作為蛋白質(zhì)激酶抑制劑的吡啶并嘧啶衍生物的制作方法
【專利摘要】式(I)的化合物，其中R、R1和R2具有權(quán)利要求1中說明的含義，其為Syk的抑制劑，且尤其可用于治療癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和/或系統(tǒng)狼瘡。
【專利說明】作為蛋白質(zhì)激酶抑制劑的吡啶并嘧啶衍生物
[0001] 發(fā)明背景 本發(fā)明的的目是發(fā)現(xiàn)具有有價(jià)值的性質(zhì)的新型化合物，特別是可用于制備藥物的那 些。
[0002] 本發(fā)明涉及化合物和化合物的用途，其中抑制、調(diào)整和/或調(diào)制經(jīng)由激酶（特別是 酪氨酸激酶）的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，此外，本發(fā)明涉及包含這些化合物的藥物組合物和所述化合物 用于治療激酶_誘導(dǎo)的疾病的用途。
[0003]因?yàn)榈鞍踪|(zhì)激酶調(diào)整幾乎每一個(gè)細(xì)胞過程，包括代謝、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和細(xì)胞 存活，它們是用于各種疾病狀態(tài)的治療介入的有吸引力的靶。例如，其中蛋白質(zhì)激酶起到樞 紐作用的細(xì)胞_循環(huán)控制和血管發(fā)生為與眾多疾病狀況關(guān)聯(lián)的細(xì)胞過程，所述疾病狀況例 如但不限于癌癥、炎性疾病、異常血管發(fā)生和與之相關(guān)的疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、黃斑變性、糖 尿病、肥胖和疼痛。
[0004] 在激活肥大細(xì)胞后，在發(fā)信號(hào)路徑中的一個(gè)關(guān)鍵事情是激活酪氨酸激酶Syk。 通過釋放前炎性介體和細(xì)胞因子，肥大細(xì)胞在哮喘和過敏性病癥中起到關(guān)鍵性作用。 FceRJ(IgE的高親和力受體）的抗原-介導(dǎo)的聚集導(dǎo)致激活肥大細(xì)胞。這觸發(fā)一系列發(fā)信 號(hào)事件，導(dǎo)致釋放介體，包括組胺、蛋白酶、白細(xì)胞三烯和細(xì)胞因子。這些介體引起提高的血 管滲透性、粘液產(chǎn)生、支氣管收縮、組織退化和發(fā)炎，因此在哮喘和過敏性病癥的病因?qū)W和 癥狀中起到關(guān)鍵的作用。Syk激酶用作導(dǎo)致介體釋放的所有隨后發(fā)信號(hào)的中心引發(fā)劑。通 過含有Syk激酶SH2區(qū)域（用作Syk激酶的抑制劑）的蛋白質(zhì)，通過完全抑制介體釋放，證 明Syk激酶在發(fā)信號(hào)路徑中的關(guān)鍵性作用（J.A.Taylor等人，Molec.andCellBiol，15: 4149-4157 (1995)。
[0005]Syk(脾-酪氨酸-激酶）為屬于細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶的亞族的72kDa非受體酪 氨酸激酶，尤其包含2八?70、？71^2、4131、1^2、1(01?和冊(cè)1?。371^為？^?$(^1?1、11、111、 FceRI、FcaR)和BCR發(fā)信號(hào)的主要調(diào)節(jié)劑，并且在整個(gè)造血系統(tǒng)以及在纖維原細(xì)胞、破骨 細(xì)胞、肝細(xì)胞、上皮和神經(jīng)元細(xì)胞中表達(dá)。除了C末端激酶區(qū)域以外，SYK呈現(xiàn)兩個(gè)SH2區(qū)域 和超過10個(gè)自動(dòng)磷酸化部位1。
[0006]借助其兩個(gè)SH2區(qū)域，SYK特別被吸收到磷酸化的ITAM(存在于免疫受體中的基 于免疫受體酪氨酸的激活模體，例如？(^1?1、1從、11從、？(^1?、？(3￡1?1和80?，通過單核細(xì) 胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和B細(xì)胞表達(dá)），并且特別介導(dǎo)通過激活在肥大細(xì) 胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞血小板和破骨 細(xì)胞中的那些受體而觸發(fā)的免疫受體發(fā)信號(hào)u。
[0007]當(dāng)BCR交聯(lián)后，在Iga/Ig0的胞質(zhì)尾部的ITAM模體處的酪氨酸殘基被Src-族激 酶Lyn磷酸化，產(chǎn)生SYK的?？坎课?，因此SYK被吸收至BCR免疫復(fù)合物。SYK隨后磷酸化， 并且通過Src-族激酶Lyn激活。在激活后，SYK將使連接體蛋白質(zhì)BLNK磷酸化，允許其與 BTK和PLCY2二者經(jīng)由它們的相應(yīng)SH2區(qū)域相互作用。SYK磷酸化的-并因此激活的-BTK 進(jìn)而磷酸化并激活PLCY2，導(dǎo)致IP3形成，Ca2+轉(zhuǎn)移，PKC和MAPK激活和隨后的NFAT、AP-1 和NFkB轉(zhuǎn)錄因子激活，導(dǎo)致激活和表面標(biāo)記物表達(dá)，細(xì)胞因子釋放，B細(xì)胞的存活和增殖 3。在肥大細(xì)胞中，變應(yīng)原激活的FceRI被LYN和FYN磷酸化，并且吸收SYK，SKY進(jìn)而被LYN磷酸化，并且進(jìn)一步自動(dòng)磷酸化，變得完全被激活。激活的SYK使兩個(gè)連接體分子NTAL和 LAT磷酸化，對(duì)于含有SH2W蛋白質(zhì)（例如PLCypvav和PI3K的p85調(diào)節(jié)亞單位），產(chǎn)生更 多的停靠部位，導(dǎo)致肥大細(xì)胞去粒和細(xì)胞因子產(chǎn)生4。Syk在肥大細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的關(guān)鍵 性作用通過以下可再現(xiàn)的觀察結(jié)果證實(shí)：不能去粒的來自人供體的10-15%的嗜堿細(xì)胞（循 環(huán)肥大細(xì)胞）具有降低量的Syk蛋白質(zhì)5'6。此外，對(duì)于破骨細(xì)胞的骨再吸收活性，需要SYK。 在通過avP3整聯(lián)蛋白刺激破骨細(xì)胞后，SYK變成被磷酸化，最可能被c-Src磷酸化，采用 DAP-12/FcyRII依賴性機(jī)制，導(dǎo)致SPL-76和Vav3磷酸化和隨后的細(xì)胞骨架再組織。SYK 缺陷破骨細(xì)胞為非活性，并且顯示缺陷細(xì)胞骨架再組織。與此相關(guān)，SYK缺陷胚胎顯示缺陷 骨骼質(zhì)量〃。
[0008] 在淋巴結(jié)中BCR-介導(dǎo)的B-細(xì)胞激活以及在關(guān)節(jié)中FcR-介導(dǎo)的激活樹枝狀細(xì)胞、 單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和肥大細(xì)胞為在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)期間發(fā)生的細(xì)胞 病理-生理機(jī)制的必要的組分。此外，激活破骨細(xì)胞導(dǎo)致骨和軟骨破壞，這是該病理學(xué)的標(biāo) 志 9。因此，在關(guān)節(jié)炎發(fā)展期間，SYK發(fā)信號(hào)應(yīng)起到樞紐作用，在外周和發(fā)炎部位二者處1(1。 實(shí)際上，由Rigel開發(fā)的口服可用的Syk抑制劑R406誘導(dǎo)臨床分?jǐn)?shù)的顯著提高并且顯著降 低血清細(xì)胞因子濃度以及骨腐蝕，采用RA的鼠科模式n'12。此外，在人的RA階段II研究 中，該抑制劑已顯示效力（ACR分?jǐn)?shù)提高）和良好的耐受性13'14'15。
[0009] 在SLE中，經(jīng)由產(chǎn)生自動(dòng)抗體，B細(xì)胞本質(zhì)上引起發(fā)病機(jī)理，導(dǎo)致免疫復(fù)合物形成， 刺激Fc受體和最終導(dǎo)致過度和慢性激活發(fā)炎。在使用Syk抑制劑的SLE治療的鼠科模式 中，導(dǎo)致分級(jí)轉(zhuǎn)換的胚芽中心、邊緣區(qū)域、新形成的和濾泡B細(xì)胞的數(shù)量降低，因此導(dǎo)致疾 病減輕效果18。
[0010] 雖然在胸腺細(xì)胞和幼稚T細(xì)胞中，TCR信號(hào)通過細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶ZAP-70傳輸，但 是若干研究指示分化的效應(yīng)器T細(xì)胞（例如涉及多發(fā)性硬化（MS)或系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE) 的病理生理學(xué)的那些）顯示TCR(鏈下調(diào)和伴隨的TCR/⑶3鏈上調(diào)及其與FcRY的相互作 用。那些研究顯示在效應(yīng)器細(xì)胞中的TCR/⑶3/FcRY復(fù)合物吸收并激活Syk，而不是ZAP-70 酪氨酸激酶。TCR發(fā)信號(hào)中的該生理學(xué)轉(zhuǎn)換在效應(yīng)器而不是幼稚或記憶T細(xì)胞中排他地發(fā) 生16'17'18。則不出意外地，在SLE的鼠科模式中，SYK抑制劑已顯示延遲疾病發(fā)展和改進(jìn)存 活 17, 18, 19, 20, 21
[0011] SYK抑制劑還可適用于哮喘、過敏癥、多發(fā)性硬化和其它疾病，例如血小板減少性 紫癜和T或B細(xì)胞淋巴腫瘤^14'22^35。
[0012] 使用Syk抑制劑治療事先患病的NZB/W小鼠防止腎病的發(fā)展，通過降低的腎小球 硬化、腎小管破壞、蛋白尿和BUN水平證明18。
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[0014] 除了肥大細(xì)胞以外，Syk在其它造血細(xì)胞（包括B細(xì)胞）中表達(dá)，其中認(rèn)為其在從 不成熟的B細(xì)胞過渡為成熟的再循環(huán)B細(xì)胞所需的轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)中起到重要作用（M.Turner 等人，ImmunologyToday，21:148 (2000))。報(bào)道B細(xì)胞在一些炎性狀況例如狼瘡（0.T. Chan等人，ImmunologicalRev，169:107_121 (1999))和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（A.Gause等人， Biodrugs, 15(2): 73-79 (2001))中起到重要的作用。
[0015] 還報(bào)道Syk為在0 -淀粉樣蛋白和蛋白病毒原纖維中的發(fā)信號(hào)級(jí)聯(lián)的要素，導(dǎo)致 產(chǎn)生神經(jīng)毒性產(chǎn)物（C.K.Combs等人，J.Neuroscl，19:928-939 (1999))。此外，Syk的 抑制劑阻斷產(chǎn)生這些神經(jīng)毒性產(chǎn)物。因此呋喃并吡啶衍生物潛在地可用于治療阿爾茨海默 病和相關(guān)的神經(jīng)炎性疾病。另一個(gè)報(bào)道（Y.Kuno等人，Blood，97,1050-1055 (2001))證 明Syk在惡性發(fā)展中起到重要的作用。發(fā)現(xiàn)TEL-Syk融合蛋白質(zhì)變換造血細(xì)胞，表明在造 血惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)理中的作用。因此，式I的化合物可用于治療某些類型的癌癥。
[0016] 涉及血液學(xué)惡性腫瘤的其它蛋白質(zhì)酪氨酸激酶包括ABL(ABL1)、ARG(ABL2)、 PDGFPR、PDGFaR、JAK2、TRKC、FGFR1、FGFR3、FLT3 和FRK。
[0017]詹納斯激酶（JAK)為由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2組成的酪氨酸激酶的族。JAK在 細(xì)胞因子發(fā)信號(hào)中起到關(guān)鍵性作用。激酶的JAK族的下游底物包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活 劑（STAT)蛋白質(zhì)。JAK/STAT發(fā)信號(hào)涉及許多異常免疫響應(yīng)的介導(dǎo)，例如過敏癥、哮喘、自 身免疫疾病例如移植（同種異體移植）排異反應(yīng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肌萎縮外側(cè)硬化和多發(fā) 性硬化，以及在實(shí)體和血液學(xué)惡性腫瘤例如白血病和淋巴腫瘤中（關(guān)于JAK/STAT路徑的藥 物介入的綜述參見Frank,Mol.Med. 5,432:456 (1999)和Seidel等人，Oncogene19， 2645-2656 (2000)。JAK2為充分生效的靶，在治療骨髓增殖性病癥（MPDs)中具有強(qiáng)大潛 力，該病癥包括真性紅細(xì)胞增多癥（PV)、特發(fā)血小板增多、慢性特發(fā)性骨髓纖維變性、髓細(xì) 胞化生伴骨髓纖維變性、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性骨髓單核細(xì)胞性白血病、慢性嗜曙紅粒細(xì) 胞增多白血病、嗜酸細(xì)胞增多綜合征和系統(tǒng)性肥大細(xì)胞疾病。
[0018] Fms-樣酪氨酸激酶3 (FLT3)(也稱為FLK-2 (胎兒肝激酶2)和STK-I(干細(xì)胞 激酶1))在造血干細(xì)胞的增殖和分化中起到重要的作用。FLT3受體激酶在正常的造血細(xì) 胞、胎盤、性腺和腦中表達(dá)。然而，該酶在80%以上的髓細(xì)胞性患者和一部分急性成淋巴細(xì) 胞白血病細(xì)胞的細(xì)胞上，以非常高的水平表達(dá)。此外，所述酶還可在來自患有慢性髓細(xì)胞性 白血病處于淋巴白血病急性發(fā)作的患者的細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)。已報(bào)道FLT3激酶在30%的急性髓 細(xì)胞白血病（AML)以及在急性成淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL)的亞組中突變（Gilliland等人， Blood100,1532-1542 (2002);Stirewalt等人，Nat.Rev.Cancer，3,650-665 (2003))。 在FLT3中最常見的激活突變?yōu)樵谂阅^(qū)域內(nèi)的內(nèi)部串聯(lián)復(fù)制，而在激酶區(qū)域中，點(diǎn)突變、 插入或刪除不太常見。這些突變體FLT3激酶中的一些為組成活性。FLT3突變與差的預(yù)后 有關(guān)（Malempati等人，Blood，104，ll(2004)。多于十二種已知FLT3抑制劑正在開發(fā)，并 且一些已顯示針對(duì)AML的有希望的臨床效果（Levis等人，Int.J.Hematol，52,100-107 (2005)。
[0019] 已報(bào)道一些小分子FLT3抑制劑在具有FLT3-激活突變的細(xì)胞系中有效誘導(dǎo)凋 亡并且延長在它們的骨髓細(xì)胞中表達(dá)突變體FLT3的小鼠的存活（Levis等人，Bl〇〇d，99， 3885-3891 (2002);Kelly等人，CancerCell，1，421-432 (2002);Weisberg等人，Cancer Cell，l，433-443 (2002);Yee等人，Blood(血液），100,2941-2949 (2002))。
[0020] 特別是，本發(fā)明涉及化合物和其中抑制、調(diào)整和/或調(diào)制經(jīng)由Syk的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)起作 用的化合物的用途。
[0021] 因此，期望合成特異性抑制、調(diào)整和/或調(diào)制經(jīng)由酪氨酸激酶（特別是Syk)的信 號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小化合物，并且這是本發(fā)明的目的。
[0022] 此外，本發(fā)明的目的是合成新的化合物，用于預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)狼 瘡、哮喘、過敏性鼻炎、ITP、多發(fā)性硬化、白血病、乳腺癌和惡性黑素腫瘤。意外地，我們已鑒 定選擇性抑制SYK、BTK、KDR、Src、Zap70、Fak、Pyk2、Flt3或Jak或抑制這些激酶中的選擇 物的呋喃并吡啶。
[0023] 此外，式I的化合物抑制絲氨酸激酶GCN2。
[0024] 實(shí)體腫瘤的癌癥治療的許多策略集中于盡可能通過手術(shù)除去腫瘤塊，隨后使用更 特異性地靶向癌細(xì)胞路徑的細(xì)胞毒性劑或抑制劑，通過放療和化療根除任何殘余的腫瘤細(xì) 胞。然而，這些方法的成功有限，并且通常不能堅(jiān)持。這主要是由于這些細(xì)胞毒性劑窄的治 療窗口（特異性和副作用）和癌細(xì)胞（cancercalls)適應(yīng)由細(xì)胞毒性或其它抑制劑施加的 選擇性壓力的能力。獲得對(duì)初始治療的抗性的少量腫瘤（干）細(xì)胞的存活可能足以導(dǎo)致腫 瘤再生長。在大多數(shù)情況下，與初始腫瘤相比，這些復(fù)發(fā)更加難以治療。結(jié)果，更加成功地靶 向腫瘤細(xì)胞可能需要并行地祀向腫瘤細(xì)胞的多重存活和逃脫機(jī)制（Muller&Prendegast 2007)。
[0025] 惡性腫瘤發(fā)展伴隨著細(xì)胞生理學(xué)的主要提升。在該過程期間，癌細(xì)胞獲得一些性 質(zhì)，其為對(duì)生長抑制信號(hào)永久增殖化或不敏感的基礎(chǔ)。此外，腫瘤細(xì)胞還改變與微環(huán)境及以 外的相互作用。后一領(lǐng)域包括腫瘤細(xì)胞從免疫學(xué)監(jiān)視逃脫的策略（Muller&Prendegast 2007)。免疫監(jiān)視限制惡性生長而且還提供選擇性壓力，觸發(fā)進(jìn)化機(jī)制，以回避免疫響應(yīng)， 如[Dunn等人，2004]綜述。實(shí)質(zhì)上，經(jīng)常觀察到T細(xì)胞免疫性的脫離足以提高腫瘤發(fā)生率 [Shankaran等人，2001]，并且相信免疫逃脫影響腫瘤相對(duì)于發(fā)展的休眠，促進(jìn)發(fā)病和轉(zhuǎn)移 和對(duì)治療響應(yīng)的負(fù)面影響。
[0026] 數(shù)種機(jī)理研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤微環(huán)境內(nèi)，免疫逃脫與代謝改變具有重要的界面。此 處，介導(dǎo)對(duì)抗原的免疫耐受的重要作用已與必需氨基酸色氨酸和精氨酸的分解代謝相關(guān)， 分別通過酶吲哚胺2, 3-雙加氧酶（ID0)和精氨酸酶I(ARG)進(jìn)行（Bronte和Zanovello， 2005;Muller等人，2005b;Muller和Prendergast，2007;Munn和Mellor，2007;Popovic等 人，2007)。
[0027]ID0為催化色氨酸降解為犬尿氨酸的單鏈氧化還原酶。ID0不負(fù)責(zé)分解代謝過量 膳食色氨酸，而是調(diào)節(jié)局部環(huán)境中的色氨酸水平。提高癌癥患者的色氨酸分解代謝表明顯 著改變的色氨酸或分解代謝產(chǎn)物的血清濃度，這與在腫瘤和消耗淋巴結(jié)中通常升高的ID0 相關(guān)。根據(jù)若干出版物，ID0過表達(dá)與癌癥差的預(yù)后相關(guān)[Okamoto等人2005;Brandacher 等人，2006]。
[0028] T細(xì)胞看起來對(duì)ID0激活優(yōu)先敏感，使得當(dāng)對(duì)色氨酸饑餓時(shí)，它們不能分裂，結(jié)果 是不能變得被對(duì)其呈現(xiàn)的抗原所激活。Munn和Mellor和他們的同事揭示，通過抑制T-細(xì) 胞激活和通過產(chǎn)生對(duì)腫瘤抗原的外周耐受，ID0調(diào)制免疫（Mellor和Munn，2004)。這些機(jī) 理包括將腫瘤細(xì)胞吸收的免疫細(xì)胞破壞至其緊鄰的微環(huán)境或至腫瘤-耗盡淋巴結(jié)。此處， 通過呈現(xiàn)抗原的細(xì)胞清除的腫瘤抗原對(duì)于適合的免疫系統(tǒng)交叉呈現(xiàn)。除了為直接耐受原以 夕卜，成熟的DC能使調(diào)節(jié)T細(xì)胞膨脹（Tregs)[Moser2003]。
[0029] 除了色氨酸分解代謝以外，在腫瘤調(diào)節(jié)的微環(huán)境中，精氨酸的轉(zhuǎn)化提高，并且眾多 報(bào)道指示在腫瘤生長和發(fā)展期間激活精氨酸酶的作用。在腫瘤-滲透骨髓細(xì)胞中，精氨酸 通過精氨酸酶I(ARG1)、精氨酸酶II(ARG2)轉(zhuǎn)化為尿素和鳥氨酸，并且通過可誘導(dǎo)形式的 一氧化氮合成酶（N0S2)氧化為瓜氨酸和一氧化氮（N0)。
[0030] 在患有結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌的患者中通常觀察到提高的ARG活性 [Cederbaum2004]，與在前列腺癌中發(fā)現(xiàn)的ARG和N0S的過表達(dá)相關(guān)[Keskinege等人， 2001，Aaltoma等人，2001，Wang等人，2003]。已顯示在滲透巨噬細(xì)胞中ARG活性損害CD3 受體的抗原-特異性T細(xì)胞響應(yīng)和表達(dá)。此外，在腫瘤相關(guān)的骨髓細(xì)胞中ARG和N0S的累積 活性可對(duì)抗原-特異性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抑制信號(hào)，最終導(dǎo)致凋亡[Bronte2003a;2003b]。
[0031]ID0和ARG二者相關(guān)的機(jī)理在感覺相應(yīng)的氨基酸濃度的耗盡濃度的點(diǎn)處結(jié)合。在 氨基酸脫除期間，eIF2激酶EIF2AK4(稱為通用控制不可去阻遏2 (GCN2))與細(xì)胞內(nèi)累積 脫酰化的tRNA相互作用。結(jié)果是，假定GCN2從自動(dòng)抑制的變?yōu)榛钚詷?gòu)象，并且通過自動(dòng)磷 酸化進(jìn)一步激活。隨后僅已知的底物蛋白質(zhì)eIF2a變得被磷酸化，結(jié)果是用于翻譯引發(fā)的 復(fù)合物受抑制[Harding等人。2000]。這樣減少通用CAP-依賴性翻譯引發(fā)，并且通過這樣 減少相應(yīng)蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。在另一方面，主要通過cap-非依賴性引發(fā)，經(jīng)由激活轉(zhuǎn)錄因子4 (ATF4)，這誘導(dǎo)應(yīng)激相關(guān)的靶基因的特異性表達(dá)。通過表達(dá)相應(yīng)的應(yīng)激響應(yīng)蛋白質(zhì)，例如在 氨基酸代謝中的酶，細(xì)胞試圖補(bǔ)償特定的細(xì)胞應(yīng)激[Wek等人，2006]。如果應(yīng)激持續(xù)，相同 的路徑將轉(zhuǎn)換為促進(jìn)細(xì)胞死亡，經(jīng)由前凋亡轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄，CCAAT/增強(qiáng)劑-結(jié)合蛋白質(zhì) 同源蛋白質(zhì)（CHOP)[Oyadomari2004]。其顯示，色氨酸饑餓觸發(fā)GCN2-依賴性應(yīng)激發(fā)信號(hào) 路徑。在T細(xì)胞中，改變eIF2a磷酸化和翻譯引發(fā)導(dǎo)致細(xì)胞生長停止（Munn等人。2005)。 Sharma等人[2007]公布關(guān)于直接ID0-誘導(dǎo)的和GCN2-依賴性的Tregs激活成熟。類似地， Fallarino等人[2006]發(fā)現(xiàn)CD4+CD25-細(xì)胞的GCN2-依賴性轉(zhuǎn)變?yōu)镃D25+FoxP3+Tregs，產(chǎn) 生IL-10和TGFp。Rodriguez等人[2007]鑒定，經(jīng)由色氨酸或精氨酸耗盡與TCR發(fā)信號(hào)組 合激活GCN2路徑，導(dǎo)致CD3 (鏈下調(diào)，細(xì)胞循環(huán)停止和無反應(yīng)性。
[0032] 重要地，GCN2路徑不僅對(duì)于用于腫瘤免疫逃脫是重要的，而且在直接調(diào)制腫瘤存 活中也起到主動(dòng)作用。Ye等人[2010]發(fā)現(xiàn)前述轉(zhuǎn)錄因子ATF4在人實(shí)體腫瘤中過表達(dá)，表 明在腫瘤發(fā)展中的重要功能。氨基酸和葡萄糖脫除為在實(shí)體腫瘤中發(fā)現(xiàn)的典型應(yīng)激，并且 激活GCN2路徑以上調(diào)在氨基酸合成和運(yùn)輸中涉及的ATF4靶基因。與正常的組織相比，在 人和小鼠腫瘤中觀察到GCN2激活/過表達(dá)和提高的磷酸-eIF2a，并且ATF4或GCN2表達(dá)的 廢除顯著抑制腫瘤體內(nèi)生長。推斷GCN2-eIF2a-ATF4路徑對(duì)于在腫瘤細(xì)胞中維持代謝體內(nèi) 平衡是關(guān)鍵的。
[0033] 本發(fā)明的生物學(xué)始終干涉ARG/ID0路徑，由于通過適應(yīng)性機(jī)制破壞腫瘤免疫逃脫 而有吸引力。此處特別受關(guān)注的是GCN2功能的干涉，因?yàn)槠錇閮煞N路徑（ID0和ARG)的結(jié) 合點(diǎn)，以及其提供另外的機(jī)會(huì)以直接阻礙腫瘤代謝。
[0034] 已考慮數(shù)種路徑抑制劑作為免疫調(diào)節(jié)劑。這些抑制劑主要解決IDO或ARG 蛋白質(zhì)的酶功能（Muller和Scherle，2006)。在小鼠中，施用精氨酸酶抑制劑（N-輕 基-nor-L-Arg)阻斷s.c. 3LL肺癌的生長[Rodriguez2004]。已報(bào)道提供N0的阿司匹林 如NCX4016 (2-(乙?；趸┍郊姿?-(硝基氧基甲基）苯酯）干涉骨髓細(xì)胞的抑制酶 活性。口服給予的N0阿司匹林使攜帶腫瘤的宿主的免疫狀況正?；?，提高腫瘤-抗原-特 異性T淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能，并且增強(qiáng)通過癌癥接種誘出的抗腫瘤免疫性的預(yù)防和治療 效力（DeSanto2〇〇5)。
[0035] 在癌癥情境和其它環(huán)境中，底物類似物1甲基-色氨酸（1MT)和相關(guān)的分子已廣 泛用于革巴向IDO。Friberg等人（2002)和Uyttenhove等人（2003)的研究證明，1MT可限 制過表達(dá)ID0的腫瘤的生長。然而，在若干腫瘤模式中，1MT不能誘出腫瘤退化，表明當(dāng)施 用ID0抑制作為單一治療時(shí)，僅適度的抗腫瘤效力。與此相反，用1MT和多種細(xì)胞毒性化 療劑聯(lián)合治療誘出確立的MMTV-neu/HER2腫瘤的退化，該腫瘤對(duì)任何單一劑治療的響應(yīng)差 [Muller等人2005a]。在治療使該模式中觀察到的組合效力廢除之前，免疫耗盡來自小鼠 的⑶4+或⑶8+T細(xì)胞，證實(shí)以下預(yù)期：1MT間接通過激活T細(xì)胞-介導(dǎo)的抗腫瘤免疫性起 作用。通過證明在對(duì)于ID0有基因缺陷的小鼠中，1MT缺乏抗腫瘤活性，提供了ID0靶向?qū)?于1MT作用為必需的重要證據(jù)[Hou等人，2007]。
[0036] 抑制GCN2將能夠使氨基酸饑餓誘導(dǎo)的免疫編輯的兩個(gè)路徑分支組合，并且將使 腫瘤規(guī)避任一分支的抑制的選項(xiàng)減少。此外，如以上詳述的，GCN2抑制提供機(jī)會(huì)以同時(shí)干 涉腫瘤代謝，這可增強(qiáng)單一治療或與其它抗癌方法聯(lián)合治療的效力。
[0037]文獻(xiàn)： 1. Aaltoma,S.H. ,P.K.Lipponen和V.M.Kosma. 2001.Induciblenitricoxide synthase(iNOS)expressionanditsprognosticvalueinprostatecancer(在 前列腺癌中可誘導(dǎo)的一氧化氮合成酶（iNOS)表達(dá)及其預(yù)后值）.AnticancerRes. 21:3101-3106. 2. Brandacher,G. ；Perathoner,A. ；Ladurner,R. ；Schneeberger,S. ；0brist,P.； Winkler,C. ；fferner,E.R. ；fferner-Felmayer,G. ；ffeiss,H.G. ；Gobel,G. ；Margreiter, R. ；Konigsrainer,A. ；Fuchs,D. ；Amberger,A.Prognosticvalueofindoleamine2, 3-dioxygenaseexpressionincolorectalcancer:effectontumorinfiltratingT cells(在結(jié)腸直腸癌中，吲哚胺2, 3-雙加氧酶表達(dá)的預(yù)后值：對(duì)腫瘤滲透T細(xì)胞的影響）. Clin.CancerRes. 2006,12,1144-1151. 3. BronteV,ZanovelloP. (2005).Regulationofimmuneresponsesby L-argininemetabolism(通過L_ 精氨酸代謝調(diào)整免疫響應(yīng)）?NatRevImmunol5: 641-654. 4. 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[0038] 已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物及其鹽具有非常有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，同時(shí)良好耐受。
[0039] 本發(fā)明特別涉及抑制、調(diào)整和/或調(diào)制經(jīng)由Syk的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的式I化合物、包含這 些化合物的組合物以及其用于治療Syk-誘導(dǎo)的疾病和不適的方法。
[0040] 式I的化合物可此外用于分離和研究Syk的活性或表達(dá)。此外，它們特別適合用 于與未調(diào)節(jié)的或被擾亂的Syk活性結(jié)合的疾病的診斷方法。
[0041] 宿主或患者可屬于任何哺乳動(dòng)物物種，例如靈長類物種，特別是人；嚙齒動(dòng)物，包 括小鼠、大鼠和倉鼠；兔；馬、牛、狗、貓等。動(dòng)物模式是實(shí)驗(yàn)研究關(guān)注的，提供用于治療人疾 病的模式。
[0042] 特殊細(xì)胞對(duì)用依據(jù)本發(fā)明的化合物治療的易感性可通過體外試驗(yàn)確定。典型地， 將細(xì)胞培養(yǎng)與各種濃度的依據(jù)本發(fā)明的化合物結(jié)合一定的時(shí)間段（通常在約1小時(shí)和1周 之間），其足以使得活性劑例如抗IgM誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)答例如表面標(biāo)記物的表達(dá)。體外試驗(yàn)可采 用來自血或來自活組織檢查樣本的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行。所表達(dá)的表面標(biāo)記物的量通過流式細(xì)胞 計(jì)數(shù)儀，使用識(shí)別標(biāo)記物的特異性抗體來評(píng)測。
[0043] 所述劑量根據(jù)所用的特定化合物、特定疾病、患者狀態(tài)等而變化。治療劑量典型地 足以顯著減少靶組織中的不期望的細(xì)胞種群，同時(shí)維持患者的生存能力。治療一般持續(xù)至 出現(xiàn)顯著減少，例如細(xì)胞負(fù)荷減少至少約50%，和可持續(xù)至在體內(nèi)基本不再檢測出不期望的 細(xì)胞。
[0044] 為了鑒定信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和為了檢測各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之間的相互作用，許多科學(xué) 家已開發(fā)合適的模型或模型系統(tǒng)，例如細(xì)胞培養(yǎng)模型（例如Khwaja等，EMB0，1997，16， 2783-93)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型（例如White等，Oncogene, 2001，20，7064-7072)。為了確 定信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)中的某些階段，可利用相互作用的化合物以調(diào)節(jié)信號(hào)（例如Stephens等， BiochemicalJ.，2000，351，95 105)。依據(jù)本發(fā)明的化合物也可用作在本申請(qǐng)?zhí)峒暗膭?dòng) 物和/或細(xì)胞培養(yǎng)模型或在臨床疾病中測試激酶依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的試劑。
[0045] 激酶活性的測量是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)。用于確定激酶活性使用底物，例 如組蛋白（例如Alessi等，F(xiàn)EBSLett. 1996，399，3，第333-338頁）或堿性髓磷脂 蛋白的通用測試系統(tǒng)，描述于文獻(xiàn)（例如Campos-Gonzdlez,R.和Glenney,Jr.，J.R. 1992，J.Biol.Chem. 267，14535 頁）。
[0046] 為鑒定激酶抑制劑，各種測定系統(tǒng)是可以利用的。在閃爍迫近試驗(yàn)（Sorg等，J. of.BiomolecularScreening, 2002，7, 11-19)和快速板試驗(yàn)（flashplateassay)中檢 測使用YATP的作為底物的蛋白或肽的放射性磷酸化。在存在抑制性化合物時(shí)，可檢測到 減弱的放射性信號(hào)或根本檢測不到。此外，均勻時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（HTR-FRET) 和突光偏振（FP)技術(shù)適合用作試驗(yàn)方法（Sills等，J.ofBiomolecularScreening, 2002, 191-214)。
[0047] 其它的非放射性ELISA試驗(yàn)方法采用特異性磷酸-抗體（磷酸-AB)。此種磷酸-AB 只結(jié)合磷酸化的底物?？墒褂眠^氧化物酶-綴合的抗綿羊二次抗體通過化學(xué)發(fā)光法檢測這 種結(jié)合（Ross等，2002，Biochem.J.)。 現(xiàn)有技術(shù)
[0048]其它雜環(huán)化合物描述于W0 2011/075699、US7732446、W0 2009/046448、W0 2009/134973。
[0049]其它雜環(huán)Syk抑制劑描述于W02008/118823、W02009/136995、W0 2010/027500。
[0050] 發(fā)明概述 本發(fā)明涉及式I的化合物及其藥學(xué)可接受的溶劑合物、鹽、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和 立體異構(gòu)體，包括它們按所有比例的混合物：
【權(quán)利要求】
1. 式I的化合物及其藥學(xué)可接受的溶劑合物、鹽、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和立體異 構(gòu)體，包括它們按所有比例的混合物：
其中 R表示H、OH、A或NR4R4'， R1表示Ar丨、Het1、CN、A或-C=C-Ar1, R2表示Het2、NR3Cyc、NR3CR3CON(R3) 2、NR3[C(R3) 2]PCR3 (NH2)CH2OA或NR3[C(R3) 2]PN(R3) 2，Ar1 表示苯基，其被A、（CH2)nHet3、[C(R3)2]n0R3、[C(R3)2]nN(R3)2、N02、CN、Hal、C00R3、 C0N(R3)2、NR3C0A、NR3S02A、SO2N(R3)JP/ 或S(O)，單取代、二取代或三取代， Het1表示3, 6-二氫-2H-吡喃基、四氫吡啶基、1，3-二氫-苯并咪唑基、吡唑基、苯 并二氫吡喃基、1，2, 3, 4-四氫-吡唑并[1，5-a]吡啶基、6, 7-二氫-4H-吡唑并[5, 1-c] [1，4]-噁嗪基、1，4-二氫-苯并[d] [1，3]-噁嗪基、4H-苯并[1，4]噁嗪基、苯并咪唑基、 吡啶基、嘧啶基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻唑基、三唑基、苯并三唑基、卩引哚基、吲唑基、 1，3-或 2, 3-二氫-吲哚基，各自被A、CN、OH、0A、Hal、S02NH2、（CH2)nNH2、（CH2)nNHA、（CH2) "隱2和/或=0單取代、二取代、三取代或四取代， Het2表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、嗎啉基、四氫吡喃基、吡唑基、噴唑基、氮雜環(huán)丁烷 基或八氫-苯并咪唑基，各自被Hal、A、（CH2)nNH2、（CH2)nNHA、（CH2)nNA2、（CH2)nOH和 / 或（CH2) n〇A單取代、二取代或三取代， Het3表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、嗎啉基、咪唑烷基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、吡唑 基、呋喃基、噻唑基或三唑基，各自被A和/或=0單取代或二取代， R3表示H或具有1、2、3或4個(gè)C原子的烷基， R4、R4'彼此獨(dú)立，各自表示H或A， A表示具有1-10個(gè)C原子的非支化或支化烷基，其中1-7個(gè)H原子可被F替代，和/或 其中一個(gè)或兩個(gè)非相鄰的〇12基團(tuán)可被0和/或NH替代， 或 具有3-7個(gè)C原子的環(huán)烷基， Cyc表示具有3-7個(gè)C原子的環(huán)烷基，其可為未取代的或被NH2、CN、0)顯2或OH單取 代， m表示0、1或2，n表示 0、1、2、3 或 4， P表示1、2、3或4。
2. 權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)可接受的溶劑合物、鹽、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和 立體異構(gòu)體，包括它們按所有比例的混合物，其中 Ar1表示苯基，其被A、（CH2)nHet3和/或SO2NH2單取代、二取代或三取代。
3. 權(quán)利要求1或2的化合物及其藥學(xué)可接受的溶劑合物、鹽、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體 和立體異構(gòu)體，包括它們按所有比例的混合物，其中 Het1表示3, 6-二氫-2H-吡喃基、四氫吡啶基、1，3-二氫-苯并咪唑基、吡唑基、苯 并二氫吡喃基、1，2, 3, 4-四氫-吡唑并[1，5-a]吡啶基、6, 7-二氫-4H-吡唑并[5, 1-c] [1，4]-噁嗪基、1，4-二氫-苯并[d] [1，3]-噁嗪基、4H-苯并[1，4]噁嗪基、苯并咪唑基、苯 并三唑基、卩引哚基、卩引唑基、1，3-或2, 3-二氫-吲哚基，各自被A、CN、0H、0A、Hal和/或=0 單取代、二取代、三取代或四取代。
4. 權(quán)利要求1-3中一項(xiàng)或多項(xiàng)的化合物及其藥學(xué)可接受的溶劑合物、鹽、對(duì)映異構(gòu) 體、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括它們按所有比例的混合物，其中 Het2表示哌啶基或八氫-苯并咪唑基，各自被A、（CH2)nOH或（CH2)nOA單取代。
5. 權(quán)利要求1-4中一項(xiàng)或多項(xiàng)的化合物及其藥學(xué)可接受的溶劑合物、鹽、對(duì)映異構(gòu) 體、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括它們按所有比例的混合物，其中 R表示H、OH、A或NR4R4'， R1表示Ar丨、Het1、CN、A或-C=C-Ar1, R2表示Het2、NR3Cyc、NR3CR3CON(R3) 2、NR3[C(R3) 2]PCR3 (NH2)CH2OA或NR3[C(R3) 2]PN(R3) 2，Ar1表示苯基，其被A、（CH2)nHet3和/或SO2NH2單取代、二取代或三取代， Het1表示3, 6-二氫-2H-吡喃基、四氫吡啶基、1，3-二氫-苯并咪唑基、吡唑基、苯 并二氫吡喃基、1，2, 3, 4-四氫-吡唑并[1，5-a]吡啶基、6, 7-二氫-4H-吡唑并[5, 1-c] [1，4]-噁嗪基、1，4-二氫-苯并[d] [1，3]-噁嗪基、4H-苯并[1，4]噁嗪基、苯并咪唑基、苯 并三唑基、卩引哚基、卩引唑基、1，3-或2, 3-二氫-吲哚基，各自被A、CN、0H、0A、Hal和/或=0 單取代、二取代、三取代或四取代， Het2表示哌啶基或八氫-苯并咪唑基，各自被A、（CH2)nOH或（CH2)nOA單取代， Het3表示三唑基， R3表示H或具有1、2、3或4個(gè)C原子的烷基， R4、R4'彼此獨(dú)立，各自表示H或A， A表示具有1-10個(gè)C原子的非支化或支化烷基，其中1-7個(gè)H原子可被F替代，和/或 其中一個(gè)或兩個(gè)非相鄰的〇12基團(tuán)可被0和/或NH替代， 或 具有3-7個(gè)C原子的環(huán)烷基， Cyc表示具有3-7個(gè)C原子的環(huán)烷基，其可為未取代的或被NH2、CN、0)顯2或OH單取 代， m表示0、1或2，n表示 0、1、2、3 或 4， P表示1、2、3或4。
6. 權(quán)利要求1的化合物及其藥學(xué)可接受的溶劑合物、鹽、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和 立體異構(gòu)體，包括它們按所有比例的混合物，其選自以下組：



7.制備根據(jù)權(quán)利要求1-6的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、對(duì)映異構(gòu) 體、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體的方法，其特征在于： a)為了制備式I的化合物， 其中 R表示NR4R4'且 R2表示NR3Cyc、NR3CR3CON(R3) 2、NR3[C(R3) 2]PCR3 (NH2)CH2OA或NR3[C(R3) 2]PN(R3) 2， 使式II的化合物與式III的化合物反應(yīng)
其中R1、!?4、R4'具有權(quán)利要求1中說明的含義， R2-NHR3III 其中R2和R3具有權(quán)利要求1中說明的含義， 或 b)為了制備式I的化合物， 其中 R表示H， 使式IV的化合物與式V的化合物反應(yīng)
其中R1、!?4、R4'具有權(quán)利要求1中說明的含義， R1-LV 其中R1具有權(quán)利要求1中說明的含義， 且L表示硼酸或硼酸酯基團(tuán)， 采用Suzuki類型偶聯(lián)， 和/或 式I的堿或酸轉(zhuǎn)化為其鹽中的一種。
8. 藥物，所述藥物包含至少一種式I的化合物和/或它們的藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑 合物、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括它們按所有比率的混合物，和任選的藥 學(xué)上可接受的載體、賦形劑或媒介物。
9. 式I的化合物和它們的藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和 立體異構(gòu)體，包括它們按所有比率的混合物，用于治療和/或預(yù)防炎性狀況、免疫學(xué)狀況、 自身免疫狀況、過敏性狀況、風(fēng)濕病狀況、血栓形成狀況、癌癥、感染、神經(jīng)退行性疾病、神經(jīng) 炎性疾病、心血管疾病和代謝狀況，所述方法包括給予有需要的受試者有效量的權(quán)利要求1 的化合物。
10. 權(quán)利要求9的化合物用于治療和/或預(yù)防癌癥， 其中所述要治療的癌癥為實(shí)體瘤或血液和免疫系統(tǒng)的瘤。
11. 權(quán)利要求10的化合物，其中所述實(shí)體瘤源自上皮、膀胱、胃、腎、頭頸、食道、子宮 頸、甲狀腺、腸、肝、腦、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系統(tǒng)、胃、喉、骨、胚芽細(xì)胞和/或肺的瘤， 所述骨瘤包括軟骨肉瘤和尤因肉瘤，所述胚芽細(xì)胞瘤包括胚胎組織瘤；所述實(shí)體瘤源自單 核細(xì)胞性白血病、肺腺癌、小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維瘤、血管肉瘤、乳腺 癌和/或惡性黑素瘤。
12. 權(quán)利要求9的化合物，用于治療和/或預(yù)防選自以下的疾病： 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)狼瘡、哮喘、多發(fā)性硬化、骨關(guān)節(jié)炎、缺血性損傷、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、 炎性腸疾病、糖尿病、囊性纖維變性、牛皮癬、斯耶格倫氏綜合征和移植器官排斥反應(yīng)。
13. 權(quán)利要求9的化合物，用于治療和/或預(yù)防選自以下的疾?。?阿爾茨海默病、唐氏綜合征、荷蘭型遺傳性大腦出血伴淀粉樣變性、大腦淀粉樣血管 病、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、額顳骨癡呆、亨廷頓舞蹈病、帕金森病。
14. 權(quán)利要求9的化合物，用于治療和/或預(yù)防選自以下的疾?。?利什曼蟲、包括麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae)、結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)和/或 鳥分枝桿菌（M.avium)的分枝桿菌（mycobacteria)、利什曼蟲、_原蟲、人免疫缺陷病毒、 EB病毒、皰疫單純病毒、丙肝病毒。
15. 藥物，所述藥物包含至少一種式I的化合物和/或它們的藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑 合物、對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括它們按所有比率的混合物，和至少一種 另外的藥物活性成分。
16. 套裝（試劑盒），其由以下單獨(dú)的包裝組成： (a) 有效量的式I的化合物和/或它們的藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、對(duì)映異構(gòu)體、 互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括它們按所有比率的混合物， 和 (b) 有效量的另外的藥物活性成分。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK104507942SQ201380041839
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2013年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月7日
【發(fā)明者】布格多夫 L., 庫恩 D., 羅斯 T., 多伊奇 C. 申請(qǐng)人:默克專利股份公司