維生素c在抑制農(nóng)藥ddt肝臟毒性中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的應(yīng)用。將維生素C與DDT共同處理人肝臟正常細(xì)胞，檢測(cè)維生素C對(duì)DDT肝臟損傷的抑制效果。30μM和60μM的DDT對(duì)人肝臟細(xì)胞的損傷分別為27.5%和46.4%。通過加入1-50μM維生素C后，減弱了該損傷。用維生素C處理人肝臟細(xì)胞24小時(shí)，無(wú)明顯毒副作用，體現(xiàn)了維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的效果。
【專利說(shuō)明】維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及維生素C的新用途，具體屬于維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]DDT,又稱二氯二苯三氯乙烷，是有機(jī)氯殺蟲劑的一種，于1874年首次合成，最初被用于消滅瘧疾等蟲媒傳染病，第二次世界大戰(zhàn)后，其作為一種有效殺蟲劑，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)。但是從20世紀(jì)60年代開始，人們逐漸發(fā)現(xiàn)，隨著該類農(nóng)藥的長(zhǎng)期使用，生態(tài)環(huán)境中DDT的積累也越來(lái)越多，動(dòng)物、植物、水、土壤以及空氣的樣本中均發(fā)現(xiàn)了 DDT的殘留，即使是在從沒有該類農(nóng)藥使用紀(jì)錄的南極，也發(fā)現(xiàn)了 DDT的存在，說(shuō)明DDT的影響是全球性的。在人群的流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，DDT在人體中的蓄積有可能是過去50年來(lái)肝癌、結(jié)腸癌以及乳腺癌等癌癥發(fā)病率升高的原因之一。鑒于DDT對(duì)生態(tài)環(huán)境的巨大污染以及潛在的對(duì)人體健康的危害，從70年代開始，歐美等的發(fā)達(dá)國(guó)家相繼禁止DDT的生產(chǎn)和使用。2001年5月21-23日，在瑞典斯德哥爾摩外交大會(huì)上通過《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》后，包括中國(guó)在內(nèi)的世界上92個(gè)國(guó)家和歐共體在斯德哥爾摩簽署了旨在控制和消除POPs及其污染影響的公約，從而全面開始了削減和淘汰POPs的國(guó)際合作，但在一些欠發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)，特別是在非洲國(guó)家，DDT作為切斷瘧疾傳染途徑的廉價(jià)而有效工具仍在使用。此外，DDT具有持久性、半衰期長(zhǎng)(約為7年)和難降解的特性，且在生物體內(nèi)具有累積性，在環(huán)境中仍大量存在，其殘留量對(duì)人體健康具有嚴(yán)重?fù)p傷，因此，關(guān)于其和人類健康關(guān)系的研究，特別是和肝臟健康的相關(guān)性研究越來(lái)越受到人們的重視。
[0003]維生素C又稱抗壞血酸，是一種水溶性的天然抗氧化劑。維生素C的應(yīng)用也比較廣泛，它可以增強(qiáng)人體免疫`功能；預(yù)防和治療缺鐵性貧血；預(yù)防和治療惡性貧血；預(yù)防和治療壞血病；促進(jìn)膠原形成和膽固醇的代謝；有利于維持骨骼和牙齒的正常功能；有利于維持細(xì)胞膜的完整性；具有抗衰老作用；具有防癌抗癌作用。此外，維生素C對(duì)某些毒性物質(zhì)具有解毒作用，鉛化物、砷化物、苯、細(xì)菌毒素等是日常膳食中常見的有毒有害物質(zhì)，對(duì)人體健康存在潛在危害。當(dāng)致毒劑量的鉛化物、砷化物、苯以及細(xì)菌毒素等進(jìn)人人體內(nèi)時(shí)，充足的維生素C有利于緩解其毒性，從而降低這些有害物質(zhì)對(duì)人體健康的危害程度。但是關(guān)于維生素C對(duì)于農(nóng)藥毒性的解毒作用，目前未見報(bào)道。
[0004]經(jīng)對(duì)現(xiàn)有文獻(xiàn)的檢索，未見關(guān)于維生素C在抑制DDT肝臟毒性中應(yīng)用的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供維生素C的新用途，即維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明是通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，用DDT和維生素C單獨(dú)或者共同處理人正常肝細(xì)胞HL-7702，檢測(cè)該細(xì)胞生長(zhǎng)的情況，30 μ M和60 μ M的DDT對(duì)人肝臟細(xì)胞的損傷分別為27.5%和46.4%，通過加入5-100 μ M維生素C后，減弱了該損傷，細(xì)胞凋亡率最大降低至2%，實(shí)驗(yàn)表明維生素C與DDT共同處理HL-7702細(xì)胞，可以顯著抑制DDT對(duì)HL-7702細(xì)胞損傷，而維生素C單獨(dú)處理細(xì)胞，對(duì)HL-7702細(xì)胞生長(zhǎng)沒有影響。說(shuō)明維生素C可在抑制DDT肝臟毒性中的應(yīng)用。
[0007]維生素C傳統(tǒng)上是作為一種水溶性的天然抗氧化劑，具有增強(qiáng)人體免疫功能；預(yù)防和治療惡性貧血和壞血??；促進(jìn)膠原形成和膽固醇的代謝；有利于維持骨骼和牙齒的正常功能和細(xì)胞膜的完整性；具有抗衰老和防癌抗癌等功能。本發(fā)明為維生素C提供了一種新用途，即維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的應(yīng)用?？墒笵DT高暴露地區(qū)、高殘留地區(qū)人群重視維生素C的食用，服務(wù)于人類健康。也可以為農(nóng)藥DDT污染的環(huán)境治理提供理論依據(jù)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0008]圖1經(jīng)MTT方法檢測(cè)，所得到的DDT對(duì)HL-7702細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
[0009]圖2經(jīng)MTT方法檢測(cè)，所得到的維生素C對(duì)HL-7702細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
[0010]圖3經(jīng)MTT方法檢測(cè)，所得到的維生素C與DDT共同處理，對(duì)HL-7702細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1:
[0012](一)農(nóng)藥DDT和維生素C單獨(dú)處理或共同處理的劑量選擇:
[0013](I)取0.176g維生素C粉末，加入IOml PBS緩沖液，置于4°C攪拌器上攪拌，在細(xì)胞超凈臺(tái)中，用0.22微米的微孔濾膜過濾。配成終濃度為IOOmM的維生素C溶液。
[0014](2)將(I)中得到的IOOmM的維生素C溶液，用培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)基，稀釋成不同的工作濃度，即 1、2、5、10、30、50、70、100μΜ。
[0015](3)在細(xì)胞超凈臺(tái)中，往0.1g DDT粉末中加入3.54ml DMS0，置于振蕩儀上振蕩。配成終濃度為IOOmM的DDT溶液。
[0016](4)將(3)得到IOOmM的DDT溶液，用培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)基，稀釋成不同濃度的工作濃度，即 1、5、10、20、30、40、50、60 μ Μ。
[0017](5)將(I)中獲得的IOOmM的維生素C溶液，用(3)中稀釋得到的30或60 μ M的DDT溶液，稀釋成1、2、5、10、30、50、70、100μΜ的維生素C溶液。
[0018](二)農(nóng)藥DDT和維生素C單獨(dú)處理或共同處理HL-7702細(xì)胞24小時(shí)后，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響:
[0019]將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-7702細(xì)胞，以I X IO3個(gè)/孔傳入96孔培養(yǎng)板。37°C含5%的C02培養(yǎng)箱孵育24小時(shí)后，分別用維生素C和DDT單獨(dú)或共同處理，設(shè)五個(gè)復(fù)孔。孵育24小時(shí)后棄去孔內(nèi)培養(yǎng)基，用PBS洗滌2次后加入新的培養(yǎng)基，每孔加MTT溶液(5mg/ml)20ml，繼續(xù)孵育4小時(shí)后終止培養(yǎng)。小心棄去孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入150ml DMS0，搖床振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。于570`nm波長(zhǎng)，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值。
[0020]本發(fā)明用維生素C和DDT單獨(dú)或共同處理，檢測(cè)對(duì)人正常肝細(xì)胞株HL-7702細(xì)胞的生長(zhǎng)影響，當(dāng)DDT含量為1、5、10、20、30、40、50、60 μ M時(shí)，對(duì)HL-7702細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制，呈劑量依賴性的關(guān)系，且當(dāng)含量大于10 μ M時(shí)，顯著性地抑制了 HL-7702細(xì)胞的生長(zhǎng)(ρ〈0.05)(見圖1);當(dāng)維生素C含量為1、2、5、10、30、50、70、10(^]?，處理1-7702細(xì)胞24小時(shí)后，對(duì)HL-7702細(xì)胞生長(zhǎng)基本無(wú)影響(p>0.05)(見圖2);當(dāng)1、2、5、10、30、50 μ M的維生素C與30或60 μ M的DDT共同處理HL-7702細(xì)胞24小時(shí)后，維生素C減弱了 DDT對(duì)HL-7702細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制效果，且當(dāng)維生素C含量大于2-50 μ M時(shí)，極顯著地減弱DDT的肝臟毒性(ρ〈0.01)(見圖3)。`
【權(quán)利要求】
1.維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的維生素C在抑制農(nóng)藥DDT肝臟毒性中的應(yīng)用，其特征在于所述的維生素C有效 抑制劑量為1-50 μ M0
【文檔編號(hào)】A61P39/02GK103860548SQ201410120484
【公開日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月28日
【發(fā)明者】晉小婷, 李卓玉, 宋莉, 李漢卿, 劉相元, 陳美蘭 申請(qǐng)人:山西大學(xué)