多肽小分子及其在制備防治膀胱過度活躍藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。膀胱過度活躍臨床表現(xiàn)為尿頻、尿急，在神經(jīng)源性膀胱、膀胱過動癥、膀胱出口梗阻以及間質(zhì)性膀胱炎等多種疾病中都有表現(xiàn)。本發(fā)明的目的在于提供一種具有抑制P2X3受體活性的多肽小分子，該多肽小分子的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。本發(fā)明還提供了該多肽小分子在制備防治膀胱過度活躍藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】多肽小分子及其在制備防治膀胱過度活躍藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種具有降低周圍神經(jīng)末梢興奮性，緩解膀胱過度活躍作用的多肽小分子及其在制備防治膀胱過度活躍藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]膀胱過度活躍臨床表現(xiàn)為尿頻、尿急，在神經(jīng)源性膀胱、膀胱過動癥、膀胱出口梗阻以及間質(zhì)性膀胱炎等多種疾病中都有表現(xiàn)。在美國，約有790萬年齡超過18歲的婦女遭受這類疾病(Neuhaus J, Schwalenberg T.1ntravesical treatments of bladder painsyndrome/interstitial cystitis.Nat Rev Urol.2012Dec; 9 (12): 707-20.)。在亞洲，超過22.9%的30歲以上人群具有膀胱過度活躍的表現(xiàn)(Yoo ES, Kim BS, Kim DY, Oh SJ, KimJC.The impact of overactive bladder on health-related quality of life, sexuallife and psychological health in Korea.1nt Neurourol J.2011 Sep;15 (3):143-51.)。他們的生活質(zhì)量大大下降。
[0003]目前國內(nèi)外應(yīng)用于治療膀胱過度活躍的有效藥物很少，且具有遠(yuǎn)期藥效逐漸下降的趨勢。目前的臨床一線用藥是抗膽堿藥物(托特羅定，索利那新，達(dá)非那新等)，通過減少膀胱平滑肌收縮達(dá)到治療目的(Andersson KE.Drugs and future candidates.Can UrolAssoc J.2011 0ct;5(5Suppl2):S131-3.)，但這種藥物只比安慰劑對照組療效僅略有升高，其副作用(口干，便秘，視力模糊等)和治療效果的不足導(dǎo)致病人的依從性較差(CardozoL.The overactive bladder syndrome: treating patients on an individual basis.BJUInt.2007 Jun; 99 Suppl 3:1_7.)。因此，深入開展膀胱過度活躍的藥物防治研究具有重要意義。
[0004]P2X3是一種配體門控的離子通道型受體，在包括膀胱在內(nèi)的內(nèi)臟傳入神經(jīng)纖維上大量分布。尿路上皮可以分泌P2X3的內(nèi)源性配體ATP，并增強(qiáng)傳入神經(jīng)纖維的興奮性(Vlaskovska M, Kasakov L, Rong W，Bodin P, Bardini M, Cockayne DA, Ford AP, BurnstockG.P2X3 knock-out mice reveal a major sensory role for urothelially releasedATP.J Neurosc1.2001 Aug I; 21 (15): 5670-7.)。此外，在膀胱發(fā)生炎癥時，尿路上皮分泌的 ATP 也大大增加(Burnstock G.Targeting the visceral purinergic system for paincontrol.Curr Opin Pharmacol.2012 Feb;12 (I):80—6.)。
[0005]目前尚無有關(guān)通過多肽小分子抑制P2X3受體活性來緩解膀胱過度活動的的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種具有抑制P2X3受體活性的多肽，該多肽可以用于制備防治膀胱過度活躍藥物。
[0007]本發(fā)明的第一方面，是提供了一種多肽小分子，該多肽小分子的氨基酸序列如SEQID NO:1 所示。[0008]Met-Glu-Val-Leu-Pro-Lys-Ala-Leu-Glu-Val-Asp-Glu-Arg-Ser(SEQ ID NO:1)
[0009]該多肽小分子為14肽(SEQ ID NO:1)，具有抑制P2X3受體活性，并緩解膀胱過度活動的作用。
[0010]本發(fā)明的第二方面，是提供了上述的多肽小分子在制備預(yù)防或治療膀胱過度活躍藥物中的應(yīng)用。
[0011 ] 所述膀胱過度活躍是指尿頻或尿急。
[0012]本發(fā)明經(jīng)小鼠膀胱炎模型的藥理試驗，結(jié)果表明，如SEQ ID N0:1所示的多肽分子能顯著降低小鼠排尿次數(shù)，增加每次排尿體積。
[0013]本發(fā)明的多肽小分子可以按常規(guī)藥劑學(xué)制備成注射劑、片劑或膠囊劑。
[0014]本發(fā)明提供的多肽小分子具有在制備防治膀胱過度活躍藥物中良好的應(yīng)用前景。
【具體實施方式】
[0015]現(xiàn)結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的實施并不僅限于此。
[0016]本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得或可按文獻(xiàn)方法制備。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人《分子克隆:實驗室指南》(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0017]實施例1:多肽小分子的制備方法
[0018]1、14肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示:
[0019]Met-Glu-Val-Leu-Pro-Lys-Ala-Leu-Glu-Val-Asp-Glu-Arg-Ser
[0020]2、TAT穿膜肽氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示:
[0021 ] Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg
[0022]為了促進(jìn)多肽分子進(jìn)入胞漿，在I號多肽分子的C末端融合一段TAT穿膜妝(Schwarze SR,Ho A,Vocero-Akbani A,Dowdy SF.1n vivo proteintransduction: delivery of a biologicalIy active protein into the mouse.Science.1999 Sep 3;285 (5433):1569-72.)。
[0023]以上多肽分子由上海科肽生物科技有限公司合成，純度在95%以上。實施例2:多肽小分子對P2X3受體活性的抑制實驗
[0024]1、實驗方法
[0025]將pcDNA3.l_rP2X3 質(zhì)粒(pcDNA3.1 載體購自 Invitrogen 公司，rP2X3 從大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織中通過RT-PCR方法獲得，并克隆到pcDNA3.1載體上)與pEGFP_N2質(zhì)粒(購自Clontech公司)共轉(zhuǎn)入HEK293T細(xì)胞(購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心)，24~36小時后，細(xì)胞孵育多肽I小時。在熒光顯微鏡下，將具有EGFP綠色熒光的細(xì)胞認(rèn)為是同時表達(dá)有P2X3受體的細(xì)胞。
[0026]利用膜片鉗方法(《膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用》，康華光等編著，2013年第I版，科學(xué)出版社)記錄這些細(xì)胞表達(dá)的？2&受體電流大小。用ΙΟμΜ的α,β-meATP (購自Sigma-Aldrich公司)灌流細(xì)胞2秒，誘導(dǎo)出Ρ2Χ3受體電流。電流的記錄在30分鐘內(nèi)完成。
[0027]2、實驗分組
[0028]對照組:給予等體積的PBS孵育[0029]14肽組:給予10 μ M 14肽孵育
[0030]TAT肽組:給予10 μ M TAT穿膜肽孵育
[0031]3、實驗結(jié)果
[0032]表1: 14肽對Ρ2Χ3受體電流密度的影響
【權(quán)利要求】
1.一種多肽小分子，其特征在于，該多肽小分子的氨基酸序列如SEQ ID N0:1所不。
2.一種如權(quán)利要求1所述的多肽小分子在制備預(yù)防或治療膀胱過度活躍藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽小分子在制備預(yù)防或治療膀胱過度活躍藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述膀胱過度活躍是指尿頻或尿急。
【文檔編號】A61K38/10GK103788179SQ201410012044
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月10日
【發(fā)明者】何成, 高霄飛, 馮吉鋒, 王偉 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)