經(jīng)由不含銅的環(huán)加成的基于peg的水凝膠的應(yīng)變促進(jìn)的交聯(lián)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇和多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的應(yīng)變促進(jìn)的反應(yīng)產(chǎn)物的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠以及用于制備其的方法。因?yàn)榭商幚硭銮绑w物質(zhì)而不會(huì)引起交聯(lián)，條件是不會(huì)達(dá)到所述應(yīng)變閾值，這些水凝膠允許交聯(lián)發(fā)生時(shí)(處)的機(jī)械控制并且比先前的應(yīng)變-激活或溫度-激活系統(tǒng)更易于使用。這些新型水凝膠不需要催化劑進(jìn)行交聯(lián)，從而避免許多催化劑常見(jiàn)的所述生物相容性問(wèn)題。所述交聯(lián)過(guò)程也不受是否存在催化劑或其它物質(zhì)的影響，其已經(jīng)在已知的應(yīng)變誘導(dǎo)水凝膠中干擾交聯(lián)。由于其交聯(lián)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，這些新型水凝膠可包封并輸送高度敏感的細(xì)胞和其它生物添加劑且不含已知的毒性副產(chǎn)物。
【專利說(shuō)明】經(jīng)由不含銅的環(huán)加成的基于PEG的水凝膠的應(yīng)變促進(jìn)的交 聯(lián)
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2012年7月3日提交的標(biāo)題為"Strain-PromotedCrosslinkingof PEG-basedHydrogelsviaCopper-FreeCycloaddition" 的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào) 61/677, 683的權(quán)益，并且通過(guò)引用整體并入。
[0003] 政府支持的參考
[0004] 本發(fā)明至少部分在美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研宄院授權(quán)號(hào)MLB，P41EB0063536的支持下研 發(fā)。政府可以對(duì)本發(fā)明具有某些權(quán)利。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005] 本發(fā)明在應(yīng)變促進(jìn)的、共價(jià)交聯(lián)的水凝膠的領(lǐng)域內(nèi)并且涉及包含8-元環(huán)炔官能 化聚亞燒基二醇和多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物（glycerolexytholatetriazide)的 應(yīng)變促進(jìn)的反應(yīng)產(chǎn)物的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠以及用于其制備的方法。

【背景技術(shù)】
[0006] 聚合物水凝膠為本領(lǐng)域熟知的并且可被定義為由聚合物鏈的三維網(wǎng)絡(luò)和填充大 分子之間的空間的水組成的雙組分或多組分系統(tǒng)。水凝膠為不溶于水的聚合物鏈的網(wǎng)絡(luò)， 有時(shí)以膠態(tài)凝膠被發(fā)現(xiàn)，其中水在分散介質(zhì)中。水凝膠為具有超強(qiáng)吸收能力的（它們可含 有超過(guò)99%的水）天然或合成聚合物。由于其顯著的水含量，水凝膠還具有與天然組織非 常相似的柔韌度。
[0007] 水凝膠通常用于軟性隱形眼鏡、傷口敷料、藥物遞送系統(tǒng)、超強(qiáng)吸收劑、許多醫(yī)學(xué) 和再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用。取決于使用的聚合物（多個(gè)聚合物）的性質(zhì)，以及網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的性質(zhì)和密 度，平衡中的此類結(jié)構(gòu)可含有各種量的水；通常水凝膠中處于溶脹狀態(tài)的水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比 聚合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)高得多。
[0008] 已經(jīng)定義了兩種一般類別的水凝膠。第一為物理水凝膠，其中鏈通過(guò)靜電力、氫 鍵、疏水作用或鏈纏結(jié)（此類凝膠為非永久性的并且通常通過(guò)加熱它們可被轉(zhuǎn)化成聚合物 溶液）連接?？墒褂枚喾N環(huán)境觸發(fā)劑（PH、溫度、離子強(qiáng)度）和多種物理化學(xué)相互作用（疏 水作用、電荷凝聚、氫鍵或超分子相互作用）實(shí)現(xiàn)聚合物鏈的物理交聯(lián)。在物理交聯(lián)的水凝 膠中可逆交聯(lián)點(diǎn)的存在允許溶劑澆鑄和/或熱處理。然而，物理交聯(lián)的水凝膠的主要缺點(diǎn) 為其在溶脹狀態(tài)時(shí)的弱的機(jī)械性能以及可被觸發(fā)以形成生理學(xué)相關(guān)狀況的材料的范圍極 其有限。
[0009] 第二類別的水凝膠為化學(xué)水凝膠，其通常具有連接鏈的共價(jià)鍵。化學(xué)方法包括 各種點(diǎn)擊反應(yīng)、硫醇烯加成、金屬催化的疊氮化物-炔烴環(huán)加成、邁克爾加成（Michael addition)和狄爾斯-阿爾德反應(yīng)（Diels-Alderreaction)。由于其高度有效的轉(zhuǎn)化、正 交性和生物友好特性，已經(jīng)將不含金屬的、應(yīng)變促進(jìn)的疊氮化物-炔烴"點(diǎn)擊"環(huán)加成反應(yīng) 應(yīng)用于細(xì)胞成像以及水凝膠系統(tǒng)。凝膠形成過(guò)程為原子中性的，因?yàn)椴淮嬖谖廴鞠到y(tǒng)和能 夠?qū)ο嚓P(guān)生物系統(tǒng)造成毒性問(wèn)題的殘余物。
[0010] 在這些系統(tǒng)中開(kāi)始凝膠形成通常依賴于起始來(lái)自單體前體的網(wǎng)絡(luò)形成的化學(xué)或 光化學(xué)過(guò)程。生物相容性起始系統(tǒng)（諸如化學(xué)催化劑、熱和/或紫外（UV)光）的使用和殘 留金屬催化劑、有機(jī)溶劑的存在以及官能團(tuán)的不完全轉(zhuǎn)化經(jīng)常導(dǎo)致與這些系統(tǒng)的生物相容 性問(wèn)題。這些凝膠化和官能化策略中的每一種的實(shí)驗(yàn)需求對(duì)各自水凝膠的實(shí)用性和通用性 有明顯的限制并且使得直接的臨床轉(zhuǎn)化為困難的或不可能的。
[0011] 最近，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)原位形成的注射用水凝膠有另外的希望，因?yàn)橄鄬?duì)于預(yù)成型的水 凝膠它們能適應(yīng)復(fù)雜的缺陷位置。在這些系統(tǒng)中，注射含有水凝膠的組成單體的一種或多 種溶液或以其它方式將其遞送至使用水凝膠并起始交聯(lián)的位點(diǎn)。這些系統(tǒng)的常見(jiàn)問(wèn)題為交 聯(lián)聚合物網(wǎng)絡(luò)所需的基于光化學(xué)、熱、UV光和或化學(xué)催化劑的引發(fā)劑經(jīng)常生物相容性不大 并且對(duì)敏感的細(xì)胞類型不起作用。而且，交聯(lián)反應(yīng)的所有副產(chǎn)物也必須為生物相容的并且 殘留金屬催化劑、有機(jī)溶劑以及官能團(tuán)的不完全轉(zhuǎn)化經(jīng)常導(dǎo)致與這些系統(tǒng)的生物相容性問(wèn) 題。
[0012] 也已經(jīng)開(kāi)發(fā)由物理應(yīng)變起始的原位形成水凝膠。然而，許多這些系統(tǒng)在存在明膠、 膠原、脂質(zhì)、碳水化合物或聚合物納米纖維的情況下將不會(huì)交聯(lián)，這顯著限制其有效性。
[0013] 因此，本領(lǐng)域需要的是這樣的水凝膠，其能夠原位（和體內(nèi)）形成，不含有毒的副 產(chǎn)物，允許交聯(lián)發(fā)生時(shí)（和發(fā)生處）的機(jī)械控制，比基于熱的系統(tǒng)更易于使用并且將在存在 明膠、膠原、脂質(zhì)、碳水化合物或聚合物納米纖維的情況下交聯(lián)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明涉及包含8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇和多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化 物的應(yīng)變促進(jìn)的反應(yīng)產(chǎn)物的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠。本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠允許交聯(lián)將發(fā) 生時(shí)（處）的機(jī)械控制并且比應(yīng)變-激活或溫度-激活系統(tǒng)更易于使用。
[0015] 可處理前體物質(zhì)而不引起交聯(lián)，只要不會(huì)達(dá)到所述應(yīng)變閾值。水凝膠不需要催化 劑交聯(lián)，從而避免許多催化劑常見(jiàn)的生物相容性問(wèn)題。所述交聯(lián)過(guò)程也不受是否存在催化 劑或其它物質(zhì)的影響，其可在已知的應(yīng)變誘導(dǎo)水凝膠中干擾交聯(lián)。前體物質(zhì)基本上為正交 的并且將在存在明膠、膠原、脂質(zhì)、碳水化合物或聚合物納米纖維的情況下交聯(lián)。由于其交 聯(lián)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，本發(fā)明的水凝膠可包封并輸送高度敏感的細(xì)胞和其它生物添加劑。而且，本 發(fā)明的水凝膠不含已知的毒性副產(chǎn)物。
[0016] 而且，共價(jià)交聯(lián)的水凝膠為通用的并且為生物相容的因?yàn)樗鼈兓诓缓饘俚摹?應(yīng)變促進(jìn)的疊氮化物-炔烴環(huán)加成。交聯(lián)不需要光、引發(fā)劑和催化劑。不需要對(duì)敏感蛋白、 肽或細(xì)胞有害的任何物質(zhì)。
[0017] 本發(fā)明還包括用于將細(xì)胞和其它敏感生物材料包封在水凝膠內(nèi)的有效方法，其中 膠凝化基于應(yīng)變的環(huán)辛炔單元（cyclocotyneunit)和疊氮化物封端的PEG鏈之間的特定 分子識(shí)別相互作用的累積效應(yīng)。各自組分的分子質(zhì)量的潛在變化性、分支單元的數(shù)目以及 與hMSC和細(xì)胞培養(yǎng)基的相容性在應(yīng)用中提供通用性，其中注射器可注射的材料或水凝膠 的原位形成是必需的。
[0018] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇和多臂聚氧 乙基甘油醚三疊氮化物的應(yīng)變促進(jìn)的反應(yīng)產(chǎn)物的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠。在一些實(shí)施方案中， 本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包括上文描述的實(shí)施方案，其中8-元環(huán)炔官能化聚亞烷 基二醇為選自以下的聚合物：聚乙二醇，聚丙二醇及其組合。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的 共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方案，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷 基二醇的分子質(zhì)量為約500Da至約12000Da。
[0019] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方 案，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇為二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇。
[0020] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方 案，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇為包含約1 %至約40%重量百分比的二芐基環(huán) 辛炔官能化聚乙二醇的水溶液。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含 上文描述的任一實(shí)施方案，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇為包含約11重量百分 比的二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇的水溶液。
[0021] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方 案，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物為具有2至5個(gè)臂的聚氧乙基甘油醚三疊氮 化物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方案， 其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物為3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物。
[0022] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方 案，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物為包含約1%至約40%重量百分比的3-臂聚 氧乙基甘油醚三疊氮化物的水溶液。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以 包含上文描述的任一實(shí)施方案，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物為包含約3%重 量百分比的3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的水溶液。
[0023] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方 案，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠通過(guò)所述二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇和所述多臂聚氧乙 基甘油醚三疊氮化物的應(yīng)變促進(jìn)的環(huán)加成形成。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的 水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方案，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠通過(guò)所述8-元環(huán) 炔官能化聚亞烷基二醇和所述3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的應(yīng)變促進(jìn)的環(huán)加成形 成。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方案，其 中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠通過(guò)二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇和3-臂聚氧乙基甘油醚三疊 氮化物的應(yīng)變促進(jìn)的環(huán)加成形成。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包 含上文描述的任一實(shí)施方案，其中所述二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇的質(zhì)量平均分子量為 約 1，000 至約 20, 000。
[0024] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包括上文描述的任一實(shí)施方 案，其中共價(jià)交聯(lián)的水凝膠的交聯(lián)密度為約2至約300mol/m3。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明 的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包括上文描述的任一實(shí)施方案，其中共價(jià)交聯(lián)的水凝膠的交聯(lián)密 度為約 8. 6mol/m3。
[0025] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包括上文描述的任一實(shí)施方 案，其中共價(jià)交聯(lián)的水凝膠的損耗因數(shù)（tanS)為約〇. 10至約〇. 50。在一些實(shí)施方案中， 本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包括上文描述的任一實(shí)施方案，其中共價(jià)交聯(lián)的水凝膠的 損耗因數(shù)（tanS)為約0.25。
[0026] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包括上文描述的還包含選自 細(xì)胞、膠原、脫細(xì)胞組織、明膠及其組合的添加劑的任一實(shí)施方案。在一些實(shí)施方案中，本發(fā) 明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方案，其中所述添加劑用所述共價(jià)交 聯(lián)的水凝膠包封。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任 一實(shí)施方案，其中所述添加劑為人間充質(zhì)干細(xì)胞。
[0027] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方 案，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠為約40%至約99. 9%的水。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的 共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方案，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠為約 96. 1 %的水。
[0028] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠可以包含上文描述的任一實(shí)施方 案，其中所述二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇具有下式：
[0029]

【權(quán)利要求】
1. 一種共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其包含8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇和多臂聚氧乙基甘 油醚三疊氮化物的應(yīng)變促進(jìn)的反應(yīng)產(chǎn)物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇 為選自以下的聚合物：聚乙二醇、聚丙二醇及其組合。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇 的分子質(zhì)量為約500Da至約12000Da。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇 為二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇 為包含約1%至約40%重量百分比的二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇的水溶液。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇 為包含約11重量百分比的二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇的水溶液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化 物為具有2至5個(gè)臂的聚氧乙基甘油醚三疊氮化物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化 物為3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化 物為包含約1 %至約40%重量百分比的3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的水溶液。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮 化物為包含約3%重量百分比的3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的水溶液。
11. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠通過(guò)所述 二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇和所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的所述應(yīng)變促進(jìn)的 環(huán)加成形成。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠通過(guò)所述 8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇和所述3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的所述應(yīng)變促進(jìn)的 環(huán)加成形成。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠通過(guò)二芐 基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇和3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的所述應(yīng)變促進(jìn)的環(huán)加成形 成。
14. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二 醇的質(zhì)量平均分子量為約1，〇〇〇至約20, 000。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其交聯(lián)密度為約2至約300mol/m3。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其交聯(lián)密度為約8. 6mol/m3。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其損耗因數(shù)（tanS)為約〇. 10至約 0. 50〇
18. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其損耗因數(shù)（tanS)為約〇. 25。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其還包含選自以下的添加劑：細(xì)胞、膠 原、脫細(xì)胞組織、明膠及其組合。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述添加劑用所述共價(jià)交聯(lián)的水 凝膠包封。
21. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述添加劑為人間充質(zhì)干細(xì)胞。
22. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述添加劑為人間充質(zhì)干細(xì)胞。
23. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠為約40% 至約99. 9%的水。
24. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠為約 96. 1 %的水。
25. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二 醇具有下式：
其中n為約60至約300的整數(shù)。
26. 根據(jù)權(quán)利要求24所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中n為6或7。
27. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其中所述3-臂聚氧乙基甘油醚三疊氮 化物具有下式：
其中n為約8至約30的整數(shù)。
28. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的共價(jià)交聯(lián)的水凝膠，其具有下式：
其中n為約8至約30的整數(shù)。
29. -種制備共價(jià)交聯(lián)的水凝膠的方法，其包括： A.制備含有8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇的水溶液； B. 制備含有多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物的水溶液；以及 C. 將步驟A的所述溶液與步驟B的所述溶液組合；以及 D. 將應(yīng)變應(yīng)用至步驟C的混合物直至所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇和所述多臂 聚氧乙基甘油醚三疊氮化物之間形成共價(jià)交聯(lián)。
30. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇為選自以下 的聚合物：聚乙二醇、聚丙二醇及其組合。
31. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇為聚乙二
32. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇為二芐基環(huán) 辛炔官能化聚乙二醇。
33. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟A的所述水溶液含有約1 %至約40%重量 百分比的所述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇。
34. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟A的所述水溶液含有約11重量百分比的所 述8-元環(huán)炔官能化聚亞烷基二醇。
35. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物為具有2 至5個(gè)臂的聚氧乙基甘油醚三疊氮化物。
36. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物為3-臂聚 氧乙基甘油醚三疊氮化物。
37. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟B的所述水溶液含有約1 %至約40%重量 百分比的所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物。
38. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟B的所述水溶液含有約3%重量百分比的 所述多臂聚氧乙基甘油醚三疊氮化物。
39. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述二芐基環(huán)辛炔官能化聚乙二醇的質(zhì)量平均 分子量為約1，〇〇〇至約20, 000。
40. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，還包括在步驟D之前，將步驟C的所述混合物引入至 活有機(jī)體的所述步驟。
41. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中將步驟D的所述混合物通過(guò)注射引入至活有機(jī) 體。
42. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟D在體內(nèi)發(fā)生。
43. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中步驟D在體內(nèi)發(fā)生。
44. 根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中步驟D在體內(nèi)發(fā)生。
45. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟C的所述混合物為粘性液體。
46. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟C的所述混合物的損耗因數(shù)（tanS)大于 或等于約1. 0。
47. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中步驟C的所述混合物的損耗因數(shù)（tanS)為約 1. 0〇
48. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，還包括將選自以下的添加劑加入至步驟A的一個(gè)或 多個(gè)所述水溶液或步驟B的所述水溶液的所述步驟：細(xì)胞、膠原、脫細(xì)胞組織、明膠及其組 合。
49. 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述添加劑用所述共價(jià)交聯(lián)的水凝膠包封。
50. 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述添加劑為人間充質(zhì)干細(xì)胞。
51. 根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述添加劑為人間充質(zhì)干細(xì)胞。
52. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中在步驟D中應(yīng)用的所述應(yīng)變?yōu)?%至15%的振 蕩剪切應(yīng)變。
【文檔編號(hào)】A61K47/34GK104487093SQ201380039067
【公開(kāi)日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2013年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月31日
【發(fā)明者】R·A·外斯, M·貝克 申請(qǐng)人:阿克倫大學(xué)