌、膽管癌、大腸癌、食道癌、胃癌、肝癌、肺癌、骨肉瘤、滑膜肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、軟組織腫瘤、睪丸腫瘤、間皮瘤、頭頸部癌、皮膚癌、淋巴瘤、慢性骨髓性白血病及急性骨髓性白血病等，但并不限定于這些。
[0096]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有T細胞表位肽作為有效成分的情況下，除上述的成分之夕卜，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以含有用于增強免疫應答的佐劑。本說明書中使用的“佐劑”這樣的用語是指:在與具有免疫原性的蛋白質一起(或連續(xù))給藥的情況下，增強對該蛋白質的免疫應答的物質。作為可以使用的佐劑的實例，可以列舉例如:弗氏不完全佐劑、弗氏完全佐劑、GM-CSF其它免疫刺激性細胞因子、皂角苷、皂角苷衍生物、脂多糖、脂肽、乳鐵蛋白、CpG低聚核苷酸、細菌DNA、咪唑并喹啉等，但并不限定于這些。另外，文獻(例如Clin.Microb1l.Rev.，7:277-289，1994)中記載的佐劑等也可以使用。這些佐劑可以單獨使用，也可以組合使用2種以上的佐劑。
[0097]在佐劑為親水性的物質的情況下，該佐劑可以在含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液中溶解肽之前或溶解之后添加于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中。另一方面，在佐劑為油性佐劑的情況下，該佐劑優(yōu)選在溶解肽之后添加于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。該情況下，優(yōu)選通過在佐劑添加后進行攪拌而制成乳劑的形態(tài)。例如，在含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液中溶解肽而進行過濾滅菌后，與油性佐劑進行混合并攪拌，由此可以將本發(fā)明的醫(yī)藥組合物作為乳化制劑制備?；蛘?，在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物為冷凍干燥制劑的情況下，進行該冷凍干燥制劑的重構之后，與油性佐劑進行混合并攪拌，由此可以制成乳劑的形態(tài)。與油性佐劑的乳化制劑或乳劑可以通過皮下注射、皮內注射、靜脈內注射、或肌肉內注射等給藥于受試者。在優(yōu)選的實施方式中，乳化制劑或乳劑通過皮下注射給藥于受試者。另外，作為可以用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的油性佐劑的典型的實例，可以列舉弗氏不完全佐劑，但并不限定于此。
[0098]2.本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的制造方法
[0099]另外，本發(fā)明提供一種本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的制造方法。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以通過如下方法來制造，即，在藥學上允許的水性溶劑中溶解堿性氨基酸和/或堿，制作含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液之后，在該水溶液中溶解肽，按照在本【技術領域】中公知的方法進行制劑化。因此，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的制造方法包含在含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液中溶解I種或2種以上的肽的工序。
[0100]例如，在以注射用被制備的滅菌水(例如日本藥典中所規(guī)定的注射用水)等藥學上允許的水性溶劑中溶解堿性氨基酸(例如L-精氨酸)及堿(例如碳酸鈉或其水合物)，制作水溶液。此時，水溶液中的堿性氨基酸及堿的濃度可以根據堿性氨基酸及堿的種類、肽對于水的溶解度、以及最終的劑型等適當選擇。
[0101]例如,在使用L-精氨酸作為堿性氨基酸的情況下,可以選擇Omg/mL?100mg/mL的濃度。濃度的下限可以優(yōu)選設為2mg/mL、5mg/mL、7.5mg/mL、10mg/mL或15mg/mL。另外,濃度的上限可以參照例如《醫(yī)藥品添加物詞典2007》(醫(yī)藥品添加劑協(xié)會編集、藥事日報社)中記載的最大使用量、根據設想的最終的給藥量選擇該水溶液中的濃度。例如，為含有T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物的情況下，通常與等量的油性佐劑進行混合、攪拌并做成乳劑后，將ImL的乳劑通過皮下注射給藥于受試者。另外，使用作為堿性氨基酸的L-精氨酸的情況下，根據《醫(yī)藥品添加物詞典2007》，利用皮下注射的I天的最大使用量為20mg。因此，在使用作為堿性氨基酸的L-精氨酸的情況下，作為上述水溶液中的L-精氨酸的濃度，可以選擇40mg/mL、或低于其的濃度。
[0102]另外，例如，在使用作為堿的碳酸鈉或其水合物的情況下，作為換算為碳酸鈉的濃度，可以選擇Omg/mL?20mg/mL的濃度。濃度的下限可以設為優(yōu)選0.5mg/mL、lmg/mL、2mg/mL、3mg/mL或5mg/mL。另外,濃度的上限可以參照例如《醫(yī)藥品添加物詞典2007》(醫(yī)藥品添加劑協(xié)會編集、藥事日報社)中記載的最大使用量、根據設想的最終的給藥量選擇上述水溶液中的濃度。例如，為含有T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物的情況下，通常與等量的油性佐劑進行混合、攪拌并做成乳劑之后，將ImL的乳劑通過皮下注射給藥于受試者。另外，使用十水合碳酸鈉(十水合碳酸鈉=Na2CO3.1H2O)作為堿的情況下，根據《醫(yī)藥品添加物詞典2007》，利用皮下注射的I天的最大使用量為20.8mg(換算為碳酸鈉(Na2CO3)時，為7.7mg)。因此，在使用十水合碳酸鈉作為堿的情況下，作為上述水溶液中的十水合碳酸鈉的濃度，可以選擇41.6mg/mL(以碳酸鈉換算計為15.4mg/mL)或低于其的濃度。
[0103]制作含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液之后，在該水溶液中溶解I種或2種以上的肽。在溶解2種以上的肽的情況下，也可以同時溶解全部種類或一部分的肽，但優(yōu)選使每I種逐個溶解。關于溶解肽的順序，通常不需要考慮。在溶解肽時，可以根據需要利用pH調整劑調整pH。作為優(yōu)選的pH的范圍，可以列舉pH8.0?11.0的范圍，但并不限定于此。需要說明的是，肽溶解后的水溶液的PH通常為上述的范圍內，因此，通常不需要調整pH。
[0104]上述水溶液中的各肽的濃度可以以最終的給藥量成為有效量的方式根據劑型適當選擇。例如，肽為T細胞表位肽的情況下，各肽的有效量通常為0.1mg?lOOmg。另外，為含有T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物的情況下，大多與等量的油性佐劑進行混合、攪拌并做成乳劑之后，將ImL的乳劑通過皮下注射給藥于受試者。因此，上述水溶液中的各肽的濃度可以從0.2mg/mL?200mg/mL的范圍中選擇。典型而言，肽為T細胞表位肽的情況下，上述水溶液中的各肽的濃度可以從lmg/mL?20mg/mL的范圍中選擇。
[0105]或者，各肽的有效量可以作為摩爾量算出。例如，肽為T細胞表位肽的情況下，各肽的有效量通常為0.1 μ moL?100 μ moL。另外，為含有T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物的情況下，大多與等量的油性佐劑進行混合、攪拌并做成乳劑之后，將ImL的乳劑通過皮下注射給藥于受試者。因此，上述水溶液中的各肽的濃度可以從0.2 μ moL/mL?200 μ moL/mL的范圍中選擇。典型而言，肽為T細胞表位肽的情況下，上述水溶液中的各肽的濃度可以從
Iμ moL/mL?20 μ moL/mL的范圍中選擇。
[0106]在溶解2種以上的肽的情況下，上述水溶液中的各肽的濃度可以相同，也可以不同。將各肽的濃度設為相同的情況下，各肽的濃度可以以重量濃度設為相同，也可以以摩爾濃度設為相同。在本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中，只要含有有效量的各肽即可，因此，各肽的組合比沒有特別限定。
[0107]在上述水溶液中溶解肽之后，可以按照在本【技術領域】中公知的方法進行制劑化。另外，也可以在肽的溶解前或溶解后、根據需要添加如上所述的添加劑和/或佐劑。
[0108]在注射劑的情況下，可以通過例如將如上述那樣制備的肽溶解液進行過濾滅菌、填充于安瓿、玻璃瓶、塑料容器等適當的容器中并進行密封來制備。在過濾滅菌中，可以使用例如0.22 μ m孔徑的無菌過濾用過濾器等。
[0109]另外，在冷凍干燥制劑的情況下，可以通過例如將如上述那樣制備的肽溶解液進行過濾滅菌、填充于安瓿、玻璃瓶、塑料容器等適當的容器中后、進行冷凍干燥來制備。冷凍干燥結束后，進行復壓并密封容器。就冷凍干燥的條件而言，只要是本領域技術人員，就可以適當選擇。
[0110]在肽為T細胞表位肽的情況下，也可以做成與油性佐劑的乳劑制劑。例如，將如上述那樣制備的肽溶解液進行過濾滅菌，在無菌條件下與進行了過濾滅菌的油性佐劑進行混合、攪拌，由此可以制備乳劑制劑。肽溶解液和油性佐劑的混合比通常為1:1，但并不限定于此。就乳劑的制備而言，在制藥工廠等中進行的情況下，可以使用通過蒸汽滅菌等進行了滅菌的乳化機而進行。另外，乳劑的制備可以在成為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的給藥受試者的患者存在的醫(yī)院等設施中進行。在醫(yī)院等設施中，在給藥之前?24小時前，使用注射器等，將如上述那樣制備的注射劑及油性佐劑進行混合、攪拌，由此可以進行乳劑的制備?；蛘?，可以將如上述那樣制備的冷凍干燥制劑進行重構后，與注射劑同樣地，使用注射器等制備乳劑。
[0111]3.本發(fā)明的試劑盒
[0112]本發(fā)明還提供一種含有(a)本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的冷凍干燥制劑、及(b)該本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的冷凍干燥制劑的重構溶液的試劑盒。
[0113]在本發(fā)明的試劑盒中作為冷凍干燥制劑含有的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以為上述的任一種醫(yī)藥組合物。優(yōu)選本發(fā)明的試劑盒中所含的醫(yī)藥組合物為含有T細胞表位肽作為肽的醫(yī)藥組合物，更優(yōu)選為含有來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物。冷凍干燥制劑中所含的T細胞表位肽可以為I種，也可以為多種。
[0114]本發(fā)明的試劑盒中所含的重構溶液沒有特別限定，可以使用以注射用被制備的滅菌水(注射用水)、生理鹽水等。另外，可以在重構溶液中溶解與冷凍干燥制劑中所含的肽種類不同的肽。
[0115]本發(fā)明的試劑盒的優(yōu)選的實施方式為含有由序列號1、2、3或4所示的氨基酸序列構成的肽的I種或2種以上的冷凍干燥制劑，和由重構溶液構成的試劑盒。另外，本發(fā)明的試劑盒的其它優(yōu)選的實施方式為含有由序列號1、2、3或4所示的氨基酸序列構成的肽的I種或2種以上的冷凍干燥制劑，和由含有包含序列號5所示的氨基酸序列構成的肽的重構溶液的試劑盒。作為這種試劑盒的實例，可列舉含有由序列號1、2、3或4所示的氨基酸序列構成的肽的全部種類的冷凍干燥制劑，和由含有包含序列號5所示的氨基酸序列構成的肽的重構溶液的試劑盒。
[0116]本發(fā)明的試劑盒除上述(a)及(b)之外，可以含有(C) I種或2種以上的佐劑。佐劑沒有特別限定，可以使用弗氏不完全佐劑、弗氏完全佐劑等油性佐劑等。
[0117]在上述本發(fā)明的試劑盒中，在向受試者給藥前，由重構溶液重構冷凍干燥制劑。重構后的重構組合物中的各肽的最終濃度優(yōu)選為0.2mg/mL以上。在優(yōu)選的實施方式中，以各肽的最終濃度成為lmg/mL?20mg/mL的方式進行重構?；蛘撸谝岳鋬龈稍镏苿┲械母麟牧砍蔀榈饶柕姆绞教砑拥那闆r下，可以以各肽的最終濃度成為I μ moL/mL?20 μ moL/mL的方式進行重構。
[0118]重構組合物例如可以作為注射劑給藥于受試者。在本發(fā)明的試劑盒含有佐劑的情況下，可以使用注射器等與佐劑進行混合、攪拌之后，給藥于受試者。在佐劑為油性佐劑的情況下，可以通過使用注射器等進行混合、攪拌并做成乳劑。做成乳劑的情況下，與重構組合物混合的佐劑的量優(yōu)選設為與重構組合物等量，但并不限定于此。制備的乳劑可以作為注射劑給藥于受試者。在含有T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物的情況下，例如可以將乳劑ImL通過皮下注射等給藥于受試者。
[0119]本發(fā)明還提供一種含有(a)本發(fā)明的醫(yī)藥組合物、及(b) I種或2種以上的佐劑的試劑盒。該情況下，試劑盒中所含的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物優(yōu)選為水性的醫(yī)藥組合物。優(yōu)選醫(yī)藥組合物含有I種或2種以上的T細胞表位肽，更優(yōu)選含有來自腫瘤特異抗原的T細胞表位肽作為肽。佐劑沒有特別限定，可以優(yōu)選使用弗氏不完全佐劑、弗氏完全佐劑等油性佐齊U。醫(yī)藥組合物和佐劑可以通過使用注射器等進行混合、攪拌而做成乳劑。制備的乳劑可以作為注射劑給藥于受試者。在含有T細胞表位肽的醫(yī)藥組合物的情況下，例如可以將乳劑ImL通過皮下注射等給藥于受試者。
[0120]本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或其冷凍干燥制劑、重構溶液和/或佐劑優(yōu)選以封入適當的容器中的形態(tài)在本發(fā)明的試劑盒中含有。作為適當的容器的實例，可列舉例如:瓶、玻璃瓶、注射器及試管等。容器可以為2室式容器。容器可以由諸如玻璃或塑料的多樣的材料形成。優(yōu)選在容器的表面添加標簽。標簽可以表示能夠適用的疾病及用于給藥的說明等。例如，標簽可以表示冷凍干燥制劑的重構方法、乳劑的制備方法、乳劑的給藥方法等。
[0121]本發(fā)明的試劑盒可以含有上述以外的其它組件?？梢院袕纳虡I(yè)上及使用者觀點出發(fā)優(yōu)選的其它組件，例如，緩沖劑、稀釋劑、賦形劑、過濾器、針、注射器及與使用方法有關的附加文件等。
[0122]下面，列舉實施例及試驗例，對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明不應該限定于這些實施例。
[0123]實施例
[0124]注射劑用肽:
[0125]合成表I中記載的肽作為注射劑用的肽。如表I所示，這些肽的預測pi為5.2?10.4的范圍，預料溶解特性分別不同。這些肽為來自確認具有細胞毒性T細胞誘導能力的腫瘤特異抗原的肽。
[0126]注射用水:注射用水使用日本藥典中所規(guī)定的制造用水。
[0127][表I]
[0128]
肽名稱I氨基酸序列I序列號I預測Pl (平均pKa)
肽 -1SYGVLLWEI~?6.75(6.48)
肽 -2EYYELFVNI~ 27.90(6.80)
肽 -3KVYLRVRPLL 310.4(9.72)
肽 -4IYTWIEDHF~ 45.20(6.05)
肽 -5RYCNLEGPPI 59.60(8.08)
肽 -6RFVPDGNRI~ 69.09(8.02)
肽 -7SYRNEIAYL~ 79.45(8.10)
肽 -8EYCPGGNLP~89.67(7.38)
肽 -9VYGIRLEHF~97.60(7.53)
肽-?οDylnewgsrf-To6.95(7.13)
[0129]比較例I使用有注射用水的單一肽注射劑的制備
[0130]為了制備表I中記載的單一肽制劑，在注射用水ImL中分別投入表I中記載的肽。通過在室溫下進行攪拌而溶解投入的肽的總量，制備無色透明的肽單一溶液。其后，將得到的肽溶液進行過濾滅菌(0.22 μ m過濾器)，得到注射劑。
[0131]肽的投入量在2?20mg的范圍內發(fā)生變化，在各濃度階段制備注射劑。關于肽_3、
5、6、8、9，在試驗的任一投入量中，均可得到注射劑。另一方面，關于肽-1、2、4、7、10，在試驗的任一投入量中，均不能得到注射劑。對這些肽確認可以制備注射劑的濃度，結果，就肽-7而言，只要為0.5mg/mL的濃度，就可以得到注射劑，但其它肽即使為0.08mg/mL的濃度，也不能得到注射劑。
[0132]實施例1使用有碳酸鈉溶液的單一肽注射劑的制備
[0133]將十水合碳酸鈉(Na2CO3.1H2O) 4Img溶解于注射用水lmL，得到含碳酸鈉注射用水。關于比較例I中不溶解于注射用水的肽，為了制備各肽的單一制劑，在含碳酸鈉注射用水ImL中分別投入肽_1、2、4、7、10。通過在室溫下進行攪拌而溶解投入的肽的總量，制備無色透明的肽溶液。其后，將得到的肽溶液進行過濾滅菌(0.22 μ m過濾器)，得到注射劑。
[0134]肽投入量在5?20mg的范圍內發(fā)生變化，在各濃度階段制備注射劑。就肽_2、4、
7、10而言，在試驗的任一投入量中，均可得到注射劑。關于肽-1，確認至9mg的投入量可得到注射劑。需要說明的是，得到的注射劑的PH均在作為注射劑適合的pH的范圍內(表2)。
[0135]實施例2使用有精氨酸溶液的單一肽注射劑的制備
[0136]將L-精氨酸40mg溶解于注射用水lmL，得到含精氨酸的注射用水。關于比較例I中不溶解于注射用水的肽，為了制備各肽的單一制劑，在含精氨酸的注射用水ImL中分別投入肽_1、2、4、7、10。通過在室溫下進行攪拌而溶解投入的肽的總量，制備無色透明的肽單一溶液。其后，將得到的肽溶液進行過濾滅菌(0.22 μ m過濾器)，得到注射劑。
[0137]肽的投入量在5~20mg的范圍內發(fā)生變化，在各濃度階段制備注射劑。就肽_2、
4、7、10而言，在試驗的任一投入量中，均可得到注射劑。關于肽-1，確認至6mg的投入量可得到注射劑。得到的注射劑的PH均在作為注射劑適合的pH的范圍內(表2)。
[0138]實施例3使用有碳酸鈉/精氨酸溶液的注射劑的制備
[0139]將十水合碳酸鈉41mg及L-精氨酸40mg溶解于注射用水lmL，得到含碳酸鈉/精氨酸的注射用水。為了制備表1中記載的肽的單一制劑，在含碳酸鈉/精氨酸的注射用水ImL中分別投入表1中記載的肽。通過在室溫下進行攪拌而溶解投入的肽的總量，制備無色透明的肽單一溶液。其后，將得到的肽溶液進行過濾滅菌(0.22 μ m過濾器)，得到注射劑。
[0140]肽的投入量在5~20mg的范圍內發(fā)生變化，在各濃度階段制備注射劑。關于肽_2、4~10，在試驗的任一投入量中均可得到注射劑。關于肽-1，確認至1mg的投入量可得到注射劑。另外，關于肽_3，確認至15mg的投入量可得到注射劑。得到的注射劑的pH均在作為注射劑適合的PH的范圍內(表2)。
[0141]將實施例1~3及比較例I的結果歸納于表2。關于在使用有注射用水的情況下不能制備注射劑的肽，也可以通過使用含碳酸鈉的注射用水、含精氨酸的注射用水、或含碳酸鈉/精氨酸的注射用水來制備注射劑。可以認為，在上述3種注射用水中，在試驗的任一種肽中均可以以10mg/mL以上的濃度制備注射劑的含碳酸鈉/精氨酸的注射用水作為注射劑用溶劑最優(yōu)異。
[0142][表2]
[0143]

【權利要求】
1.一種醫(yī)藥組合物，其含有I種或2種以上的肽作為有效成分，且含有堿性氨基酸和/或堿。
2.如權利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中，堿性氨基酸為選自由精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、組氨酸、羥基賴氨酸及它們的鹽構成的組中的I種或2種以上的組合。
3.如權利要求1或2所述的醫(yī)藥組合物，其中，堿為選自由碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙醇胺、氨基丁三醇及葡甲胺構成的組中的I種或2種以上的組合。
4.如權利要求1?3中任一項所述的醫(yī)藥組合物，其中，肽為T細胞表位肽。
5.如權利要求1?3中任一項所述的醫(yī)藥組合物，其中，肽為2種以上的T細胞表位肽直接或經由連接體連接而成的肽。
6.如權利要求4或5所述的醫(yī)藥組合物，其中，T細胞表位肽為由序列號1、2、3、4或5所示的氨基酸序列構成的肽的任一種或2種以上的肽。
7.如權利要求4或5所述的醫(yī)藥組合物，其中，T細胞表位肽為由序列號1、2、3或4所示的氨基酸序列構成的肽的全部種類的肽。
8.如權利要求4?7中任一項所述的醫(yī)藥組合物，其為用于誘導對腫瘤的免疫應答的醫(yī)藥組合物。
9.如權利要求8所述的醫(yī)藥組合物，其為用于預防或治療癌癥的醫(yī)藥組合物。
10.如權利要求1?9中任一項所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，以非經口制劑的形態(tài)進行制劑。
11.如權利要求10所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，非經口制劑為注射劑。
12.—種冷凍干燥制劑，其是對權利要求1?11中任一項所述的醫(yī)藥組合物進行冷凍干燥而成的。
13.—種制造醫(yī)藥組合物的方法，所述醫(yī)藥組合物為權利要求11所述的注射劑，所述方法包含將I種或2種以上的肽溶解于含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液的工序。
14.制造如權利要求12所述的冷凍干燥制劑的方法，其包含以下的工序: (1)將I種或2種以上的肽溶解于含有堿性氨基酸和/或堿的水溶液的工序；及 (2)將(I)中制備的肽溶液進行冷凍干燥的工序。
15.如權利要求14所述的制造冷凍干燥制劑的方法，其中，肽為各自由序列號1、2、3或4所示的氨基酸序列構成的肽的全部種類的肽。
16.一種試劑盒，其含有以下的(a)及(b): (a)權利要求12所述的冷凍干燥制劑'及 (b)(a)的冷凍干燥制劑的重構溶液。
17.—種試劑盒，其含有以下的(a)及(b): (a)對權利要求6或7所述的醫(yī)藥組合物進行冷凍干燥而成的冷凍干燥制劑；及 (b)含有由序列號5所示的氨基酸序列構成的肽的(a)的冷凍干燥制劑的重構溶液。
18.如權利要求16或17所述的試劑盒，其還含有以下的(c): (c)I種或2種以上的佐劑。
19.一種試劑盒，其含有以下的(a)及(b): (a)權利要求1?11中任一項所述的醫(yī)藥組合物；
(b) I種或2種以上的佐劑。
【文檔編號】A61P35/00GK104168917SQ201380013184
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2013年3月8日 優(yōu)先權日:2012年3月9日
【發(fā)明者】冰見長夫, 渡邊剛, 野上俊宏, 坂井雅美, 渡邊雪乃 申請人:腫瘤療法科學股份有限公司