用于治療硬皮病的抗ccl2抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明尤其提供特征在于高親和力、效力、組織選擇性和/或表位特異性的經(jīng)改良抗CCL2抗體，和其尤其用于治療硬皮病和相關(guān)纖維化和/或發(fā)炎性疾病、病癥和病況的用途。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供基于親和力為10-12M或更大的抗CCL2抗體治療硬皮病和相關(guān)纖維化和/或發(fā)炎性疾病、病癥和病況的方法和組合物。
【專利說明】用于治療硬皮病的抗CCL2抗體
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)案的奪叉引用
[0002] 本申請(qǐng)案依據(jù)35USC§ 119(e)要求2012年5月22日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng) 案第61/650, 149號(hào)的權(quán)益，所述申請(qǐng)案特此以全文引用的方式并入本文中。
[0003] 序列表
[0004] 本說明書提及2013年5月22日以電子形式作為命名為"2006685-0330_ Sequences_ST25"的ASCII,txt文檔提交的序列表。所述.txt文檔是在2013年5月14日 生成的且大小是2KB。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005] 無

【背景技術(shù)】
[0006] 全身性硬化癥（硬皮?。┦桥R床上異質(zhì)性結(jié)締組織病癥，引起皮膚的硬化和繃緊。 其是特征在于免疫活化、血管損傷和纖維化的自身免疫型疾病。涉及肺、心、腎和胃腸道的 基于主要器官的并發(fā)癥可促進(jìn)死亡率和發(fā)病率。發(fā)病機(jī)制是未知的。
[0007] 與硬皮病最常有關(guān)的特征是纖維化（膠原蛋白在皮膚和器官中積聚）。膠原蛋 白的積聚促成病癥的癥狀，包括脫發(fā)、皮膚硬化和繃緊、皮膚變色、關(guān)節(jié)疼痛、手指和關(guān)節(jié)僵 硬、消化道問題和呼吸并發(fā)癥（干咳、呼吸短促、喘息）。硬皮病可歸類成兩個(gè)主要子組：局 限性皮膚硬皮病和彌漫性皮膚硬皮病。在局限性皮膚硬皮病中，纖維化主要限制于手、臂和 面部。彌漫性皮膚硬皮病是一種快速進(jìn)行性病癥，其影響大面積的皮膚并損害一或多個(gè)內(nèi) 臟?；加芯窒扌云つw硬皮病的患者與患有彌漫性皮膚硬皮病的患者相比具有相對(duì)更好的長(zhǎng) 期預(yù)后。廣泛的全身性硬皮病可損傷心、腎、肺或胃腸道，這可引起死亡。肺纖維化是患有 硬皮病的患者死亡的最常見原因。
[0008] 因此，硬皮病是極度致衰弱的疾病，有著潛在的致命后果。在美國約有50, 000名 患者。女性患者與男性患者的比率是約4:1。當(dāng)前治療方法僅基于對(duì)在整個(gè)疾病過程產(chǎn)生 的并發(fā)癥的對(duì)癥治療和管理（例如皮質(zhì)類固醇、NSAID和免疫抑制藥物（如甲氨蝶呤和環(huán) 磷氮介））。沒有療法展示出會(huì)逆轉(zhuǎn)或停止疾病進(jìn)展。因此，對(duì)于硬皮病的有效療法存在高 度未滿足的醫(yī)學(xué)需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明具體是基于經(jīng)改良抗體或結(jié)合蛋白提供用于有效治療硬皮病的經(jīng)改良方 法和組合物，所述經(jīng)改良抗體或結(jié)合蛋白可以高親和力、效力和/或表位多樣性特異性地 結(jié)合于C-C趨化因子配體-2 ("CCL2")，從而實(shí)現(xiàn)穩(wěn)固的生物分布和/或組織特異性。已知 CCL2是硬皮病的經(jīng)驗(yàn)證目標(biāo)。數(shù)項(xiàng)研宄已展示，硬皮病成纖維細(xì)胞呈現(xiàn)出CCL2mRNA和蛋白 的組成型表達(dá)增加。在硬皮病皮膚切片中，CCL2的表達(dá)在成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和單核細(xì)胞 中被檢測(cè)到，而其在正常皮膚中是不可檢測(cè)的（加林多（Galindo)等人，關(guān)節(jié)炎與風(fēng)濕病 (ArthritisRheum. )2001 年6月；44(6) :1382-6 ;迪斯特勒（Distler)等人，關(guān)節(jié)炎與風(fēng)濕 病 2001 年 11 月；44 (11) :2665-78 ;利奧伊德（Lioyd)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)（ExpMed. ) 1997 年 4 月 7 日；185 (7) :1371-80 ;山本（Yamamoto)等人，皮膚病科學(xué)雜志（JDermatolSci. )2001 年 6 月；26 (2) :133-9;登頓（Denton)等人；免疫學(xué)趨勢(shì)（TrendsImmunol. )2005 年 11 月； 26(11):596-602. 2005年9月15日電子出版）。然而，在本發(fā)明之前，尚未發(fā)展出基于抗 CCL2抗體的針對(duì)硬皮病的有效療法。本發(fā)明人觀察到，血漿中的高水平CCL2螯合靜脈內(nèi)注 射的抗CCL2抗體，引起對(duì)患病組織中CCL2的低效靶向。為了解決這一問題，本發(fā)明人想到 使用具有高親和力的抗CCL2抗體，以足以勝過高水平血清CCL2的量投與，引起對(duì)所需患病 組織中CCL2的有效靶向。具體來說，本發(fā)明人想到"同類之最的"抗CCL2單克隆抗體，其 特征在于高結(jié)合親和力、組織選擇性、表位特異性和/或長(zhǎng)半衰期。所述本發(fā)明抗體一旦被 體內(nèi)投與就會(huì)引起所需生物分布和生物可用性，使得其結(jié)合并阻斷目標(biāo)組織中的CCL2信 號(hào)傳導(dǎo)，除了硬皮病的其它癥狀或特征以外還減少浸潤(rùn)、炎癥和纖維化。
[0010] 因此，在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供治療硬皮病的方法，其包含向罹患或易患硬皮病 的個(gè)體投與有效量的抗CCL2抗體或其片段，使得目標(biāo)組織中硬皮病的至少一種癥狀或特 征的強(qiáng)度、嚴(yán)重度或頻率降低或具有延遲的發(fā)作。
[0011] 在一些實(shí)施例中，硬皮病的至少一種癥狀或特征是選自內(nèi)皮細(xì)胞損傷、基底膜層 增生、血管周圍單核細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化、內(nèi)臟器官架構(gòu)紊亂、血管稀疏、缺氧和其組合。
[0012] 在一些實(shí)施例中，目標(biāo)組織是選自由以下組成的群組：皮膚、血管、肺、心、腎、胃腸 道（包括肝）、肌肉骨胳系統(tǒng)以及其組合。在一些實(shí)施例中，目標(biāo)組織是肺。在一些實(shí)施例 中，目標(biāo)組織是心。
[0013] 在一些實(shí)施例中，個(gè)體罹患或易患局限性皮膚硬皮病。在一些實(shí)施例中，個(gè)體罹患 或易患彌漫性皮膚硬皮病。
[0014] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是腸胃外投與的。在一些實(shí)施例中，腸胃 外投與是選自靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、吸入、經(jīng)皮（表面）、皮下和/或經(jīng)粘膜投與。在一些實(shí)施例中， 腸胃外投與是靜脈內(nèi)投與。
[0015] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是口服投與的。
[0016] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是兩月一次、每月一次、三周一次、兩周一 次、每周一次、每天一次或以可變的時(shí)間間隔投與的。
[0017] 在另一方面中，本發(fā)明提供如本文中所述的抗CCL2抗體或其片段的用途，其用于 制造供治療硬皮病用的藥物，其中治療包含向罹患或易患硬皮病的個(gè)體投與有效量的抗 CCL2抗體或其片段，使得目標(biāo)組織中硬皮病的至少一種癥狀或特征的強(qiáng)度、嚴(yán)重度或頻率 降低或具有延遲的發(fā)作。
[0018] 在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供抗CCL2抗體或其片段的用途，其用于制造如本文中 所述的供治療硬皮病用的藥物，其中抗CCL2抗體或其片段的特征在于結(jié)合親和力強(qiáng)于和/ 或大于KT12M(例如大于 0? 5XKT12M、1(T13M、0. 5XKT13M、1(T14M、0. 5XKT14M或I(T15M)。
[0019] 在一些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的抗CCL2抗體或其片段是選自由以下組成的群組： 完整IgG、F(ab'）2、F(ab) 2、Fab'、Fab、scFvs、雙功能抗體、三功能抗體和四功能抗體。
[0020] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是單克隆抗體，任選地，抗CCL2抗體或其 片段是人類化單克隆抗體，任選地，抗CCL2抗體或其片段是人類抗體。
[0021] 在另一方面中，本發(fā)明提供治療硬皮病的方法，其包含向罹患或易患硬皮病的個(gè) 體投與抗CCL2抗體或其片段，所述抗CCL2抗體或其片段的結(jié)合親和力強(qiáng)于和/或大于 KT12M(例如大于 0? 5XKT12M、1(T13M、0. 5XKT13M、1(T14M、0. 5XKT14M或I(T15M)。
[0022] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段以治療有效劑量和一定的投與時(shí)間間隔 投與，使得抗CCL2抗體或其片段分布到一或多種選自由以下組成的群組的目標(biāo)組織：皮 膚、血管、肺、心、腎、胃腸道（包括肝）、肌肉骨胳系統(tǒng)以及其組合。在一些實(shí)施例中，抗CCL2 抗體或其片段以治療有效劑量和一定的投與時(shí)間間隔投與，使得抗CCL2抗體或其片段分 布到肺和/或心。
[0023] 在一些實(shí)施例中，投與時(shí)間間隔是選自兩月一次、每月一次、三周一次、兩周一次、 每周一次、每天一次或可變的時(shí)間間隔。
[0024] 在另一方面中，本發(fā)明提供治療硬皮病的方法，其包含以治療有效劑量和一定的 投與時(shí)間間隔向罹患或易患硬皮病的個(gè)體投與抗CCL2抗體或其片段，使得抗CCL2抗體或 其片段分布到肺和/或心。在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段進(jìn)一步分布到皮膚、腎 和/或肝。
[0025] 在另一方面中，本發(fā)明提供如以上各種實(shí)施例中公開的方法，其中抗CCL2抗體或 其片段是選自由以下組成的群組：完整IgG、F(ab'）2、F(ab)2、Fab'、Fab、scFvs、雙功能抗 體、三功能抗體和四功能抗體。
[0026] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是單克隆抗體。在一些實(shí)施例中，抗CCL2 抗體或其片段是人類化單克隆抗體。在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是人類抗體。
[0027] 本發(fā)明尤其提供具有高親和力的抗CCL2抗體。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供抗 CCL2抗體或其片段，其結(jié)合親和力強(qiáng)于和/或大于KT12M(例如大于0. 5X1(T12M、10_13M、 0? 5X1(T13M、1(T14M、0. 5XKT14M或I(T15M)。
[0028] 在一些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的抗CCL2抗體或其片段是選自由以下組成的群組： 完整IgG、F(ab'）2、F(ab) 2、Fab'、Fab、scFvs、雙功能抗體、三功能抗體和四功能抗體。
[0029] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是單克隆抗體。
[0030] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是人類化單克隆抗體。
[0031] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是人類抗體。
[0032] 在另一方面中，本發(fā)明提供如本文中所述用于治療硬皮病的方法的抗CCL2抗 體或其片段，所述方法包含向受試者投與抗CCL2抗體或其片段的步驟，其中抗CCL2抗 體或其片段的特征在于結(jié)合親和力強(qiáng)于和/或大于KT12M(例如大于0. 5XKT12M、1(T13M、 0? 5X1(T13M、1(T14M、0. 5XKT14M或I(T15M)。
[0033] 在一些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的抗CCL2抗體或其片段是選自由以下組成的群組： 完整IgG、F(ab'）2、F(ab) 2、Fab'、Fab、scFvs、雙功能抗體、三功能抗體和四功能抗體。
[0034] 在一些實(shí)施例中，抗CCL2抗體或其片段是單克隆抗體，任選地，抗CCL2抗體或其 片段是人類化單克隆抗體，任選地，抗CCL2抗體或其片段是人類抗體。
[0035] 在另一方面中，本發(fā)明提供含有本文中所述的抗CCL2抗體的各種組合物和試劑 盒。
[0036] 本發(fā)明的其它特征、目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】、圖式和權(quán)利要求書顯 而易知。然而，應(yīng)理解，【具體實(shí)施方式】、圖式和權(quán)利要求書在指示本發(fā)明的實(shí)施例時(shí)僅以說 明方式給出且無限制性。在本發(fā)明的范圍內(nèi)的各種變化和修改對(duì)于所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將 變得顯而易見。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0037] 圖式是僅出于說明的目的而非限制。
[0038] 圖1示出了描繪經(jīng)修改的羅德南皮膚分?jǐn)?shù)的示例性圖式。指示了身體上評(píng)估皮膚 纖維化的位置。
[0039] 圖2描繪了繪制在平衡之后CCL2的血清和組織濃度的示例性圖式。
[0040] 圖3示出了描繪血漿和患病組織中CCL2靶向的示例性圖式。
[0041] 定義
[0042] 為了使本發(fā)明更易于理解，首先對(duì)某些術(shù)語進(jìn)行定義。以下術(shù)語和其它術(shù)語的其 它定義闡述在整個(gè)說明書中。
[0043] 親和力：如本領(lǐng)域中已知，"親和力"是具體配體結(jié)合于（例如非共價(jià)締合于）其 搭配物的緊密性和/或其從其搭配物解離的速率或頻率的量度。如本領(lǐng)域中已知，多種技 術(shù)中的任一者均可用于測(cè)定親和力。在許多實(shí)施例中，親和力代表特異性結(jié)合的量度。 [0044] 親和力成熟的（或親和力成熟的抗體）：如本文中所用，其是指在其一或多個(gè)CDR 中具有一或多個(gè)變化的抗體，所述一或多個(gè)變化引起抗體與不具有那些變化的親本抗體相 比對(duì)抗原的親和力提高。在一些實(shí)施例中，親和力成熟的抗體對(duì)目標(biāo)抗原將具有納摩爾 或甚至皮摩爾的親和力。親和力成熟的抗體可通過所屬領(lǐng)域中已知的多種程序中的任一 者產(chǎn)生。馬克斯（Marks)等人生物技術(shù)（BioTechnology) 10:779-783(1992)描述通SVh 和'域改組產(chǎn)生的親和力成熟。CDR和/或框架殘基的隨機(jī)誘變由以下各者描述：巴巴 斯（Barbas)等人美國國家科學(xué)院院刊（ProcNat.Acad.Sci,USA)91:3809-3813(1994); 希爾（Schier)等人基因（Gene) 169:147-155 (1995);耶爾頓（Yelton)等人免疫 學(xué)雜志（J.Immunol. ) 155:1994-2004(1995);杰克遜（Jackson)等人，免疫學(xué)雜 志154 (7) : 3310-9 (1995);以及霍金斯（Hawkins)等人，分子生物學(xué)雜志（J.Mol. Biol.)226:889-896(1992)。
[0045] 抗體：如本文中所用，術(shù)語"抗體"是指由一或多個(gè)實(shí)質(zhì)上由免疫球蛋白基因或免 疫球蛋白基因片段編碼的多肽組成的多肽。所識(shí)別的免疫球蛋白基因包括K、X、a、y、 S、e和y恒定區(qū)基因以及無數(shù)免疫球蛋白可變區(qū)基因。輕鏈通常歸類為K或X。重鏈 通常歸類為y、y、a、S或e，其又分別定義免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。 典型免疫球蛋白（抗體）結(jié)構(gòu)單元已知包含四聚體。每一四聚體由兩對(duì)相同的多肽鏈組成， 每一對(duì)具有一個(gè)"輕"鏈（約25kD)和一個(gè)"重"鏈（約50-70kD)。每一鏈的N端界定具有約 100到110個(gè)或更多個(gè)主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的氨基酸的可變區(qū)。術(shù)語"可變輕鏈"（VJ和"可 變重鏈"(VH)分別是指這些輕鏈和重鏈。抗體對(duì)具體抗原可具有特異性。抗體或其抗原可為 分析物或結(jié)合搭配物?？贵w作為完整免疫球蛋白或作為通過使用各種肽酶消化而產(chǎn)生的多 個(gè)明確表征的片段存在。因此，舉例來說，胃蛋白酶在鉸鏈區(qū)中的二硫鍵下方消化抗體以產(chǎn) 生F(ab) ' 2 (-種自身為由雙硫鍵連接到輕鏈的Fab的二聚體）?？稍跍睾蜅l件下 還原F(ab)'2以破壞鉸鏈區(qū)中的雙硫鍵聯(lián)進(jìn)而將（Fab'）2二聚體轉(zhuǎn)化成Fab'單體。Fab'單 體基本上是具有部分鉸鏈區(qū)的Fab(參見基礎(chǔ)免疫學(xué)（FundamentalImmunology)，W.E.保 羅（W.E.Paul)編，紐約的瑞文出版社（RavenPress，N.Y. )(1993)，關(guān)于其它抗體片段的 較詳細(xì)描述）。雖然各種抗體片段根據(jù)完整抗體的消化定義，但所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將理 解所述Fab'片段可以化學(xué)方式或使用重組DNA方法從頭合成。因此，如本文中所用的術(shù)語 "抗體"還包括通過修飾全抗體產(chǎn)生的抗體片段或通過使用重組DNA方法從頭合成的抗體 片段。在一些實(shí)施例中，抗體是單鏈抗體，如單鏈Fv(scFv)抗體，其中可變重鏈和可變輕鏈 (直接或通過肽連接子）連接在一起以形成連續(xù)多肽。單鏈Fv( "scFv"）多肽是共價(jià)連接 的VH: 雜二聚體，其可從包括直接連接或由肽編碼連接子連接的V#PVJl碼序列的核 酸表達(dá)。（參見例如休斯頓（Huston)等人（1988)美國國家科學(xué)院院刊，85:5879-5883,其 全部?jī)?nèi)容以引用的方式并入本文中。）多種結(jié)構(gòu)存在用于將來自抗體V區(qū)的天然聚集但化 學(xué)上間隔開的輕鏈和重鏈多肽鏈轉(zhuǎn)化成scFv分子，所述scFv分子將折疊成實(shí)質(zhì)上類似于 抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)構(gòu)的三維結(jié)構(gòu)。參見例如美國專利第5, 091，513號(hào)和第5, 132, 405號(hào)和第 4, 956, 778 號(hào)。
[0046] 大約：如本文中所用，術(shù)語"大約"或"約"在應(yīng)用于所關(guān)注的一或多個(gè)值時(shí)是指與 所述參考值類似的值。在某些實(shí)施例中，除非另行說明或另外從上下文顯而易見，否則術(shù) 語"大約"或"約"是指落入所述參考值的任一方向（大于或小于）25%、20%、19%、18%、 17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或 更低內(nèi)的一系列值（除了其中所述數(shù)目將超過100%的可能值）。
[0047] 結(jié)合劑：如本文中所用，術(shù)語"結(jié)合劑"包括結(jié)合抗原或目標(biāo)蛋白或肽的任何天然 存在、合成或基因工程改造的藥劑，如蛋白質(zhì)。"結(jié)合劑"也稱為"結(jié)合蛋白"。結(jié)合劑可來 源于天然存在的抗體或以合成方式經(jīng)工程改造。結(jié)合蛋白或結(jié)合劑可類似于抗體通過結(jié)合 于特定抗原以形成復(fù)合物并引發(fā)生物反應(yīng)（例如激動(dòng)或拮抗具體生物活性）來起作用。結(jié) 合劑或結(jié)合蛋白可包括經(jīng)分離片段、由抗體的重鏈和輕鏈的可變區(qū)組成的"Fv"片段、其中 輕鏈和重鏈可變區(qū)由肽連接子連接的重組單鏈多肽分子（"scFv蛋白"）和由模擬高變區(qū) 的氨基酸殘基組成的最小識(shí)別單位。如本文中所用的術(shù)語結(jié)合劑還可包括通過修飾全抗 體產(chǎn)生的抗體片段或通過使用重組DNA方法從頭合成的抗體片段。在一些實(shí)施例中，抗體 是單鏈抗體，如單鏈Fv(scFv)抗體，其中可變重鏈和可變輕鏈（直接或通過肽連接子）連 接在一起以形成連續(xù)多肽。單鏈Fv( "scFv"）多肽是共價(jià)連接的VH: =Vlj雜二聚體，其可從 包括直接連接或由肽編碼連接子連接的VjPVJl碼序列的核酸表達(dá)。（參見例如休斯頓 (Huston)等人（1988)美國國家科學(xué)院院刊，85:5879-5883,其全部?jī)?nèi)容以引用的方式并入 本文中。）多種結(jié)構(gòu)存在用于將來自抗體V區(qū)的天然聚集但化學(xué)上間隔開的輕鏈和重鏈多 肽鏈轉(zhuǎn)化成scFv分子，所述scFv分子將折疊成實(shí)質(zhì)上類似于抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)構(gòu)的三維結(jié) 構(gòu)。參見例如美國專利第5, 091，513號(hào)和第5, 132, 405號(hào)和第4, 956, 778號(hào)。在一些實(shí)施 例中，如本文中所用的術(shù)語結(jié)合劑還可包括抗體。參見抗體的定義。
[0048] CDR:如本文中所用，其是指抗體可變區(qū)內(nèi)的互補(bǔ)決定區(qū)。在重鏈和輕鏈的每一可 變區(qū)中有三個(gè)⑶R，對(duì)于每一可變區(qū)，其被指定為⑶R1、⑶R2和⑶R3。"⑶R的組"或"⑶R 組"是指在能夠結(jié)合抗原的單一可變區(qū)中存在的三個(gè)或六個(gè)CDR群組或能夠結(jié)合抗原的同 源重鏈和輕鏈可變區(qū)的CDR。CDR的界限已取決于系統(tǒng)以不同方式定義，在所述系統(tǒng)中數(shù)種 是所屬領(lǐng)域中已知的（例如卡巴特（Kabat)、科西亞（Chothia)等）。
[0049] 化合物和藥劑：術(shù)語"化合物"和"藥劑"在本文中可互換使用。其是指任何天然 存在或非天然存在（即合成或重組）的分子，如生物大分子（例如核酸、多肽或蛋白質(zhì)）、有 機(jī)或無機(jī)分子、或由生物物質(zhì)（如細(xì)菌、植物、真菌或動(dòng)物（尤其是哺乳動(dòng)物，包括人類）細(xì) 胞或組織）制成的提取物?；衔锟蔀閱我环肿踊蛑辽賰煞N分子的混合物或復(fù)合物。
[0050] 對(duì)照：如本文中所用，術(shù)語"對(duì)照"具有其作為結(jié)果與之相比的標(biāo)準(zhǔn)的本領(lǐng)域理解 的含義。通常，對(duì)照用于通過隔離變量以便得出關(guān)于所述變量的結(jié)論來加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的完整性。 在一些實(shí)施例中，對(duì)照是與測(cè)試反應(yīng)或分析同時(shí)執(zhí)行以提供比較物的反應(yīng)或分析。在一個(gè) 實(shí)驗(yàn)中，施用"測(cè)試"（即，所測(cè)試的變量）。在第二實(shí)驗(yàn)中，"對(duì)照"，不施用所測(cè)試的變量。 在一些實(shí)施例中，對(duì)照是歷史對(duì)照（即先前執(zhí)行的測(cè)試或分析，或先前已知的量或結(jié)果）。 在一些實(shí)施例中，對(duì)照是或包含印刷或以其它方式保存的記錄。對(duì)照可為陽性對(duì)照或陰性 對(duì)照。
[0051] 給藥方案："給藥方案"（或"治療方案"）在所述術(shù)語在本文中使用時(shí)是通常間隔 開時(shí)間段向受試者個(gè)別投與的一組單位劑量（通常是一個(gè)以上）。在一些實(shí)施例中，給定治 療劑具有推薦的給藥方案，其可能涉及一或多個(gè)劑量。在一些實(shí)施例中，給藥方案包含多個(gè) 劑量，其中的每一者彼此間隔開相同長(zhǎng)度的時(shí)間段；在一些實(shí)施例中，給藥方案包含多個(gè)劑 量以及間隔開個(gè)別劑量的至少兩個(gè)不同時(shí)間段。
[0052] 診斷：如本文中所用，術(shù)語"診斷"是指旨在判定個(gè)體是否罹患疾病（disease或 ailment)的過程。在本發(fā)明的情形下，"硬皮病的診斷"是指旨在以下各項(xiàng)中的一者或多者 的過程：判定個(gè)體是否罹患硬皮病，鑒別硬皮病亞型（即彌漫性或局限性皮膚硬皮病）以及 確定疾病的嚴(yán)重度。
[0053] 有效量：如本文中所用，術(shù)語"有效量"是指足以滿足預(yù)期目的的化合物或藥劑的 量。在本發(fā)明的情形下，目的可為例如：調(diào)節(jié)硬皮病的病因或癥狀；和/或延緩或預(yù)防硬皮 病的發(fā)作；和/或減緩或終止硬皮病癥狀的進(jìn)展、加重或惡化；和/或緩解與硬皮病有關(guān)的 一或多個(gè)癥狀；和/或?yàn)橛财げ“Y狀帶來改善，和/或治愈硬皮病。
[0054] 框架或框架區(qū)：如本文中所用，其是指減去CDR的可變區(qū)的序列。因?yàn)镃DR序列 可通過不同系統(tǒng)測(cè)定，所以同樣地框架序列經(jīng)歷相對(duì)應(yīng)地不同解讀。六個(gè)CDR將重鏈和輕 鏈上的框架區(qū)劃分成各鏈上的四個(gè)子區(qū)（FR1、FR2、FR3和FR4)，其中CDRl位于FRl與FR2 之間，⑶R2位于FR2與FR3之間，并且⑶R3位于FR3與FR4之間。在不將具體子區(qū)指定為 FRl、FR2、FR3或FR4的情況下，如通過其它提及的框架區(qū)代表單個(gè)天然存在免疫球蛋白鏈 的可變區(qū)內(nèi)的組合的FR。如本文中所用，F(xiàn)R代表四個(gè)子區(qū)中的一者，F(xiàn)Rl例如代表最接近 于可變區(qū)的氨基末端并且相對(duì)于CDRl的5'的第一框架區(qū)，并且FRs代表構(gòu)成框架區(qū)的子 區(qū)中的兩者或更多者。
[0055] 人類抗體：如本文中所用，其打算包括具有從人類免疫球蛋白序列生成（或裝配） 的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。在一些實(shí)施例中，抗體（或抗體組分）可視為"人類"，盡管其 氨基酸序列例如在一或多個(gè)CDR并且尤其是CDR3中包括不由人類生殖系免疫球蛋白序列 (例如包括序列變異體，例如可能（原先）已通過體外隨機(jī)或定點(diǎn)誘變或通過體內(nèi)體細(xì)胞突 變引入的序列變異體）編碼的殘基或元件。
[0056] 人類化：如本領(lǐng)域中已知，術(shù)語"人類化"常用于指氨基酸序列包括來自在非人類 物種（例如小鼠）中產(chǎn)生的參考抗體的VjPVl區(qū)序列而且在那些序列中包括打算使其更 "人類樣"（即，與人類生殖系可變序列更類似）的相對(duì)于參考抗體的修飾的抗體（或抗體組 分）。在一些實(shí)施例中，"人類化"抗體（或抗體組分）是免疫特異性地結(jié)合到所關(guān)注抗原 的抗體，并且其具有具備實(shí)質(zhì)上如人類抗體的氨基酸序列般的氨基酸序列的框架（FR)區(qū) 以及具備實(shí)質(zhì)上如非人類抗體的氨基酸序列般的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)。人類化 抗體包含實(shí)質(zhì)上所有的至少一個(gè)并且通常是兩個(gè)可變域（Fab、Fab' 4(&13'）2、？&13(：、？0，其 中所有或?qū)嵸|(zhì)上所有的CDR區(qū)對(duì)應(yīng)于非人類免疫球蛋白（即供體免疫球蛋白）的CDR區(qū)， 并且所有或?qū)嵸|(zhì)上所有框架區(qū)是人類免疫球蛋白共同序列的框架區(qū)。在一些實(shí)施例中，人 類化抗體還包含免疫球蛋白恒定區(qū)（Fe)的至少一部分，通常是人類免疫球蛋白恒定區(qū)的 至少一部分。在一些實(shí)施例中，人類化抗體含有輕鏈以及至少重鏈可變域兩者?？贵w還可 包括重鏈恒定區(qū)的CH1、鉸鏈、CH2、CH3以及任選地CH4區(qū)。在一些實(shí)施例中，人類化抗體僅含 有人類化'區(qū)。在一些實(shí)施例中，人類化抗體僅含有人類化VHg。在一些某些實(shí)施例中， 人類化抗體含有人類化％和Vl區(qū)。
[0057] 提高、增大或減?。喝绫疚闹兴?，術(shù)語"提高"、"增大"或"減小"或語法上的等效 說法指示相對(duì)于基線測(cè)量值的值，所述基線測(cè)量值如在相同個(gè)體中在開始本文中所述的治 療之前的測(cè)量值或在一個(gè)對(duì)照個(gè)體（或多個(gè)對(duì)照個(gè)體）中在不存在本文中所述的治療的情 況下的測(cè)量值。"對(duì)照個(gè)體"是與所治療的個(gè)體罹患相同類型和大致相同嚴(yán)重度的硬皮病的 個(gè)體，其與所治療的個(gè)體年齡大致相同（從而確保所治療的個(gè)體與對(duì)照個(gè)體的疾病階段是 可比的）。
[0058] 試劑盒：如本文中所用，術(shù)語"試劑盒"是指用于傳遞物質(zhì)的任何傳遞系統(tǒng)。所述 傳遞系統(tǒng)可包括允許從一個(gè)地點(diǎn)到另一個(gè)地點(diǎn)儲(chǔ)存、運(yùn)輸或傳遞各種診斷性或治療性試劑 (例如在適當(dāng)容器中的寡核苷酸、酶等）和/或支持物質(zhì)（例如緩沖液，用于執(zhí)行分析的書 面說明書等）的系統(tǒng)。舉例來說，試劑盒包括一或多個(gè)含有相關(guān)反應(yīng)試劑和/或支持物質(zhì) 的外殼（例如盒子）。術(shù)語"分部式試劑盒"是指包含兩個(gè)或更多個(gè)分開的容器的傳遞系 統(tǒng)，所述容器各自含有全部試劑盒組分的亞部分?？梢黄鸹蚍珠_地將所述容器傳遞給預(yù)期 的接受者。舉例來說，第一個(gè)容器可含有用于分析的酶，而第二個(gè)容器含有寡核苷酸。術(shù) 語"分部式試劑盒"打算涵蓋含有在聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案（FederalFood，Drug，and CosmeticAct)的條款520(e)的管制之下的分析物特異性試劑（AnalyteSpecific Reagents，ASR's)的試劑盒，但并不局限于此。事實(shí)上，在術(shù)語"分部式試劑盒"中包括任何 包含兩個(gè)或更多個(gè)分開的容器的傳遞系統(tǒng)，所述容器各自含有全部試劑盒組分的亞部分。 相反地，"組合式試劑盒"是指在單個(gè)容器中（例如在容納每一所需組分的單個(gè)盒子中）含 有所有組分的傳遞系統(tǒng)。術(shù)語"試劑盒"包括分部式和組合式試劑盒兩者。
[0059] 正常：如本文中所用，術(shù)語"正常"在用于修飾術(shù)語"個(gè)體"或"受試者"時(shí)是指并 未患有具體疾病或病況并且也不是所述疾病或病況的攜帶者的個(gè)體或個(gè)體群組。術(shù)語"正 常"在本文中也用于形容從正?；蛞吧蛡€(gè)體或受試者中分離的生物樣本或樣品，例如"正 常生物樣品"。
[0060] 核酸：如本文中所用的術(shù)語"核酸"是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸以及其片段 或部分，并且是指可為單鏈或雙鏈的基因組或合成起點(diǎn)的DNA或RNA，并且代表正義或反義 鏈。
[0061] 核酸分子：術(shù)語"核酸分子"和"多核苷酸"在本文中可互換使用。其是指呈單鏈 或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并且除非另行說明，否則其涵蓋可以 與天然存在的核苷酸類似的方式起作用的已知的天然核苷酸類似物。所述術(shù)語涵蓋具有合 成主鏈的核酸樣結(jié)構(gòu)以及擴(kuò)增產(chǎn)物。
[0062] 蛋白質(zhì)：一般來說，"蛋白質(zhì)"是多肽（即，由肽鍵彼此連接的至少兩個(gè)氨基酸的 串）。蛋白質(zhì)可包括除氨基酸之外的部分（例如可為糖蛋白）和/或可以其它方式加工或 修飾。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解"蛋白質(zhì)"可為如由細(xì)胞產(chǎn)生的完整多肽鏈（具有或不 具有信號(hào)序列），或可為其功能性部分。一般技術(shù)者將進(jìn)一步理解蛋白質(zhì)有時(shí)可包括例如由 一或多個(gè)二硫鍵連接或通過其它方式締合的一個(gè)以上多肽鏈。
[0063] 樣品：如本文中所用，術(shù)語"樣品"涵蓋從生物來源獲得的任何樣品。術(shù)語"生物樣 品"和"樣品"可互換使用。生物樣品可（借助于非限制性實(shí)例）包括皮膚組織、肝組織、腎 組織、肺組織、腦脊髓液、（CSF)、血液、羊水、血清、尿液、糞便、表皮樣品、皮膚樣品、頰部抹 拭、精子、羊膜液、經(jīng)培養(yǎng)細(xì)胞、骨髓樣品和/或絨毛膜絨毛。任何生物樣品的細(xì)胞培養(yǎng)物也 可用作生物樣品。生物樣品還可為例如從任何器官或組織獲得的樣品（包括活檢或尸檢樣 本），可包含細(xì)胞（不論是原代細(xì)胞還是經(jīng)培養(yǎng)細(xì)胞）、由任何細(xì)胞、組織或器官調(diào)節(jié)的培養(yǎng) 基、組織培養(yǎng)物。在一些實(shí)施例中，適于本發(fā)明的生物樣品是已經(jīng)加工從而釋放或以其它方 式使核酸可供用于如本文中所述的檢測(cè)的樣品。也可使用固定或冷凍組織。
[0064] 受試者：如本文中所用，術(shù)語"受試者"是指人類或任何非人類動(dòng)物（例如小鼠、大 鼠、兔、狗、貓、牛、豬、綿羊、馬或靈長(zhǎng)類動(dòng)物）。人類包括出生前和出生后形式。在許多實(shí)施 例中，受試者是人類。受試者可為患者，其是指呈現(xiàn)給醫(yī)療服務(wù)提供者以便診斷或治療疾病 的人類。術(shù)語"受試者"在本文中與"個(gè)體"或"患者"可互換使用。受試者可罹患或易患疾 病或病癥但可能呈現(xiàn)或可能不呈現(xiàn)所述疾病或病癥的癥狀。
[0065] 罹患："罹患"疾病、病癥和/或病況（例如硬皮病）的個(gè)體已診斷有所述疾病、病 癥和/或病況或展示所述疾病、病癥和/或病況的一或多種癥狀。
[0066] 易患："易患"疾病、病癥和/或病況的個(gè)體尚未診斷有所述疾病、病癥和/或病況 和/或可能不展現(xiàn)所述疾病、病癥和/或病況的癥狀。在一些實(shí)施例中，易患疾病、病癥和/ 或病況（例如硬皮?。┑膫€(gè)體的特征可在于以下中的一或多者：（1)與所述疾病、病癥和/ 或病況發(fā)展有關(guān)的基因突變；（2)與所述疾病、病癥和/或病況發(fā)展有關(guān)的基因多態(tài)性；（3) 增加和/或減少與所述疾病、病癥和/或病況有關(guān)的蛋白的表達(dá)和/或活性；(4)與所述疾 病、病癥和/或病況發(fā)展有關(guān)的習(xí)慣和/或生活方式；（5)所述疾病、病癥和/或病況的家 族病史；(6)對(duì)某些細(xì)菌或病毒的反應(yīng)；（7)暴露于某些化學(xué)物質(zhì)。在一些實(shí)施例中，易患疾 病、病癥和/或病況的個(gè)體將發(fā)展所述疾病、病癥和/或病況。在一些實(shí)施例中，易患疾病、 病癥和/或病況的個(gè)體將不發(fā)展所述疾病、病癥和/或病況。
[0067] 治療：如本文中所用，術(shù)語"治療（treatment)"（還有"治療（treat)"或"治療 (treating)"）是指治療性蛋白的任何投與（例如抗CCL2單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段的 投與）部分或完全地將具體疾病、病癥和/或病況（例如硬皮病、纖維化或炎癥）的一或多 種癥狀或特征緩解、改善、減輕、抑制、延緩發(fā)作、降低嚴(yán)重度和/或降低發(fā)病率。所述治療 可為對(duì)并未展現(xiàn)相關(guān)疾病、病癥和/或病況的征象的受試者的治療和/或?qū)H展現(xiàn)疾病、病 癥和/或病況的早期征象的受試者的治療?？商娲鼗蛄硗猓鲋委熆蔀閷?duì)展現(xiàn)相關(guān)疾 病、病癥和/或病況的一或多種確立征象的受試者的治療。

【具體實(shí)施方式】
[0068] 本發(fā)明尤其提供特征在于高親和力、效力、組織選擇性和/或表位特異性的經(jīng)改 良抗CCL2抗體，和其尤其用于治療硬皮病和相關(guān)纖維化和/或發(fā)炎性疾病、病癥和病況的 用途。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供基于親和力為KT12M或更大的抗CCL2抗體治療硬皮病 和相關(guān)纖維化和/或發(fā)炎性疾病、病癥和病況的方法和組合物。
[0069] 本發(fā)明在某種程度上基于由本發(fā)明人觀察到的獨(dú)到見解，S卩，高親和力抗CCL2 抗體尤其在以高劑量投與時(shí)允許不管血漿中的高水平CCL2而有效抑制受影響組織中的 CCL2。本發(fā)明的實(shí)施例包括親和力為KT12M或更大的抗CCL2抗體。所述高親和力的抗體 是尤其有利的。由于硬皮病患者血漿中CCL2的循環(huán)水平較高，故所投與的任何抗CCL2抗 體的較大部分很可能被循環(huán)CCL2所螯合。在不希望受理論束縛的情況下，高親和力抗CCL2 抗體除了中和循環(huán)CCL2之外還可有效中和受影響組織中的CCL2,這部分歸因于其有效地 競(jìng)爭(zhēng)離開受體CCR2 (其對(duì)CCL2的結(jié)合親和力為60pM)的能力。因此，高親和力抗CCL2抗 體（例如結(jié)合親和力強(qiáng)于60pM的抗CCL2抗體）可有效螯合患病組織中的CCL2,防止CCL2 與其受體CCR2之間的結(jié)合。因此，患病組織中可能需要較少量的高親和力抗CCL2抗體來 實(shí)現(xiàn)所需治療作用。
[0070] 本發(fā)明的各種方面詳細(xì)地描述于以下章節(jié)中。章節(jié)的使用不意欲限制本發(fā)明。每 一章節(jié)可應(yīng)用于本發(fā)明的任何方面。在本申請(qǐng)案中，除非另外說明，否則"或"的使用意指 "和/或"。
[0071] 硬皮病
[0072] 硬皮病或全身性硬化癥通常被視為慢性全身性自身免疫疾病，其特征尤其在于纖 維化或硬化、血管變化和自身抗體。在不希望受理論束縛的情況下，據(jù)認(rèn)為硬皮病是由強(qiáng)化 擴(kuò)增環(huán)中截留的活動(dòng)過度的自身免疫反應(yīng)引起的。舉例來說，硬皮病的組織學(xué)特征在于單 核細(xì)胞的炎性浸潤(rùn)，其又活化周圍成纖維細(xì)胞中的膠原蛋白合成并與膠原蛋白合成增加有 關(guān)。具體來說，活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TGF-0和TOGF，其活化受影響區(qū)域中的成纖維細(xì)胞以 產(chǎn)生較高量的膠原蛋白。
[0073] T細(xì)胞似乎也通過活化巨噬細(xì)胞和炎性前纖維發(fā)生細(xì)胞因子的直接釋放而在疾病 過程中起一定作用。除了膠原蛋白之外，活化的成纖維細(xì)胞似乎分泌會(huì)將其它炎性細(xì)胞募 集到受影響區(qū)域的因子，所述炎性細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，所述細(xì)胞因子進(jìn)一步募集細(xì)胞因子 釋放炎性細(xì)胞，由此引起未經(jīng)調(diào)節(jié)的炎癥和組織纖維化。
[0074] 通常，單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞在硬皮病患者的循環(huán)和組織中的數(shù)目和活化 均增加。組織積聚既是微血管損傷的原因也是其作用，微血管損傷是硬皮病發(fā)病機(jī)制中的 早期事件之一。微血管損傷的特征在于內(nèi)皮細(xì)胞損傷、基底膜層增生、外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞在 血管壁中的偶發(fā)性滯留以及初始血管周圍單核細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著發(fā)炎級(jí)聯(lián)反應(yīng)惡化，纖維化、 內(nèi)臟器官架構(gòu)紊亂、血管稀疏以及因此產(chǎn)生的缺氧占主導(dǎo)地位。所有這些因素和單核細(xì)胞 的持續(xù)募集促成纖維化的維持。
[0075] 在一些實(shí)施例中，硬皮病也被視為結(jié)締組織疾病，其特征通常在于胞外基質(zhì)蛋白 在皮膚和內(nèi)臟中的過度積聚、血管損傷以及免疫異常。
[0076] 所述疾病的許多臨床表現(xiàn)被認(rèn)為涉及血管重構(gòu)的誤調(diào)節(jié)。硬皮病的最早癥狀之一 是微血管損傷。這種微血管損傷被認(rèn)為引起內(nèi)皮細(xì)胞活化增加。認(rèn)為活化的內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)表 達(dá)粘附分子，引起毛細(xì)管滲透性改變，允許炎性細(xì)胞通過內(nèi)皮迀移并滯留在血管壁中。免疫 活化被認(rèn)為促進(jìn)內(nèi)皮活化維持，這引起內(nèi)皮細(xì)胞的分解。認(rèn)為這一過程會(huì)促進(jìn)在硬皮病患 者中通常觀察到的血管彈性損失和變窄。此外，認(rèn)為微血管損傷促成單核細(xì)胞在真皮中的 血管周圍浸潤(rùn)，這被認(rèn)為會(huì)促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化和許多硬皮病的相關(guān)標(biāo)志性癥狀。隨著纖 維化增加，滲透性降低。因此，抗體滲透患病組織變得更困難。因此，抗CCL2抗體的親和力 對(duì)于保持抗體局部化來說變得尤其重要。
[0077] 所述疾病的許多臨床表現(xiàn)被大體上認(rèn)為涉及成纖維細(xì)胞的誤調(diào)節(jié)。成纖維細(xì)胞的 主要功能是通過連續(xù)分泌胞外基質(zhì)前體來維持結(jié)締組織的結(jié)構(gòu)完整性。成纖維細(xì)胞為許多 組織提供結(jié)構(gòu)框架（基質(zhì)），在創(chuàng)傷愈合中起到重要作用并且是動(dòng)物中最常見的結(jié)締組織 細(xì)胞。成纖維細(xì)胞在形態(tài)上是異質(zhì)的，取決于其位置和活性具有多樣的外觀。
[0078] 硬皮病有兩種主要形式：局限性全身性硬化癥/硬皮病和彌漫性全身性硬化癥/ 硬皮病。在局限性皮膚硬皮病中，皮膚的纖維化大體上限制于接近肘部的區(qū)域。局限性皮 膚硬皮病患者通常經(jīng)歷血管損害。皮膚和器官纖維化在局限性硬皮病患者中通常進(jìn)展緩 慢。彌漫性硬皮病患者通常經(jīng)歷與在局限性硬皮病中相比進(jìn)展更快速的皮膚和器官的纖維 化和/或廣泛的炎癥和/或與在局限性硬皮病中可見相比更嚴(yán)重的內(nèi)部器官涉及。
[0079] 通常認(rèn)為間質(zhì)肺疾?。ㄆ湟鸱卫w維化）是硬皮病相關(guān)死亡的主要原因（盧德維 卡-布拉德萊A. (Ludwicka-Bradley，A.)等人硬皮病間質(zhì)肺疾病中的凝血和自身免疫性 (Coagulationandautoimmunityinsclerodermainterstitiallungdisease)?關(guān)節(jié)炎 與風(fēng)濕病論文集（SeminArthritisRheum) ,41 (2) ,212-22, 2011)。引起硬皮病相關(guān)死亡的 其它并發(fā)癥包括（但不限于）癌癥、心力衰竭、肺高血壓、腎衰竭和吸收障礙或其任何組合。
[0080] 硬皮病最常通過檢查皮膚癥狀來診斷。診斷的測(cè)試包括（但不限于）目視和/或 手動(dòng)檢查皮膚、血壓測(cè)試、胸X射線、肺CT、超聲心動(dòng)圖、尿分析、皮膚活檢和血液測(cè)試（包括 抗核抗體測(cè)試、抗拓?fù)洚悩?gòu)酶抗體測(cè)試、抗著絲?？贵w測(cè)試、抗U3抗體測(cè)試、抗RNA抗體測(cè) 試、其它類型的抗體測(cè)試、紅細(xì)胞沉降速率以及類風(fēng)濕因子）。
[0081] 抗CCL2 抗體
[0082] 本發(fā)明提供基于投與抗CCL2抗體（具體來說是高親和力抗CCL2抗體）來治療硬 皮病和相關(guān)纖維化和/或發(fā)炎性疾病、病癥和病況的方法和組合物。
[0083] CCL2
[0084] CCL2是由多種細(xì)胞類型產(chǎn)生的趨化因子。其也稱為單核趨化蛋白-I(MCP-I)。 已知CCL2是免疫系統(tǒng)許多細(xì)胞類型的強(qiáng)力引誘劑，包括（但不限于）單核細(xì)胞、CD4和 ⑶8記憶T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞（卡魯利M. (Carulli，M.)等人CCL2血清水平可在全身性 硬化癥中用于風(fēng)險(xiǎn)分層或監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)嗎？（CanCCL2serumlevelsbeusedinrisk stratificationortomonitortreatmentresponseinsystemicsclerosis?)風(fēng)濕 病年鑒（AnnRheumDis)，67, 105-109, 2008，山本T. (Yamamoto,T.)硬皮病-病理生理學(xué) (Scleroderma-Pathophysiology) ?歐洲皮膚病學(xué)雜志（EurJDermatol) ,19 (I) ,14-24)。 CCL2已展示出促進(jìn)白細(xì)胞跨內(nèi)皮單層迀移，表明在促進(jìn)單核細(xì)胞的血管周圍浸潤(rùn)中的作用 (同上）。CCL2也已展示出在體外大鼠成纖維細(xì)胞中促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化并上調(diào)I型膠原 蛋白mRNA表達(dá)。在硬皮病患者以及硬皮病動(dòng)物模型中已展示出CCL2水平升高（同上）。 確切地說，在硬皮病皮膚中已展示CCL2表達(dá)水平增加，并且在硬皮病成纖維細(xì)胞中已展示 CCL2RNA和蛋白質(zhì)增加（同上）。
[0085] 人類CCL2是含有76個(gè)氨基酸殘基的8. 6kDa蛋白，其氨基酸序列展示在表1中。 其由多種細(xì)胞類型（尤其包括單核細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、某些上皮細(xì)胞）表達(dá) 并且結(jié)合其受體CCR2。CCL2屬于CC趨化因子家族，其含有鄰近的兩個(gè)半胱氨酸殘基（鄰 近半胱氨酸殘基在表1中帶下劃線）。
[0086] 表 1
[0087]

【權(quán)利要求】
1. 一種治療硬皮病的方法，其包含 向罹患或易患硬皮病的個(gè)體投與有效量的抗CCL2抗體或其片段，使得目標(biāo)組織中硬 皮病的至少一種癥狀或特征的強(qiáng)度、嚴(yán)重度或頻率降低或具有延遲的發(fā)作。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述硬皮病的至少一種癥狀或特征是選自內(nèi)皮細(xì) 胞損傷、基底膜層增生、血管周圍單核細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化、內(nèi)臟器官架構(gòu)紊亂、血管稀疏、缺 氧以及其組合。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述目標(biāo)組織是選自由以下組成的群組：皮 膚、血管、肺、心、腎、胃腸道（包括肝）、肌肉骨胳系統(tǒng)以及其組合。
4. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述目標(biāo)組織是肺。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述目標(biāo)組織是心。
6. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述個(gè)體罹患或易患局限性皮 膚硬皮病。
7. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述個(gè)體罹患或易患彌漫性皮 膚硬皮病。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段是 腸胃外投與的。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述腸胃外投與是選自靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、吸入、經(jīng)皮 (表面）、皮下和/或經(jīng)粘膜投與。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述腸胃外投與是靜脈內(nèi)投與。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段 是口服投與的。
12. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段 是兩月一次、每月一次、三周一次、兩周一次、每周一次、每天一次或以可變的時(shí)間間隔投與 的。
13. -種治療硬皮病的方法，其包含 向罹患或易患硬皮病的個(gè)體投與結(jié)合親和力大于1(T12M的抗CCL2抗體或其片段。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段以治療有效劑量和一 定的投與時(shí)間間隔投與，使得所述抗CCL2抗體或其片段分布到一或多種選自由以下組成 的群組的目標(biāo)組織：皮膚、血管、肺、心、腎、胃腸道（包括肝）、肌肉骨胳系統(tǒng)以及其組合。
15. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段以治療有效劑量和一 定的投與時(shí)間間隔投與，使得所述抗CCL2抗體或其片段分布到肺和/或心。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述投與時(shí)間間隔是選自兩月一次、每月一次、 三周一次、兩周一次、每周一次、每天一次或可變的時(shí)間間隔。
17. -種治療硬皮病的方法，其包含 以治療有效劑量和一定的投與時(shí)間間隔向罹患或易患硬皮病的個(gè)體投與抗CCL2抗體 或其片段，使得所述抗CCL2抗體或其片段分布到肺和/或心。
18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段進(jìn)一步分布到皮膚、 腎和/或肝。
19. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段是 選自由以下組成的群組：完整IgG、F(ab'）2、F(ab)2、Fab'、Fab、scFvs、雙功能抗體、三功能 抗體和四功能抗體。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段是單克隆抗體。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段是人類化單克隆抗 體。
22. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗CCL2抗體或其片段是人類抗體。
23. -種抗CCL2抗體或其片段，其具有大于10 _12M的結(jié)合親和力。
24. 根據(jù)權(quán)利要求23所述的抗CCL2抗體，其中所述抗CCL2抗體或其片段具有大于 1(T13M的結(jié)合親和力。
25. 根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的抗CCL2抗體，其中所述抗CCL2抗體或其片段是選自 由以下組成的群組：完整IgG、F(ab'）2、F(ab)2、Fab'、Fab、scFvs、雙功能抗體、三功能抗體 和四功能抗體。
26. 根據(jù)權(quán)利要求23到25中任一權(quán)利要求所述的抗CCL2抗體，其中所述抗CCL2抗體 或其片段是單克隆抗體。
27. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的抗CCL2抗體，其中所述抗CCL2抗體或其片段是人類化單 克隆抗體。
28. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的抗CCL2抗體，其中所述抗CCL2抗體或其片段是人類抗體。
29. -種試劑盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求23到28中任一權(quán)利要求所述的抗CCL2抗體或 其片段。
【文檔編號(hào)】A61K39/395GK104487091SQ201380038785
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2013年5月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月22日
【發(fā)明者】P·G·V·馬丁尼, M·納塔拉詹, P·A·J·哈斯利特, A·B·西摩 申請(qǐng)人:夏爾人類遺傳性治療公司