羥基喜樹堿納米脂束制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種具有主動(dòng)靶向功能的羥基喜樹堿納米脂束油劑、羥基喜樹堿納米脂束注射劑及其制備方法。所述羥基喜樹堿納米脂束油劑包含磷脂、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、甘油、丙二醇、乙醇和羥基喜樹堿和X-PEG-DSPE，所述X-PEG-DSPE選自葉酸-PEG-DSPE、膽酸-PEG-DSPE、CRGDK-PEG-DSPE、唾液酸-PEG-DSPE、低聚糖-PEG-DSPE。將所述羥基喜樹堿納米脂束油劑溶于注射用水性溶劑制成羥基喜樹堿納米脂束注射劑，其粒徑均勻，能降低羥基喜樹堿的毒性、具有長循環(huán)效果、能增強(qiáng)腫瘤靶向富集作用和增加病人順應(yīng)性。所述羥基喜樹堿納米脂束油劑及羥基喜樹堿納米脂束注射劑制備方法工藝簡單，能夠滿足臨床應(yīng)用的各種需要。
【專利說明】羥基喜樹堿納米脂束制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物納米脂束制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種具有主動(dòng)靶向功能的10-羥基喜樹喊納米脂束制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]作為一種細(xì)胞毒性生物堿,喜樹堿(camptothecin,CPT)于20世紀(jì)50年代從植物喜樹中被分離出來。與拓?fù)洚悩?gòu)酶1-DNA復(fù)合物結(jié)合，能夠抑制DNA超螺旋結(jié)構(gòu)松弛過程中的再連接步驟，進(jìn)而導(dǎo)致高拓?fù)洚悩?gòu)酶表達(dá)的腫瘤細(xì)胞凋亡。初期研究發(fā)現(xiàn)，不僅出血性膀胱炎和骨髓毒性的副作用阻礙了喜樹堿進(jìn)一步的應(yīng)用，而且其低的水溶性，也大大阻礙了其臨床中的應(yīng)用。
[0003]降低毒性、增加溶解性和提高藥效是喜樹堿類藥物發(fā)展的方向。通過對7、
9、10、11位的結(jié)構(gòu)改造，人們成功獲得了喜樹堿的一些列衍生物，如羥基喜樹堿(10-hydroxycamptothecin, HCPT)、9_ 氨基喜樹喊(9_aminocamptothecin)、9_ 硝基喜樹喊(9-nitrocamptothecin)、拓?fù)涮婵?topotecan)、依立替康(lrinotecan, CPT-11)、勒托替康(Iurtolecan)、DB-67 (7-t-butyldimethylsilyl-10-hydroxycamptothecin)等，這其中
10-羥基喜樹堿、拓?fù)涮婵?、伊立替康已用于臨床治療結(jié)腸癌、卵巢癌和小細(xì)胞肺癌。在這三種藥物中，羥基喜樹堿成本最低，以三周用藥為期，羥基喜樹堿約需要1700元，拓?fù)涮婵导s需要5065元,伊立替康價(jià)格最高,需要14000元左右。作為治療成本最低的喜樹堿類藥物，羥基喜樹堿具有最差的溶解性。這大大阻礙了其實(shí)際應(yīng)用。
[0004]臨床上應(yīng)用的羥基喜樹堿注射劑是借助PH8-9.5的水溶液實(shí)現(xiàn)其溶解性，但是在此PH環(huán)境下，大量羥基喜樹堿的藥效基團(tuán)，生物學(xué)功能較強(qiáng)的d—羥基一 δ —內(nèi)酯環(huán)打開，形成生物學(xué)功能較弱的羥酸鹽結(jié)構(gòu)。這些羥酸鹽結(jié)構(gòu)的喜樹堿衍生物，羥酸鹽結(jié)構(gòu)與血漿蛋白的結(jié)合力是內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的150倍。而這些與血漿蛋白結(jié)合的喜樹堿及其衍生物的抗腫瘤活性已經(jīng)下降至1/1000。因此，保證羥基喜樹堿的內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)的同時(shí)，增加其溶解性，降低其內(nèi)酯藥效基團(tuán)的不穩(wěn)定性，減少與血漿蛋白的高度結(jié)合性是充分發(fā)揮其抗腫瘤作用，拓展其臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。
[0005]作為不溶于水的物質(zhì)，羥基喜樹堿具有一定的脂溶性，并且在脂質(zhì)中溶解后，并不會(huì)發(fā)生內(nèi)酯開環(huán)現(xiàn)象。不僅如此，研究表明，包裹的喜樹堿制劑，例如囊泡、固體脂質(zhì)顆粒、脂質(zhì)體等不僅保持其閉環(huán)結(jié)構(gòu)，具有良好的抗癌活性，而且能夠有效的降低喜樹堿的毒性，延長血液中的滯留循環(huán)時(shí)間。隨著納米技術(shù)的快速發(fā)展，納米尺寸的藥物逐漸被開發(fā)研究，而且它們具有被動(dòng)靶向作用，在治療腫瘤方面也體現(xiàn)了獨(dú)特的優(yōu)勢。前期的研究發(fā)現(xiàn)，表面PEG化的脂質(zhì)體能夠躲避體內(nèi)巨噬細(xì)胞的吞噬，延長循環(huán)時(shí)間。因此，納米尺寸、表面PEG化的藥物有望在延長循環(huán)時(shí)間、提高藥效、降低毒性方面展示獨(dú)特的優(yōu)勢。
[0006]較普通制 劑而言，微乳具有熱力學(xué)穩(wěn)定、單相、成品較透明和自乳化的特點(diǎn)。PEG表面化的納米脂束能夠兼具長循環(huán)、隱形和立體穩(wěn)定的特點(diǎn)，對減少巨唾細(xì)胞吞噬、提高藥物靶向性、阻礙血液蛋白成分與磷脂的結(jié)合等具有重要的作用。然而，如何將目的藥物即羥基喜樹堿、增溶劑以及實(shí)現(xiàn)表面PEG化和靶向性的試劑制成微乳，在實(shí)踐中遇到了很大困難。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明借助磷脂、甘油、丙二醇、乙醇、新型聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯(Solutol HS15)的組合和配比，以及制備步驟，實(shí)現(xiàn)了表面PEG的羥基喜樹堿脂束納米藥物的制備。制備工藝簡單，能滿足臨床應(yīng)用的各種需求，對造福于廣大的癌癥患者具有重大意義。
[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種具有主動(dòng)靶向功能的羥基喜樹堿納米脂束油劑、羥基喜樹堿納米脂束注射劑及其制備方法。所述羥基喜樹堿納米脂束注射劑粒徑均勻，能降低羥基喜樹堿的毒性，具有長循環(huán)效果，能增強(qiáng)主動(dòng)腫瘤靶向富集作用和增加病人順應(yīng)性；所述制備方法工藝簡單，用簡單、可重復(fù)性高的制備方法在納米脂束中引入主動(dòng)靶向基團(tuán)，能夠滿足臨床應(yīng)用的各種需要。
[0009]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用以下技術(shù)方案:
[0010]在第一方面，本發(fā)明提供一種羥基喜樹堿納米脂束油劑，包含磷脂、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、甘油、丙二醇、乙醇，X-PEG-DSPE (X為葉酸、膽酸、CRGDK、唾液酸、低聚糖等)和羥基喜樹堿。
[0011]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述制劑包含4-8重量份磷脂、10-20重量份聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、5-15重量份甘油、10-20重量份乙醇、4-8重量份丙二醇、0.1-0.4重量份輕基喜樹堿和 0.01-10.00 份 X-PEG-DSPE。
[0012]在具體實(shí)施方案中，所述油劑中磷脂的含量可以是例如5重量份、6重量份或7重量份；聚乙二醇-十二 羥基硬脂酸酯的含量可以是例如12重量份、14重量份、16重量份或18重量份；甘油的含量可以是例如7重量份、9重量份、11重量份或13重量份；乙醇的含量可以是例如12重量份、14重量份、16重量份或18重量份；羥基喜樹堿的含量可以是例如0.2重量份、0.3重量份、0.15重量份；X-PEG-DSPE的含量可以是例如0.5重量份、I重量份、5重量份或9重量份。
[0013]在第二方面，本發(fā)明提供一種羥基喜樹堿納米脂束注射劑，其包括第一方面所述的羥基喜樹堿納米脂束油劑和注射用水性溶劑。
[0014]在本發(fā)明中，所使用注射用水性溶劑是主要基質(zhì)為水的含溶質(zhì)或不含溶質(zhì)的能夠用于注射的溶劑，不作特別地限定。
[0015]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述注射用水性溶劑選自生理鹽水、葡萄糖注射劑和注射用水。
[0016]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述注射用水性溶劑的體積是所述羥基喜樹堿納米脂束油劑體積的5-100倍，例如6倍、8倍、10倍、15倍、20倍、30倍、50倍、70倍、80倍或90倍，優(yōu)選
5-80倍，更優(yōu)選10-20倍。
[0017]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述羥基喜樹堿納米脂束注射劑還包含注射用輔料，例如pH調(diào)節(jié)劑，所述卩^1調(diào)節(jié)劑選自檸檬酸、乳酸、山梨糖醇、似20)3、似0!1、順4(:1、似!10)3或0&(0!1)2。
[0018]在具體實(shí)施方案中，所述羥基喜樹堿納米脂束注射劑通過靜脈注射、肌肉注射、皮下注射等常規(guī)給藥方式給藥。
[0019]在第三方面，本發(fā)明提供一種制備如第一方面所述的羥基喜樹堿納米脂束油劑的方法，包括:
[0020]將磷脂、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、甘油、乙醇、丙二醇和羥基喜樹堿混合，配成澄清透明溶液。
[0021]在本發(fā)明制備羥基喜樹堿納米脂束油劑的方法中，配制所述澄清透明溶液的方法有多種，可以將磷脂、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、X-PE⑶SPE (X為葉酸、膽酸、CRGDK、唾液酸、低聚糖等)、甘油、乙醇、丙二醇和羥基喜樹堿混合在一起，借助磁力攪拌、機(jī)械攪拌、超聲、加熱、勻漿器勻漿或其組合等外力作用得到澄清透明溶液。在具體實(shí)施方案中，可以將上述配方中的成分一次性全部加入容器中進(jìn)行混合處理，也可以先加一部分配方中的物質(zhì)，攪拌均勻后，再加另一部分并混合處理得到澄清透明溶液。為方便生產(chǎn)中的儲(chǔ)存與實(shí)際操作，兩種優(yōu)選的配制本發(fā)明制劑的方法如下:
[0022]第一種方法具體為:
[0023](I)將磷脂與丙二醇混合溶解，配成第一溶液；
[0024](2)將聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、甘油、乙醇、X-PE⑶SPE、乙醇和羥基喜樹堿混合溶解，配成第二溶液；
[0025](3)將所述第一溶液與所述第二溶液混合，攪拌混勻得到所述澄清透明溶液。
[0026]第二種方法具體為:
[0027](I)將磷脂與乙醇混合溶解，配成第一溶液；
[0028](2)將聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、X-PE⑶SPE、甘油、丙二醇、乙醇和羥基喜樹堿混合溶解，配成第二溶液；
[0029](3)將所述第一溶液與所述第二溶液混合，攪拌混勻得到所述澄清透明溶液。
[0030]本發(fā)明中，澄清透明溶液是一般意義上的概念，即肉眼不可見顆粒物或析出物的存在，激光照射下，沒有丁達(dá)爾現(xiàn)象的發(fā)生，紫外吸收光譜中不會(huì)有源于顆粒散射所導(dǎo)致的消光。
[0031]本發(fā)明配制的澄清透明溶液即羥基喜樹堿納米脂束油劑，可以在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下密封保存，如果配制的澄清透明溶液馬上進(jìn)行自乳化也可以不密封保存。
[0032]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述羥基喜樹堿納米脂束油劑含4-8重量份磷脂、10-20重量份聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、5-15重量份甘油、10-20重量份乙醇、4-8重量份丙二醇、0.1-0.4重量份羥基喜樹堿和0.01-10.00份X-PEG-DSPE。
[0033]在具體實(shí)施方案中，所述羥基喜樹堿納米脂束油劑中磷脂的含量可以是例如5重量份、6重量份或7重量份；聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯的含量可以是例如12重量份、14重量份、16重量份或18重量份；甘油的含量可以是例如7重量份、9重量份、11重量份或13重量份；乙醇的含量可以例如是12重量份、14重量份、16重量份或18重量份；丙二醇的含量可以是例如5重量份、6重量份或7重量份；羥基喜樹堿的含量可以是例如0.2重量份、0.3重量份、0.15重量份；X-PEG-DSPE的含量可以是例如0.5重量份、I重量份、5重量份或9重量份。
[0034]在第四方面，本發(fā)明提供一種制備如第二方面所述的羥基喜樹堿納米脂束注射劑的方法，包括:
[0035]用注射用水性溶劑稀釋如第二方面所述的羥基喜樹堿納米脂束油劑，自乳化得到所述羥基喜樹堿納米脂束注射劑。[0036]本發(fā)明中，所述自乳化過程，根據(jù)需要可借助外力，比如輕柔或劇烈震蕩。
[0037]本發(fā)明制備羥基喜樹堿納米脂束注射劑的方法中，注射用水性溶劑是主要基質(zhì)為水的含溶質(zhì)或不含溶質(zhì)的能夠用于注射的溶劑，不作特別地限定。
[0038]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述注射用水性溶劑選自生理鹽水、葡萄糖注射劑和注射用水。
[0039]作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述注射用水性溶劑的體積是所述羥基喜樹堿納米脂束油劑的5-100倍，例如6倍、8倍、10倍、15倍、20倍、30倍、50倍、70倍、80倍或90倍，優(yōu)選5-80倍，更優(yōu)選10-20倍。
[0040]注射用水性溶劑的溫度是本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定的，一般室溫即可，本發(fā)明所用的注射用水性溶劑的溫度可以是0-80°C范圍內(nèi)的任意溫度，優(yōu)選0-40°C范圍內(nèi)的任意溫度。
[0041]為儲(chǔ)存的方便，本發(fā)明制備得到的羥基喜樹堿納米脂束注射劑，可以選擇凍干等再加工工藝進(jìn)行后續(xù)處理，并不影響所述納米脂束藥物的再分散和使用，所涉及工藝可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，并直接應(yīng)用于大批量藥物生產(chǎn)開發(fā)。
[0042]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明配制出羥基喜樹堿納米脂束油劑(澄清透明溶液);經(jīng)在注射用水性溶劑中的自乳化過程后，得到具有主動(dòng)靶向功能的羥基喜樹堿納米脂束注射劑，其微乳粒徑分布均勻，能降低羥基喜樹堿的毒性、具有長循環(huán)效果、能增強(qiáng)腫瘤主動(dòng)和被動(dòng)靶向富集作用和增加病人順應(yīng)性；本發(fā)明填補(bǔ)了主動(dòng)靶向功能羥基喜樹堿納米脂束藥物的空白，所發(fā)展的配方工藝簡單，可滿足臨床應(yīng)用的各種需要。 【專利附圖】
【附圖說明】
[0043]圖1為本發(fā)明羥基喜樹堿納米脂束油劑的制備及經(jīng)自乳化過程后得到羥基喜樹堿注射劑的過程示意圖。
[0044]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1經(jīng)生理鹽水自乳化過程后得到的羥基喜樹堿納米脂束注射劑的動(dòng)態(tài)光散射結(jié)果，顯示其粒徑均勻。
[0045]圖3為本發(fā)明實(shí)施例1經(jīng)生理鹽水自乳化過程后得到的羥基喜樹堿納米脂束注射劑的透射電鏡照片。
[0046]圖4為皮下荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)取得的實(shí)體瘤樣本熒光照片，注射A (生理鹽水)的小鼠的腫瘤無熒光；注射B (注射連接有熒光分子的羥基喜樹堿納米脂束)的小鼠的腫瘤有微弱熒光；注射C (連接有熒光分子并含有葉酸-PEGDSPE的羥基喜樹堿納米脂束)的小鼠的腫瘤的突光明顯強(qiáng)于B。
【具體實(shí)施方式】
[0047]下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，以下實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，以便于更好地理解本發(fā)明，因而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換或改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所用的實(shí)驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑廠商購買得到的。[0048]本發(fā)明制備羥基喜樹堿納米脂束注射劑的工藝過程示意圖如圖1所示，不拘先后順序加入羥基喜樹堿、磷脂、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、X-PE⑶SPE、丙二醇、甘油和乙醇(助劑)混合均勻配制成羥基喜樹堿納米脂束藥物前體，然后加入注射用水性溶劑進(jìn)行自乳化得到羥基喜樹堿納米脂束注射劑。
[0049]制備例I
[0050]一、羥基喜樹堿納米脂束油劑的制備
[0051]1、稱取0.8g磷脂(德國Lipoid公司)和0.8g丙二醇，溶解，得到溶液A。
[0052]2、稱取 0.025g 羥基喜樹堿、3.0g 乙醇、3.8g Solutol HS15 (德國 BASF 公司)、0.038g葉酸-PE⑶SPE、2.6g甘油，常溫溶解，得到溶液B。
[0053]3、將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢琛⒒靹?，得到澄清透明羥基喜樹堿納米脂束油劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
[0054]二、羥基喜樹堿納米脂束注射劑的制備 [0055]將步驟一制備的羥基喜樹堿納米脂束油劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到羥基喜樹堿納米注射劑。
[0056]三、羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳粒徑測定
[0057]用英國Malven儀器公司的ZS90儀器檢測羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳粒徑，結(jié)果如圖2所示，羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳粒徑在98nm左右。
[0058]本實(shí)施例制備的羥基喜樹堿納米脂束注射劑的透射電鏡照片如圖3所示，顯示制備的羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳為粒徑均勻的納米顆粒。
[0059]制備例2
[0060]一、羥基喜樹堿納米脂束油劑的制備
[0061]1、稱取0.9g磷脂(德國Lipoid公司)和3.0g乙醇，溶解，得到溶液A。
[0062]2、稱取 0.02g 羥基喜樹堿、0.9g 丙二醇、3.6g Solutol HS15 (德國 BASF 公司)、50mg膽酸-PE⑶SPE、1.6g甘油，溶解，得到溶液B。
[0063]3、將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢?、混勻，得到澄清透明羥基喜樹堿納米脂束油劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
[0064]二、羥基喜樹堿納米脂束注射劑的制備
[0065]將步驟一制備的羥基喜樹堿納米脂束油劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到羥基喜樹堿納米脂束注射劑，所述注射劑呈乳狀液。
[0066]三、羥基喜樹堿納米注射劑的微乳粒徑測定
[0067]用英國Malven儀器公司的ZS90儀器檢測羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳粒徑，結(jié)果與圖2類似。
[0068]制備例3
[0069]一、羥基喜樹堿納米脂束油劑的制備
[0070]1、稱取1.0g磷脂(德國Lipoid公司)和1.0g丙二醇，溶解，得到溶液A。
[0071]2、稱取 0.025g 羥基喜樹堿、3.6g 乙醇、3.8g Solutol HS15(德國 BASF 公司)、60mg唾液酸-PE⑶SPE、1.6g甘油，常溫溶解，得到溶液B。
[0072]3、將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢?、混勻，得到澄清透明羥基喜樹堿納米脂束油劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。[0073]二、羥基喜樹堿納米脂束注射劑的制備
[0074]將步驟一制備的羥基喜樹堿納米脂束油劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到羥基喜樹堿納米脂束注射劑，所述注射劑呈乳狀液。
[0075]三、羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳粒徑測定
[0076]用英國Malven儀器公司的ZS90儀器檢測羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳粒徑，結(jié)果與圖2類似。
[0077]制備例4
[0078]一、羥基喜樹堿納米脂束油劑的制備
[0079]稱取0.9g磷脂(德國Lipoid公司)、0.025g羥基喜樹堿、1.6g無水乙醇、3.6gSolutol HS15 (德國BASF公司)、0.038g葉酸-PE⑶SPE、2.6g甘油和0.01g檸檬酸攪拌溶解，得到溶液澄清透明的羥基喜樹堿納米脂束油劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。結(jié)果類似圖2，羥基喜樹堿納米脂束油劑為澄清透明液體。
[0080]二、羥基喜樹堿納米脂束注射劑的制備
[0081]將步驟一制備的羥基喜樹堿納米脂束油劑用20倍體積的葡萄糖注射劑稀釋，得到羥基喜樹堿納米脂束注射劑，所述注射劑呈乳狀液。
[0082]三、羥基喜樹堿納 米脂束注射劑的微乳粒徑測定
[0083]用英國Malven儀器公司的ZS90儀器檢測羥基喜樹堿納米脂束注射劑的微乳粒徑，結(jié)果類似圖2。
[0084]對比制備例I
[0085]本發(fā)明公開了制備具有主動(dòng)靶向功能的羥基喜樹堿納米脂束藥物所需的組成、配比及步驟，如果不采用本發(fā)明的制備方法，則很難獲得所述藥物，舉例如下:
[0086]一、羥基喜樹堿納米脂束油劑的制備
[0087]1、稱取1.0g磷脂(德國Lipoid公司)和1.5g乙醇，溶解，得到溶液A。
[0088]2、稱取 0.014g 羥基喜樹堿、3.4g Solutol HS15 (德國 BASF 公司)、
0.040gCRGDK-PE⑶SPE、2.1g甘油，溶解，得到渾濁溶液B。
[0089]3、將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢?、混勻，得到渾濁羥基喜樹堿溶液。
[0090]二、羥基喜樹堿納米脂束注射劑的制備
[0091]將步驟一制備的羥基喜樹堿納米脂束油劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，不能得到羥基喜樹堿納米脂束。
[0092]效果例
[0093]按照以下方法制備不帶有葉酸靶向基團(tuán)的羥基喜樹堿納米脂束(配方中不含有葉酸-PE⑶SPE):
[0094]1、稱取0.8g磷脂(德國Lipoid公司)和0.8g丙二醇，溶解，得到溶液I。
[0095]2、稱取 0.025g 羥基喜樹堿、3.0g 乙醇、3.8g Solutol HS15(德國 BASF 公司)、2.6g甘油，常溫溶解，得到溶液2。
[0096]3、將溶液I和溶液2混合，室溫?cái)嚢?、混勻，得到澄清透明羥基喜樹堿納米脂束油劑，氣氣保護(hù)，S封保存。
[0097]將按照上述方法制備的不帶有葉酸靶向基團(tuán)的羥基喜樹堿納米脂束，加入DiR染料乙醇溶液，用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到羥基喜樹堿納米脂束注射劑B。[0098]按照制備例I的方法制備帶有葉酸靶向基團(tuán)的羥基喜樹堿納米脂束，加入DiR染料乙醇溶液，用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到羥基喜樹堿納米脂束注射劑C。
[0099]A為生理鹽水。
[0100]取三只皮下荷瘤小鼠，分別注射A、B、C，24小時(shí)后取出實(shí)體瘤，用多光譜小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)(CRI Maestro2)觀察腫瘤處藥物富集效果，發(fā)現(xiàn)注射A (生理鹽水)的小鼠的腫瘤無熒光；注射B (注射連接有熒光分子的羥基喜樹堿納米脂束)的小鼠的腫瘤有微弱熒光；注射C (連接有熒光分子并含有葉酸-PEGDSPE的羥基喜樹堿納米脂束)的小鼠的腫瘤的熒光明顯強(qiáng)于B，表明具有主動(dòng)靶向功能的羥基喜樹堿納米脂束具有最優(yōu)地聚集于腫瘤部位的效果，從而發(fā)生可預(yù)見的最優(yōu)的腫瘤殺傷效果，同時(shí)降低對于其他組織的毒性。
[0101]本發(fā)明通過上述實(shí)施例制備得到具有主動(dòng)靶向功能的羥基喜樹堿納米脂束注射劑，其能降低羥基喜樹堿的毒性、具有長循環(huán)效果、能增強(qiáng)腫瘤主動(dòng)和被動(dòng)靶向富集作用和增加病人順應(yīng)性。
[0102]以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0103]另外需要說明的是，在上述【具體實(shí)施方式】中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。
[0104]此外，本發(fā)明的各種不 同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。
【權(quán)利要求】
1.一種羥基喜樹堿納米脂束油劑，含有磷脂、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、甘油、乙醇、丙二醇、羥基喜樹堿和X-PEG-DSPE，所述X-PEG-DSPE選自葉酸-PEG-DSPE、膽酸-PEG-DSPE、CRGDK-PEG-DSPE、唾液酸-PEG-DSPE、低聚糖-PEG-DSPE，以及其他具有主動(dòng)靶向功能的包含PEG-DSPE結(jié)構(gòu)的基團(tuán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基喜樹堿納米脂束油劑，其特征在于，所述羥基喜樹堿納米脂束油劑包含4-8重量份磷脂、10-20重量份聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、5-15重量份甘油、10-20重量份乙醇、4-8重量份丙二醇、0.1-0.4重量份羥基喜樹堿和0.01-2.00重量份所述 X-PEG-DSPE。
3.一種羥基喜樹堿納米脂束注射劑，包含根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的羥基喜樹堿納米脂束油劑和注射用水性溶劑；優(yōu)選地，所述羥基喜樹堿納米脂束注射劑還包含其它注射用輔料；優(yōu)選地，所述其它注射用輔料為pH調(diào)節(jié)劑；優(yōu)選地，所述pH調(diào)節(jié)劑選自檸檬酸、乳酸、山梨糖醇、Na2CO3^ NaOH, NH4C1、NaHCO3 或 Ca (OH)20
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的羥基喜樹堿納米脂束注射劑，其特征在于，所述注射用水性溶劑的體積是所述羥基喜樹堿納米脂束油劑體積的5-100倍，優(yōu)選5-80倍，更優(yōu)選10-20倍；優(yōu)選地，所述注射用水性溶劑選自生理鹽水、葡萄糖注射劑和注射用水。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的羥基喜樹堿納米脂束注射劑，其特征在于，所述羥基喜樹堿納米脂束注射劑通過靜脈注射、肌肉注射、皮下注射方式給藥。
6.一種制備權(quán)利要求1-5之一所述的羥基喜樹堿納米脂束油劑的方法，包括: 將磷脂、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、甘油、乙醇、丙二醇、羥基喜樹堿、X-PEG-DSPE混合，配成澄清透明溶液，所述X-PEG-DSPE選自葉酸-PEG-DSPE、膽酸-PEG-DSPE、CRGDK-PEG-DSPE、唾液酸-PEG-DSPE、低聚糖-PEG-DSPE。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟具體為: (1)將磷脂與乙醇混合溶解，配成第一溶液； (2)將聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、X-PEG-DSPE、甘油、丙二醇和羥基喜樹堿混合溶解，配成第二溶液； (3)將所述第一溶液與所述第二溶液混合，攪拌混勻得到所述澄清透明溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟具體為: (1)將磷脂與丙二醇混合溶解，配成第一溶液； (2)將聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、X-PEG-DSPE、甘油、乙醇和羥基喜樹堿混合溶解，配成第二溶液； (3)將所述第一溶液與所述第二溶液混合，攪拌混勻得到所述澄清透明溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)的方法，其特征在于，所述羥基喜樹堿納米脂束油劑包含4-8重量份磷脂、10-20重量份聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯、5-15重量份甘油、10-20重量份乙醇、4-8重量份丙二醇、0.1-0.4重量份羥基喜樹堿和0.01-10.00份X-PEG-DSPE。
10.一種制備羥基喜樹堿納米脂束注射劑的方法，包括: 用注射用水性溶劑稀釋根據(jù)權(quán)利要求6-9任一項(xiàng)所述的羥基喜樹堿納米脂束油劑，自乳化得到所述羥基喜樹堿納米脂束注射劑； 優(yōu)選地，所述注射用水性溶劑選自生理鹽水、葡萄糖注射劑和注射用水； 優(yōu)選地，所述注射用水性溶劑的體積是 所述羥基喜樹堿納米脂束油劑的體積的5-100倍，優(yōu)選5-80倍，更優(yōu)選10-20倍。優(yōu)選地，所述注射用水性溶劑包 含注射用輔料；優(yōu)選地，所述注射用輔料為PH調(diào)節(jié)劑；優(yōu)選地，所述pH調(diào)節(jié)劑選自檸檬酸、乳酸、山梨糖醇、Na2CO3、NaOH、NH4Cl、NaHCO3或Ca (OH) 2。
【文檔編號】A61P35/00GK103784965SQ201410016965
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月14日
【發(fā)明者】梁興杰, 趙元元, 陳飛, 馬曉溦, 李盛亮, 薛向東, 柳娟, 金叔斌, 李鴻基, 張吉梅, 王義峰, 甘雅玲, 姜永剛 申請人:國家納米科學(xué)中心