甲磺酸去鐵胺佐劑及含甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種甲磺酸去鐵胺佐劑及含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗。所述含甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗是：每單份疫苗劑中含有0.6～8mg的甲磺酸去鐵胺佐劑。甲磺酸去鐵胺佐劑長(zhǎng)期應(yīng)用于臨床治療，毒副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用是安全可靠的，能夠有效誘導(dǎo)抗原特異性的體液免疫應(yīng)答，且所誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答效果優(yōu)于無(wú)佐劑組，甲磺酸去鐵胺佐劑原料易得，為市售產(chǎn)品，制備工藝簡(jiǎn)單，成本低，性能穩(wěn)定，可添加于多種傳統(tǒng)疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑。
【專(zhuān)利說(shuō)明】甲磺酸去鐵胺佐劑及含甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及一種甲磺酸去鐵胺佐劑及含該佐劑的疫苗，屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0003]近年來(lái)，隨著疫苗研究的不斷深入，特別是分子生物技術(shù)的迅速發(fā)展，研制出的新型基因工程疫苗純度高、特異性強(qiáng)，但分子小，免疫原性相對(duì)較弱，難以產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。因此應(yīng)用佐劑來(lái)增強(qiáng)其免疫原性就顯得尤為重要。
[0004]目前，已認(rèn)證應(yīng)用于人類(lèi)的佐劑仍寥寥無(wú)幾，鋁鹽佐劑就是其中之一。鋁鹽佐劑在提高抗體水平和安全方面已獲得長(zhǎng)期的實(shí)踐證實(shí)，但由于其可引起過(guò)敏、誘導(dǎo)退行性神經(jīng)病變等缺點(diǎn)，迫切需要開(kāi)發(fā)新型疫苗佐劑以克服這些缺陷，更好的為人類(lèi)服務(wù)。
[0005]甲磺酸去鐵胺(Deferoxamine，DF0)是放線菌屬毛鏈霉菌產(chǎn)生的細(xì)菌性鐵載體，臨床上用來(lái)治療鐵中毒，通過(guò)與三價(jià)鐵離子形成大分子鐵胺復(fù)合物，從尿及糞便中排出，防止體內(nèi)鐵超負(fù)荷和鐵沉著于各器官，進(jìn)而減少因鐵超負(fù)荷促進(jìn)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和自由基的生成，減輕溶血。
[0006]研究發(fā)現(xiàn)甲磺酸去鐵胺在常氧條件下能誘導(dǎo)低氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-1nducible factor,HIF-1)的表達(dá)并促其穩(wěn)定。低氧誘導(dǎo)因子-1是一種隨著細(xì)胞內(nèi)氧濃度變化而調(diào)芐基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄激活因子，具有DNA結(jié)合活性，低氧時(shí)在組織細(xì)胞中廣泛表達(dá)，如腎、肝、肺、腦、心等細(xì)胞系，并對(duì)低氧誘導(dǎo)基因，如促紅細(xì)胞生成素(EPO)、糖酵解酶和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)等的活化起關(guān)鍵作用。
[0007]由于人體存在氧濃度梯度，在感染和受損傷的部位氧濃度相當(dāng)?shù)?，因而免疫系統(tǒng)的效應(yīng)細(xì)胞需要在一個(gè)比較寬的氧壓范圍內(nèi)發(fā)揮功能，這就需要通過(guò)HIF的活化來(lái)調(diào)節(jié)各類(lèi)免疫細(xì)胞的功能，使得其能夠在低氧狀態(tài)下發(fā)揮有效作用。低氧誘導(dǎo)因子-1的作用主要有以下幾方面:1，提高免疫細(xì)胞的存活力，低氧誘導(dǎo)因子-1通過(guò)提高糖酵解酶的表達(dá)增強(qiáng)糖酵解反應(yīng)以提高ATP的供應(yīng)，同時(shí)也促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和促紅細(xì)胞生成素的表達(dá)，促進(jìn)血管和紅細(xì)胞新生。2，增強(qiáng)免疫細(xì)胞的殺菌能力，吞噬細(xì)胞對(duì)病原菌的識(shí)別、吞噬和消化能力也能夠被低氧誘導(dǎo)因子-1所增強(qiáng)。3，對(duì)炎癥反應(yīng)的影響，吞噬細(xì)胞內(nèi)低氧誘導(dǎo)因子-1對(duì)動(dòng)物炎癥反應(yīng)的發(fā)生是必需的。低氧誘導(dǎo)因子-1在天然免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中都具有重要作用，由此我們可推測(cè)HIF-1具有免疫增強(qiáng)作用，因而其在常氧條件下的誘導(dǎo)劑甲磺酸去鐵胺可間接發(fā)揮免疫增強(qiáng)作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]為解決現(xiàn)有疫苗佐劑存在的毒副作用、價(jià)格昂貴等問(wèn)題，本發(fā)明提供一種安全、有效、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)的甲磺酸去鐵胺佐劑。
[0009] 發(fā)明還提供含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗。[0010]本發(fā)明所述甲磺酸去鐵胺在制備疫苗佐劑中的應(yīng)用。
[0011]所述甲磺酸去鐵胺為市購(gòu)醫(yī)用產(chǎn)品，分子式為C26H52N6O11S,分子量為656.80，結(jié)構(gòu)式如圖1所示，在人體中推薦劑量為每200 μ L疫苗液中的甲磺酸去鐵胺用量不超過(guò)500mg，優(yōu)選0.6~8mg。
[0012]本發(fā)明提供的含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有
0.6~8mg甲磺酸去鐵胺。
[0013]所述每單份疫苗劑為臨床或者動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中使用的常規(guī)單次注射參考量。
[0014]本發(fā)明提供的含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗經(jīng)過(guò)下列方法制備:
按每單份疫苗劑加入0.6~8mg甲磺酸去鐵胺的量，在疫苗中加入甲磺酸去鐵胺，再加生理鹽水至100 - 200ul，按常規(guī)混合，得含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗。
[0015]所述疫苗為常規(guī)甲肝抗原、乙肝抗原、狂犬病毒抗原中的一種。
[0016]甲磺酸去鐵胺佐劑能顯著增強(qiáng)抗原特異性的體液免疫反應(yīng)。
[0017]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果:(1)甲磺酸去鐵胺佐劑應(yīng)用于臨床治療，毒副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用是安全可靠的；(2)甲磺酸去鐵胺佐劑能夠有效的誘導(dǎo)抗原特異性的體液免疫應(yīng)答，且其所誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答效果優(yōu)于無(wú)佐劑組；(3)甲磺酸去鐵胺佐劑原料易得，為市售產(chǎn)品，制備工藝簡(jiǎn)單，成本低，性能穩(wěn)定，可添加于多種傳統(tǒng)疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑；(4)甲磺酸去鐵胺佐劑與疫苗聯(lián)合應(yīng)用能有效增強(qiáng)疫苗體液免疫應(yīng)答，免疫效果優(yōu)于無(wú)佐劑的疫苗。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018]圖1為甲磺酸去鐵胺分子結(jié)構(gòu)式。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。文中所述的較佳條件實(shí)施方法僅作示范之用。
[0020]實(shí)施例1
本實(shí)施例提供的甲磺酸去鐵胺佐劑用量為lmg。
[0021]本實(shí)施例提供的含有甲磺酸去鐵胺佐劑的甲肝疫苗是:在每單份HAV抗原(SP動(dòng)物實(shí)驗(yàn)小鼠使用的單次注射劑量)中，加入Img的甲磺酸去鐵胺佐劑，再加生理鹽水至200ul，按常規(guī)混合，得含有甲磺酸去鐵胺佐劑的甲肝疫苗，其中，甲磺酸去鐵胺為市購(gòu)產(chǎn)品，購(gòu)自瑞士諾華制藥有限公司，HAV抗原為市購(gòu)的抗原滴度為512EU/ml的18EU HAV抗原液，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所。
[0022]本實(shí)施例1所得含有甲磺酸去鐵胺佐劑的甲肝疫苗的免疫試驗(yàn)和效果如下:
A、免疫
將6~8周齡、18~22g的清潔級(jí)ICR小鼠隨機(jī)分為甲磺酸去鐵胺佐劑組、氫氧化鋁佐劑組、無(wú)佐劑組和空白組，共四組，每組8只；所用氫氧化鋁為常用的氫氧化鋁膠體佐劑，其制法參照《中國(guó)藥典(三部·)》，(國(guó)家藥典委員會(huì).北京:人民衛(wèi)生出版社.2005:118-119)，在人體中的劑量為1.8~2.7mg。[0023]對(duì)甲磺酸去鐵胺佐劑組:實(shí)施例1的含有甲磺酸去鐵胺佐劑的甲肝疫苗至小鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200 μ L，其中疫苗中含有甲磺酸去鐵胺lmg，甲肝抗原18EU ；
對(duì)氫氧化鋁佐劑組:將氫氧化鋁300ug與甲肝抗原18EU混合后加生理鹽水至200ul，經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200μ L ;
對(duì)無(wú)佐劑組:將甲肝抗原18EU與生理鹽水混合至200ul，再經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200μ L ;
對(duì)空白組僅注射生理鹽水，注射劑量為每只小鼠200ul ；
免疫方案:在第O周經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小鼠體內(nèi)，免疫次數(shù)為一次；
B、ELISA檢測(cè)血清抗一 HAV IgG水平
在免疫后的第4、8、12、16周，采集小鼠尾靜脈血，分離血清，ELISA檢測(cè)血清抗一 HAVIgG水平，按KPL公司生產(chǎn)的小鼠IgG ELISA試劑盒方法進(jìn)行檢測(cè)。
[0024]C、數(shù)據(jù)分析
對(duì)所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P < 0.05為差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表1 。
[0025]表1為使用實(shí)施例1提供的佐劑后，16周內(nèi)，各實(shí)驗(yàn)組小鼠血清抗-HAV IgG水平(抗體效價(jià)值)。
[0026]表1
【權(quán)利要求】
1.甲磺酸去鐵胺在制備疫苗佐劑中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的甲磺酸去鐵胺在制備疫苗佐劑中的應(yīng)用，其特征在于所述甲磺酸去鐵胺為化合物deferoxamine，分子式為C26H52N6O11S,分子量為656.80。
3.一種含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有0.6~8mg甲磺酸去鐵胺。
4.如權(quán)利要求3所述的含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗，其特征在于經(jīng)過(guò)下列方法制備:按每單份疫苗劑加入0.6~8mg甲磺酸去鐵胺的量，在疫苗中加入甲磺酸去鐵胺，再加生理鹽水至100 - 200ul，按常規(guī)混合`，得含有甲磺酸去鐵胺佐劑的疫苗。
【文檔編號(hào)】A61K39/205GK103736090SQ201410039464
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月27日
【發(fā)明者】胡凝珠, 羅婷, 王海漩, 胡云章, 李彥涵, 李建芳 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所