一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物，屬于中藥領(lǐng)域。抑菌組合物中大黃提取液與水溶性納米銀以比例混合，兩種藥物的合用對抑制藤黃微球菌起到協(xié)同的作用。本發(fā)明的一種大黃提取物與納米銀抑菌組合物與現(xiàn)有的技術(shù)相比，解決了常規(guī)抑菌方法中大黃抑菌劑用量較大的問題，同時(shí)采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)減少了微生物耐藥的發(fā)生機(jī)率、降低了其對人體的毒性，更加的安全。
【專利說明】一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥抑菌組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]大黃是多種寥科大黃屬的多年生植物的合稱，也是中藥材的名稱。因其喜冷涼氣候，且耐寒，故其主要生于山地林緣或草坡的陰濕環(huán)境，中藥大黃具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血、祛瘀、解毒等功效?，F(xiàn)代藥理研究證 明，大黃具有抗菌作用，其中對于金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、傷寒沙門菌、痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉?xiàng)U菌、炭疽桿菌、變形桿菌等都有較強(qiáng)的抑制作用，除此之外，還具有抗腫瘤、降低血壓、健胃、利膽、保肝、強(qiáng)心、延緩衰老、調(diào)節(jié)免疫功能等作用。大黃因其具有較高的藥用和保健價(jià)值，廣泛引起了人們關(guān)注。
[0003]中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌劑、涂覆劑等一次用劑量大，且長期使用影響人體健康。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對大黃抑菌劑一次用量大和長期使用影響人體健康問題，本發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)納米銀能有效增強(qiáng)大黃提取液抑菌性能，減少大黃抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合物，更加的安全。本發(fā)明的目的在于提供一種大黃納米銀抑菌組合物，減少大黃抑菌劑一次的用劑量和降低藥品對人體的毒性。
[0005]本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
一種抑菌組合物，含有大黃提取液、水溶性納米銀；
大黃提取液制備包括如下步驟:加水量為大黃重量的9倍，經(jīng)95 1:水浴提取4h，再經(jīng)過減壓濃縮得到提取液。所得提取液經(jīng)0.22 μ m濾膜過濾。最后提取液經(jīng)高效液相色譜法對大黃素進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定量。
[0006]水溶性納米銀顆粒粒徑為3~10 nm,納米銀外表包覆兩性聚合物。
[0007]水溶性納米銀粒徑為3~10 nm,外表為羧基，依照下列方法制備:取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6.7g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與大黃提取液具有良好的的協(xié)同抗菌作用。
[0008]抑制大腸桿菌0157:H7時(shí)大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為75~100:1 抑制藤黃微球菌時(shí)大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為和25~50:1。
[0009]本發(fā)明還涉及上述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明還涉及上述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應(yīng)用本發(fā)明的有益效果是:水溶性納米銀的應(yīng)用能有效增強(qiáng)大黃抑菌性能，降低大黃抑菌劑的用量，令人意向不到的是，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協(xié)同作用，同時(shí)本抑菌組合物采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)，相對于使用高劑量的大黃或者水溶性納米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1大黃提取液與納米銀之比為100:1對大腸桿菌0157:H7協(xié)同抑菌作用
圖1a 200 μ L大黃提取液對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖1b 2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖1c 100 μ L大黃提取液與I μ L納米銀對大腸桿菌0157:Η7的協(xié)同抑菌作用。
[0012]圖2大黃提取液與納米銀之比為75:1對大腸桿菌0157:Η7協(xié)同抑菌作用
圖2a 150 μ L大黃提取液對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖2b 2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖2c 75 μ L大黃提取液和I μ L納米銀對大腸桿菌0157:Η7的協(xié)同抑菌作用。
[0013]圖3大黃提取液與納米銀之比為50:1對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖3a 800 μ L大黃提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖3b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖3c 400 μ L大黃提取液和8 μ L納米銀藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用。 [0014]圖4大黃提取液與納米銀之比為25:1對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖4a 400 μ L大黃提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖4b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖4c 200 μ L大黃提取液和8 μ L納米銀藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1
1、大黃提取液的制備過程:
稱取大黃50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提取4 h,經(jīng)過真空旋轉(zhuǎn)濃縮儀后，用0.22μ m濾膜除去提取液中的雜質(zhì)和細(xì)菌，最后用高效液相色譜法測得提取液中大黃素含量為1.92 μ g/go
[0016]2、水溶性銀納米顆粒制備
取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6.7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。
[0017]3、大黃提取液與水溶性納米銀協(xié)同抑菌作用。
[0018]a、細(xì)菌的培養(yǎng)
挑取LB瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養(yǎng)基中，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)4 h后。取I mL上述菌液用0.1%的蛋白胨水連續(xù)稀釋三個(gè)梯度，最終的菌液大約為IO6 CFU/mL。[0019]b、水溶性納米銀與大黃提取液在抑菌性能上的協(xié)同作用
分別取I mL上述已稀釋好的菌液于1.5 mL滅菌的離心管中，向I號離心管中分別加入200 μ L大黃提取液(大黃素含量為1.92 μ g/g，下同)，向2號離心管中加入2 μ L濃度為10mg/mL的水溶性納米銀，向3號離心管中加入100 μ L大黃提取液和I μ L濃度為10 mg/mL水溶性納米銀，4號離心管作為空白對照，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等，差量用0.1%的蛋白胨水補(bǔ)齊，置于37°C搖床培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 h。每組實(shí)驗(yàn)平行三次。
[0020]c、平板計(jì)數(shù)
將實(shí)驗(yàn)組待測液用PBS連續(xù)稀釋兩個(gè)梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布
在
LB固體平板上；空白組連續(xù)稀釋四個(gè)梯度，從10_2、10_3、10_4三個(gè)梯度分別均涂布在LB 固體平板上。平板吹干后，37 1:倒置培養(yǎng)12 h，長出菌落后計(jì)數(shù)，以30-300個(gè)菌落形
成單
位(CFU)為有效的計(jì)數(shù)范圍。每毫升原菌液活菌數(shù)=平板計(jì)數(shù)*稀釋倍數(shù)*5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
【權(quán)利要求】
1.一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物，其特征在于由大黃提取液、水溶性納米銀組成；所述大黃提取液制備包括如下步驟:加水量為大黃重量的9倍，經(jīng)95 1:水浴提取4h，再經(jīng)過減壓濃縮得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備:取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6.7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末；大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為和25~50:1。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥抑菌組合物，其特征在于所得提取液經(jīng)0.22 ym濾膜過濾。
3.如權(quán)利要求1~2任一所述中藥抑菌組合物在制備抑制藤黃微球菌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/04GK104013682SQ201410052640
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月28日
【發(fā)明者】許恒毅, 熊勇華, 王力均, 郭亮, 徐鋒, 萬翠香, 魏華, 賴衛(wèi)華 申請人:南昌大學(xué)