芳香族陽(yáng)離子肽及其用途
【專(zhuān)利摘要】本公開(kāi)內(nèi)容提供了芳香族陽(yáng)離子肽組合物及其使用方法。該方法包括肽在電子傳遞、心磷脂過(guò)氧化的抑制、以及細(xì)胞凋亡和壞死的抑制中的用途，以治療、預(yù)防或改善自身免疫疾病或病癥的癥狀。
【專(zhuān)利說(shuō)明】芳香族陽(yáng)離子肽及其用途
[0001] 與相關(guān)申請(qǐng)的奪Y衾#
[0002]本專(zhuān)利申請(qǐng)要求于2012年2月23日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/602, 418的利益 和優(yōu)先權(quán)，所述美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)全文以引用方式并入本文。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本技術(shù)總體涉及芳香族陽(yáng)離子肽組合物和在治療、預(yù)防或改善自身免疫疾病或病 癥癥狀中的使用方法。

【背景技術(shù)】
[0004]自身免疫疾病的特征在于針對(duì)身體自身組織的方面的免疫應(yīng)答。取決于主要臨床 和病理學(xué)疾病特點(diǎn)，自身免疫疾病可廣泛分成兩類(lèi)：損害許多器官的自身免疫疾?。ㄏ到y(tǒng) 性）和其中僅單一器官或組織被自身免疫過(guò)程直接損害的自身免疫疾?。ň窒扌裕?。系統(tǒng) 性自身免疫疾病尤其例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、抗磷脂綜合征和系統(tǒng)性硬化 癥通常特征在于與廣泛多樣的自身抗原反應(yīng)的自身抗體，所述自身抗原包括DNA、細(xì)胞表面 分子和細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)蛋白質(zhì)。盡管系統(tǒng)性自身免疫的原因仍不明了，但已牽涉幾種免疫機(jī)制， 連同遺傳和環(huán)境因子。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 在一些方面，本技術(shù)提供了通過(guò)給受試者施用治療有效量的芳香族陽(yáng)離子肽或其 藥學(xué)可接受的鹽，用于治療患有自身免疫疾病的受試者，用于減少患有自身免疫疾病的受 試者中的心磷脂氧化，和/或用于減少患有自身免疫疾病的受試者中的炎癥的方法。在該 方法的一些實(shí)施例中，自身免疫疾病的特征在于增加水平的針對(duì)心磷脂的抗體。在一些實(shí) 施例中，自身免疫疾病是系統(tǒng)性紅斑狼瘡或抗磷脂綜合征。
[0006] 在本文公開(kāi)的方法的一些實(shí)施例中，施用于受試者的芳香族陽(yáng)離子 肽包括選自下述的一種或多種肽：2' ,6' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys_NH2(SS-02); Phe-D~Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20) ；D-Arg-2 ' ,6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)； 2 ' ，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap_NH2 (SS-19)，其中（atn)Dap 是 β -氛茴 酰-L-α，β-二氨基丙酸；和 2' ,6，-Dmt-D-Arg-Aid-Lys-NH2(SS-36)，其中 Aid 是 β -(6，-二甲基氨基-2'_萘酰）丙氨酸。在一些實(shí)施例中，鹽是乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在 一些實(shí)施例中，該肽包含 D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)。
[0007] 在一些實(shí)施例中，給有此需要的受試者施用治療有效量的芳香族陽(yáng)離子肽或其藥 學(xué)可接受的鹽（例如用于治療患有自身免疫疾病的受試者中的自身免疫疾病，減少心_脂 氧化和/或減少炎癥）導(dǎo)致自身免疫疾病的一種或多種癥狀的減少。例如，在一些實(shí)施例 中，受試者患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡，并且芳香族陽(yáng)離子肽施用減少或改善系統(tǒng)性紅斑狼瘡的 一種或多種癥狀，其中所述系統(tǒng)性紅斑狼瘡的癥狀是選自下述的一種或多種癥狀：增加的 心磷脂抗體水平，發(fā)熱，血管血栓形成，血小板減少癥，心臟瓣膜疾病，網(wǎng)狀青斑，胸膜炎，胸 腔積液，狼瘡性肺炎，慢性彌漫性間質(zhì)性肺疾病，肺性高血壓，肺栓塞，肺出血，肺收縮綜合 征，心包炎，心肌炎，心內(nèi)膜炎，貧血，低血小板和白細(xì)胞計(jì)數(shù)，延長(zhǎng)部分凝血活酶時(shí)間，骨關(guān) 節(jié)結(jié)核，肌痛，面頰疫，盤(pán)狀狼瘡，脫發(fā)（allopecia)，口、鼻、泌尿道和陰道潰瘍，多發(fā)性神經(jīng) 病和顱內(nèi)壓增高綜合征。
[0008]在一些實(shí)施例中，芳香族陽(yáng)離子肽經(jīng)口、腸胃外、靜脈內(nèi)、皮下、經(jīng)皮、局部或通過(guò) 吸入施用。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖 1A 和 1B 是顯示肽 D-Arg-2 '，6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增加細(xì)胞色素 C 還原率的圖表。
[0010]圖 2(上圖）是顯示肽 D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增強(qiáng)通過(guò)細(xì)胞 色素 c的電子擴(kuò)散的圖表。圖2(下圖）是顯示在l〇〇mV/s下具有漸增SS-31劑量（20mM Tris-硼酸鹽-EDTA(TBE)緩沖液 PH7的溶液中的細(xì)胞色素 c的循環(huán)伏安圖的圖。
[0011]圖 3A 和 3B 是顯示肽 D-Arg-2 '，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增加細(xì)胞色素 c 中的電子容量的圖表。 _2] 圖4是顯示肽D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)誘導(dǎo)圍繞細(xì)胞色素 c血 紅素的新型：π-?ι相互作用的圖表。
[0013]圖 5A 和 5B 是顯不肽 D-Arg-2' ,6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增加分離的線(xiàn)粒 體中的02消耗的圖表。
[0014] 圖6是顯不肽D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增加分離的線(xiàn)粒體中的 ATP合成的圖表。
[0015]圖7是顯示肽D-Arg-2 '，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增強(qiáng)細(xì)胞色素 C耗盡的 絲狀體中的呼吸的圖表。
[0016]圖 8 是顯不肽 D-Arg-2 ' ，6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)促進(jìn)細(xì)胞色素 c還原的圖表。
[0017]圖9是顯示如通過(guò)分離的大鼠腎線(xiàn)粒體中的〇2消耗測(cè)量的，肽D_ Arg-2'，6，_D mt-Lys-Phe-NH2(SS-31)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)促進(jìn)電子流量的圖表。
[0018] 圖 1〇 是顯示肽 D-Arg-2 ，，6 ，-Dmt-Lys-Phe_NH2(SS-31)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)增加分離的線(xiàn)粒體中的ATP生產(chǎn)率的圖表。
[0019] 圖 11A-11C 是顯不膚 2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap_NH2(SS-19)(圖 11A)、 2 '，6' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2 (SS-36)(圖 11C)和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Ald- NH2(SS-37)(圖11B)與心磷脂的相互作用的圖表。
[0020]圖 12A-12D 是顯示肽 2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2(SS-19)與細(xì)胞色 素 c的相互作用的圖表。
[0021] 圖 13A-13D 是顯不膚 2 '，6 ' -Dnrt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2 (SS-19)(圖 13A、 13B)、2 '，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Ald-NH2 (SS-37)(圖 13C)和 2，，6，-Dmt-D-Arg-Aid -Lys-NH2(SS-36)(圖13D)與細(xì)胞色素 c和心磷脂（CL)的相互作用的圖表。
[0022] 圖 14A-14E 是顯不肽 2，，6 , -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2(SS-19) (圖 14B)、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20)(圖 14D)、D-Arg-2 ' ，6 ，-Dmt-Lys-P he-NH2(SS-31)(圖 14A)、2 ' ，6 ' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2(SS-36)(圖 14C)和 D-Arg-Tyr^Lys-Phe-NH2(SPI-231)(圖14E)保護(hù)細(xì)胞色素c的血紅素環(huán)境不受心磷脂的酰 基鏈影響的圖表。
[0023]圖 15A-15C 是顯示肽 D-Arg-2，，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)(圖 15A、15B)、 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)(圖 15C)、D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2(SPI-231)(圖 15C)防 止由心磷脂引起的細(xì)胞色素 c還原的抑制的圖表。
[0024]圖肅-懸是顯示肽 D-Arg_2 '，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)(圖 16A)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-2〇)(圖1明）增強(qiáng)分離的線(xiàn)粒體中的〇 2消耗的圖表。
[0025]圖17是顯示肽D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增加分離的線(xiàn)粒體中 的ATP合成的圖表。
[0026]圖 18 是顯示肽 D-Arg-2 '，6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增強(qiáng)細(xì)胞色素 C 耗盡 的絲狀體中的呼吸的圖表。
[0027]圖 19A-19C 是顯示肽 D-Arg-2 '，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)(圖 19A、19B)、 2 '，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe- (atn) Dap-NH2 (SS-19)、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20)、2，， 6 ' -Dmt-D-Arg-Aid-Lys-NH2(SS-36)、2 '，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Aid-NH2(SS-37)和 D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2(SPI-231)(圖19C)防止細(xì)胞色素c/心磷脂復(fù)合物中的過(guò)氧化物 酶活性的圖表。
[0028]圖 20A 是肽類(lèi)似物 SS-02、[atn] SS-02 (也稱(chēng)為 SS-19)、[aid] SS-02 (也稱(chēng)為 SS-36)和SS-31結(jié)構(gòu)的圖示。圖20B顯示了加入luM[atn]SS-02中的不同濃度心磷脂的 代表性發(fā)射光譜。圖20C顯示了加入1 μ M[ald]SS-02中的不同濃度心磷脂的代表性發(fā)射 光譜。圖20D顯示了在添加1 μ M[ald]SS_〇2后的P〇PS、POPA、DPPG和心磷脂的代表性發(fā)射 光譜。圖20E是顯示加入心磷脂（CL)、DPPG、P0PS、P0PA、PE和P0PC中的[ald]SS-02的相 對(duì)熒光的條形圖。圖20F是比較加入不同濃度心磷脂和脂質(zhì)體中的心磷脂中的[ atn]SS-02 的相對(duì)熒光的線(xiàn)圖。圖2〇G是顯示加入lyM[atn]SS-02中的不同濃度心磷脂（25、50、75、 100 μ g/mL)的相對(duì)熒光的條形圖。
[0029]圖21A顯示了加入不同濃度（2、4、6μΜ)細(xì)胞色素 c中的[atn]SS_02(luM)的代 表性發(fā)射光譜。圖21B顯示了加入不同濃度（2、4、6μΜ)細(xì)胞色素 c中的[ald]SS-02(luM) 的代表性發(fā)射光譜。圖21C是通過(guò)添加漸增濃度（1-?〇μΜ)的細(xì)胞色素 c的[atn] SS-02(luM)熒光猝滅的線(xiàn)圖。圖21D是在心磷脂（l〇Ug/ml)的存在和不存在下，[ atn] SS-02 (1 μ Μ)和細(xì)胞色素 c (2 μ Μ)隨著時(shí)間過(guò)去的相對(duì)熒光的圖。圖21E是在漸增濃度的 單獨(dú)的心磷脂或與脂質(zhì)體混合的心磷脂中，通過(guò)細(xì)胞色素 c的[atn] SS-02 (1 μ Μ)熒光猝滅 的線(xiàn)圖。圖21F顯示了在心磷脂（CL)的存在下，以及在心磷脂和細(xì)胞色素 c的存在下，單獨(dú) 的[aid] SS-02的代表性發(fā)射光譜。圖21G是比較在線(xiàn)粒體相對(duì)于細(xì)胞色素 c缺乏絲狀體 中[atn]SS_02的熒光猝滅百分比的條形圖。圖21H顯示了來(lái)自通過(guò)2μΜ細(xì)胞色素 c(圖 21Η中的標(biāo)記C)的序貫添加，伴隨75ug/ml BSA(圖21Η中的標(biāo)記Α)的進(jìn)一步添加猝滅的 [ant] SS-02的代表性熒光發(fā)射光譜。圖211顯示了來(lái)自通過(guò)TMRM (圖211中的標(biāo)記C)的 序貫添加，伴隨75μ g/ml BSA(圖211中的標(biāo)記A)的進(jìn)一步添加粹滅的[ant]SS-02的代 表性熒光發(fā)射光譜。
[0030]圖22A是伴隨不同濃度（0、10、20、4(^1)33-31肽的添加，關(guān)于細(xì)胞色素(；和心磷 脂的混合物在A55Q/5ro中的變化的曲線(xiàn)圖。圖22B是比較關(guān)于不同肽（對(duì)照、SS-02、[atn] SS-02、[ald]SS-02和SS-31)的細(xì)胞色素 c氧化率的條形圖。
[0031] 圖23是顯示在SS肽類(lèi)似物的不存在或存在下，單獨(dú)的或具有心磷脂（CL)的復(fù)合 物中的鐵細(xì)胞色素 c的索雷帶（Soret band)的代表性圓二色光譜。
[0032] 圖24是比較關(guān)于SS-02、[atn]SS-02、[ald]SS-02和SS-31，作為對(duì)照百分比的細(xì) 胞色素 c過(guò)氧化率的條形圖。
[0033] 圖 25 是比較不同肽類(lèi)似物（40μΜ ;SS-02、[atn]SS-02、[ald]SS-02 和 SS-31)在 其促進(jìn)通過(guò)抗壞血酸鹽誘導(dǎo)的心磷脂-細(xì)胞色素 c復(fù)合物還原的能力中的條形圖。CL是不 含添加的SS肽類(lèi)似物的心磷脂-細(xì)胞色素 c復(fù)合物。

【具體實(shí)施方式】
[0034] 應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的某些方面、模式、實(shí)施例、變化和特點(diǎn)在下文以不同的詳細(xì)水平 描述，以便提供本發(fā)明的基本理解。如本說(shuō)明書(shū)中使用的某些術(shù)語(yǔ)的定義在下文提供。除 非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)一般具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通 常理解相同的含義。
[0035] 在實(shí)踐本公開(kāi)內(nèi)容中，使用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)生物化學(xué)、免疫學(xué)和 細(xì)菌學(xué)的許多常規(guī)技術(shù)。這些技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的，并且在任何數(shù)目的可用出版物中 提供，包括Current Protocols in Molecular Biology,第 I-III卷，Ausubel，編輯（1997); Sambrook 等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第二版（Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989)。
[0036] 如本說(shuō)明書(shū)和所附權(quán)利要求中使用的，單數(shù)形式"一個(gè)"、"一種"和"該/所述"包 括復(fù)數(shù)所指對(duì)象，除非內(nèi)容另有明確說(shuō)明。例如，提及"細(xì)胞"包括兩種或更多種細(xì)胞的組 合等等。
[0037] 如本文使用的，試劑、藥物或肽對(duì)受試者的"施用"包括將化合物引入或遞送至受 試者以執(zhí)行其預(yù)期功能的任何途徑。施用可通過(guò)任何合適途徑執(zhí)行，包括經(jīng)口、經(jīng)鼻、腸胃 外（靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下）、局部、經(jīng)外表皮、經(jīng)直腸、皮內(nèi)、經(jīng)皮、吸入、動(dòng)脈內(nèi)、大腦 內(nèi)、骨內(nèi)、鞘內(nèi)、離子電滲法、經(jīng)眼、陰道內(nèi)等。施用包括自施用和通過(guò)另一者的施用。
[0038]如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"氨基酸"包括天然存在的氨基酸和合成氨基酸，以及氨基酸 類(lèi)似物和氨基酸模擬物，其以類(lèi)似于天然存在的氨基酸的方式起作用。天然存在的氨基酸 是由遺傳密碼編碼的氨基酸，以及以后修飾的氨基酸，例如羥腩氨酸、羧基谷氨酸鹽和 〇-磷酸絲氨酸。氨基酸類(lèi)似物指這樣的化合物，其具有與天然存在的氨基酸相同的基本化 學(xué)結(jié)構(gòu)，即與氫、羧基、氨基和R基結(jié)合的α -碳，例如高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、 甲硫氨酸甲基锍。此類(lèi)類(lèi)似物具有經(jīng)修飾的R基（例如正亮氨酸）或經(jīng)修飾的肽主鏈，但 保留與天然存在的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。氨基酸模擬物指這樣的化學(xué)化合物，其具 有不同于氨基酸的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)，但以類(lèi)似于天然存在的氨基酸的方式起作用。氨 基酸在本文中可由其通常已知的三字母符號(hào)或由IUPAC-IUB生物化學(xué)命名委員會(huì)推薦的 單字母符號(hào)提及。
[0039] 如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"有效量"指足以實(shí)現(xiàn)所需治療和/或預(yù)防效應(yīng)的數(shù)量。在治 療或預(yù)防應(yīng)用的背景下，施用于受試者的組合物量將取決于疾病的類(lèi)型和嚴(yán)重性，以及個(gè) 體的特征，例如一般健康、年齡、性別、體重和對(duì)藥物的耐受。它還將取決于疾病的程度、嚴(yán) 重性和類(lèi)型。取決于這些及其他因素，技術(shù)人員將能夠測(cè)定適當(dāng)劑量。組合物還可與一種 或多種另外的治療性化合物組合施用。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)"有效量"指足以實(shí)現(xiàn)所需療 效，例如緩解（aleviate)或改善疾病或病癥例如抗磷脂綜合征或系統(tǒng)性紅斑狼瘡的體征 或癥狀的數(shù)量。
[0040]如本文使用的，"外源核酸"指這樣的核酸（例如DNA、RNA)，其并非天然存在于宿 主細(xì)胞內(nèi)，而是從外部源引入。如本文使用的，外源核酸指未整合到宿主細(xì)胞的基因組內(nèi)而 是保持分離的核酸，例如細(xì)菌質(zhì)粒核酸。如本文使用的，"細(xì)菌質(zhì)粒"指細(xì)菌起源的環(huán)狀 DNA， 其充當(dāng)目的序列的載體和用于在細(xì)菌宿主細(xì)胞中表達(dá)序列的工具。
[0041 ] "分離的"或"純化的"多肽或肽基本上不含來(lái)自試劑源自其的細(xì)胞或組織來(lái)源的 細(xì)胞材料或其他污染多肽，或當(dāng)化學(xué)合成時(shí)，基本上不含化學(xué)前體或其他化學(xué)品。例如，分 離的芳香族陽(yáng)離子肽或分離的細(xì)胞色素 c蛋白質(zhì)將不含這樣的材料，其將干擾試劑的診斷 或治療用途，或干擾肽的電導(dǎo)或電子特性。此類(lèi)干擾材料可包括酶、激素及其他蛋白質(zhì)性和 非蛋白質(zhì)性溶質(zhì)。
[0042] 如本文使用的，"誘導(dǎo)型啟動(dòng)子"指這樣的啟動(dòng)子，其受某些條件例如溫度或特定 分子的存在影響，且僅在滿(mǎn)足這些條件時(shí)，促進(jìn)可操作地連接的目的核酸序列的表達(dá)。
[0043] 如本文使用的，"組成型啟動(dòng)子"指這樣的啟動(dòng)子，其在所有或大多數(shù)環(huán)境條件下 促進(jìn)可操作地連接的目的核酸序列的表達(dá)。
[0044] 如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"多肽"、"肽"和"蛋白質(zhì)"在本文中可互換使用，以意指包含通 過(guò)肽鍵或經(jīng)修飾的肽鍵彼此連接的兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸的聚合物，即肽等排物。多肽指通 常被稱(chēng)為肽、糖肽或寡聚物的短鏈，和一般被稱(chēng)為蛋白質(zhì)的更長(zhǎng)鏈兩者。多肽可含有20種 基因編碼的氨基酸以外的氨基酸。多肽包括通過(guò)天然過(guò)程例如翻譯后加工、或通過(guò)本領(lǐng)域 眾所周知的化學(xué)修飾技術(shù)進(jìn)行修飾的氨基酸序列。
[0045] 如本文使用的,"重組細(xì)菌"指已改造為攜帶和/或表達(dá)一種或多種外源核酸（例 如DNA)序列的細(xì)菌。
[0046] 如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"處理"或"治療"或"減輕"指治療性處理和預(yù)防或防止措施 兩者，其中目的是預(yù)防或減慢（減輕）靶向病理學(xué)病癥或障礙。還應(yīng)當(dāng)理解如所述的醫(yī)學(xué) 病癥的多種治療或預(yù)防模式意指"基本的"，其包括完全治療或預(yù)防以及少于完全治療或預(yù) 防，并且其中達(dá)到一些生物學(xué)或醫(yī)學(xué)相關(guān)結(jié)果。
[0047] 如本文使用的，障礙或病癥的"預(yù)防"或"防止"指這樣的化合物，相對(duì)于未經(jīng)處理 的對(duì)照樣品，其降低經(jīng)處理的樣品中的障礙或病癥的出現(xiàn)，或者相對(duì)于未經(jīng)處理的對(duì)照樣 品，延遲障礙或病癥的-種或多種癥狀的爆發(fā)或降低障礙或病癥的一種或多種癥狀的嚴(yán)重 性。
[0048] 芳莕旌陽(yáng)離子狀:
[0049] 本技術(shù)涉及芳香族陽(yáng)離子肽的用途。在一些實(shí)施例中，該肽可用于涉及治療或改 善特征在于抗心磷脂抗體的存在的癥狀、病癥或疾?。ɡ缈沽字C合征和系統(tǒng)性紅斑狼 瘡）的方面。
[0050]芳香族陽(yáng)離子肽是水溶性和高度極性的。盡管有這些特性，該肽仍可容易地穿透 細(xì)胞膜。芳香族陽(yáng)離子肽通常包括由肽鍵共價(jià)連接的最少三個(gè)氨基酸或最少四個(gè)氨基酸。 芳香族陽(yáng)離子肽中存在的氨基酸的最大數(shù)目是由肽鍵共價(jià)連接的約二十個(gè)氨基酸。適當(dāng) 地，氨基酸的最大數(shù)目是約十二、約九或約六。
[0051]芳香族陽(yáng)離子肽的氨基酸可以是任意氨基酸。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"氨基酸"用于 指含有至少一個(gè)氨基和至少一個(gè)羧基的任何有機(jī)分子。通常，至少一個(gè)氨基在相對(duì)于羧基 的α位置處。氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括例如在哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì) 中通常發(fā)現(xiàn)的二十種最常見(jiàn)的左旋（L)氨基酸，即丙氨酸（Ala)、精氨酸（Arg)、天冬酰胺 (Asn)、天冬氨酸（Asp)、半胱氨酸（Cys)、谷氨酰胺（Gin)、谷氨酸（Glu)、甘氨酸（Gly)、組氨 酸（His)、異亮氨酸（lie)、亮氨酸（Leu)、賴(lài)氨酸（Lys)、甲硫氨酸（Met)、苯丙氨酸（Phe)、 脯氨酸（Pro)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)、色氨酸（Trp)、酪氨酸（Tyr)和纈氨酸（Val)。其 他天然存在的氨基酸包括例如在與蛋白質(zhì)合成不相關(guān)的代謝過(guò)程中合成的氨基酸。例如， 氨基酸鳥(niǎo)氨酸和瓜氨酸在尿素生產(chǎn)過(guò)程中的哺乳動(dòng)物代謝中合成。天然存在的氨基酸的另 一個(gè)例子包括輕脯氨酸（Hyp)。
[0052]該肽任選含有一種或多種非天然存在的氨基酸。最佳地，該肽不具有天然存在的 氨基酸。天然存在的氨基酸可以是左旋的（L-)、右旋的（D-)或其混合物。非天然存在的氨 基酸是這樣的氨基酸，其通常在活生物體中的正常代謝過(guò)程中未合成，并且在蛋白質(zhì)中未 天然存在。另外，天然存在的氨基酸適當(dāng)?shù)匾膊挥沙Ｒ?jiàn)蛋白酶識(shí)別。天然存在的氨基酸可 存在于肽中的任何位置處。例如，非天然存在的氨基酸可在N末端、C末端或N末端和C末 端之間的任何位置處。
[0053] 非天然氨基酸可例如包含在天然氨基酸中未發(fā)現(xiàn)的烷基、芳基或烷基芳基。非天 然烷基氨基酸的一些例子包括α -氨基丁酸、β -氨基丁酸、γ -氨基丁酸、δ -氨基戊酸和 ε -氨基己酸。非天然芳基氨基酸的一些例子包括鄰、間和對(duì)氨基苯甲酸。非天然烷基芳基 氨基酸的一些例子包括鄰、間和對(duì)氨基苯乙酸和苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨 基酸包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍生物可例如包括一個(gè)或多個(gè) 化學(xué)基團(tuán)對(duì)天然存在的氨基酸的添加。
[0054] 例如，一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)可加入苯丙氨酸或酪氨酸殘基的芳環(huán)的W、3'、4'、 5'或…位置或者色氨酸殘基的苯并環(huán)的4'、5<、6<或7'位置中的一個(gè)或多個(gè)?；鶊F(tuán) 可以是可加入芳環(huán)的任何化學(xué)基團(tuán)。此類(lèi)基團(tuán)的一些例子包括分支或未分支的(^-(；烷基， 例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基或叔丁基、(^-(；烷基氧基（即烷氧基）、氨基、 crc4烷基氨基和CrC4二烷基氨基（例如甲基氨基、二甲氨基）、硝基、羥基、鹵素（即氟、氯、 溴或碘）。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些具體例子包括正纈氨酸（Nva) 和正亮氨酸（Nle)。
[0055]肽中的氨基酸修飾的另一個(gè)例子是肽的天冬氨酸或谷氨酸殘基的羧基的衍生化。 一個(gè)衍生化例子是由氨或者由伯胺或仲胺酰胺化，所述伯胺或仲胺例如甲胺、乙胺、二甲胺 或二乙胺。另一個(gè)衍生化例子包括由例如甲醇或乙醇酯化。另一種此類(lèi)修飾包括賴(lài)氨酸、 精氨酸或組氨酸殘基的氨基的衍生化。例如，此類(lèi)氨基可以是酰化的。一些合適的酰基包 括例如苯甲?；虬衔奶峒暗腝-Q烷基中的任一個(gè)的烷?；缫阴；虮；?。 [00 56] 非天然存在的氨基酸適當(dāng)?shù)貙?duì)常見(jiàn)蛋白酶是抗性或不敏感的。對(duì)蛋白酶是抗性或 不敏感的非天然存在的氨基酸的例子包括右旋（D-)形式的上述天然存在的L-氨基酸中的 任一個(gè)，以及L-和/或D-非天然存在的氨基酸。D-氨基酸通常不存在于蛋白質(zhì)中，盡管它 們?cè)谀承╇目股刂邪l(fā)現(xiàn)，所述肽抗生素由細(xì)胞的正常核糖體蛋白合成機(jī)制以外的方法合 成。如本文使用的，D-氨基酸視為非天然存在的氨基酸。
[0057] 為了使蛋白酶敏感性降到最低，該肽應(yīng)具有由常見(jiàn)蛋白酶識(shí)別的小于五個(gè)、小于 四個(gè)、小于三個(gè)或小于兩個(gè)連接L-氨基酸，與氨基酸是天然存在的還是非天然存在的無(wú) 關(guān)。在一個(gè)實(shí)施例中，該肽僅具有D-氨基酸，且不具有L-氨基酸。如果該肽含有蛋白酶敏 感的氨基酸序列，則氨基酸中的至少一個(gè)優(yōu)選是非天然存在的D-氨基酸，由此賦予蛋白酶 抗性。蛋白酶敏感序列的例子包括由常見(jiàn)蛋白酶例如內(nèi)肽酶和胰蛋白酶容易切割的兩個(gè)或 更多個(gè)連接的堿性氨基酸。堿性氨基酸的例子包括精氨酸、賴(lài)氨酸和組氨酸。
[0058] 與肽中的氨基酸殘基總數(shù)目相比較，芳香族陽(yáng)離子肽應(yīng)在生理pH下具有最小數(shù) 目的凈正電荷。在生理pH下的凈正電荷的最小數(shù)目在下文將被稱(chēng)為（p m)。肽中的氨基酸 殘基總數(shù)目在下文將被稱(chēng)為（r)。下文討論的凈正電荷的最小數(shù)目均在生理pH下。如本文 使用的術(shù)語(yǔ)"生理pH"指在哺乳動(dòng)物機(jī)體的組織和器官的細(xì)胞中的正常pH。例如，人的生 理pH通常為大約7. 4,但哺乳動(dòng)物中的正常生理pH可以是約7. 0-約7. 8的任何pH。
[0059] 如本文使用的"凈電荷"指由肽中存在的氨基酸攜帶的正電荷數(shù)目和負(fù)電荷數(shù)目 的平衡。在本說(shuō)明書(shū)中，應(yīng)當(dāng)理解凈電荷在生理pH下測(cè)量。在生理pH下帶正電的天然存 在的氨基酸包括L-賴(lài)氨酸、L-精氨酸和L-組氨酸。在生理pH下帶負(fù)電的天然存在的氨 基酸包括L-天冬氨酸和L-谷氨酸。
[0060] 通常，肽具有帶正電的N末端氨基和帶負(fù)電的C末端羧基。電荷在生理pH下彼此 抵消。作為計(jì)算凈電荷的例子，肽Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg具有一個(gè)帶負(fù)電 的氨基酸（即Glu)和四個(gè)帶正電的氨基酸（即兩個(gè)Arg殘基、一個(gè)Lys和一個(gè)His)。因 此，上述肽具有凈正電荷三。
[0061] 在一個(gè)實(shí)施例中，芳香族陽(yáng)離子肽具有的在生理pH下的凈正電荷的最小數(shù)目（Pm) 和氨基酸殘基的總數(shù)目（r)之間的關(guān)系為：其中3ρ π是小于或等于r+1的最大數(shù)。在該實(shí) 施例中，凈正電荷的最小數(shù)目（pj和氨基酸殘基總數(shù)目（r)之間的關(guān)系如下：
[0062] 表1.氨基酸數(shù)目和凈正電荷（3Ρπ彡p+1)
[0063]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于治療患有特征在于增加水平的心磷脂抗體的自身免疫疾病的受 法，所述方法包括： 給所述受試者施用治療有效量的芳香族陽(yáng)離子肽或其藥學(xué)可接受的鹽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述芳香族陽(yáng)離子肽包含選自下述的一種或多種1 肽：2 ,，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH 2 (SS-02) ;Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20) ;D-Arg-2 ',6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31);2, ,6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH 2(SS-19)，其中 (atn) Dap 是 β -氣茵釀-L- α , β -二氛基丙酸；和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2 (SS 3 6)，其中Aid是β -(6' -二甲基氨基-2' -萘酰）丙氨酸。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述鹽是乙酸鹽或三氟乙酸鹽。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述肽包含D-Arg-2' , 6' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS - 31) 〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述自身免疫疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡和抗_月旨 綜合征。 ^
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中治療包括減少或改善系統(tǒng)性紅斑狼瘡的一種或多 種癥狀，其中所述系統(tǒng)性紅斑狼瘡的癥狀是選自下述的一種或多種癥狀：增加的心磷脂抗^ 體水平，發(fā)熱，血管血栓形成，血小板減少癥，心臟瓣膜疾病，網(wǎng)狀青斑，胸膜炎，胸腔積$， 狼瘡性肺炎，慢性彌漫性間質(zhì)性肺疾病，肺性高血壓，肺栓塞，肺出血，肺收縮綜合征，力@ 炎，心肌炎，心內(nèi)膜炎，貧血，低血小板和白細(xì)胞計(jì)數(shù)，延長(zhǎng)部分凝血活酶時(shí)間，骨關(guān)節(jié)結(jié)核， 肌痛，面頰疹，盤(pán)狀狼瘡，脫發(fā)，口、鼻、泌尿道和陰道潰瘍，多發(fā)性神經(jīng)病和顱內(nèi)壓增高綜合 征。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述芳香族陽(yáng)離子肽經(jīng)口、腸胃外、靜脈內(nèi)、皮下、 經(jīng)皮、局部或通過(guò)吸入施用。
8. -種用于減少患有自身免疫疾病的受試者中的心磷脂氧化的方法，所述方法包括： 給所述受試者施用有效量的芳香族陽(yáng)離子肽或其藥學(xué)可接受的鹽。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述芳香族陽(yáng)離子肽是選自下述的一種或多種：2 ',6' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-02) ；Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20) ；D-Arg-2, ,6r -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31) ;Dmt-D-Arg-Phe- (atn) Dap-NH2 (SS-19)，其中（atn) Dap 是 β -氨 茵醜-L- α, β -二氛基丙酸；和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Ald-LysHNH2 (SS-36)，其中 Aid 是 β -(6' -二甲基氨基-2' -萘酰）丙氨酸。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述鹽是乙酸鹽或三氟乙酸鹽。
11. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述自身免疫疾病的特征在于增加水平的針對(duì) 心磷脂的抗體。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述自身免疫疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡和抗磷 脂綜合征。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述方法包括減少或改善系統(tǒng)性紅斑狼瘡的一 種或多種癥狀，其中所述系統(tǒng)性紅斑狼瘡的癥狀是選自下述的一種或多種癥狀：增加的心 磷脂抗體水平，發(fā)熱，血管血栓形成，血小板減少癥，心臟瓣膜疾病，網(wǎng)狀青斑，胸膜炎，胸腔 積液，狼瘡性肺炎，慢性彌漫性間質(zhì)性肺疾病，肺性高血壓，肺栓塞，肺出血，肺收縮綜合征， 心包炎，心肌炎，心內(nèi)膜炎，貧血，低血小板和白細(xì)胞計(jì)數(shù)，延長(zhǎng)部分凝血活酶時(shí)間，骨關(guān)節(jié) 結(jié)核，肌痛，面頰疹，盤(pán)狀狼瘡，脫發(fā)，口、鼻、泌尿道和陰道潰瘍，多發(fā)性神經(jīng)病和顱內(nèi)壓增 高綜合征。
14. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述芳香族陽(yáng)離子肽經(jīng)口、腸胃外、靜脈內(nèi)、皮 下、經(jīng)皮、局部或通過(guò)吸入施用。
15. -種用于減少患有自身免疫疾病的受試者中的炎癥的方法，所述方法包括： 給具有自身免疫疾病的受試者施用有效量的芳香族陽(yáng)離子肽或其藥學(xué)可接受的鹽。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述芳香族陽(yáng)離子肽是選自下述的一種或多 種：2，,6! -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-02) ;Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS_20) ;D_Arg-2 ',6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31) ;2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2(SS-19)，其中 (atn) Dap 是 β -氨茴酰-L- α，β -二氨基丙酸；和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2 (SS-3 6)，其中Aid是β _(6' -二甲基氨基-2' -萘酰）丙氨酸。
17. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述鹽是乙酸鹽或三氟乙酸鹽。
18. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述自身免疫疾病產(chǎn)生針對(duì)心磷脂的抗體。
19. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述自身免疫疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡和抗磷 脂綜合征。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述方法包括減少或改善系統(tǒng)性紅斑狼瘡的一 種或多種癥狀，其中所述系統(tǒng)性紅斑狼瘡的癥狀是選自下述的一種或多種癥狀：增加的心 磷脂抗體水平，發(fā)熱，血管血栓形成，血小板減少癥，心臟瓣膜疾病，網(wǎng)狀青斑，胸膜炎，胸腔 積液，狼瘡性肺炎，慢性彌漫性間質(zhì)性肺疾病，肺性高血壓，肺栓塞，肺出血，肺收縮綜合征， 心包炎，心肌炎，心內(nèi)膜炎，貧血，低血小板和白細(xì)胞計(jì)數(shù)，延長(zhǎng)部分凝血活酶時(shí)間，骨關(guān)節(jié) 結(jié)核，肌痛，面頰疹，盤(pán)狀狼瘡，脫發(fā)，口、鼻、泌尿道和陰道潰瘍，多發(fā)性神經(jīng)病和顱內(nèi)壓增 高綜合征。
21. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述芳香族陽(yáng)離子肽經(jīng)口、腸胃外、靜脈內(nèi)、皮 下、經(jīng)皮、局部或通過(guò)吸入施用。
22. 根據(jù)權(quán)利要求8或15所述的方法，其中所述肽包含D-Arg-2' W -Dmt-Lys-Phe- NH2(SS-31)〇
23. 根據(jù)權(quán)利要求1、8或15所述的方法，其中所述肽包含 2 1 ，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap_NH2 (SS-19)，其中（atn) Dap 是 β -氨茴 醜-L- α，β _ -?見(jiàn)基丙fe。
24. 根據(jù)權(quán)利要求1、8或15所述的方法，其中所述肽包含2' ,6' -Dmt-D-Arg-Ald-Ly s-NH2(SS-36)，其中Aid是β -(6' -二甲基氨基_2' -萘釀）丙氨酸。
【文檔編號(hào)】A61K38/07GK104203262SQ201380016624
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2013年2月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月23日
【發(fā)明者】黑茲爾·H·司徒 申請(qǐng)人:康奈爾大學(xué)