通過施用絲氨酸蛋白酶抑制劑治療或預(yù)防流感病毒感染的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于治療和預(yù)防流感病毒感染的方法。本發(fā)明方法包括給需要其的受試者施用包含II型跨膜絲氨酸蛋白酶(TTSP)的藥物組合物。TTSP抑制劑優(yōu)選地通過抑制流感血凝素(HA0)蛋白水解切割成有功能的亞基HA1和HA2來發(fā)揮作用。在某些實(shí)施方案中，TTSP抑制劑是跨膜蛋白酶絲氨酸S1成員2(TMPRSS2)的抑制劑，例如抗TMPRSS2抗體或其抗原結(jié)合片段。
【專利說明】通過施用絲氨酸蛋白酶抑制劑治療或預(yù)防流感病毒感染的 方法 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及流感病毒感染的治療和預(yù)防。更特別地，本發(fā)明涉及使用II型跨膜絲 氨酸蛋白酶抑制劑（TTSP)，如抗-TMPRSS2抗體在受試者中治療或預(yù)防流感病毒感染。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 流感病毒感染過程從病毒顆粒（病毒體）附著到靶細(xì)胞開始，然后是病毒包膜與 靶細(xì)胞膜融合。病毒附著和細(xì)胞融合通過病毒包膜蛋白血凝素（HA)介導(dǎo)。HA由兩個(gè)亞基 組成：HAl介導(dǎo)附著步驟，而HA2介導(dǎo)融合步驟。HA最初合成為沒有活性的前體（HAO)，其 中HAl和HA2通過蛋白酶敏感的連接體序列連接。通過宿主細(xì)胞蛋白酶切割連接體產(chǎn)生了 有功能的HAl和HA2亞基。因?yàn)镠A的切割是必要的，所以認(rèn)為流感病毒感染過程中的宿 主介導(dǎo)步驟（介導(dǎo)HA活化的宿主細(xì)胞蛋白酶）是針對(duì)流感感染的治療靶點(diǎn)（參見例如， Bottcher 等，（2006) J. Virol. 80:9896-9898)。
[0004] 涉及流感HA切割的宿主細(xì)胞蛋白酶包括TTSP如跨膜蛋白酶絲氨酸Sl成員 2 (TMPRSS2)、TMPRSS4和人呼吸道胰島素樣蛋白酶（HAT)。（參見例如，Bahgat等，（2011) Virol. J.8:27,以及其中引用的參考文獻(xiàn)）。這些蛋白酶在人呼吸道上皮細(xì)胞中表 達(dá)。（參見 Bertram等，（2010) Rev. Med. Virol. 20:298-310)。已經(jīng)報(bào)道，使用在空間 上阻斷TMPRSS2cRNA的單鏈DNA樣反義試劑（PPMO)在體外處理人呼吸道上皮細(xì)胞系 (Calu-3)造成了 HlNl 病毒滴度的降低。（參見 Bottcher-Friebertshauser 等人，（2011) J. Virol. 85:1554-1562)。然而，并沒有直接顯示動(dòng)物模型中TTSP作用減弱（例如TMPRSS2 敲除）的保護(hù)性作用。此外，并沒有顯示流感病毒感染的治療和/或預(yù)防中靶向TTSP的蛋 白水解活性的治療劑（例如，抗TMPRSS2抗體）的用途。因此，在本領(lǐng)域存在針對(duì)流感的新 的、高效的治療方法的需求，所述方法利用了感染過程中宿主細(xì)胞蛋白酶的作用。 發(fā)明概要
[0005] 本發(fā)明通過提供用于治療或預(yù)防流感病毒感染的方法處理了本領(lǐng)域的前述需求。 本發(fā)明方法包括給需要其的受試者施用包含II型跨膜絲氨酸蛋白酶（TTSP)抑制劑的藥物 組合物。在某些實(shí)施方案中，TTSP是TMPRSS2的抑制劑?？梢栽诒景l(fā)明的背景中使用的示 例性TMPRSS2抑制劑包括例如，小分子蛋白酶抑制劑、肽抑制劑、基于核酸的抑制劑，以及 特異地結(jié)合TMPRSS2的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。
[0006] 根據(jù)本發(fā)明的某些方面，將TMPRSS2抑制劑施用給需要其的受試者，其中TMPRSS2 抑制劑特異性針對(duì)TMPRSS2和/或僅將TTSP抑制劑施用給受試者。例如，在某些實(shí)施方案 中，將抗TMPRSS2抗體施用給受試者，其中抗TMPRSS2抗體僅抑制TMPRSS2的活性，并且不 將其他TTSP抑制劑（例如，TMPRSS4抑制劑、HAT抑制劑等）施用給受試者。
[0007] 本發(fā)明還包括這樣的實(shí)施方案，其中將第二治療劑與TTSP抑制劑組合施用給受 試者。例如，本發(fā)明包括這樣的方法，其中將抗TMPRSS2抗體與一種或多種抗病毒劑組合和 /或與抗流感抗體組合施用給受試者。
[0008] 在閱讀隨后的詳細(xì)說明后，本發(fā)明的其他實(shí)施方案是顯而易見的。
[0009] 附圖簡(jiǎn)述
[0010] 圖1-4描述了 4個(gè)不同試驗(yàn)（分別為試驗(yàn)1-4)的結(jié)果，其中用750PFU的HlNl流 感病毒攻擊野生型小鼠（"WT"，閉合的正方形）和TMPRSS2敲除小鼠（"K0"閉合的圓形）， 并在感染后的幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)評(píng)估了體重改變百分?jǐn)?shù)（A圖）和存活百分?jǐn)?shù)（B圖）。
[0011] 圖5顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，在野生型小鼠（"WT"，空白條形）和 TMPRSS2敲除小鼠（"K0"，陰影條形）中觀察到的體重改變百分?jǐn)?shù)（A圖）和肺病毒負(fù)荷（B 圖）。
[0012] 圖6顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，用野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）觀察到的體重改變百分?jǐn)?shù)，以及用相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠觀察到 的體重改變百分?jǐn)?shù)。每一標(biāo)記表示第5天各個(gè)小鼠的體重改變百分?jǐn)?shù)。
[0013] 圖7顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的肺中CD45+CD19+(圖A)和CD45+CD3+(圖B)細(xì)胞的頻率，以及相應(yīng)的未感 染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的肺中⑶45+⑶19+和⑶45+⑶3+細(xì)胞的頻率。每一標(biāo)記表示第5天 來自各個(gè)小鼠的指定細(xì)胞類型的頻率。
[0014] 圖8顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的肺中CD45+CD4+(圖A)和CD45+CD8+(圖B)細(xì)胞的頻率，以及相應(yīng)的未感染 WT和未感染KO小鼠的肺中⑶45+⑶4+和⑶45+⑶8+細(xì)胞的頻率。每一標(biāo)記表示第5天來自 各個(gè)小鼠的指定細(xì)胞類型的頻率。
[0015] 圖9顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除小 鼠（"K0"）的肺中樹突細(xì)胞（DC)的頻率，以及在相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的肺中 觀察到的DC頻率。每一標(biāo)記表示第5天在來自各個(gè)小鼠的肺組織中的DC頻率。
[0016] 圖10顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的肺中嗜中性粒細(xì)胞（圖A)、肺泡巨噬細(xì)胞（圖B)和嗜酸性粒細(xì)胞（圖C) 的頻率，以及相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的肺中嗜中性粒細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞和嗜酸 性粒細(xì)胞的頻率。每一標(biāo)記表示第5天來自各個(gè)小鼠的指定細(xì)胞類型的頻率。
[0017] 圖11顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的肺中肺泡巨噬細(xì)胞（圖A)和流感感染的肺泡巨噬細(xì)胞（圖B)的頻率，以 及相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的肺中肺泡巨噬細(xì)胞和流感感染的肺泡巨噬細(xì)胞的頻 率。每一標(biāo)記表示第5天來自各個(gè)小鼠的指定細(xì)胞類型的頻率。
[0018] 圖12顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的肺中嗜中性粒細(xì)胞（圖A)和流感感染的嗜中性粒細(xì)胞（圖B)的頻率，以 及相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的肺中嗜中性粒細(xì)胞和流感感染的嗜中性粒細(xì)胞的頻 率。每一標(biāo)記表示第5天來自各個(gè)小鼠的指定細(xì)胞類型的頻率。
[0019] 圖13顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的肺中上皮細(xì)胞（圖A)和流感感染的上皮細(xì)胞（圖B)的頻率，以及相應(yīng)的 未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的肺中上皮細(xì)胞和流感感染的上皮細(xì)胞的頻率。每一標(biāo)記表示 第5天來自各個(gè)小鼠的指定細(xì)胞類型的頻率。
[0020] 圖14顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的肺中的累積病變得分，以及相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的肺中的累 積病變得分。每一標(biāo)記表示第5天來自各個(gè)小鼠的肺中的累積病變得分。累積病變得分是 5個(gè)參數(shù)的0至4的數(shù)值排序（0 =無，1 =極小的，2 =輕微的，3 =中度的，4 =顯著的）， 5個(gè)參數(shù)為：（1)炎癥（支氣管的和細(xì)支氣管的）=出現(xiàn)炎性細(xì)胞（嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì) 胞、單核細(xì)胞）；上皮層喪失（壞死）以及管腔內(nèi)細(xì)胞碎片累積；（2)炎癥（肺泡的）=肺泡 層（alveolar lining)喪失、II型肺細(xì)胞增生、嗜中性粒細(xì)胞和組織炎性細(xì)胞、纖維蛋白、 出血和/或細(xì)胞碎片沉積；（3)浸潤(rùn)（血管周圍的）=混合的細(xì)胞浸潤(rùn)（淋巴細(xì)胞和嗜中 性粒細(xì)胞），伴有內(nèi)皮反應(yīng)、多處炎性細(xì)胞著邊和偶爾極少的細(xì)胞碎片；(4)Exema/滲出物 =血管周圍和肺泡內(nèi)，伴有纖維蛋白沉積和/或混合的細(xì)胞浸潤(rùn)；和（5) IHC =在支氣管上 皮、肺泡被覆上皮和/或肺泡巨噬細(xì)胞中觀察的。
[0021] 圖15顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲 除小鼠（"K0"）的血清中多種趨化性細(xì)胞因子（KC/GR0-圖A;MIP-la -圖B和MCP-I/ CCL-2-圖C)的水平，以及相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠的血清中細(xì)胞因子的水平。 每一標(biāo)記表示第5天來自各個(gè)小鼠的血清中的細(xì)胞因子水平（pg/mL)。
[0022] 圖16顯示用HlNl流感病毒攻擊后第5天，野生型小鼠（"WT"）和TMPRSS2敲除 小鼠（"K0"）的血清中干擾素Y (IFN Y )的水平，以及相應(yīng)的未感染W(wǎng)T和未感染KO小鼠 的血清中干擾素Y的水平。每一標(biāo)記表示第5天來自各個(gè)小鼠的血清中的干擾素Y水平 (pg/mL) 〇
[0023] 發(fā)明詳述
[0024] 在描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并不限于所述的特定方法和實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)?此類方法和條件是可以改變的。還應(yīng)當(dāng)理解，本文中所用的術(shù)語僅用于描述特定實(shí)施方案 的目的，并不旨在限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍僅受所附權(quán)利要求的限制。
[0025] 除非另外指明，本文中所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通 技術(shù)人員通常理解的含義一樣的含義。如本文中所用，術(shù)語"約"當(dāng)用于指代具體列舉的數(shù) 值時(shí)，意為該值可以具有與所列舉值的1%以下的不同。例如，如本文中所用，表述"約1〇〇" 包括99和101，以及之間的全部值（例如，99. 1、99. 2、99. 3、99. 4等）。
[0026] 盡管可以將與本文中所述的那些方法和材料類似的或者等同的任意方法和物質(zhì) 用于本發(fā)明的實(shí)踐，但當(dāng)前描述了優(yōu)選的方法和材料。
[0027] 用于治療或預(yù)防流感病毒感染的方法
[0028] 本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防流感病毒感染的方法。如本文中所用，表述"治療 流感病毒感染"意為改善、降低或緩解哺乳動(dòng)物中流感病毒感染的至少一種癥狀或生物學(xué) 結(jié)果，和/或在暴露于流感病毒后降低或減少哺乳動(dòng)物中流感病毒的滴度、載量、復(fù)制或增 殖。表述"治療流感病毒感染"還包括縮短流感病毒感染后受試者顯示出流感病毒感染的 至少一種癥狀或生物學(xué)結(jié)果的時(shí)間期限。根據(jù)本發(fā)明，用于治療流感病毒感染的方法包括 在受試者感染流感病毒感染后和/或在受試者顯示出或者診斷為具有流感病毒感染的一 種或多種癥狀或生物學(xué)結(jié)果后，將本發(fā)明藥物組合物施用給受試者。
[0029] 如本文中所用，表述"預(yù)防流感病毒感染"意為在哺乳動(dòng)物中預(yù)防流感病毒感染的 至少一種癥狀或生物學(xué)結(jié)果，和/或抑制或減弱流感病毒能在動(dòng)物身體的細(xì)胞內(nèi)/之間進(jìn) 入、擴(kuò)散和/或繁殖的程度。表述"預(yù)防流感病毒感染"還包括降低受試者對(duì)流感病毒感染 的至少一種癥狀或生物學(xué)后果的易感性。用于預(yù)防流感病毒感染（即，預(yù)防）的方法包括 在受試者感染流感病毒之前和/或受試者顯示出流感病毒感染的一種或多種癥狀或生物 學(xué)結(jié)果之前，將本發(fā)明的藥物組合物施用給受試者。用于預(yù)防流感病毒感染的方法還可以 包括在特定的時(shí)期或季節(jié)（例如，在通常發(fā)現(xiàn)的經(jīng)歷流感病毒感染的個(gè)體數(shù)達(dá)到峰值之前 1-2個(gè)月期間）或者在受試者進(jìn)入或者暴露于流感病毒感染高發(fā)的環(huán)境之前，和/或在受試 者暴露于感染流感病毒的其他受試者之前，將本發(fā)明藥物組合物施用給受試者。
[0030] 如本文中所用，表述"流感病毒感染的癥狀或生物學(xué)結(jié)果"包括以下的一種或多 種：鼻充血、鼻竇充血、流鼻涕、打噴嚏、身體（肌肉）疼痛、頭疼、寒冷、發(fā)燒、咳嗽、咽喉痛、 疲乏、耳痛或者流感病毒感染的診斷指標(biāo)。流感病毒感染的診斷指標(biāo)包括，例如通過病毒 培養(yǎng)檢測(cè)流感、血凝素凝集抑制（HAI)測(cè)定、免疫熒光或者使用合適樣本（例如，鼻拭子、 鼻咽拭子、咽喉拭子、氣管內(nèi)吸出物、痰、支氣管沖洗液等）進(jìn)行的基于核酸的檢測(cè)（例如 RT-PCR)。因此，認(rèn)為通過診斷測(cè)定測(cè)試出的流感病毒感染陽性受試者是顯示出"流感病毒 感染癥狀或生物學(xué)結(jié)果"的受試者。
[0031] 本文中所述的實(shí)驗(yàn)顯示，動(dòng)物并不表達(dá)有功能的II型跨膜絲氨酸蛋白酶（例如， TMPRSS2)，所述II型跨膜絲氨酸蛋白酶在流感病毒攻擊后的肺中的某些流感感染的細(xì)胞 類型中并不表現(xiàn)出顯著的增加。特別地，用流感病毒攻擊的TMPRSS2敲除小鼠的肺中并不 顯示出流感陽性肺泡巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞或上皮細(xì)胞的增加，而這些流感感染細(xì)胞類 型頻率在流感病毒攻擊后的野生型小鼠的肺中顯著增加。TMPRSS2敲除小鼠在流感病毒攻 擊后還顯示出完全存活以及體重增加/維持特征。因此，本發(fā)明還提供了這樣的方法，其用 于預(yù)防或減少已經(jīng)暴露于流感病毒或者受流感病毒攻擊的受試者的肺中流感感染的肺泡 巨噬細(xì)胞、流感感染的嗜中性粒細(xì)胞和/或流感感染的上皮細(xì)胞的積累，其中該方法包括 給受試者施用包含II型跨膜絲氨酸蛋白酶（TTSP)抑制劑的藥物組合物。
[0032] 患者群體
[0033] 可將本發(fā)明方法用于任意受試者中來治療或預(yù)防流感病毒感染，其中所述受試者 將受益于該治療或預(yù)防。受試者可以是人類或非人動(dòng)物（例如，馬、犬、牛、貓科動(dòng)物、綿羊、 豬、禽鳥等）。關(guān)于治療方法，待治療的受試者包括顯示出至少一種流感病毒感染的癥狀或 生物學(xué)結(jié)果（已在本文中定義了該短語）的任意個(gè)體。關(guān)于預(yù)防方法，受試者可以是處于 暴露于流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)或者可能與感染流感病毒的另一個(gè)體接觸的任意個(gè)體。
[0034] 在"治療"或者"預(yù)防"的情況下，本發(fā)明方法可以特別地用于患者群體中來治療 或者預(yù)防流感病毒感染，所述患者群體選自老年受試者、癌癥患者（例如，進(jìn)行化療、放射 或其他抗癌癥治療方案的個(gè)體）和無免疫能力的或者免疫受損的個(gè)體。例如，不能充分地 應(yīng)答流感疫苗接種或者其他抗病毒治療或者不耐受常規(guī)治療的受試者（例如，具有蛋類過 敏不能進(jìn)行流感疫苗接種的個(gè)體）是可以在治療上或預(yù)防上受益于本發(fā)明方法的受試者。
[0035] ITSP 抑制劑
[0036] 本發(fā)明方法包括將包含II型跨膜絲氨酸蛋白酶（TTSP)抑制劑的藥物組合物施用 給受試者。示例性TTSP包括跨膜蛋白酶絲氨酸Sl成員2 (TMPRSS2)、跨膜蛋白酶絲氨酸Sl 成員4 (TMPRSS4)和人呼吸道胰島素樣蛋白酶（HAT)。TTSP抑制劑可以是小分子蛋白酶抑 制劑、基于核酸的抑制劑（例如，siRNA、核酶、反義構(gòu)建體等）、抗原結(jié)合蛋白質(zhì)（例如，抗 體或其抗原結(jié)合片段）或者阻斷肽/肽抑制劑。TTSP抑制劑可以通過抑制或降低TTSP將 血凝素前體蛋白（HAO)蛋白水解切割成HAl和HA2亞基的能力來發(fā)揮作用。
[0037] 在某些示例性實(shí)施方案中，TTSP抑制劑是TMPRSS2抑制劑例如特異地結(jié)合 TMPRSS2并抑制TMPRSS2的蛋白水解活性的抗體或其抗原結(jié)合片段。例如，抗體或其抗原結(jié) 合片段可以抑制或降低TMPRSS2蛋白水解切割血凝素前體蛋白（HAO)成HAl和HA2亞基的 能力。當(dāng)與TTSP混合時(shí)，相對(duì)于在相同或基本上相同的實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)試的非抑制性對(duì)照分 子，如果抗體使TTSP的蛋白水解活性降低至少25 % (例如，30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、 80%、90%或100%)，那么認(rèn)為抗體抑制11^?(例如了1^1?52)的蛋白酶活性。
[0038] 在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，TTSP抑制劑是抗TMPRSS2抗體或其抗原結(jié)合片段， 其抑制TMPRSS2的蛋白酶活性，但基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性。對(duì)于本發(fā)明 公開的目的，如果抗TMPRSS2抗體與TMPRSS4或HAT混合，相對(duì)于在相同或基本上相同的實(shí) 驗(yàn)條件下測(cè)試的非抑制性對(duì)照分子，所述抗體對(duì)TMPRSS4或HAT的蛋白水解活性沒有影響， 或者導(dǎo)致TMPRSS4或HAT的蛋白水解活性不超過25 % (例如，20 %、15 %、10 %、5 %或更低） 的下降，那么所述抗體"基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性"。
[0039] 在其中TTSP抑制劑是TMPRSS2抑制劑的某些實(shí)施方案中，TMPRSS2抑制劑是施 用給受試者的唯一 TTSP抑制劑。因此，在本發(fā)明此類實(shí)施方案的情況下，特別地排除了抗 TMPRSS2抑制劑之外的任何其他TTSP抑制劑（例如，TMPRSS4抑制劑或HAT抑制劑）的施 用。
[0040] 抗體和抗體的抗原結(jié)合片段
[0041] 如上所示，用于本發(fā)明方法中的TTSP抑制劑（例如，TMPRSS2抑制劑）可以是抗 體或其抗原結(jié)合片段（例如，特異地結(jié)合TMPRSS2的抗體或其抗原結(jié)合片段）。如本文中所 用，術(shù)語"抗體"意為包含至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的任一抗原結(jié)合分子或分子復(fù)合體， 所述互補(bǔ)決定區(qū)與特定抗原（例如TMPRSS2)特異地結(jié)合或者相互作用。術(shù)語"抗體"包括免 疫球蛋白分子，其包含四條多肽鏈、通過二硫鍵互相連接的兩個(gè)重鏈（H)和兩個(gè)輕鏈（L)， 及其多聚體（例如IgM)。每一重鏈包含重鏈可變區(qū)（在本文中簡(jiǎn)稱為HCVR或V h)和重鏈 恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域，CH1、每一輕鏈包含輕鏈可變區(qū)（在本文 中簡(jiǎn)稱為L(zhǎng)CVR或')和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個(gè)結(jié)構(gòu)域（Ql)。Vh和'區(qū)可以 進(jìn)一步劃分為高變區(qū)（稱為互補(bǔ)決定區(qū)（CDR))，其與更保守的區(qū)域（稱為構(gòu)架區(qū)（FR))交 替。每一Vh和八包含三個(gè)⑶R和四個(gè)FR，從氨基端至羧基端按以下順序排列：FR1、⑶Rl、 FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本發(fā)明不同的實(shí)施方案中，抗TMPRSS2抗體（或其抗原結(jié)合 部分）的FR可以與人種系序列相同，或者可以是天然或人工修飾的。可以基于兩個(gè)或兩個(gè) 以上CDR的并行分析來定義氨基酸共有序列。
[0042] 如本文中所用，術(shù)語"抗體"還包括完整抗體分子的抗原結(jié)合片段。如本文中所用， 術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"、抗體的"抗原結(jié)合片段"等包括特異地結(jié)合抗原形成復(fù)合體的 任一天然存在的、酶促獲得的、合成的或者基因工程多肽或糖蛋白。使用任意合適的標(biāo)準(zhǔn)技 術(shù)如蛋白水解消化或涉及操作和表達(dá)編碼抗體可變域和任選地恒定域的DNA的重組基因 工程技術(shù)，抗體的抗原結(jié)合片段可以來源于例如完整抗體分子。該DNA是已知的和/或從 例如商業(yè)來源、DNA文庫（包括例如，噬菌體抗體庫）容易得到的，或者可以是合成的?？?以對(duì)DNA測(cè)序并使用化學(xué)方法或者通過使用例如分子生物學(xué)技術(shù)操作DNA，以使一個(gè)或多 個(gè)可變域和/或恒定域排列成合適的構(gòu)型，或者引入密碼子、產(chǎn)生半胱氨酸殘基、修飾、添 加或缺失氨基酸等。
[0043] 抗原結(jié)合片段的非限制性實(shí)例包括：⑴Fab片段；（ii) F (ab'）2片段；（iii) Fd片 段；（iv)Fv片段；(V)單鏈Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和（vii)由模擬抗體的高變區(qū) (例如，分離的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)如CDR3肽）的氨基酸殘基組成的最小識(shí)別單位或者受限 的FR3-CDR3-FR4肽。其他基因工程分子，例如結(jié)構(gòu)域特異性抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、缺失結(jié)構(gòu) 域的抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、小型抗體、納米抗體（例如，單 價(jià)納米抗體、二價(jià)納米抗體等）、小型模塊化免疫藥物（SMIP)和鯊魚可變IgNAR結(jié)構(gòu)域也包 含于如本文中所用的表述"抗原結(jié)合片段"中。
[0044] 抗體的抗原結(jié)合片段通常包含至少一個(gè)可變域。可變域可以是任意大小或任意的 氨基酸組成，并且通常包含至少一個(gè)CDR，其與一個(gè)或多個(gè)構(gòu)架序列鄰近或者與一個(gè)或多個(gè) 構(gòu)架序列處在一個(gè)框架中。在具有Vh結(jié)構(gòu)域及 '結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段中，相對(duì)于彼此， Vh和\結(jié)構(gòu)域可以位于任意合適的排列中。例如，可變區(qū)可以是二聚的，并含有V H-VH，VH-\ 或 二聚體。備選地，抗體的抗原結(jié)合片段可以含有單體V h或 '結(jié)構(gòu)域。
[0045] 在某些實(shí)施方案中，抗體的抗原結(jié)合片段可以含有與至少一個(gè)恒定域共價(jià)連接的 至少一個(gè)可變域?？梢栽诒景l(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段中發(fā)現(xiàn)的可變域和恒定域的非限制性 示例性構(gòu)型包括：⑴ VChI ; (ii)VCH2 ; (iii) VCH3 ; (iv)VCHl_CH2 ; (v)VH-CHl-CH2-CH3 ; (vi)VH-CH2-CH3 ； (vii)Vh-Cl ； (viii)Vl-ChI ； (ix)VL-CH2 ； (x)VL-CH3 ； (xi) VL-CH1-CH2 ； (xii) VCH1-CH2-CH3 VC H2-CH3 ;和（xiv) VQ。在可變域和恒定域的任意構(gòu)型，包括上述 任意示例性構(gòu)型中，可變域和恒定域可以是相互直接連接或者可以是通過完整的或部分的 鉸鏈區(qū)或連接體區(qū)連接。鉸鏈區(qū)由至少兩個(gè)（例如，5個(gè)、10個(gè)、15個(gè)、20個(gè)、40個(gè)、60個(gè)或 更多個(gè)）氨基酸組成，所述氨基酸導(dǎo)致單個(gè)多肽分子中相鄰可變域和/或恒定域之間的彈 性或半彈性連接。此外，本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段可以包含上述任意可變域和恒定域構(gòu) 型的同型二聚體或異型二聚體（或者其他多聚體），其通過上述任意可變域和恒定域構(gòu)型 彼此非共價(jià)結(jié)合和/或與一個(gè)或多個(gè)單體V h和 '結(jié)構(gòu)域非共價(jià)結(jié)合（例如，通過二硫鍵） 形成。
[0046] 如同完整抗體分子，抗原結(jié)合片段可以是單特異性或多特異性的（例如，雙特異 性）。抗體的多特異性抗原結(jié)合片段通常包含至少兩個(gè)不同的可變域，其中每一可變域能特 異地結(jié)合單獨(dú)的抗原或者同一抗原上的不同表位。使用本領(lǐng)域可得到的常規(guī)技術(shù)，可將任 意多特異性抗體形式，包括本文中所公開的示例性雙特異性抗體形式適用于本發(fā)明抗體的 抗原結(jié)合片段的背景中。
[0047] 如本文中所用，術(shù)語"人抗體"意在包括具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變 區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可以例如在CDR且特別地CDR3中包括不由人種系免 疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基（例如，通過體外隨機(jī)誘變或位點(diǎn)特異性誘變或者通過體 細(xì)胞突變引入突變）。然而，如本文中所用的術(shù)語"人抗體"并不意圖包含這樣的抗體，其中 已經(jīng)將來源于另一哺乳動(dòng)物物種例如小鼠的種系的CDR序列移植在人構(gòu)架序列上。
[0048] 如本文中所用，術(shù)語"重組人抗體"意在包括通過重組方法制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分 離的全部人抗體，例如使用轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體（進(jìn)一步描述 于下文）、分離自重組的、組合的人抗體文庫的抗體（進(jìn)一步描述于下文）、分離自針對(duì)人 免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物（例如小鼠）的抗體（參見例如，Taylor等，Nucl. Acids Res. 20:6287-6295 (1992))或者通過涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接成其他DNA序列的 任何其他方法制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的抗體。此類重組人抗體具有來源于人種系免疫球蛋 白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。然而，在某些實(shí)施方案中，將此類重組人抗體進(jìn)行體外誘變（或 者，當(dāng)使用針對(duì)人Ig序列轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物時(shí)，進(jìn)行體內(nèi)體細(xì)胞誘變），因此該重組抗體的V h和 '區(qū)的氨基酸序列是這樣的序列，其雖然來源于并且與人種系Vh和 '序列相關(guān)，但并非天 然存在于體內(nèi)的人抗體種系庫中。
[0049] 人抗體可以以與鉸鏈異質(zhì)性相關(guān)的兩種形式存在。在一種形式中，免疫球蛋白分 子包含大約150-160kDa的穩(wěn)定四鏈構(gòu)建體，其中二聚體通過鏈間重鏈二硫鍵結(jié)合。在第二 種形式中，二聚體并不通過鏈間二硫鍵連接，而是形成約75-80kDa的分子，其由共價(jià)偶聯(lián) 的輕鏈和重鏈（半抗體）組成。這些形式非常難分離，甚至是在親和純化后也難分離。
[0050] 在多種完整IgG同種型中第二種形式出現(xiàn)的頻率歸因于但不局限于與抗體的鉸 鏈區(qū)同種型相關(guān)的結(jié)構(gòu)差異。人IgG4鉸鏈的鉸鏈區(qū)中單個(gè)氨基酸取代可以將第二種形式 的出現(xiàn)（Angal等（1993)Molecular Immunology30:105)顯著地降低至使用人IgGl鉸鏈通 常觀察到的水平。本發(fā)明包括在鉸鏈區(qū)，期望地在CH2*C H3區(qū)中具有一個(gè)或多個(gè)突變的抗 體，以例如在生產(chǎn)中改善期望的抗體形式的產(chǎn)率。
[0051] 如本文中所用，"分離的抗體"意為從其天然環(huán)境的至少一個(gè)組分中鑒定和分離和 /或回收的抗體。例如，從抗體天然存在或者天然產(chǎn)生的器官或組織或者細(xì)胞的至少一個(gè)組 分中分離或回收的抗體是用于本發(fā)明目的的"分離的抗體"。分離的抗體還包括重組細(xì)胞內(nèi) 的原位抗體。分離的抗體是已經(jīng)進(jìn)行了至少一個(gè)純化或分離步驟的抗體。根據(jù)某些實(shí)施方 案，分離的抗體可以基本上是沒有細(xì)胞物質(zhì)和/或化學(xué)物質(zhì)的抗體。
[0052] 藥物組合物和施用方法
[0053] 本發(fā)明包括將TTSP抑制劑（例如抗TMPRSS2抗體）施用于受試者的方法，其中 TTSP抑制劑包含于藥物組合物中。本發(fā)明藥物組合物與合適的載體、賦形劑以及提供合適 的轉(zhuǎn)移、遞送、耐受等的其他試劑一起配制。許多合適的制劑可見于全部藥劑師的已知的 處方集：Remington , s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA〇 這些制劑包括，例如粉劑、糊劑、軟膏、凝膠劑、蠟、油劑、脂質(zhì)、含小囊泡的脂質(zhì)（陽離子或 陰離子）（如LIPOFECTIN?)、DNA綴合物、無水的吸附性糊劑、水包油和油包水乳劑、乳劑碳 蠟（多種分子量的聚乙二醇）、半固體凝膠以及含碳蠟的半固體混合物。還參見Powell等 人，''Compendium of excipients for parenteral formulations〃PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52:238-31I〇
[0054] 已知多種遞送系統(tǒng)，并可以將其用于施用本發(fā)明藥物組合物，例如脂質(zhì)體中的 包囊、微粒、微膠囊、能表達(dá)突變病毒的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用（參見例如，Wu 等，1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432)。施用的方法包括但不限于，真皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、 靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜外和經(jīng)口途徑?？梢酝ㄟ^任何方便的途徑，例如通過輸注或彈丸注 射、通過上皮層或皮膚粘膜層（例如，口腔粘膜、直腸和腸粘膜等）吸收來施用組合物，并且 可以與其他生物學(xué)活性試劑一起施用。
[0055] 使用標(biāo)準(zhǔn)的針頭和注射器，可以皮下或靜脈內(nèi)遞送本發(fā)明藥物組合物。此外，關(guān)于 皮下遞送，已經(jīng)將筆式遞送裝置（pen delivery device)應(yīng)用于遞送本發(fā)明藥物組合物。該 筆式遞送裝置是可重復(fù)使用或者一次性的?？芍貜?fù)使用的筆式遞送裝置通常使用含藥物組 合物的可替換藥筒。一旦施用了藥筒內(nèi)的全部藥物組合物并且藥筒已空，那么可以立即丟 棄空藥筒，并用含藥物組合物的新藥筒替換。然后可以重復(fù)使用筆式遞送裝置。在一次性 的筆式遞送裝置中，沒有可替換的藥筒。相反，在一次性的筆式遞送裝置中，已經(jīng)用藥物組 合物預(yù)裝滿了裝置內(nèi)的儲(chǔ)存器。一旦儲(chǔ)存器中沒有了藥物組合物，那么可以丟棄整個(gè)裝置。
[0056] 在某些情況下，可以在控釋系統(tǒng)中遞送藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以 使用泵（參見 Langer, supra ;Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201)。在 另一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用聚合物質(zhì)；參見，Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds. ), 1974, CRC Pres. , Boca Raton, Florida。 又在 另一個(gè)實(shí)施方案中，可將控釋系統(tǒng)放置在組合物的靶標(biāo)附近，因此僅需要全身劑量 的一部分（參見例如，Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138)。在 Langer, 1990, Science 249:1527-1533 的綜述中 討論了其他控釋系統(tǒng)。
[0057] 可注射的制劑可以包含用于靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)和肌內(nèi)注射、點(diǎn)滴注射等的劑量形 式?？梢酝ㄟ^已知的方法制備這些可注射的制劑。例如，可以例如通過在常規(guī)地用于注射 的無菌的水介質(zhì)或者油性介質(zhì)中溶解、懸浮或乳化上述抗體或其鹽，來制備可注射的制劑。 對(duì)于用于注射的水介質(zhì)，可以是例如生理鹽水、含葡萄糖和其他輔助劑（auxiliary agent) 的等滲溶液等，可以將其與合適的增溶劑如醇（例如，乙醇）、多元醇（例如丙二醇、聚乙二 醇）、非離子表面活性劑（例如，聚山梨酯80、HC0-50(氫化蓖麻油的聚氧乙烯（50mol)加 合物））等組合使用。對(duì)于油性介質(zhì)，可以使用例如芝麻油、大豆油等，可以將其與增溶劑如 苯甲酸芐酯、苯甲醇等組合使用。因此，將制備的注射劑優(yōu)選地裝入合適的安瓿瓶中。
[0058] 有利地，將上述經(jīng)口或腸胃外使用的藥物組合物制備成單位劑量的劑量形式，所 述單位劑量與一次劑量的活性成分相匹配。此類單位劑量的劑量形式包括例如，藥片、藥 丸、膠囊、注射劑（針劑）、栓劑等。
[0059] 劑量
[0060] 根據(jù)本發(fā)明方法，施用給受試者的TTSP抑制劑（例如，抗TMPRSS2抗體）的量通 常是治療有效量。如本文中所用，短語"治療有效量"意為TTSP抑制劑的劑量，其導(dǎo)致流感 病毒感染的一個(gè)或多個(gè)癥狀或生物學(xué)結(jié)果可檢測(cè)的改善，這正如該表述在本文中定義的那 樣。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以將多種動(dòng)物模型用于證實(shí)特定量的候選TTSP抑制 劑是否是治療有效量。TTSP抑制劑的"治療有效量"還包括這樣的TTSP抑制劑（例如，抗 TMPRSS2抗體）的量，相對(duì)于在相同的或基本上相同的實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)試的非抑制性對(duì)照分 子，所述量能使TTSP的蛋白水解活性（例如，將HAO切割成HAl和HA2亞基的能力）降低 至少25%。
[0061] 在抗TMPRSS2抗體的情況下，治療有效量可以是以下量的抗TMPRSS2抗體：約 0? 05mg 至約 600mg，例如，約 0? 05mg、約 0? lmg、約 I. Omg、約 I. 5mg、約 2. Omg、約 10mg、約 20mg、約 30mg、約 40mg、約 50mg、約 60mg、約 70mg、約 80mg、約 90mg、約 lOOmg、約 llOmg、約 120mg、約 130mg、約 140mg、約 150mg、約 160mg、約 170mg、約 180mg、約 190mg、約 200mg、約 210mg、約 220mg、約 230mg、約 240mg、約 250mg、約 260mg、約 270mg、約 280mg、約 290mg、約 300mg、約 310mg、約 320mg、約 330mg、約 340mg、約 350mg、約 360mg、約 370mg、約 380mg、約 390mg、約 400mg、約 410mg、約 420mg、約 430mg、約 440mg、約 450mg、約 460mg、約 470mg、約 480mg、約 490mg、約 500mg、約 510mg、約 520mg、約 530mg、約 540mg、約 550mg、約 560mg、約 570mg、約 580mg、約 590mg 或約 600mg。
[0062] 各個(gè)劑量中含有的抗TMPRSS2抗體的量可以以每千克患者體重的抗體的毫克數(shù) (即mg/kg)的形式表示。例如，可以以每千克患者體重0. 0001至約IOmg的劑量，將抗 TMPRSS2抗體施用給患者。
[0063] 組合治療
[0064] 根據(jù)某些實(shí)施方案，本發(fā)明方法可以包括將包含TTSP抑制劑（例如，抗TMPRSS2 抗體）的藥物組合物與第二治療劑組合施用給受試者。術(shù)語"與第二治療劑組合"意為在將 包含TTSP抑制劑的藥物組合物施用于受試者之前（例如，之前約1至72小時(shí)）、之后（例 如，之后約1至72小時(shí)）或同時(shí)（例如，約1小時(shí)內(nèi)），將第二治療劑施用于受試者。
[0065] 第二治療劑本身可以是用于治療或預(yù)防流感病毒感染的任意治療劑?？梢耘c包 含TTSP抑制劑的藥物組合物組合施用的第二治療劑的非限制性實(shí)例包括，例如金剛烷 胺、金剛乙胺、奧司他韋、扎那米韋、抑肽酶、亮肽素、陽離子類固醇抗菌劑（參見例如，US 2007/0191322)、流感疫苗（例如，滅活的、活的、減毒的全病毒或亞單位疫苗）或者針對(duì)流 感病毒的抗體（例如，抗血凝素抗體）。
[0066] 施用方案
[0067] 根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，可以在確定的時(shí)程中將多個(gè)劑量的包含TTSP抑制 劑（例如，抗TMPRSS2抗體）的藥物組合物施用于受試者。根據(jù)本發(fā)明該方面的方法包括 對(duì)受試者順次施用多個(gè)劑量的TTSP抑制劑。如本文中所用，"順次施用"意為在不同的時(shí) 間點(diǎn)，例如在由預(yù)定間隔（例如，小時(shí)、天、周或月）分開的不同日期，將每一劑量的TTSP抑 制劑施用給受試者。本發(fā)明包括這樣的方法，其包括給患者順次施用單一初始劑量的TTSP 抑制劑，然后施用一個(gè)或多個(gè)第二劑量的TTSP抑制劑，任選地然后施用一個(gè)或多個(gè)第三劑 量的TTSP抑制劑。
[0068] 術(shù)語"初始劑量"、"第二劑量"和"第三劑量"指施用TTSP抑制劑的暫時(shí)順序。因 此，"初始劑量"是在治療方案開始時(shí)施用的劑量（也稱為"基線劑量第二劑量"是初 始劑量后施用的劑量；而"第三劑量"是在第二劑量之后施用的劑量。初始、第二和第三劑 量可以含有相同量的TTSP抑制劑，但通常在施用的頻率方面相互區(qū)別。然而，在某些實(shí)施 方案中，在治療期間，在初始劑量、第二劑量和/或第三劑量中含有的TTSP抑制劑的量可以 相互不同（例如，根據(jù)需要上調(diào)或下調(diào)）。
[0069] 在本發(fā)明的一個(gè)示例性實(shí)施方案中，在立即的在前劑量之后1至30(例如，1、2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30 或 更多）天施用第二和/或第三劑量。如本文中所用，術(shù)語"立即的在前劑量"意為在多個(gè)施 用的順序中，施用于患者的TTSP抑制劑的劑量恰好在順序中的下一計(jì)量的施用之前，并且 沒有間隔劑量。
[0070] 根據(jù)本發(fā)明該方面的方法可以包括給患者施用任意數(shù)量的第二和/或第三劑量 的TTSP抑制劑。例如，在某些實(shí)施方案中，僅將單個(gè)第二劑量施用于患者。在其他實(shí)施方 案中，將兩個(gè)或兩個(gè)以上（例如，2、3、4、5、6、7、8或更多）第二劑量施用于患者。同樣地， 在某些實(shí)施方案中，僅將單個(gè)第三劑量施用于患者。在其他實(shí)施方案中，將兩個(gè)或兩個(gè)以上 (例如，2、3、4、5、6、7、8或更多）第三劑量施用于患者。
[0071] 在涉及多個(gè)第二劑量的實(shí)施方案中，可以以與其他第二劑量相同的頻率施用每一 個(gè)第二劑量。例如，可以在立即的在前劑量之后1至29天給患者施用每一個(gè)第二劑量。相 似地，在涉及多個(gè)第三劑量的實(shí)施方案中，可以以與其他第三劑量相同的頻率施用每一個(gè) 第三劑量。例如，可以在立即的在前劑量之后1至60天給患者施用每一個(gè)第三劑量。備選 地，可以根據(jù)治療方案的進(jìn)程來改變施用于患者的第二和/或第三劑量的頻率。取決于臨 床檢查后各個(gè)患者的需求，在療程中醫(yī)師或醫(yī)療服務(wù)人員還可以調(diào)整施用的頻率。
[0072] 如本文中其他地方所定義，前述實(shí)施方案中的任一個(gè)可以包括將一種或多種其他 治療劑與TTSP抑制劑組合施用。 實(shí)施例
[0073] 提出了以下實(shí)施例，從而為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供如何制備和使用本發(fā)明組合 物，使用本發(fā)明方法的完整公開和描述，并且所述實(shí)施例并不旨在限制發(fā)明人認(rèn)為的本發(fā) 明的范圍。已經(jīng)進(jìn)行了努力，以確保所使用的數(shù)值（例如，量、溫度等）的準(zhǔn)確性，但應(yīng)當(dāng)考 慮一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另外指明，份數(shù)是重量份數(shù)，分子量是平均分子量，溫度是攝 氏度，壓力是大氣壓或者接近大氣壓。
[0074] 實(shí)施例I. A型流感病毒感染后，與野生型小鼠比較，TMPRSS2敲除小鼠顯示出改善 的存活和重量維持
[0075] 使用經(jīng)改造的不能表達(dá)有功能的TMPRSS2蛋白的敲除小鼠（"TMPRSS2-K0"）進(jìn) 行最初的實(shí)驗(yàn)。將野生型Iittermate小鼠（"WT"）用作為對(duì)照。實(shí)施了 4次單獨(dú)的試驗(yàn) (試驗(yàn) 1-試驗(yàn) 4)，其中用 IOx MLD5Q(750PFU)的 A/Puerto Rico/8/1934HlNl 病毒鼻內(nèi)感染 TMPRSS2-K0小鼠和WT對(duì)照。感染后每天大致地稱重小鼠，并監(jiān)測(cè)存活。當(dāng)動(dòng)物喪失25% 或更多在感染時(shí)（例如，第〇天）測(cè)定的最初體重時(shí)，進(jìn)行感染小鼠的安樂死。還監(jiān)測(cè)小鼠 其他的明顯的發(fā)病體征，包括身體蜷縮（hunched posture)、堅(jiān)毛和/或神經(jīng)學(xué)癥狀如后肢 癱瘓。圖1-4分別顯示了試驗(yàn)1-4的結(jié)果。表1總結(jié)了各個(gè)試驗(yàn)的存活數(shù)據(jù)。
[0076] 表1.流感感染試驗(yàn)的總結(jié)
[0077]
【權(quán)利要求】
1. 用于治療或預(yù)防流感病毒感染的方法，所述方法包括將包含II型跨膜絲氨酸蛋白 酶（TTSP)抑制劑的藥物組合物施用于需要其的受試者。
2. 用于預(yù)防或減少受試者的肺中流感感染的肺泡巨噬細(xì)胞、流感感染的嗜中性粒細(xì)胞 和/或流感感染的上皮細(xì)胞的積累的方法，所述受試者已經(jīng)暴露于流感病毒或受流感病毒 攻擊，所述方法包括將包含Π 型跨膜絲氨酸蛋白酶（TTSP)抑制劑的藥物組合物施用于受 試者。
3. 包含II型跨膜絲氨酸蛋白酶（TTSP)抑制劑的藥物組合物，用于在受試者中治療或 預(yù)防流感病毒感染。
4. 包含II型跨膜絲氨酸蛋白酶（TTSP)抑制劑的藥物組合物，用于預(yù)防或減少受試 者的肺中流感的肺泡巨噬細(xì)胞、流感感染的嗜中性粒細(xì)胞和/或流感感染的上皮細(xì)胞的積 累，所述受試者已經(jīng)暴露于流感病毒或受流感病毒攻擊。
5. 權(quán)利要求3或4的藥物組合物，其中所述TTSP抑制劑是跨膜蛋白酶絲氨酸S1成員 2(TMPRSS2)抑制劑。
6. 權(quán)利要求5的藥物組合物，其中所述TMPRSS2抑制劑選自小分子蛋白酶抑制劑、肽抑 制劑和基于核酸的抑制劑。
7. 權(quán)利要求5的藥物組合物，其中所述TMPRSS2抑制劑抑制TMPRSS2的蛋白酶活性，但 基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性。
8. 權(quán)利要求3或4的藥物組合物，其中所述TTSP抑制劑是特異地結(jié)合TMPRSS2并抑制 其蛋白水解活性的抗體或其抗原結(jié)合片段。
9. 權(quán)利要求8的藥物組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段抑制TMPRSS2的蛋白酶 活性，但基本上不抑制任何其他TTSP的蛋白酶活性。
10. 權(quán)利要求3至9中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物配制用于全身施用。
11. 權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述藥物組合物配制用于皮下施用。
12. 權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述藥物組合物配制用于靜脈內(nèi)施用。
13. 權(quán)利要求3至12中任一項(xiàng)的藥物組合物，其進(jìn)一步包含第二治療劑。
14. 權(quán)利要求13的藥物組合物，其中所述第二治療劑是抗病毒劑。
15. 權(quán)利要求14的藥物組合物，其中所述抗病毒劑選自金剛烷胺、金剛乙胺、奧司他韋 和扎那米韋。
16. 權(quán)利要求13的藥物組合物，其中所述第二治療劑是流感病毒疫苗。
17. 權(quán)利要求13的藥物組合物，其中所述第二治療劑是抗流感抗體。
18. 權(quán)利要求17的藥物組合物，其中所述抗流感抗體是特異地結(jié)合血凝素（HA)的抗 體。
【文檔編號(hào)】A61P31/16GK104244978SQ201380020133
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2013年4月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月16日
【發(fā)明者】恩嘉波 L·A·珀塞爾 申請(qǐng)人:瑞澤恩制藥公司