絲素蛋白單組分微囊、絲素蛋白-納米金雜化微囊及其制備方法
【專利摘要】發(fā)明公開了絲素蛋白單組分微囊、絲素蛋白-納米金雜化微囊及其制備方法，絲素蛋白單組分微囊的制備步驟為：將絲素蛋白、聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒和碳酸鹽緩沖液混合得混合液；滴加蛋白的不良溶劑混合，蛋白交聯(lián)，加入丙酮和N-甲基吡咯烷酮混合液用于去除聚乳酸-羥基乙酸共聚物，水洗得到絲素蛋白單組分微囊懸液；再以DNA功能化的納米金對絲素蛋白單組分微囊進行修飾得到絲素蛋白-納米金雜化微囊，它是一種中空微囊，既可負(fù)載生物大分子類藥物，同時納米金修飾賦予其遠(yuǎn)程釋放調(diào)控及拉曼增強特性。制備工藝簡單、重現(xiàn)性好，普適性強，適合于規(guī)?；a(chǎn)，而且所用材料具有良好的生物相容性、可降解、無免疫原性，廉價易得。
【專利說明】絲素蛋白單組分微囊、絲素蛋白-納米金雜化微囊及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物載體領(lǐng)域，具體地涉及一種絲素蛋白單組分微囊及其制備方法，一種絲素蛋白-納米金雜化微囊及其制備方法
【背景技術(shù)】
[0002]在藥物傳遞系統(tǒng)(drug delivery systems)中，中空結(jié)構(gòu)的有機或無機載體由于其特殊的包封、保護以及傳遞特性而受到了廣泛關(guān)注。目前，常見的中空微/納米粒子主要包括聚電解質(zhì)微囊、聚合物空心微/納米球、脂質(zhì)體、碳管及硅基微粒等，其制備方法也各不相同。其中，層層自組裝(Layer-by-layer，LBL)技術(shù)由于其簡便易行、適用性強等優(yōu)勢而在中空微囊制備中備受重視。然而，LBL法在制備醫(yī)用中空微囊時也具有其自身的不足，如荷正電的聚電解質(zhì)引入的潛在生物毒性；無機模板去除時常須使用強腐蝕性酸如氫氟酸、鹽酸等；不可降解聚合物如聚苯乙烯球模板的殘留等?；谏鲜霾蛔?，2011年，Tsukruk小組利用蛋白變性原理,制備了單組份LBL絲素蛋白微囊,通過控制絲素蛋白沉積的層數(shù)調(diào)控微囊通透性，避免了荷正電聚電解質(zhì)帶來的生物毒性(ShChepelina，0.;Drachuk, 1.; Gupta, Μ.K.; Lin, J.; Tsukruk, V.V., Adv.Mater.2011, 23, 4655-4660.)?而基于聚乳酸(PLA)或聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)微球模板的LBL微囊無疑克服了無機酸苛刻的模板去除條件，同時由于PLA和PLGA良好的生物相容性也解決了模板殘留問題(Shenoy, D.B.; Antipov, A.A.; Sukhorukov G.B.; Mohwald, H.Biomacromolecules2003, 4, 265-272.)。但是，LBL法仍無法克服其操作費時及產(chǎn)量隨殼層層數(shù)的增加而減少的難題，大大限制了傳統(tǒng)LBL法實際工業(yè)應(yīng)用價值(Richardson, J.J.;Liang, K.; Kempe, K.; Ej ima, H.; Cui, J.; Caruso, F.Adv.Mater.2013, 25, 6874-6878.Zhu, Y.;Tong, ff.;Gao, C.;Mohwald, H.J.Mater.Chem.2008，18，`1153-1158)。因而，一步法合成聚電解質(zhì)微囊得到了初步探索，如以介孔氧化硅或MnCO3微粒為模板合成聚合物或天然蛋白單組分微囊，并通過條件優(yōu)化調(diào)控了微囊的通透性。(Wang, Y.;Bansal, V.; Zelikin, A.N.; Caruso, F., Nano Lett.2008, 8, 1741-1745.Zhu, Y.; Tong, ff.; Gao, C.; Mohwald, H., J.Mater.Chem.2008, 18，1153-1158.)。然而，將方法溫和簡便普適性、模板生物相容性、微囊通透性以及多功能性集于一體的微囊類納米器件及其制備方法還未見報道。
[0003]PLGA是一種具有良好生物相容性和生物降解性的醫(yī)用高分子材料，經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)可用作醫(yī)用手術(shù)縫合線、微膠囊、微球等器械和藥用輔料。PLGA在體內(nèi)中間產(chǎn)物是乳酸，是人機體正常的代謝產(chǎn)物，不會在重要器官聚集，最終代謝產(chǎn)物是CO2和H20。以PLGA微粒作為微囊制備的模板，不僅可解決模板殘留問題，而且去除PLGA模板的過程也相對簡便溫和。絲素蛋白具有卓越的機械強度、良好的生物相容性以及可加工性并且不易引發(fā)炎癥反應(yīng)，是藥物載體的理想材料。金是極其惰性的材料，金納米粒子理化性質(zhì)穩(wěn)定、環(huán)境友好、生物相容性好、半數(shù)致死量高，并具有優(yōu)異的光學(xué)性質(zhì)，通過物理吸附或
價鍵合可穩(wěn)定地固定多種生物分子，如核酸、抗體及藥物等，并保持其生物活性。[0004]因此，以PLGA微粒為模板，利用去溶劑法一步合成絲素蛋白單組份微囊，進而利用DNA功能化的納米金進行微囊表面修飾，在調(diào)控其通透性的同時賦予微囊無機納米粒子引入的特殊光學(xué)性質(zhì)以及DNA的多種生物學(xué)功能，使該類雜化微囊兼具藥物傳遞及診斷的功能還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種絲素蛋白單組分微囊。
[0006]本發(fā)明的第二個目的是提供一種絲素蛋白單組分微囊的制備方法。
[0007]本發(fā)明的第三個目的是提供一種絲素蛋白-納米金雜化微囊。
[0008]本發(fā)明的第四個目的是提供一種絲素蛋白-納米金雜化微囊的制備方法。
[0009]本發(fā)明的第五個目的是提供一種絲素蛋白-納米金雜化微囊的用途。
[0010]本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下: [0011]一種絲素蛋白單組分微囊的制備方法，包括的步驟:
[0012]將絲素蛋白、分子量為5000-50000的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒和pH=9_ll的碳酸鹽緩沖液混合得混合液，使混合液中絲素蛋白的濃度為2-5mg/mL、使所述聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒的濃度為IX 108-3X IO8個/mL ;向混合液中滴加蛋白的不良溶劑混合，所述混合液與蛋白的不良溶劑的體積比為1:6-10 ;離心，除去上清液，得到第一種微粒，向第一種微粒中加入戊二醛水溶液進行蛋白交聯(lián)，離心，水洗，得到第二種微粒；向水洗后的第二種微粒中加入體積比為1:1的丙酮和N-甲基吡咯烷酮混合液混合，用于去除聚乳酸-羥基乙酸共聚物，水洗得到絲素蛋白單組分微囊懸液。
[0013]蛋白的不良溶劑優(yōu)選甲醇或乙醇。
[0014]上述方法制備的絲素蛋白單組分微囊。
[0015]一種絲素蛋白-納米金雜化微囊的制備方法，包括如下步驟:
[0016]I)將絲素蛋白、分子量為5000-50000的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒和pH=9_ll的碳酸鹽緩沖液混合得混合液，使混合液中絲素蛋白的濃度為2-5mg/mL、使所述聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒的濃度為1\108-3\108個/!!^;向混合液中滴加蛋白的不良溶劑混合，所述混合液與蛋白的不良溶劑的體積比為1:6-10 ;離心，除去上清液，得到第一種微粒，向第一種微粒中加入戊二醛水溶液進行蛋白交聯(lián)，離心，水洗，得到第二種微粒；向水洗后的第二種微粒中加入體積比為1:1的丙酮和N-甲基吡咯烷酮混合液混合，用于去除聚乳酸-羥基乙酸共聚物，水洗得到絲素蛋白單組分微囊懸液；
[0017]2)按絲素蛋白單組分微囊與DNA功能化的金納米粒子的摩爾比為1:10000-100000的比例，將絲素蛋白單組分微囊懸液與DNA功能化的金納米粒子膠體溶液混合均勻，孵育，得到絲素蛋白-納米金雜化微囊，所述DNA為端部修飾有一個巰基的5-100個堿基的序列；
[0018]蛋白的不良溶劑優(yōu)選為甲醇或乙醇。
[0019]上述方法制備的一種絲素蛋白-納米金雜化微囊。
[0020]一種絲素蛋白-納米金雜化微囊在制備絲素蛋白-納米金載藥雜化微囊中的應(yīng)用，藥優(yōu)選為蛋白或多糖。
[0021]一種絲素蛋白-納米金雜化微囊在制備拉曼成像造影劑中的應(yīng)用。[0022]本發(fā)明的絲素蛋白-納米金雜化微囊是一種中空微囊，既可負(fù)載生物大分子類藥物，同時納米金修飾賦予其遠(yuǎn)程釋放調(diào)控及拉曼增強特性。絲素蛋白單組分微囊及絲素蛋白-納米金雜化微囊制備工藝簡單、重現(xiàn)性好，普適性強，適合于規(guī)?；a(chǎn)，而且所用材料具有良好的生物相容性、可降解、無免疫原性，廉價易得。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1A，B和C分別為實施例2制備的PLGA微粒(分子量5萬)、實施例5制得的絲素蛋白包被的PLGA微粒以及絲素蛋白單組分微囊的掃描電鏡照片，D為絲素蛋白單組分微囊的透射電鏡照片。
[0024]圖2為實施例2制備PLGA微粒(分子量1.5萬)。
[0025]圖3A，B分別為實施例6制得的絲素蛋白包被的PLGA微粒以及絲素蛋白單組分微囊的掃描電鏡照片。
[0026]圖4DNA功能化金納米球(A)、金納米棒(C)以及金納米棒和球(E)修飾的絲素蛋白單組分微囊的透射電鏡照片；B、D、F為A、C、E對應(yīng)的掃描電鏡照片。
[0027]圖5雜化微囊的表面增強拉曼圖譜。實線為聚焦在微囊上采集的拉曼信號，虛線為聚焦在微囊周圍溶液中采集的拉曼信號。
[0028]圖6負(fù)載FITC-BSA (A)以及FITC_dextran250kDa (B)的雜化微囊激光共聚焦照片。
【具體實施方式】
[0029]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，本發(fā)明的實施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明，但并不對本發(fā)明作任何限制。
[0030]實施例1絲素蛋白水溶液的制備:
[0031]絲素粉購于:湖州新天絲生物技術(shù)有限公司，取Ig絲素粉，置于5mL LiBr0.3M)溶液中，60°C緩慢磁力攪拌4h，產(chǎn)生20%的溶液，將所得溶液轉(zhuǎn)入透析袋(MWC03500)，蒸餾水透析3-4d (每4h換水一次)，除去鹽，所得溶液8，OOOrpm離心20min，重復(fù)3次，除去不溶物，再將所得溶液過0.45 μ m濾膜。最終得到的絲素蛋白水溶液濃度約為6%，濃度測定是通過測定一定體積絲素蛋白水溶液凍干后重量計算所得。儲存液存放于4°C備用。
[0032]實施例2PLGA微球的制備:
[0033]采用經(jīng)典的乳液-溶劑揮發(fā)法制備PLGA微球:
[0034]I)將150mg的PLGA (50:50，分子量5萬)溶解于IOmL 二氯甲烷中，逐滴滴入至IOOmL濃度為1%的聚乙烯醇中，高速勻質(zhì)形成乳液，轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上繼續(xù)攪拌18h，使二氯甲烷揮發(fā)完全，10, OOOrpm離心15min，加水超聲重分散，重復(fù)此過程三次，凍干，低溫儲存(圖1A)。
[0035]2)將150mg的PLGA (50:50，分子量1.5萬)溶解于IOmL 二氯甲烷中，逐滴滴入至IOOmL濃度為1%的聚乙烯醇中，高速勻質(zhì)形成乳液，轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上繼續(xù)攪拌18h，以揮發(fā)二氯甲烷，10, OOOrpm離心15min，加水超聲重分散，重復(fù)此過程三次，凍干，低溫儲存(圖 2)。
[0036]實施例3DNA功能化的金納米球的制備:[0037]采用經(jīng)典的檸檬酸三鈉還原法制備球形納米金顆粒(AuNSs)Jf 20mL的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸水溶液加至圓底燒瓶中，油浴鍋中攪拌加熱至回流，加入ImL質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)攪拌15min，冷卻至室溫，得到金納米球的膠體溶液。
[0038]按金納米球與巰基化DNA (巰基化寡核苷酸5’ HS-C6-TTTTT)的摩爾比為1: 10000的比例，將金納米球的膠體溶液與巰基化DNA的水溶液混合40h，離心，向沉淀中加水，得到DNA功能化的金納米球膠體溶液。
[0039]實施例4DNA功能化的金納米棒的制備:
[0040]I)采用經(jīng)典的種子生長法合成金納米棒(AuNRs)。實驗步驟如下:
[0041]a)制備金種子溶液:
[0042]將0.25mL濃度為0.01mol/L的HAuCl4水溶液與7.5mL濃度0.lmol/L的十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)水溶液均勻混合得混合液，將0.6mL新鮮制備的濃度0.01mol/L的NaBH4水溶液在磁力攪拌條件下加入混合液中，繼續(xù)攪拌2min后，靜置2h，即得金種子溶液；
[0043]b)制備金納米棒生長液:
[0044]取一燒杯,依次加入9.5mL濃度為0.lmol/L CTAB水溶液,0.4mL濃度為0.01mol/L的HAuCl4水溶液，0.06mL新鮮制備的濃度為0.01mol/L的AgNO3水溶液，充分混合；加入
0.064mL新鮮制備的濃度為 0.lmol/L的抗壞血酸水溶液攪拌，直至溶液從淡黃色轉(zhuǎn)為無色透明，即得金納米棒生長液；
[0045]c )制備金納米棒:
[0046]將0.04mL步驟a)制得的金種子溶液加至步驟b)制得的金納米棒生長液中，以誘發(fā)金納米棒的生長，緩慢攪拌直至溶液顏色轉(zhuǎn)為淡紫色，靜置9h，保持恒溫28°C得金納米棒膠體溶液；
[0047]3)按金納米棒與巰基化DNA(巰基化寡核苷酸5’ HS-C6-TTTTT)的摩爾比為1:1000的比例，將金納米棒的膠體溶液與巰基化DNA的水溶液混合40h，離心，除去含有未結(jié)合的巰基化DNA的液體，沉淀為DNA功能化的金納米棒(AuNRs-T5)；
[0048]實驗表明，端部修飾有一個巰基的5-100個堿基的DNA序列都適用于本發(fā)明。
[0049]實施例5
[0050]一種絲素蛋白單組分微囊的制備方法，包括的步驟:
[0051]將絲素蛋白、粒徑為2.4μπκ分子量為50000聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒(圖1Α)和ρΗ=9的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液混合得混合液，使混合液中絲素蛋白的濃度為2mg/mL、使聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒的濃度為I X IO8個/mL ;向混合液中滴加無水乙醇混合，混合液與無水乙醇的體積比為1:6 ;離心，除去上清液，得到第一種微粒，向第一種微粒中加入剛剛除去的上清液的體積的I倍的質(zhì)量濃度為2%的戊二醛水溶液用于交聯(lián)蛋白，攪拌lh，離心，水洗，得到第二種微粒(圖1B);向水洗后的第二種微粒中加入體積比為1:1的丙酮和N-甲基吡咯烷酮混合液混合16h用于除去聚乳酸-羥基乙酸共聚物，水洗得到絲素蛋白單組分微囊懸液。
[0052]圖1C、D是電子顯微鏡觀察的到的將絲素蛋白單組分微囊懸液干燥后得到的絲素蛋白單組分微囊。
[0053]本實驗利用絲素蛋白與PLGA的疏水相互作用(Wang, X.;ffenk, E.;Hu, X.; Castro, G.R.;Meinel, L.; Wang, X.; Li, C.;Merkle, H.; Kaplan,D.L.,Biomaterials2007, 28(28),4161-4169)將析出的絲素蛋白沉積于PLGA微球表面，再將其交聯(lián)固化，使之不再解聚，溶解模板最終形成絲素蛋白單組分微囊，因此其他尺度的PLGA微球例如:在分子量為5000-50000的任意微粒同樣可以作為模板制備不同尺寸的絲素蛋白單組分微囊。
[0054]實施例6
[0055]一種絲素蛋白單組分微囊的制備方法，包括的步驟:
[0056]將絲素蛋白、粒徑為2.4 μ m、分子量為50000聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒(圖1A)和pH=ll的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液混合得混合液，使混合液中絲素蛋白的濃度為5mg/mL、使聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒的濃度為3X IO8個/mL ;向混合液中滴加無水乙醇混合，混合液與無水乙醇的體積比為1:10;離心，除去上清液，得到第一種微粒，向第一種微粒中加入剛剛除去的上清液的同體積的質(zhì)量濃度為2%的戊二醛水溶液，攪拌lh，離心，水洗，得到第二種微粒(圖3A);向第二種微粒中加入體積比為1:1的丙酮和N-甲基吡咯烷酮混合液混合16h，用于去除聚乳酸-羥基乙酸共聚物，水洗得到絲素蛋白單組分微囊懸液，滴于硅片干燥后，掃描電子顯微鏡觀察(圖3B)。
[0057]實驗證明，蛋白的不良溶劑選用甲醇或異丙醇也可以用于本發(fā)明。
[0058]實施例7
[0059]一種絲素蛋白-金納米球雜化微囊的制備方法，包括的步驟:
[0060]I)絲素蛋白單組 分微囊懸液制備同實施例5 ；
[0061]2)按絲素蛋白單組分微囊與實施例3制備的DNA功能化的金納米球的摩爾比為1:60000的比例，將絲素蛋白單組分微囊懸液與DNA功能化的金納米球膠體溶液混合均勻，孵育4h，得到絲素蛋白-金納米球雜化微囊(圖4A，B)。
[0062]PLGA微球僅作為模板影響絲素蛋白微囊的尺寸，而不改變微囊的物理化學(xué)性質(zhì)。因此，其他尺度的絲素蛋白單組分微囊也可通過此過程產(chǎn)生相應(yīng)的絲素蛋白-金納米球雜化微囊。
[0063]實施例8
[0064]一種絲素蛋白-金納米棒雜化微囊的制備方法，包括的步驟:
[0065]I)絲素蛋白單組分微囊制備同實施例5 ；
[0066]2)按絲素蛋白單組分微囊與實施例4制備的DNA功能化的金納米棒的摩爾比為1:60000的比例，將絲素蛋白單組分微囊懸液與DNA功能化的金納米棒膠體溶液混合均勻，孵育4h，得到絲素蛋白-金納米棒雜化微囊(圖4C，D)。
[0067]絲素蛋白單組分微囊與DNA功能化的金納米棒的摩爾比還可以在1:10000-100000 的范圍內(nèi)選擇例如:1:10000，1:20000，1:50000，1:80000，1:100000 等，其
目的是讓DNA功能化的金納米棒對絲素蛋白單組分微囊進行封堵，以調(diào)節(jié)其通透性，以便于制備絲素蛋白-納米金載藥雜化微囊。
[0068]單組分微囊經(jīng)金納米棒修飾得到雜化微囊后，zeta-電位由-9.44土 2.67mV變?yōu)?4.22±0.62mV表明金納米棒與絲素之間通過靜電作用以及氫鍵結(jié)合，與此前的工作以及其他研究者工作一致(Zhimin Zhou, A.C.Anselmo and S.Mitragotri, Adv.Mater.，2013，25，2723-2727，V.Kozlovskaya, E.Kharlampievaj 1.Drachukj D.Cheng andV.V.Tsukruk, Soft Matter2010, 6，3596-9608.)，PLGA微球僅作為模板影響絲素蛋白微囊的尺寸，而不改變微囊的物理化學(xué)性質(zhì)。因此，其他尺度的絲素蛋白單組分微囊也可通過此過程產(chǎn)生相應(yīng)的絲素蛋白-金納米棒雜化微囊。
[0069]實施例9
[0070]—種絲素蛋白-納米金雜化微囊在制備拉曼成像造影劑中的應(yīng)用
[0071]將實施例8制備的絲素蛋白-金納米棒雜化微囊制成含有5 μ M結(jié)晶紫的懸液，激發(fā)波長633nm，采集拉曼信號(圖5 )。
[0072]實施例10
[0073]—種絲素蛋白-納米金雜化微囊在制備絲素蛋白-納米金載藥(蛋白藥)雜化微囊中的應(yīng)用
[0074]I)絲素蛋白單組分微囊制備同實施例5 ；
[0075]2) DNA功能化的金納米棒的制備同實施例4 ；
[0076]3)將絲素蛋白單組分微囊與質(zhì)量濃度為2mg/mL的FITC標(biāo)記的牛血清白蛋白(FITC-BSA)混合得混合液，30min后將混合液與DNA功能化的金納米棒按絲素蛋白單組分微囊與DNA功能化的金納米棒的摩爾比為1:60000的比例混合，孵育4h，離心水洗得到包載模型藥物的絲素蛋白-納米金載藥雜化微囊(圖6A)。
[0077]由于本領(lǐng)域公 知，模型藥物牛血清白蛋白是蛋白的代表，牛血清白蛋白能包載于絲素蛋白-金納米棒雜化微囊中，因此，其它蛋白的藥物也能包載于絲素蛋白-金納米棒雜化微囊中。實施例11
[0078]一種絲素蛋白-納米金雜化微囊在制備絲素蛋白-納米金載藥(多糖藥)雜化微囊中的應(yīng)用
[0079]I)絲素蛋白單組分微囊制備同實施例5 ；
[0080]2) DNA功能化的金納米棒的制備同實施例4 ；
[0081]3)將絲素蛋白單組分微囊與分子量為250kDa的質(zhì)量濃度為2mg/mL的FITC標(biāo)記的葡聚糖(FITC-dextran)混合得混合液，30min后將混合液與DNA功能化的金納米棒按絲素蛋白單組分微囊與DNA功能化的金納米棒的摩爾比為1:60000的比例混合，孵育4h，離心水洗得到包載模型藥物的絲素蛋白-納米金載藥雜化微囊(圖6B)。
[0082]由于本領(lǐng)域公知，模型藥物葡聚糖是多糖的代表，葡聚糖能包載于絲素蛋白-金納米棒雜化微囊中，因此，其它多糖也能包載于絲素蛋白-金納米棒雜化微囊中。
[0083]實施例12
[0084]一種絲素蛋白-金納米棒和球雜化微囊的制備方法，包括的步驟:
[0085]I)絲素蛋白單組分微囊制備同實施例5 ；
[0086]2) DNA功能化的金納米球的制備同實施例3 ；
[0087]3) DNA功能化的金納米棒的制備同實施例4 ；
[0088]4)按絲素蛋白單組分微囊與DNA功能化的金納米棒的摩爾比為1:60000的比例，將絲素蛋白單組分微囊懸液與DNA功能化的金納米棒膠體溶液混合均勻，孵育4h，混合液再與DNA功能化的金納米球按絲素蛋白單組分微囊與DNA功能化的金納米球的摩爾比為1:60000的比例，混合，孵育4h，得到絲素蛋白-金納米棒和球雜化微囊(圖4E，F(xiàn))。
[0089]PLGA微球僅作為模板影響絲素蛋白微囊的尺寸，而不改變微囊的物理化學(xué)性質(zhì)。因此，其他尺度的絲素蛋白單組分微囊也可通過此過程產(chǎn)生相應(yīng)的絲素蛋白-金納米棒和球雜化微囊。`
【權(quán)利要求】
1.一種絲素蛋白單組分微囊的制備方法，其特征在于包括的步驟: 將絲素蛋白、分子量為5000-50000的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒和pH=9-ll的碳酸鹽緩沖液混合得混合液，使混合液中絲素蛋白的濃度為2-5mg/mL、使所述聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒的濃度為I X 108-3X IO8個/mL ;向混合液中滴加蛋白的不良溶劑混合，所述混合液與蛋白的不良溶劑的體積比為1:6-10;離心，除去上清液，得到第一種微粒，向第一種微粒中加入戊二醛水溶液進行蛋白交聯(lián)，離心，水洗，得到第二種微粒；向水洗后的第二種微粒中加入體積比為1:1的丙酮和N-甲基吡咯烷酮混合液混合，用于去除聚乳酸-羥基乙酸共聚物，水洗得到絲素蛋白單組分微囊懸液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種絲素蛋白單組分微囊的制備方法，其特征是所述蛋白的不良溶劑為甲醇或乙醇。
3.權(quán)利要求1或2的方法制備的絲素蛋白單組分微囊。
4.一種絲素蛋白-納米金雜化微囊的制備方法，其特征是包括如下步驟: 1)將絲素蛋白、分子量為5000-50000的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒和pH=9-ll的碳酸鹽緩沖液混合得混合液，使混合液中絲素蛋白的濃度為2-5mg/mL、使所述聚乳酸-羥基乙酸共聚物微粒的濃度為I X 108_3 X IO8個/mL ;向混合液中滴加蛋白的不良溶劑混合，所述混合液與蛋白的不良溶劑的體積比為1:6-10 ;離心，除去上清液，得到第一種微粒，向第一種微粒中加入戊二醛水溶液進行蛋白交聯(lián)，離心，水洗，得到第二種微粒；向水洗后的第二種微粒中加入體積比為1:1的丙酮和N-甲基吡咯烷酮混合液混合，用于去除聚乳酸-羥基乙酸共聚物，水洗得到絲素蛋白單組分微囊懸液； 2)按絲素蛋白單組分微囊與DNA功能化的金納米粒子的摩爾比為1:10000-100000的比例，將絲素蛋白單組分微囊懸液與DNA功能化的金納米粒子膠體溶液混合均勻，孵育，得到絲素蛋白-納米金雜化微囊`，所述DNA為端部修飾有一個巰基的5-100個堿基的序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種絲素蛋白-納米金雜化微囊的制備方法，其特征是所述蛋白的不良溶劑為甲醇或乙醇。
6.權(quán)利要求4或5的方法制備的一種絲素蛋白-納米金雜化微囊。
7.權(quán)利要求6的一種絲素蛋白-納米金雜化微囊在制備絲素蛋白-納米金載藥雜化微囊中的應(yīng)用，所述藥為蛋白或多糖。
8.權(quán)利要求6的一種絲素蛋白-納米金雜化微囊在制備拉曼成像造影劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K9/50GK103768038SQ201410066374
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年2月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月26日
【發(fā)明者】張其清, 杜博, 周志敏 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所