納米級(jí)顆粒型輔料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了納米級(jí)顆粒及其制備方法，該方法包括，合成琥珀?；暇厶?；合成胺基化葉酸類似物；合成葉酸-葡聚糖綴合物；以及，將藥物化合物混合入葉酸-葡聚糖綴合物中。本發(fā)明還公開了該納米級(jí)顆粒在制備適用于脂溶性藥物化合物、抗腫瘤和／或藥物耐受性增強(qiáng)并且毒性降低的藥物組合物中的應(yīng)用等。
【專利說明】納米級(jí)顆粒型輔料
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明是中國專利申請(qǐng)第201210543504.9號(hào)分案的發(fā)明，享有2012年12月14
日的申請(qǐng)日。
[0002]本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及納米級(jí)顆粒，除了其藥物理化性質(zhì)得以提升外，其中輔料和紫杉醇等藥物化合物甚至可以協(xié)同起效，并能提高藥物的耐受性。另外，本發(fā)明還涉及該納米級(jí)顆粒在制備適用于脂溶性藥物化合物、抗腫瘤和/或藥物耐受性增強(qiáng)并且毒性降低的藥物組合物中的應(yīng)用以及該納米級(jí)顆粒的制備方法等。
【背景技術(shù)】
[0003]目前臨床使用的大多數(shù)抗癌藥物，如紫杉醇，Docetaxel(多西他賽)，阿霉素等在生理鹽水中的溶解度比較差，無法在臨床上直接使用，需要一些輔料配合。例如，Taxol?用聚氧乙烯蓖麻油和乙醇的混合物來配制紫杉醇，Taxotere? (泰索帝)用聚山梨酯和乙醇來配制，但是都會(huì) 引起強(qiáng)烈的副作用，如過敏反應(yīng)、腎臟毒性、神經(jīng)和心臟毒性等；最近的Abraxane?使用血清白蛋白為載體來配制紫杉醇，毒副作用也明顯降低，然而血清白蛋白無論是提取還是DNA重組獲得，純化難度大，造成成本居高不下，一個(gè)劑量就需US $ 5，100，而一個(gè)療程需要至少3劑，無法在我國推廣。
[0004]日本專利JP2010126533A披露了，把紫杉醇與葡聚糖等共價(jià)綴合在一起，然后再通過非共價(jià)吸附在藥物顆粒表面固定葉酸，以達(dá)到靶向抗腫瘤的目的，然而本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，紫杉醇作為藥效活性化合物，與葡聚糖綴合，尤其是與葡聚糖上大量基團(tuán)的副反應(yīng)，由于化學(xué)結(jié)構(gòu)的改變，會(huì)顯著降低紫杉醇的藥效，如果要消除結(jié)構(gòu)相近的副產(chǎn)物，需要復(fù)雜的純化過程(如層析過柱)，成本降不下來，而且葉酸吸附在表面，容易洗脫。中國專利20121002970.5公開了共價(jià)結(jié)合的葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米顆粒，其具有體外靶向作用，其沒有報(bào)道這種顆粒本身的抗腫瘤效果(實(shí)際基本沒有)，而且本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)其是先合成葡聚糖-氧化鐵納米顆粒，然后再進(jìn)行葉酸綴合，合成效率低，且輔料對(duì)藥物的適應(yīng)性喪失。
[0005]為此，本發(fā)明人經(jīng)過艱苦的研究，并結(jié)合一些運(yùn)氣，偶然發(fā)現(xiàn)通過一些連接基團(tuán)將葉酸直接共價(jià)結(jié)合到葡聚糖上，雖然一定程度上喪失了葉酸對(duì)腫瘤的靶向性，目前其經(jīng)測(cè)試體外沒有抗腫瘤細(xì)胞的毒性(活性)，但是卻能夠很穩(wěn)定地非共價(jià)地包裹住諸如紫杉醇等藥物，復(fù)溶性和穩(wěn)定性俱佳，且不必改變紫杉醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)，還無需使用復(fù)雜的純化工藝(如，柱層析)。更令人意想不到的是，該輔料本身雖然沒有體外抗腫瘤細(xì)胞的毒性，但是能夠協(xié)同紫杉醇起效，提高體內(nèi)的抗腫瘤的效果，并且能提高受試動(dòng)物的藥物耐受性，使得在臨床使用中可以更大劑量地給藥，從而進(jìn)一步提高抗腫瘤效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供新的納米級(jí)顆粒，其最終形成的藥物組合物復(fù)溶性和穩(wěn)定性俱佳，其制備無需復(fù)雜的純化工藝，藥物適應(yīng)性良好，甚至其中的輔料能與紫杉醇等藥物化合物協(xié)同起效，提高療效以及藥物耐受性。另外，本發(fā)明還提供了該納米級(jí)顆粒在制備適用于脂溶性藥物化合物、抗腫瘤和/或藥物耐受性增強(qiáng)并且毒性降低的藥物組合物中的應(yīng)用以及該納米級(jí)顆粒的制備方法等。
[0007]具體而言，在第I方面，本發(fā)明提供了納米級(jí)顆粒，其由如下制備方法制備，該方法包括，
[0008](I)按流程式I合成琥珀?；暇厶?br> [0009]
【權(quán)利要求】
1.納米級(jí)顆粒，其由如下制備方法制備，該方法包括， (1)按流程式I合成琥珀?；暇厶?
2.權(quán)利要求1所述的納米級(jí)顆粒，其中藥物化合物是脂溶性藥物化合物，優(yōu)選是紫杉醇。
3.權(quán)利要求1所述的納米級(jí)顆粒，其中步驟(4)中的藥物化合物和葉酸-葡聚糖綴合物的重量比為0.5~2: I~10，優(yōu)選為0.8~1.2: 3~6，如1: 4。
4.權(quán)利要求1所述的納米級(jí)顆粒，其中步驟(1)中的葡聚糖的平均分子量為5~30KDa，優(yōu)選為 10 ~20KDa，如 10KDa、15KDa 或 20KDa。
5.權(quán)利要求1所述的納米級(jí)顆粒，其中所述方法包括，(1)取平均分子量20KDa、Mw/ Mn=L 3的葡聚糖10.0g溶于無水DMF中，攪拌20分鐘形成澄清的溶液，然后加入1670mg琥珀酸酐和200.0mg4_ 二甲基氨基吡啶(DMAP)，快速攪拌至所有的固體溶解；置于室溫下使得整個(gè)反應(yīng)液反應(yīng)24小時(shí)，之后將反應(yīng)液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后將透析袋中的溶液冷凍干燥，得到白色的琥珀酰化葡聚糖； (2)取3g葉酸溶于120mLDMSO中，向其中加入930mg DCC和770mgNHS，反應(yīng)液在室溫暗室處放置12小時(shí)，然后副產(chǎn)物D⑶沉淀被過濾去除，再向反應(yīng)液加入1000mL V:V=30: 70的丙酮/乙醚混合液并進(jìn)行攪拌，收集黃色沉淀并用V:V=30: 70的丙酮/乙醚混合液洗滌后晾干；取2.78g晾干的黃色沉淀再溶于20mLDMS0中，取6.0lg乙二胺快速加入到該溶液中，將兩者混合后在室溫暗室處放置12小時(shí)，加入50mL V:V=30: 70的丙酮/乙醚混合液并進(jìn)行攪拌，收集黃色沉淀并在DMSO溶液中重結(jié)晶提純，獲得胺基化葉酸類似物； (3)取步驟⑴制備的琥珀酰化葡聚糖2000mg溶于40ml無水DMF中，加入50mgDMAP和579.7mg DCC,在室溫下放置12小時(shí)后，再加入2mL含300mg步驟(2)制備的胺基化葉酸類似物的EDC溶液，反應(yīng)液在室溫下攪拌12小時(shí)后，將反應(yīng)液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后將透析袋中的溶液冷凍干燥，得到黃色的葉酸-葡聚糖綴合物； (4)取1000mg步驟(3)制備的葉酸-葡聚糖綴合物，溶于100mll5mM的磷酸緩沖液(pH=7.4)中，溶解后，置于磁力攪拌器上以400rpm攪拌；在攪拌過程中，將250mg紫杉醇溶于5mL乙醇中，逐滴加入到攪拌的溶液中，加完后置于FS-1型高速勻漿機(jī)中，以最大功率勻漿6次，每次1分鐘，停2分鐘，之后將勻漿液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于15mM pH=7.4的磷酸緩沖液中透析12小時(shí)以除去乙醇，然后加入2500mg甘露醇調(diào)節(jié)滲透壓，并經(jīng)過0.2 μ m濾膜除菌，即得葉酸-葡聚糖綴合物包裹的紫杉醇顆粒溶液。
6.權(quán)利要求1~5之任一所述的納米級(jí)顆粒的制備方法，其包括權(quán)利要求1~5之任一中所述的制備步驟。
7.權(quán)利要求1~5之任一所述的納米級(jí)顆粒在制備含有脂溶性藥物化合物(優(yōu)選是紫杉醇)的藥物組合物(優(yōu)選是注射劑，更優(yōu)選是凍干粉針劑)中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1~5之任一所述的納米級(jí)顆粒在制備抗腫瘤藥物組合物(優(yōu)選是注射劑，更優(yōu)選是凍干粉針劑)中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中腫瘤是非小葉肺癌。
10.權(quán)利要求1~5之任一所述的納米級(jí)顆粒在制備藥物耐受性增強(qiáng)并且毒性降低的藥物組合物(優(yōu)選是注射劑，更優(yōu)選是凍干粉針劑)中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/36GK103936880SQ201410064409
【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月14日
【發(fā)明者】李軍, 游紹進(jìn), 陳瓊 申請(qǐng)人:蘇州友林生物科技有限公司