一種可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法及應(yīng)用，可有效解決可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備及在制備光動力治療腫瘤藥物中的應(yīng)用問題，其解決的技術(shù)方案是，在富勒烯分子上通過化學(xué)鍵連接有聚乳酸，聚乳酸相對分子量為1,0000-1,8000，富勒烯為C60富勒烯，微球粒徑為1-10μm，本發(fā)明制備方法簡單，制備條件容易滿足，并且不會對富勒烯本身的特性進(jìn)行破壞，有效解決光動力治療和化療同時發(fā)揮腫瘤治療作用，是腫瘤治療藥物上的創(chuàng)新。
【專利說明】一種可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是一種可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]富勒烯(Fullerene)，又名C6tl，是碳元素的第三種同素異形體，是二十世紀(jì)重大發(fā)現(xiàn)之一。C6tl具有π電子體系，它可以吸收一定波長的光子能量，由基態(tài)變成激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的C6tl與組織內(nèi)的氧發(fā)生作用，催化活性氧的生成和超氧負(fù)自由基團(tuán)，這些產(chǎn)物與腫瘤細(xì)胞內(nèi)的大分子作用，損傷細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，從而殺傷腫瘤細(xì)胞。富勒烯作為光敏劑可用于腫瘤光動力治療(photodynamic therapy, PDT )治療。
[0003]光動力治療(photodynamic therapy, PDT )是指給予光敏劑之后,在一定波長的光照射下，才產(chǎn)生治療作用的一種新興的治療方法。PDT的優(yōu)勢在于能選擇性地消滅局部的原發(fā)、復(fù)發(fā)腫瘤卻不損傷正常組織，且可與放療、化療同時進(jìn)行，發(fā)揮一定的協(xié)同作用。
[0004]聚乳酸(PLA)是一種無毒、無刺激性、具有良好生物相容性的新型高分子材料，是以乳酸為單體經(jīng)縮聚反應(yīng) 合成的生物可降解高分子材料。它在生物體內(nèi)經(jīng)過酶分解，最終形成二氧化碳和水，在醫(yī)學(xué)上有很廣泛的應(yīng)用前景。
[0005]C6tl本身具有強(qiáng)烈的疏水性，難以在生理介質(zhì)中直接使用，并且通過物理吸附的藥物量有限，難以達(dá)到治療的需要量，用水溶性氨基酸對C6tl表面進(jìn)行化學(xué)修飾合成C6tl水溶性衍生物，保存了 C6tl的球形結(jié)構(gòu)和光敏性，在此基礎(chǔ)上將聚乳酸通過化學(xué)鍵連接在氨基酸上，可制備具有生物降解自團(tuán)聚功能的富勒烯聚乳酸聚合物。應(yīng)用富勒烯聚乳酸聚合物可以制備載藥滿足治療需要的富勒烯聚乳酸載藥微球，增加水溶性藥物在體內(nèi)的滯留時間，提高藥物在機(jī)體內(nèi)的穩(wěn)定性，同時C6tl本身具有光敏性，因此，富勒烯聚乳酸載藥微球不但具有化療性，同時具有光療性。那么，如何制備富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球至今未見有公開報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法及應(yīng)用，可有效解決可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備及在制備光動力治療腫瘤藥物中的應(yīng)用問題。
[0007]本發(fā)明解決的技術(shù)方案，在富勒烯分子上通過化學(xué)鍵連接有聚乳酸，聚乳酸相對分子量為1，0000-1，8000，富勒烯為C6tl富勒烯，微球粒徑為1-10 μ m，由以下步驟實現(xiàn):
I)將2.0-4.0g氨基酸和2.0-4.0g氫氧化鈉加到40-50mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4_5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種；
2)將富勒烯氨基酸衍生物10-20mg放入容器中，加入乳酸5-10mL，然后加入無水氯化亞錫6-12mg,通入氮氣(N2),室溫飽和5-10min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱lh，140-150°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4-5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾,如此重復(fù)操作3次,然后冷凍干燥,得富勒烯聚乳酸聚合物； 3)將富勒烯聚乳酸聚合物150-200mg，加入2_3mL二氯甲烷溶液中溶解，加入l_2ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻10-15min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散10min，80-120r/min低速下，攪拌2h，4°C放置lOmin，用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5_6次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
[0008]本發(fā)明方法所制備的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球可有效用于制備光動力治療腫瘤的藥物，制備方法簡單，制備條件容易滿足，并且不會對富勒烯本身的特性進(jìn)行破壞，有效解決光動力治療和化療同時發(fā)揮腫瘤治療作用，是腫瘤治療藥物上的創(chuàng)新。
【具體實施方式】
[0009]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的【具體實施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0010]實施例1
1)將2.0g氨基酸和2.0g氫氧化鈉加到40mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種；
2)將富勒烯氨基酸衍生物IOmg放入容器中，加入乳酸5mL，然后加入無水氯化亞錫6-12mg,通入氮氣(N2),室溫飽和5min,在抽真空環(huán)境中，110 °C油浴磁力攪拌下預(yù)熱Ih,140°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由
0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物；
3)將富勒烯聚乳酸聚合物150mg,加入2mL二氯甲燒溶液中溶解,加入Iml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻IOmin,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin, 80r/min低速下,攪拌2h,4°C放置IOmin,用
0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
[0011]實施例2
I)將2.5g氨基酸和2.5g氫氧化鈉加到42mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5:3，在4001./!^!!的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4.5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種；
2)將富勒烯氨基酸衍生物13mg放入容器中，加入乳酸6mL，然后加入無水氯化亞錫8mg,通入氮氣(N2),室溫飽和6min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱Ih,143°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4.5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由
0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物；
3)將富勒烯聚乳酸聚合物160mg，加入2mL二氯甲烷溶液中溶解，加入Iml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻12min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin, 90r/min低速下,攪拌2h,4°C放置IOmin,用
0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
[0012]實施例3
1)將3g氨基酸和3g氫氧化鈉加到45mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4.5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種；
2)將富勒烯氨基酸衍生物15mg放入容器中，加入乳酸8mL，然后加入無水氯化亞錫9mg,通入氮氣(N2),室溫飽和8min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱Ih,145°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4.5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由
0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物；
3)將富勒烯聚乳酸聚合物180mg，加入2.5mL 二氯甲烷溶液中溶解，加入1.5ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻13min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin，100r/min低速下，攪拌2h，4°C放置IOmin,用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
[0013]實施例4
1)將3.5g氨基酸和3.5g氫氧化鈉加到47mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種；
2)將富勒烯氨基酸衍生物18mg放入容器中，加入乳酸9mL，然后加入無水氯化亞錫Ilmg,通入氮氣(N2),室溫飽和9min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱Ih, 147°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物；
3)將富勒烯聚乳酸聚合物190mg，加入2.7mL 二氯甲烷溶液中溶解，加入1.8ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻14min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin，110r/min低速下，攪拌2h，4°C放置IOmin,用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗6次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
[0014]實施例5
1)將4.0g氨基酸和4.0g氫氧化鈉加到50mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種；
2)將富勒烯氨基酸衍生物20mg放入容器中，加入乳酸10mL，然后加入無水氯化亞錫12mg,通入氮氣(N2),室溫飽和IOmin,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱Ih,150°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由
0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜 抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物；
3)將富勒烯聚乳酸聚合物200mg，加入3mL二氯甲烷溶液中溶解，加入2ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻15min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin，120r/min低速下，攪拌2h，4°C放置lOmin，用
0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗6次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
[0015]場發(fā)射掃描電鏡下觀察富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球粒徑在5-10 μ m.將富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球水中分散后，光學(xué)顯微鏡下觀察，微球粒徑均勻，分散性好，無團(tuán)聚現(xiàn)象。
[0016]上述
【發(fā)明內(nèi)容】
部分以及實施例1-5給出的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球，具有光敏性，可有效用于制備光動力治療腫瘤的藥物，實現(xiàn)富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球在制備光動力腫瘤藥物中的應(yīng)用。并經(jīng)試驗取得了有益的技術(shù)效果，有關(guān)實驗資料如下:
本發(fā)明富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球具有光動力學(xué)治療腫瘤作用，可通過以下試驗證明。
[0017]將制得的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚微球溶分散于0.9%的氯化鈉注射液中，原位注射到荷瘤小鼠A腫瘤內(nèi)，給藥后每2天用光源B照射，光照時間30s，每6天給藥一次，隔天測量荷瘤小鼠A的腫瘤體積大小。[0018]上述步驟中的荷瘤小鼠A為:器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血癌，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦癌，小腸癌，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰道癌，睪丸癌，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。
[0019]上述步驟I中的光源B為:400-800nm的寬波長光源或者激光中的一種。優(yōu)選532nm激光。
[0020]本發(fā)明富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚微球進(jìn)行光動力學(xué)治療深部腫瘤時，這些光源不能夠穿透照射時，可通過適用部位的照射方法，來改善外部光源的穿透能力進(jìn)行腫瘤治療。
[0021]本發(fā)明富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球可以制成多種給藥途徑的藥物制劑劑型。比如:靜脈注射、肌內(nèi)注射、瘤內(nèi)注射、皮下植入等。本發(fā)明富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球可以加入各種制劑的添加劑，例如生理鹽水、葡萄糖、凍干保護(hù)劑等以便制成合適的劑型需要。
[0022]本發(fā)明富勒烯聚乳酸聚合物作為藥物載體在腫瘤治療中的應(yīng)用可通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn):
將制得的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥微球分散于0.9%的氯化鈉注射液中，原位注射到荷瘤小鼠A的瘤內(nèi)，每6天給藥一次，給藥后每2天用光源B照射腫瘤部位，光照時間30s，測量荷瘤小鼠A的腫瘤體積大小。
[0023]上述步驟中的荷瘤小鼠A為:器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血癌，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦癌，小腸癌，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰道癌，睪丸癌，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。
[0024]上述步驟中的光源B為:400-800nm的寬波長光源或者激光中的一種。優(yōu)選532nm激光。
[0025]本發(fā)明具有光療作用及化療作用在治療腫瘤中的應(yīng)用，經(jīng)過多次試驗，均取得良好試驗結(jié)果，相關(guān)實驗數(shù)據(jù)如下:
光照后，富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚微球體內(nèi)抗腫瘤活性測定。將B16-F10小鼠黑色素瘤細(xì)胞計數(shù)后，用生理鹽水稀釋成2X106個/mL細(xì)胞懸液，接種在小黑鼠右側(cè)腹部皮下。接種腫瘤7天后，取其中腫瘤體積>100mm3的小鼠，隨機(jī)分為8組，每組5只，具體分組如下:1)生理鹽水組2)生理鹽水光照組3)富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥微球光照組4)富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥微球。5)富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球組6)富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球光照組7)單純藥物組8)單純藥物光照組。8組均采用腫瘤原位注射給藥方式，其中光照組使用光源為523nm激光照射，功率為2W，給藥后每2天照射腫瘤部位，每次為30s。每6天給藥一次，每次注射藥物劑量為2.5mg/kg，每次注射100 μ L，共給藥2次。整個實驗過程每日觀察小鼠生活狀態(tài)，每2天稱小鼠體重并用游標(biāo)卡尺測量小鼠黑色素瘤的長徑(A)與短徑(B)，計算腫瘤體積.小鼠腫瘤增值率=(給藥組第11天瘤體積-給藥組第O天瘤體積)/ (對照組第11天瘤體積-對照組第O天瘤體積)X 100%。
[0026]經(jīng)證實，激光照射后，富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球組小鼠腫瘤增值率為39.93%，富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球組，小鼠腫瘤體積的增加得到了明顯抑制。非激光照射，富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚空白微球的加入不影響小鼠腫瘤體積的增加，小鼠腫瘤體積增值率100.67%。富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥微球光照組小鼠腫瘤體積的增加得到了明顯抑制甚至瘤體積明顯縮小，小鼠腫瘤增值率為-7.14%。而單純藥物組和單純藥物組光照組均不能明顯抑制小鼠腫瘤體積的增加，小鼠腫瘤體積增值率分別為98.17%和87.95%。
[0027]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下突出的有益技術(shù)效果:
1)本發(fā)明制備方法簡單，制備條件容易滿足，物理及化學(xué)穩(wěn)定性好，原料來源豐富，成本低，并且不會對富勒烯本身的特性進(jìn)行破壞；
2)本發(fā)明自團(tuán)聚成微球后具有光敏性，可用于抗腫瘤光動力學(xué)治療，光照時可發(fā)揮抗腫瘤活性，而不光照時，抗腫瘤活性較小；
3)本發(fā)明可作為藥物載體，有極小的毒性，生物相容性好，具有緩釋效果，可植入腫瘤部位給藥，延長水溶性藥物在瘤部位滯留時間，結(jié)合光照可發(fā)揮更為優(yōu)秀的抗腫瘤活性。測試結(jié)果表明，本發(fā)明制備的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球，粒徑均勻，凍干后，可以在水溶液中分散均勻 ，無粘連現(xiàn)象。是治療腫瘤藥物上的創(chuàng)新。
【權(quán)利要求】
1.一種可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法，其特征在于，在富勒烯分子上通過化學(xué)鍵連接有聚乳酸，聚乳酸相對分子量為1，0000-1, 8000,富勒烯為C6tl富勒烯，微球粒徑為Ι-?ο μ m,由以下步驟實現(xiàn): 1)將2.0-4.0g氨基酸和2.0-4.0g氫氧化鈉加到40-50mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4_5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種； 2)將富勒烯氨基酸衍生物10-20mg放入容器中，加入乳酸5-10mL，然后加入無水氯化亞錫6-12mg,通入氮氣,室溫飽和5-10min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱lh，140-150°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4-5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物； 3)將富勒烯聚乳酸聚合物150-200mg，加入2_3mL二氯甲烷溶液中溶解，加入l_2ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻10-15min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散10min，80-120r/min低速下，攪拌2h，4°C放置lOmin，用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5_6次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法，其特征在于，由以下步驟實現(xiàn): 1)將2.0g氨基酸和2.0g氫氧化鈉加到40mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種； 2)將富勒烯氨基酸衍生物IOmg放入容器中，加入乳酸5mL，然后加入無水氯化亞錫6-12mg,通入氮氣，室溫飽和5min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱lh,140°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物； 3)將富勒烯聚乳酸聚合物150mg,加入2mL二氯甲燒溶液中溶解,加入Iml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻IOmin,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin, 80r/min低速下,攪拌2h,4°C放置IOmin,用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法，其特征在于，由以下步驟實現(xiàn): 1)將2.5g氨基酸和2.5g氫氧化鈉加到42mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5:3，在4001./MIN的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4.5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種； 2)將富勒烯氨基酸衍生物13mg放入容器中，加入乳酸6mL，然后加入無水氯化亞錫8mg,通入氮氣，室溫飽和6min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱lh,143°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4.5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物； 3)將富勒烯聚乳酸聚合物160mg，加入2mL二氯甲烷溶液中溶解，加入1ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻12min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌10min,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin, 90r/min低速下,攪拌2h,4°C放置IOmin,用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法，其特征在于，由以下步驟實現(xiàn): 1)將3g氨基酸和3g氫氧化鈉加到45mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)4.5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種； 2)將富勒烯氨基酸衍生物15mg放入容器中，加入乳酸8mL，然后加入無水氯化亞錫9mg,通入氮氣,室溫飽和8min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱lh,145°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)4.5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物； 3)將富勒烯聚乳酸聚合物180mg，加入2.5mL 二氯甲烷溶液中溶解，加入1.5ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻13min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散10min，100r/min低速下，攪拌2h，4°C放置10min,用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗5次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法，其特征在于，由以下步驟實現(xiàn): 1)將3.5g氨基酸和3.5g氫氧化鈉加到47mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5: 3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種； 2)將富勒烯氨基酸衍生物18mg放入容器中，加入乳酸9mL，然后加入無水氯化亞錫Ilmg,通入氮氣，室溫飽和9min,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱lh, 147°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45μπι的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物； 3)將富勒烯聚乳酸聚合物190mg，加入2.7mL 二氯甲烷溶液中溶解，加入1.8ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻14min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin，110r/min低速下，攪拌2h，4°C放置IOmin,用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗6次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可植入的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球的制備方法，其特征在于，由以下步驟實現(xiàn): 1)將4.0g氨基酸和4.0g氫氧化鈉加到50mL水和無水乙醇的混合溶劑中，其中水和無水乙醇的體積比為8:30，攪拌均勻，再逐滴加入到60mL的富勒烯甲苯溶液中，其中富勒烯與甲苯的重量比為5:3，在400r/min的轉(zhuǎn)速下，室溫下，磁力攪拌反應(yīng)5h，除去上層的甲苯、水和無水乙醇的混合溶液，再經(jīng)無水乙醇的抽濾洗滌3次，真空干燥24h，得富勒烯氨基酸衍生物；所述的氨基酸為苯丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、亮氨酸、結(jié)氨酸中的任意一種； 2)將富勒烯氨基酸衍生物20mg放入容器中，加入乳酸10mL，然后加入無水氯化亞錫12mg,通入氮氣，室溫飽和IOmin,在抽真空環(huán)境中，110°C油浴磁力攪拌下預(yù)熱Ih, 150°C油浴磁力攪拌下反應(yīng)5h，反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解，再用去離子水沉淀，由0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，如此重復(fù)操作3次，然后冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸聚合物； 3)將富勒烯聚乳酸聚合物200mg，加入3mL二氯甲烷溶液中溶解，加入2ml抗腫瘤藥物水溶液，潤旋混勻15min,逐滴加入40mL甘油中，1200r/min磁力攪拌IOmin,將微球甘油液加入0.5%的明膠水溶液中，攪拌分散lOmin，120r/min低速下，攪拌2h，4°C放置lOmin，用0.45 μ m的混合纖維素脂微孔濾膜抽濾，再用去離子水反復(fù)沖洗6次，冷凍干燥，得富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥緩釋微球；所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、米托蒽醌、五氟尿嘧啶、甲氨蝶呤水溶性抗腫瘤藥物中的一種。
7.權(quán)利I或2-6任一項所述的方法制備的富勒烯聚乳酸自團(tuán)聚載藥微球具有光敏性，在制備光動力治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK103768598SQ201410006420
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月7日
【發(fā)明者】李志 , 張振中, 潘麗麗, 張飛龍, 祝俠麗, 夏亞丹, 閆淑娟 申請人:鄭州大學(xué)