組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含α-突觸核蛋白表位的至少一種模擬表位的組合物，其用在預(yù)防和/或治療β-淀粉樣變性病包括阿爾茨海默氏病的方法中，其中所述至少一種模擬表位偶聯(lián)或融合至藥學(xué)可接受的載體蛋白，該載體蛋白選自下組：無(wú)毒白喉毒素突變體、匙孔蟲(chóng)戚形血藍(lán)素(KLH)、白喉毒素(DT)、破傷風(fēng)毒素(TT)和流感嗜血桿菌蛋白D(蛋白D)。
【專利說(shuō)明】組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及與β-淀粉樣蛋白形成和/或聚集（β-淀粉樣變性病）有關(guān)的疾病 的預(yù)防和治療。

【背景技術(shù)】
[0002] 各種退行性疾病的特征在于錯(cuò)誤折疊的特定蛋白質(zhì)的累積和聚合。這些所謂的 蛋白?。╬roteopathies)包括疾病例如阿爾茨海默氏病（AD)、帕金森氏病（PD)和亨廷頓 氏病（HD)或者包涵體肌炎（inclusionbodymyositis,IBM)以及系統(tǒng)性實(shí)體（systemic entities)包含各種淀粉樣變性病。
[0003] 本發(fā)明涉及與錯(cuò)誤折疊α突觸核蛋白（a-syn)的累積和聚集有關(guān)的AD的預(yù)防、 治療和診斷。本發(fā)明的其他目標(biāo)疾病包括但不限于額顳葉癡呆（FTD)、進(jìn)行性核上性麻痹 (PSP)以及唐氏綜合征（DS)的癡呆和IBM。
[0004] a-syn(最初被鑒定為PARKl和PARK4)是一種在人類神經(jīng)系統(tǒng)包括大腦區(qū)域如新 皮質(zhì)、海馬、齒狀回、嗅球、紋狀體、丘腦和小腦中廣泛表達(dá)的140個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。在神 經(jīng)系統(tǒng)中它主要存在于突觸前末端，雖然其作用尚未被清楚地了解，但其與正常的突觸功 能相關(guān)。a-syn也在造血系統(tǒng)家族成員包括B-、T-、和NK細(xì)胞及單核細(xì)胞和血小板中高度 表達(dá)。盡管在這些細(xì)胞中的確切作用目前是未知的，但是已證明其參與巨核細(xì)胞（血小板 前體）的分化。
[0005]如前所述，a-syn為淀粉樣變性病包涵體的重要成分，所述包涵體是從存在于 患和多系統(tǒng)萎縮（MSA)病人的腦部中的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)中分別找到的。這些包涵體 代表這些顯著的突觸核蛋白病的典型病理改變，這與其他證據(jù)一起暗示，聚集的錯(cuò)誤折疊 a-syn是最終導(dǎo)致這些疾病的物質(zhì)。
[0006] 重要的是，這種錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)的包涵體也在其他幾種退行性疾病包括AD、FTD、 PSP、DS和IBM中被發(fā)現(xiàn)。
[0007] 在盧伊體型癡呆（DementiawithLewyBody) (DLB)的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中，最近被 證實(shí)人類a-syn與人類APP的共同表達(dá)導(dǎo)致與膽堿能神經(jīng)元的喪失有關(guān)的認(rèn)知及肌肉運(yùn) 動(dòng)上的改變的發(fā)展、突觸泡的減少、大量淀粉樣蛋白塊斑塊及a-syn-免疫反應(yīng)性神經(jīng)元 內(nèi)纖維狀包涵體的形成。雙轉(zhuǎn)基因小鼠的表現(xiàn)型比單轉(zhuǎn)基因小鼠的表現(xiàn)型更加嚴(yán)重，表明 兩種分子的共同表達(dá)具有協(xié)同作用。
[0008] 雖然a-syn累積功能性傷害并最終導(dǎo)致神經(jīng)元的死亡的確切作用機(jī)理尚未完全 清楚，但最近的研究顯示，非正常折疊的a-syn累積參予在所述退行性過(guò)程中，是上述蛋 白病的潛在原因。
[0009] 在IwatsuboT.(Neuropathology27 (5) (2007) :474-478)中，考察了α-突 觸核蛋白沉積物及其磷酸化與α-突觸核蛋白病發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)。此出版物的作者發(fā) 現(xiàn)，在突觸核蛋白病損傷中沉積的α-突觸核蛋白的絲氨酸129是被廣泛磷酸化的。US 2007/213253涉及突變體人α-突觸核蛋白及自其衍生的肽，其可以用于抑制野生型人 α-突觸核蛋白的聚集。在WO2004/041067中，披露了用于預(yù)防或治療與α-突觸核蛋白 聚集體有關(guān)的疾病的手段和方法，其包括使用α-突觸核蛋白片段。在US2003/166558中， 描述了可用于誘導(dǎo)對(duì)蛋白質(zhì)沉積物的免疫應(yīng)答的肽。US2005/198694涉及包含至少100個(gè) 氨基酸，并C端刪除1至23個(gè)氨基酸的α-突觸核蛋白片段。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是提供用于治療和/或預(yù)防阿爾茨海默氏病的化合物及藥物。
[0011] 本發(fā)明涉及包含α-突觸核蛋白的表位的至少一種模擬表位的組合物，其用在 預(yù)防和/或治療β-淀粉樣變性?。╝myloidose)包括阿爾茨海默氏病的方法中，其中所 述的至少一種模擬表位是偶聯(lián)或融合（優(yōu)選偶聯(lián)）至藥學(xué)可接受的載體蛋白，該載體蛋 白選自無(wú)毒白喉毒素突變體（non-toxicdiphtheriatoxinmutant)、匙孔蟲(chóng)戚形血藍(lán) 素（keyholelimpethemocyanin) (KLH)、白喉毒素（diphtheriatoxin) (DT)、破傷風(fēng)毒素 (tetanustoxid) (TT)和流感嗜血桿菌蛋白D(haemophilusinfluenzaeproteinD)(蛋白 D)。β_
[0012] 出人意料地發(fā)現(xiàn)，α-突觸核蛋白的表位的模擬表位可用于治療與腦內(nèi)β-淀粉 樣蛋白沉積物有關(guān)的疾病。
[0013] 即使AD通常被認(rèn)為是由淀粉樣蛋白β(Αβ)及高度磷酸化Tau蛋白的廣泛 性沉積物所造成的蛋白病，但突觸蛋白α-syn的非正常聚集和累積可能與AD中的斑 塊形成有關(guān)。有趣的是，α-syn最初被鑒定是AD病人腦部的富含淀粉樣蛋白部分中 的組分，這強(qiáng)調(diào)了a_syn對(duì)AD的潛在重要性（116(^1(.6七31.?1'〇(3.似1:1.4〇3(1.3(3；[· U.S.A. 90 (23) 1993:11282 - 6 ;A.Iwai，T.Saitohetal.Neuron, 14 (1995)，PP. 467 - 475)。 另外，Matsubara等人（DementGeriatrCognDisord2001;12:106-109)也證明人類 a-syn基因的一些變異體與AD的相關(guān)性。
[0014] 關(guān)于a-syn及例如Aβ在上述疾病中的病理生理學(xué)上相互作用所籍由的機(jī)理，人 們推測(cè)，它們通過(guò)參與協(xié)同神經(jīng)退行性途徑而可能直接相互作用。最近已證明，在人類疾病 的臨床前模型系統(tǒng)中，病理性折疊的Αβ與a-syn分子會(huì)彼此加劇其毒性作用（Masliah etal.PNAS2001vol. 98,ηο· 21ρ· 12245 - 12250)。明顯地，這些研究結(jié)果提供了分子基礎(chǔ) 并因此表明Αβ、a-syn和特別是它們的共同作用在不同神經(jīng)退行性病癥中極為關(guān)鍵的角 色。
[0015] 因此，a-syn累積及低聚的減少就治療與錯(cuò)誤折疊的a-syn相關(guān)的疾病特別是 AD、FTD、PSP、DS和IBM是有益的，并因此提供針對(duì)病因治療該退行性疾病的新策略，以勝過(guò) 目前僅僅減輕癥狀的治療策略。
[0016] 如果該模擬表位融合或偶聯(lián)至選自下組的載體蛋白，則其免疫原性可被驚人地增 加：無(wú)毒白喉毒素突變體、匙孔蟲(chóng)戚形血藍(lán)素（KLH)、白喉毒素（DT)、破傷風(fēng)毒素（TT)以及 流感嗜血桿菌蛋白D(蛋白D)，其中無(wú)毒白喉毒素突變體例如CRM197是特別優(yōu)選的。
[0017] 如本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"表位"指抗原中被特定的抗體分子識(shí)別的免疫原性區(qū)域。 一個(gè)抗原會(huì)擁有一個(gè)或多個(gè)表位，每個(gè)表位能夠結(jié)合識(shí)別特定表位的抗體。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)"模擬表位"指具有與其模擬的表位具有拓?fù)鋵W(xué)等同體的構(gòu)象的 分子。所述模擬表位結(jié)合至抗體的與期望抗原免疫特異性結(jié)合的同一抗原結(jié)合區(qū)。所述模 擬表位會(huì)在對(duì)其模擬的抗原有反應(yīng)的宿主中引發(fā)免疫學(xué)應(yīng)答。所述模擬表位還可以在牽涉 表位和結(jié)合所述表位的抗體的體外抑制測(cè)定法（例如，ELISA抑制測(cè)定法）中充當(dāng)其模擬 的表位的競(jìng)爭(zhēng)物。然而，本發(fā)明的模擬表位可以不必在體外抑制測(cè)定法中阻止或競(jìng)爭(zhēng)其模 擬的表位的結(jié)合，盡管它能夠在對(duì)哺乳動(dòng)物施用時(shí)誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答。包含此類模擬 表位（還有上文列出的那些）的本發(fā)明化合物具有避免形成自身反應(yīng)性T細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)，因 為這些化合物的肽具有與天然存在的淀粉樣蛋白-β肽的那些氨基酸序列不同的氨基酸 序列。
[0019] 本發(fā)明的模擬表位可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的化學(xué)合成方法來(lái)合成生成，或是作為 分離的肽或作為另一肽或多肽的一部分。或者，所述肽模擬表位可以在生成肽模擬表位 的微生物中生成，然后分離并（如果想要的話）進(jìn)一步純化。所述肽模擬表位可以在微 生物例如細(xì)菌、酵母或真菌中；在真核細(xì)胞例如哺乳動(dòng)物或昆蟲(chóng)細(xì)胞中；或在重組病毒 載體例如腺病毒、痘病毒、皰疫病毒、Simliki森林病毒、桿狀病毒、噬菌體、辛德畢斯病 毒（sindbisvirus)或仙臺(tái)病毒中生成。用于生成肽模擬表位的合適細(xì)菌包括大腸桿菌 (E.coli)、枯草桿菌（B.subtilis)或能夠表達(dá)肽例如肽模擬表位的任何其它細(xì)菌。用于 表達(dá)肽模擬表位的合適酵母類型包括釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖 酵母（Schizosaccharomycespombe)、假絲酵母屬（Candida)、巴斯德畢赤氏酵母（Pichia pastoris)或能夠表達(dá)肽的任何其它酵母。相應(yīng)的方法是本領(lǐng)域公知的。用于分離和純化 重組生成的肽的方法也是本領(lǐng)域公知的，而且包括例如凝膠過(guò)濾、親和層析、離子交換層析 等。
[0020] 為了便于分離所述肽模擬表位，可生成融合多肽，其中所述肽模擬表位被翻譯性 融合（共價(jià)連接）至能夠通過(guò)親和層析來(lái)分離的異源多肽。典型的異源多肽為HiS標(biāo)簽（例 如His6 ;6個(gè)組氨酸殘基）、GST標(biāo)簽（谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶）等。融合多肽不僅便于純化 所述模擬表位，而且還能防止所述模擬表位多肽在純化期間被降解。如果想要在純化后除 去異源多肽，則所述融合多肽可在肽模擬表位與異源多肽之間的接合處包含切割位點(diǎn)。所 述切割位點(diǎn)由這樣的氨基酸序列組成，所述氨基酸序列被對(duì)該位點(diǎn)處的氨基酸序列特異性 的酶（例如蛋白酶）切割。
[0021] 本發(fā)明的模擬表位還可在它們的N-和/或C-端處或附近被修飾，使得在所述位 置處結(jié)合半胱氨酸殘基。
[0022] 本發(fā)明的模擬表位優(yōu)選是它們的氨基酸序列不同于α突觸核蛋白的氨基酸序列 的抗原性多肽。在這個(gè)方面，本發(fā)明的模擬表位可不僅包含一種或多種天然存在的氨基酸 殘基的氨基酸替代，而且還可包含一種或多種非天然氨基酸（即不是來(lái)自20種"經(jīng)典的"氨 基酸）的氨基酸替代或者它們可以完全由此類非天然氨基酸裝配而成。合適的抗體誘導(dǎo)性 抗原可以自商品化肽文庫(kù)提供。優(yōu)選的是，這些肽為至少7個(gè)氨基酸，且優(yōu)選的長(zhǎng)度可以長(zhǎng) 達(dá)16,優(yōu)選長(zhǎng)達(dá)14或20個(gè)氨基酸（例如5至16個(gè)氨基酸殘基）。然而，根據(jù)本發(fā)明，也可 很好地采用更長(zhǎng)的肽作為抗體誘導(dǎo)性抗原。另外，本發(fā)明的模擬表位也可以是多肽的一部 分，并因此在它們的N和/或C端包含至少一個(gè)別的氨基酸殘基。
[0023] 為了制備本發(fā)明的模擬表位（即本文中公開(kāi)的抗體誘導(dǎo)性抗原），噬菌體文庫(kù)、 肽文庫(kù)當(dāng)然也是合適的，例如通過(guò)用于各種結(jié)構(gòu)的組合化學(xué)的手段生成的或通過(guò)高通量 篩選技術(shù)的手段獲得的那些庫(kù)（Display:ALaboratoryManual，CarlosF.Barbas等編； WillatsWG,Phagedisplay!practicalitiesandprospects.PlantMol.Biol. 2002Dec.； 50(6) :837-54)〇
[0024] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"表位"指抗原中被特定的抗體分子特異性結(jié)合的免疫原 性區(qū)域?？乖瓡?huì)擁有一個(gè)或多個(gè)表位，每個(gè)表位能夠結(jié)合識(shí)別特定表位的抗體。
[0025] 本發(fā)明的組合物可包含至少1個(gè)，至少2個(gè)，至少3個(gè)，至少4個(gè)，至少5個(gè)或至少 10個(gè)如本文定義的模擬表位。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例，無(wú)毒白喉毒素突變體選自CRM197、CRM176、 CRM228、CRM45、CRM9、CRM102、CRM103和CRM107,其中CRM197是特別優(yōu)選的。
[0027] 本發(fā)明的模擬表位特別優(yōu)選地融合或偶聯(lián)至無(wú)毒白喉毒素突變體上，如CRM 197( -種無(wú)毒的但為白喉毒素抗原性相同的變體）、CRM176、CRM228、CRM45(Uchidaet alJ.Biol.Chem. 218 ;3838-3844, 1973)、CM9、CRM45、CM102、CM103、CM107 以及 由Nicholls和Youle在（GeneticallyEngineeredToxins,Ed:Frankel,MarcelDekker Inc, 1992)中描述的其他突變體。將肽例如模擬表位融合至其他肽、多肽或蛋白質(zhì)的方法是 本領(lǐng)域公知的。
[0028] 本發(fā)明另一方面涉及一種組合物，其包含α-突觸核蛋白的表位的至少一種模擬 表位，其用在預(yù)防和/或治療β-淀粉樣變性病包括阿爾茨海默氏病的方法中。
[0029] 在此種組合物中，所述至少一種模擬表位可被融合或偶聯(lián)至藥學(xué)可接受的載體 上，所述藥學(xué)可接受的載體優(yōu)選為KLH(匙孔蟲(chóng)戚形血藍(lán)素）、破傷風(fēng)毒素、清蛋白結(jié)合蛋 白、牛血清白蛋白、樹(shù)狀聚物（MAPChem. 358:581)、肽接頭（或側(cè)翼區(qū)）以及Singh etal.，Nat.Biotech. 17(1999)，1075-1081(特別是該文件表 1 中的那些），和O'Hagan etal·，NatureReviews,DrugDiscovery2 (9) (2003) ,727-735(特別是其中記載的內(nèi)源 免疫強(qiáng)化性化合物和遞送系統(tǒng)）中記載的物質(zhì)，或其混合物。此語(yǔ)境中的偶聯(lián)化學(xué)（例如 經(jīng)由異雙功能化合物，例如GMBS，當(dāng)然還有其它的，如"BiocojuugateTechniques"，Greg T.Hermanson中記載的那些）可選自本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的反應(yīng)。當(dāng)然至少一種模擬表 位也可融合偶聯(lián)至藥學(xué)可接受的載體蛋白，該載體蛋白選自如上定義的無(wú)毒白喉毒素突變 體、匙孔蟲(chóng)戚形血藍(lán)素（KLH)、白喉毒素（DT)、破傷風(fēng)毒素（TT)和流感嗜血桿菌蛋白D(蛋 白D)。
[0030] 本發(fā)明化合物可通過(guò)任何合適的應(yīng)用方式（例如皮內(nèi)注射（i.d.)、靜脈內(nèi)注射 (i.v.)、腹腔注射（i.P.)、肌內(nèi)注射（i.m.)、鼻內(nèi)、口服、皮下、透皮或皮內(nèi)）來(lái)施用，及在 任何合適的遞送裝置中施用（〇'Haganetal·，NatureReviews，DrugDiscovery2(9)， (2003)，727-735)。因此，本發(fā)明至少一種模擬表位優(yōu)選經(jīng)配制用于靜脈內(nèi)給藥、皮下 給藥、皮內(nèi)給藥或肌內(nèi)給藥（參見(jiàn)例如"HandbookofPharmaceuticalManufacturing Formulations，'，SarfarazNiazi,CRCPressInc, 2004) 〇
[0031] 本發(fā)明組合物包含0·Ing至10mg，優(yōu)選IOng至lmg，特別是IOOng至100μg，或 者，可選擇地例如IOOfmol至10μmol，優(yōu)選IOpmol至1μmol，特別是IOOpmol至IOOnmol 量的本發(fā)明的模擬表位。典型地，所述疫苗還可含有輔助性物質(zhì)，例如緩沖劑、穩(wěn)定劑等。
[0032] 典型地，本發(fā)明的組合物還可含有輔助性物質(zhì)，例如緩沖劑、穩(wěn)定劑等。優(yōu)選地，這 樣的輔助性物質(zhì)，例如藥學(xué)可接受的賦形劑例如水、緩沖劑和/或穩(wěn)定劑，其含量為〇. 1至 99% (重量），更優(yōu)選為5至80 % (重量），特別是10至70 % (重量）?？赡艿慕o藥方案包 括每周、每?jī)芍堋⒚克闹埽吭拢┗蛎績(jī)稍轮委?，持續(xù)約1至12月；然而，還優(yōu)選的是可以2 至5,特別地3至4次初始疫苗給藥（在一個(gè)或兩個(gè)月中），接著此后6至12個(gè)月或甚至此 后數(shù)年進(jìn)行加強(qiáng)疫苗接種（boastervaccination)(還包括已經(jīng)針對(duì)其它疫苗建議的其它 方案）。
[0033] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，向個(gè)體給藥每次免疫接種0.Ing至IOmg,優(yōu)選 0. 5至500μg，更優(yōu)選是1至100μg量的至少一種模擬表位。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，這 些量是指本發(fā)明組合物中存在的全部模擬表位。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些劑量是 指組合物中存在的每種單獨(dú)的模擬表位。當(dāng)然也可能提供這樣的疫苗，該疫苗中所述各種 模擬表位以相同或不同的量存在。然而，本發(fā)明的模擬表位也可選擇性地以0.Ing至l〇mg， 優(yōu)選IOng至lmg，特別是IOOng至300μg/kg體重的量給予至個(gè)體。
[0034] 可與載體物質(zhì)結(jié)合來(lái)制備單一劑型的模擬表位的量根據(jù)所治療的宿主和具體的 給藥方式而變化。組合物的劑量也可根據(jù)例如疾病情況、年齡、性別、個(gè)體體重及個(gè)體中抗 體誘發(fā)特定應(yīng)答的能力等因素而發(fā)生變化?？烧{(diào)整劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如， 每天可給予數(shù)個(gè)分份劑量，或根據(jù)治療情況的緊急程度按比例降低劑量。也可根據(jù)環(huán)境改 變疫苗的劑量以提供最佳的預(yù)防性劑量應(yīng)答。舉例而言，通常根據(jù)給藥本發(fā)明組合物后誘 導(dǎo)的抗體水平，將本發(fā)明的模擬表位及組合物以幾天間隔、一或兩周間隔或甚至幾個(gè)月或 幾年間隔給予至個(gè)體。
[0035] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，所述組合物可被施予2至10次之間，優(yōu)選2 至7次之間，更優(yōu)選至多5次，最優(yōu)選至多4次。這些免疫接種的次數(shù)可產(chǎn)生基礎(chǔ)免疫 (immunisation)。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，相繼疫苗接種之間的時(shí)間間隔選自2周 至5年之間，優(yōu)選1個(gè)月至至多3年之間，更優(yōu)選2個(gè)月至1. 5年之間。示例性疫苗接種計(jì) 劃可包括在6至8周且至多6個(gè)月期間內(nèi)3至4次初始疫苗接種。之后可以每2至10年 重復(fù)所述疫苗接種。重復(fù)給予本發(fā)明的模擬表位可使治療性疫苗接種的最終效果最大化。
[0036] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例，將所述至少一種模擬表位用至少一種佐劑進(jìn)行 配制。
[0037] "佐劑"為可增加對(duì)抗原（例如模擬表位）的免疫應(yīng)答的化合物或其混合物?？乖?主要用作遞送系統(tǒng)、主要用作免疫調(diào)節(jié)物或是具有兩者的強(qiáng)特征。合適的佐劑包括適合用 于哺乳動(dòng)物（包括人類）的那些佐劑。
[0038] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，用在本申請(qǐng)定義的組合物中的至少一種 佐劑能夠刺激先天性免疫系統(tǒng)。
[0039] 先天性免疫應(yīng)答是由位于細(xì)胞表面的toll樣受體（TLR's)和細(xì)胞內(nèi)的Nod-LRR 蛋白（NLR)介導(dǎo)的，且分別由Dl和DO區(qū)域所介導(dǎo)。先天性免疫應(yīng)答包括應(yīng)答TLR激 活導(dǎo)致的細(xì)胞因子（cytokine)生成和應(yīng)答特定NLR(包括Ipaf)導(dǎo)致的半胱天冬 酶-I(Caspase-I)激活和IL-Ιβ分泌。該應(yīng)答獨(dú)立于特異性抗原，但也可作為抗原特異性 的適應(yīng)性免疫應(yīng)答的佐劑。該抗原可外源性地以疫苗或感染形式來(lái)提供，或可為內(nèi)源性的 (例如，在腫瘤相關(guān)抗原的情況下）。
[0040] 多種不同的TLR已被表征。這些TLR與不同的配體結(jié)合并被激活，隨之定位于 不同的器官或結(jié)構(gòu)上。因此在本領(lǐng)域中，具有誘發(fā)特定TLR反應(yīng)能力的免疫增強(qiáng)劑的開(kāi) 發(fā)引起人們關(guān)注。舉例而言，US4, 666, 886描述了作為TLR2激動(dòng)劑的一些脂肽分子。WO 2009/118296、TO2008/005555、TO2009/111337 及TO2009/067081 分別描述了TLR7 的幾類 小分子激動(dòng)劑。WO2007/040840及WO2010/014913描述了用于治療疾病的TLR7及TLR8 的激動(dòng)劑。這些不同的化合物包含小分子免疫增強(qiáng)劑（SMIP)。
[0041] 能夠刺激先天性免疫系統(tǒng)的至少一種佐劑優(yōu)選包含或由Toll樣受體（TLR)激動(dòng) 劑組成，所述Toll樣受體（TLR)激動(dòng)劑優(yōu)選自TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8* TLR9激動(dòng)劑，特別優(yōu)選的是TLR4激動(dòng)劑。
[0042]Toll樣受體激動(dòng)劑是本領(lǐng)域公知的。舉例而言，TLR2激動(dòng)劑為Pam3CySSerLyS4、 肽聚糖（Ppg)、PamCys，TLR3激動(dòng)劑為IPH31XX，TLR4激動(dòng)劑為氨基烷基氨基葡糖苷磷酸 (Aminoalkylglucosaminidephosphate)、E6020、CRX-527、CRX-601、CRX_675、5D24.D4、 RC-527，TLR7 激動(dòng)劑為咪喹莫特（Imiquimod)、3M-003、艾達(dá)樂(lè)（Aldara)、852A、R850、R848、 CL097,TLR8 激動(dòng)劑為 3M-002,TLR9 激動(dòng)劑為鞭毛蛋白、Vaxlmmune、CpG0DN(AVE0675、 HYB2093)、CYT005-15AllQbG10、dSUM。
[0043] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述TLR激動(dòng)劑選自單磷?；|(zhì)A(MPL)、 3-脫-0-乙?；瘑瘟柞；|(zhì)A(3D-MPL)、聚I:C、GLA、鞭毛蛋白、R848、咪喹莫特和CpG。
[0044] 本發(fā)明的組合物可包含MPL。MPL可為合成生產(chǎn)的MPL或天然資源中獲取的MPL。 當(dāng)然可向本發(fā)明的組合物中添加化學(xué)修飾的MPL。此類MPL的實(shí)例在本領(lǐng)域是公知的。
[0045]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施例，所述至少一種佐劑包含皂苷（優(yōu)選QS21)、油 包水乳液和脂質(zhì)體或由皂苷（優(yōu)選QS21)、油包水乳液和脂質(zhì)體所組成。
[0046] 所述至少一種佐劑優(yōu)選自1^594301、43023303、4304、氫氧化鋁和磷酸鋁。
[0047] 已知的可用于人類的合適的遞送系統(tǒng)型佐劑的例子包括但不限于鋁劑（alum) (例如：磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁）、磷酸鈣、脂質(zhì)體、水包油乳液（如MF59(4.3%w/v角 S烯、0.5%w/v聚山梨醇酯80(Tween80)、0.5%w/v失水山梨醇三油酸酯（Span85))、油 包水乳液（如Montanide)及聚（D,L-丙交酯-共-乙交酯）（PLG)微米粒子或納米粒子。
[0048] 已知的可用于人類的合適的免疫調(diào)節(jié)型佐劑的例子包括但不限于來(lái)自Aquilla 樹(shù)皮的皂苷提取物（QS21、QuilA)、TLR4激動(dòng)劑（如MPL(單磷?；|(zhì)A))、3DMPL(3-0-去 乙?；疢PL)或GLA-AQ、LT/CT突變體、細(xì)胞因子（如各種白介素（如IL-2、IL-12)或GM-CSF 或類似的物質(zhì)。
[0049] 已知的可用于人類的同時(shí)具有遞送和免疫調(diào)節(jié)特征的合適的免疫調(diào)節(jié)型佐劑， 包括但不限于ISCOMS(參見(jiàn)，例如Sjdlanderetal. (1998)J.LeukocyteBiol. 64:713;W090/03184,W096/11711，WO00/48630,W098/36772,W000/41720,W006/134423 和 W007/026, 190)或GLA-EM，其為Toll-樣受體激動(dòng)劑如TLR4激動(dòng)劑與水包油乳液的組合。 [0050] 可提高本發(fā)明模擬表位組合物效力的更多示例性佐劑包括但不限于：（1)水 包油乳液制劑（包含或不包含其他特異性免疫刺激劑，如胞壁酰肽（見(jiàn)下）或細(xì)菌細(xì) 胞壁成分），如（a)SAF，含有10 %角鯊烯、0.4 %Tween80、5 %普蘭尼克嵌段的聚合物 (pluronic-blockedpolymer)L121及thr-MDP，其可被微流體化形成亞微型乳液或震蕩 形成大粒徑乳液，（b)RIBI? 佐劑系統(tǒng)（RAS)，（RibiImmunochem,Hamilton,Mont.),含 有2 %角鯊烯、0. 2%Tween80和一種或多種細(xì)菌細(xì)胞壁成分如單磷?；|(zhì)A(MPL)、 海藻糖二霉菌酸酯（TDM)和細(xì)胞壁骨架（CWS)，優(yōu)選MPL+CWS(DETOXtm) ; (2)可使用皂 苷佐劑，例如QS21、STIMUL0N?(CambridgeBioscience，Worcester,Mass. )、AbiSCO? (Isconova,Sweden)gJcISCOlliatriX'K;i(CommonwealthSerumLaboratories,Australia),或由其產(chǎn)生的顆粒例如ISCOM(免疫刺激復(fù)合物），該ISCOMS可沒(méi)有額外的清潔劑，如 W000/07621 ;(3)弗氏完全佐劑（CFA)和不完全弗氏佐劑（IFA) ;(4)細(xì)胞因子，如白介素 (例如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12(W099/44636)等）、干擾素（例如γ干 擾素）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF)、腫瘤壞死因子（TNF)等；(5)單磷?；|(zhì)A(MPL) 或3-0-去乙?；疢PL(3dMPL)(參見(jiàn)例如，GB-2220221、EP-A-0689454)，任選地，當(dāng)與肺炎 球菌糖類使用時(shí)基本不存在鋁劑（參見(jiàn)例如W000/56358) ;(6)3dMPL與例如QS21和/或水 包油乳液的組合（參見(jiàn)例如EP-A-0835318、EP-A-0735898和EP-A-0761231) ;(7)聚氧乙烯 醚或聚氧乙烯酯（參見(jiàn)例如W099/52549) ;(8)聚氧乙烯失水山梨醇酯表面活性劑與辛苯聚 醇的組合（W001/21207)或聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性劑與至少一種額外的非離子表面 活性劑如辛苯聚醇的組合（W001/21152) ;(9)皂苷和免疫刺激性寡核苷酸（例如CpG寡核 苷酸）（W000/62800) ;(10)免疫刺激劑和金屬鹽顆粒（參見(jiàn)例如W000/23105) ;(11)皂苷 和水包油乳液例如W099/11241 ; (12)皂苷（例如QS21)+3dMPL+M2(優(yōu)選地+甾醇）例如 W098/57659 ; (13)其他的作為免疫刺激劑以提高該組合物效力的物質(zhì)。胞壁酰肽包括N-乙 ?；?胞壁?；?L-蘇氨?；?D-異谷酰胺（thr-MDP)、N-25乙?；?去胞壁?；?L-丙 氨?；?D-異谷酰胺（nor-MDP)、N-乙?；邗；?L-丙氨?；?D-異谷酰胺基-L-丙 氨酸-2- (1' -2'-二棕櫚?；?sn-甘油-3-羥基磷?；趸?乙胺MTP-PE)等。
[0051] 本發(fā)明特別優(yōu)選的組合物包含作為佐劑的含有或不含有Toll-樣受體激動(dòng)劑的 水包油乳液，以及脂質(zhì)體和/或含皂苷的佐劑，含有或不含有Toll-樣受體激動(dòng)劑。本發(fā)明 的組合物也可包含氫氧化鋁，其含有或不含有Toll-樣受體激動(dòng)劑作為佐劑。
[0052] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述表位包含氨基酸序列KNEEGAP或 DMPVDTON或由氨基酸序列KNEEGAP或DMPVDTON所組成。
[0053] 前述表位的模擬表位是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的（參見(jiàn)例如W02009/103105、WO 2011/020133)〇
[0054] 優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物包含至少一種模擬表位，該模擬表位包含如下氨基酸序 列或由如下氨基酸序列組成
[0055] (X1)J2X3X4X5GX6P(X7)m (式I)，
[0056] 其中
[0057] X1是任意氨基酸殘基，
[0058]X2是選自下組的氨基酸殘基：賴氨酸（K)、精氨酸（R)、丙氨酸（A)和組氨酸（H)，
[0059]&是選自下組的氨基酸殘基：天冬酰胺（N)、谷氨酰胺（Q)、絲氨酸（S)、甘氨酸（G) 和丙氨酸（A)，優(yōu)選天冬酰胺（N)、絲氨酸（S)、甘氨酸（G)和丙氨酸（A)，
[0060] X4是選自下組的氨基酸殘基：谷氨酸（E)、天冬氨酸（D)和丙氨酸（A)，
[0061] X5是選自下組的氨基酸殘基：谷氨酸（E)和天冬氨酸（D)，
[0062]X6是選自下組的氨基酸殘基：丙氨酸㈧和酪氨酸（Y)，
[0063] X7是任意氨基酸殘基，
[0064]η和m獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)，
[0065] 且其中式I的氨基酸序列與具有氨基酸序列KNEEGAP的α-突觸核蛋白的7聚體 多肽片段不相同，或者不包含所述7聚體多肽片段，且其中
[0066] 包含式I的氨基酸序列的至少一種模擬表位具有結(jié)合抗體的能力，該抗體對(duì)包含 氨基酸序列KNEEGAP的α-突觸核蛋白的表位是特異性的。
[0067] 術(shù)語(yǔ)"具有結(jié)合抗體能力的肽，所述抗體對(duì)α-突觸核蛋白的表位是特異性的"是 指所述肽能夠結(jié)合于α-突觸核蛋白特異性抗體，該抗體是向哺乳動(dòng)物給予α-突觸核蛋 白或其片段后所產(chǎn)生的。具有所述結(jié)合能力的所述肽能夠誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物中α-突觸核蛋白 特異性抗體的形成。后述抗體因此結(jié)合至本發(fā)明的化合物，也能結(jié)合至α-突觸核蛋白。
[0068] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，X2是選自下組的氨基酸殘基：賴氨酸（K) 和精氨酸（R)和/或X6是丙氨酸（A)。
[0069] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述模擬表位包含選自如下的氨基酸序列或 由選自如下的氨基酸序列所組成：(X1)nKNDEGAPG上、（X1)nANEEGAPft上、（X1)nKAEEGAP(X7) m> (X1)nKNAEGAP(X7)m, (X1)nRNEEGAP(X7)m, (X1)nHNEEGAP(X7)m, (X1)nKNEDGAP(X7)m, (X1) nKQEEGAP(X丄、（X1)nKSEEGAP(X丄、（X1)nKNDDGAP(X丄、（X1)nRNDEGAP(X丄、（X1)nRNEDGAP(X7) m> (X1)nRQEEGAP(X7)m, (X1)nRSEEGAP(X7)m, (X1)nANDEGAP(X7)m, (X1)nANEDGAP(X7)m, (X1) nHSEEGAP(X7) m, (X1)nASEEGAP(X7) m, (X1)nHNEDGAP(X7) m, (X1)nHNDEGAP(X7) m, (X1)nRNAEGAP(X7) m> (X1)nHNAEGAP(X7)m, (X1)nKSAEGAP(X7)m, (X1)nKSDEGAP(X7)m, (X1)nKSEDGAP(X7)m, (X1) nRQDEGAP(X7) m, (X1)nRQEDGAP(X7) m, (X1)nHSAEGAP(X7) m, (X1)nRSAEGAP(X7) m, (X1)nRSDEGAP(X7) m、（X1)nRSEDGAP(X上、（X1)nHSDEGAP(X上、（X1)nHSEDGAP(X上、（X1)nRQDDGAP(X7)m，優(yōu)選（X1) nKNDEGAP(X2) m, (X1)nRNEEGAP(X2) m, (X1)nRNDEGAP(X2) m, (X1)nKNAEGAP(X2) m, (X1)nKSDEGAP(X2) m、（X1)nRNAEGAP(X2)m 或（X1)nRSEEGAP(X2) m。
[0070] 本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含至少一種模擬表位，該模擬表位包含選自如下的氨基 酸序列或由選自如下的氨基酸序列所組成：(X1)nQASFAME(X7)m、（X1)nTASWKGE(X7)m、（X1) nQASSKLD(X7) m, (X1)JPAffKGE(X7) m, (X1)JPSffAGE(X7) m, (X1)JPSffKGE(X7) m,
[0071] 其中
[0072] X1是任意氨基酸殘基，
[0073] X7是任意氨基酸殘基，
[0074] η和m獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)，
[0075] 所述至少一種模擬表位具有結(jié)合抗體的性能，該抗體對(duì)包含氨基酸序列KNEEGAP 的α-突觸核蛋白的表位是特異性的，
[0076] 所述組合物用于預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病。
[0077] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，該至少一種模擬表位包含氨基酸序列
[0078] (Xr)n,X2,X3.PVX4,X5,X6, (Xr)m, (式II)，
[0079] 其中
[0080]X1,是任意氨基酸殘基，
[0081] X2，是選自下組的氨基酸殘基：天冬氨酸（D)和谷氨酸（E)，
[0082] Χ3,是任意氨基酸殘基，
[0083] Χ4,是任意氨基酸殘基，
[0084] X5，是選自下組的氨基酸殘基：脯氨酸⑵和丙氨酸（A)，
[0085] X6，是選自下組的氨基酸殘基：天冬氨酸（D)和谷氨酸（E)，
[0086] Xr是任意氨基酸殘基，
[0087] η'和m'獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)，
[0088] 其中，式II的氨基酸序列與具有氨基酸序列DMPVDPDN的α-突觸核蛋白的8-聚 體多肽片段不同，或不包含所述8-聚體多肽片段，且其中
[0089] 包含式II的氨基酸序列的所述至少一種模擬表位具有結(jié)合抗體的能力，該抗體 對(duì)包含氨基酸序列DMPVDPDN的α-突觸核蛋白的表位是特異性的。
[0090] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，X3，是選自下組的氨基酸殘基：谷氨酰胺（Q)、 絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、天冬酰胺（N)、纈氨酸（V)、組氨酸（H)、蛋氨酸（M)、酪 氨酸（Y)、丙氨酸（A)和亮氨酸（L)。
[0091] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施例，X4，是選自下組的氨基酸殘基：谷氨酰胺 (Q)、色氨酸（W)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、天冬氨酸（D)、異亮氨酸（I)、纈氨酸（V)、組氨酸 (H)、脯氨酸（P)、酪氨酸（Y)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)和亮氨酸（L).
[0092] 本發(fā)明的模擬表位為本發(fā)明組合物的一部分，其優(yōu)選具有選自下組的氨基酸 序列：（C)DQPVLPD、 （C)DMPVLPD、 （C)DSPVLPD、 （C)DSPVWAE、 （C)DTPVLAE、 （C)DQPVLPDN、 (C)DMPVLPDN, (C)DSPVLPDN, (C)DQPVTAEN, (C)DSPVffAEN, (C)DTPVLAEN, (C)HDRPVTPD, (C)DRPVTPD, (C)DVPVLPD, (C)DTPVYPD, (C)DTPVIPD, (C)HDRPVTPDN, (C)DRPVTPDN, (C) DNPVHPEN, (C)DVPVLPDN, (C)DTPVYPDN, (C)DTPVIPDN, (C)DQPVLPDG, (C)DMPVLPDG, (C) DSPVLPDG、（C)DSPVWAEG、（C)DRPVAPEG、（C)DHPVHPDS、（C)DMPVSroR、（C)DSPVProD、（C) DQPVYroi、 （C)DRPVYroi、 （C)DHPVITDR、 （C)EYPVYPES、 （C)DTPVLPDS、 （C)DMPVITDT、 （C) DAPVTPDT、（C)DSPWroN、（C)DLPVITDR、（C)DSPVHPDT、（C)DAPVRPDS、（C)DMPVWPDG、（C) DAPVYPDG、（C)DRPVQPDR、（C)YDRPVQPDR、（C)DMPVDPEN、（C)DMPVDADN、DQPVLPD(C)、 DMPVLPD(C)、 （C)EMPVDPDN和（C)DNPVHPE。
[0093] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，n'和/或m'是I且X1，和/或X7是半胱 氨酸（C)。
[0094] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述模擬表位包含7至30個(gè)，優(yōu)選地7至20 個(gè)，更優(yōu)選地7至16個(gè)，最優(yōu)選地8或9個(gè)氨基酸殘基。
[0095] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述模擬表位包含下列組的氨基酸序列或由 下列的氨基酸序列所組成：DQPVLPD、DSPVLPD、DVPVLPD、DSPVLPDG、YDRPVQPDR、DHPVHPDS、 DAPVRPDS、KNDEGAP、KQEEGAP和KSEEGAP，特別是DQPVLPD和YDRPVQPDR。當(dāng)然，為了方便將 這些模擬表位偶聯(lián)至本文定義的載體蛋白上，該模擬表位可在C-和/或N-端包含半胱氨 酸殘基。
[0096] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明的組合物包含模擬表位和載體和 /或佐劑的如下組合（參見(jiàn)表A)。
[0097] 表A:
[0098] 模擬表位序列（SEQ):A=DQPVLPD,B=DSPVLPD,C=DVPVLPD,D=DSPVLPDG，E =YDRPVQPDR,F=DHPVHPDS,G=DAPVRPDS,H=KNDEGAP,I=KQEEGAP,J=KSEEGAP(模 擬表位包含用于將其偶聯(lián)至載體分子上的C-端或N-端半胱氨酸殘基）
[0099] 載體（CAR) :C1 =CRM197,C2 =KLH
[0100] 佐劑（ADJ) :A1 =鋁劑，A2 =基于皂苷的制劑，A3 =QS21 (純的），A4 =基于角鯊 烯的制劑，A5 =Addavax(失水山梨醇三油酸酯（0. 5%w/v)于角藍(lán)烯油中（5%v/v)_Tween 80(0.5%w/v)于檸檬酸鈉緩沖液中（10mM，pH6.5))，A6 =MF59(0.5%聚山梨醇酯80， 0. 5%失水山梨醇三油酸酯，4. 3%角鯊烯，注射用水，IOmM檸檬酸鈉緩沖液），A7 =AS03， A8 =AF03,A9 =單磷酰基脂質(zhì)A(MPL)，AlO=MPLA(脂質(zhì)A的衍生物，來(lái)源于明尼蘇達(dá)沙 門氏菌（Salmonellaminnesota)脂多糖），A11 =合成的MPL，A12 =A1+A3，A13 =A1+A5， A14 =A1+A9，A15 =A3+A9，A16 =A3+A4，A17 =A4+A9，A18 =A3+A4+A9，A19 =A1+A3+A4， A20 =A1+A4+A9,A21 =A1+A3+A9,A22 =Ribi佐劑系統(tǒng)，A23 =QS21 (包封的），A24 = CpG,A25 =A1+A23,A26 =A1+A24,A27 =A1+A2,A28 =A1+A9+A24,A29 =A1+A3+A24, A30 =A1+A23+A24,A31 =A4+A3,A32 =A4+A9,A33 =A4+A23,A34 =A4+A24,A35 = A4+A9+A24,A36 =A4+A3+A24,A37 =A4+A23+A24,A38 =A4+A3+A9,A39 =A4+A23+A9, A40 =A4+A3+A9+A24,A41 =A4+A23+A9+A24,A42 =A9+A23,A43 =A1+A3+A9+A24,A44 = A1+A9+A23+A24

【權(quán)利要求】
1. 包含a-突觸核蛋白的表位的至少一種模擬表位的組合物，其用在預(yù)防和/或治療 淀粉樣變性病包括阿爾茨海默氏病的方法中，其中所述至少一種模擬表位偶聯(lián)或融合 至藥學(xué)可接受的載體蛋白，該載體蛋白選自下組：無(wú)毒白喉毒素突變體、匙孔蟲(chóng)戚形血藍(lán)素 (KLH)、白喉毒素（DT)、破傷風(fēng)毒素（TT)和流感嗜血桿菌蛋白D(蛋白D)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述無(wú)毒白喉毒素突變體選自下組：CRM 197、CRM 176、CRM 228、CRM 45、CRM 9、CRM 102、CRM 103 和 CRM 107,特別是 CRM 197。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的組合物，其中所述至少一種模擬表位用至少一種佐劑進(jìn)行配 制。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其中所述至少一種佐劑能夠刺激先天性免疫系統(tǒng)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述能夠刺激先天性免疫系統(tǒng)的至少一種佐劑包含 Toll樣受體（TLR)激動(dòng)劑或由Toll樣受體（TLR)激動(dòng)劑組成，所述Toll樣受體（TLR)激 動(dòng)劑優(yōu)選為：TLR1激動(dòng)劑、TLR2激動(dòng)劑、TLR3激動(dòng)劑、TLR4激動(dòng)劑、TLR5激動(dòng)劑、TLR7激動(dòng) 齊IJ、TLR8激動(dòng)劑或TLR9激動(dòng)劑，特別優(yōu)選為TLR4激動(dòng)劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其中所述TLR激動(dòng)劑選自下組：?jiǎn)瘟柞；|(zhì)A(MPL)、 3-去-0-乙?；瘑瘟柞；|(zhì)A(3D-MPL)、聚I:C、GLA、鞭毛蛋白、R848、咪喹莫特和CpG。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3至6中任意一項(xiàng)的組合物，其中所述至少一種佐劑包含皂苷優(yōu)選 QS21、油包水乳液和脂質(zhì)體或由皂苷優(yōu)選QS21、油包水乳液和脂質(zhì)體所組成。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其中所述至少一種佐劑選自下組：MF59、AS0UAS02、 AS03、AS04、氫氧化鋁和磷酸鋁。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)的組合物，其中所述表位包含氨基酸序列KNEEGAP 或 DMPVDPDN。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1至9中任意一項(xiàng)的組合物，其中所述至少一種模擬表位包含氨基酸 序列 (X1)nX2X3X4X 5GX6P(X7)m (式 I)， 其中 Xi是任意氨基酸殘基， x2是選自下組的氨基酸殘基：賴氨酸（K)、精氨酸（R)、丙氨酸（A)和組氨酸（H)， 乂3是選自下組的氨基酸殘基：天冬酰胺（N)、谷氨酰胺（Q)、絲氨酸（S)、甘氨酸（G)和 丙氨酸（A)，優(yōu)選為天冬酰胺（N)、絲氨酸（S)、甘氨酸（G)和丙氨酸（A)， X4是選自下組的氨基酸殘基：谷氨酸（E)、天冬氨酸（D)和丙氨酸（A)， X5是選自下組的氨基酸殘基：谷氨酸（E)和天冬氨酸（D)， X6是選自下組的氨基酸殘基：丙氨酸（A)和酪氨酸（Y)， X7是任意氨基酸殘基， n和m獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)， 其中式I的氨基酸序列與具有氨基酸序列KNEEGAP的a -突觸核蛋白的7聚體多肽片 段不相同，或者不包含所述7聚體多肽片段，且其中 包含式I的氨基酸序列的所述至少一種模擬表位具有結(jié)合抗體的能力，該抗體對(duì)包含 氨基酸序列KNEEGAP的a -突觸核蛋白的表位是特異性的。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其中所述模擬表位包含選自下組的氨基酸序列：(Xi) nKNDEGAP (X7) m, (X:) nANEEGAP (X7) m, (X:) nKAEEGAP (X7) m, (X:) nKNAEGAP (X7) m, (X:) nRNEEGAP (X7)m> (X1)nHNEEGAP(X7)m, (X:) nKNEDGAP (X7) m, (X:) nKQEEGAP (X7) m, (X:) nKSEEGAP (X7) m, (X:)nKNDDGAP (X丄、（XJ nRNDEGAP (X丄、（X〇 nRNEDGAP (X丄、（XJ nRQEEGAP (X丄、（X〇 nRSEEGAP (X7)m> (X1)nANDEGAP(X7)m, (X:) nANEDGAP (X7) m, (X:) nHSEEGAP (X7) m, (X:) nASEEGAP (X7) m, (X:)nHNEDGAP (X7) m, (X:) nHNDEGAP (X7) m, (X:) nRNAEGAP (X7) m, (X:) nHNAEGAP (X7) m, (X:) nKSAEGAP (X7)m> (X1)nKSDEGAP(X7)m, (X1)nKSEDGAP(X7)m, (X:) nRQDEGAP (X7) m, (X:) nRQEDGAP (X7) m, (X:)nHSAEGAP (X7) m, (X:) nRSAEGAP (X7) m, (X:) nRSDEGAP (X7) m, (X:) nRSEDGAP (X7) m, (X:) nHSDEGAP (X7) m、（X^HSEDGAPd),、（XXRQDDGAPdh，優(yōu)選為（XXKNDEGAP%),、（X^RNEEGAP%)m、（XiRNDEGAPU^、（XiKNAEGAPfti、（XiKSDEGAPU^、（XiRNAEGAPUi 或（XDnRSEEGAP (X2)m〇
12. 根據(jù)權(quán)利要求1至11中任意一項(xiàng)的組合物，其包含至少一種模擬表位，所述模擬 表位包含選自下組的氨基酸序列：(Xi)nQASFAME(X上、（XJJASWKGEG上、（XiQASSKLD%)m> (X:) JPAWKGE (X7) m, (X:) JPSWAGE (X7) m, (X:) JPSWKGE (X7) m, 其中 &是任意氨基酸殘基， X7是任意氨基酸殘基， n和m獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)， 所述至少一種模擬表位具有結(jié)合抗體的能力，該抗體對(duì)包含氨基酸序列KNEEGAP的 a-突觸核蛋白的表位是特異性的。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1至12中任意一項(xiàng)的組合物，其中所述至少一種模擬表位包含氨基 酸序列 (xr)n,x2,x3.pvx4,x 5,x6, (Xr)m， (式 II)， 其中 Xi，是任意氨基酸殘基， x2，是選自下組的氨基酸殘基：天冬氨酸（D)和谷氨酸（E)， X3,是任意氨基酸殘基， X4，是任意氨基酸殘基， X5，是選自下組的氨基酸殘基：脯氨酸（P)和丙氨酸（A)， X6，是選自下組的氨基酸殘基：天冬氨酸（D)和谷氨酸（E)， X7，是任意氨基酸殘基， n'和m'獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)， 其中式II的氨基酸序列與具有氨基酸序列DMPVDTON的a -突觸核蛋白的8-聚體多 肽片段不同，或不包含所述8-聚體多肽片段，且其中 包含式II的氨基酸序列的所述至少一種模擬表位具有結(jié)合抗體的能力，該抗體對(duì)包 含氨基酸序列DMPVDTON的a -突觸核蛋白的表位是特異性的。
14. 根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其中所述模擬表位具有選自下組的氨基酸序列：(C) DQPVLPD、 （C)DMPVLPD、 （C)DSPVLPD、 （C)DSPVWAE、 （C)DTPVLAE、 （C)DQPVLPDN、 （C)DMPVLPDN、 (C)DSPVLPDN, (C)DQPVTAEN, (C)DSPVWAEN, (C)DTPVLAEN, (C)HDRPVTPD, (C)DRPVTPD, (C)DVPVLPD, (C)DTPVYPD, (C)DTPVIPD, (C)HDRPVTPDN, (C)DRPVTPDN, (C)DNPVHPEN, (C) DVPVLPDN, (C)DTPVYPDN, (C)DTPVIPDN, (C)DQPVLPDG, (C)DMPVLPDG, (C)DSPVLPDG, (C) DSPVWAEG、 （C)DRPVAPEG、 （C)DHPVHPDS、 （C)DMPVSroR、 （C)DSPVPPDD、 （C)DQPVYroi、 （C) DRPVYPDI, (C)DHPVTPDR, (C)EYPVYPES, (C)DTPVLPDS, (C)DMPVTPDT, (C)DAPVTPDT, (C) DSPVVPDN, (C)DLPVTPDR, (C)DSPVHPDT, (C)DAPVRPDS, (C)DMPVWPDG, (C)DAPVYPDG, (C) DRPVQPDR、（C)YDRPVQPDR、（C)DMPVDPEN、（C)DMPVDADN、DQPVLPD(C)、DMPVLro(C)、（C) EMPVDPDN和（C)DNPVHPE。
15. 根據(jù)10至14中任意一項(xiàng)的組合物，其特征在于n'和/或m'是1且\，和/或X7， 是半胱氨酸（C)。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1至15中任意一項(xiàng)的組合物，其中所述至少一種模擬表位選自下組： DQPVLPD、DSPVLPD、DVPVLPD、DSPVLPDG、YDRPVQPDR、DHPVHPDS、DAPVRPDS、KNDEGAP、KQEEGAP 和 KSEEGAP，特別是 DQPVLTO 和 YDRPVQPDR。
【文檔編號(hào)】A61K39/00GK104411328SQ201380032533
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2013年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月1日
【發(fā)明者】M.曼德勒, W.佐納, F.馬特納, W.施密特 申請(qǐng)人:阿費(fèi)里斯股份公司