干擾素微球在制備治血管瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了干擾素微球在制備治血管瘤藥物中的應(yīng)用，所述干擾素微球是：自然提取的干擾素、基因重組表達(dá)干擾素、聚乙二醇修飾的干擾素、糖基化修飾的干擾素或人血清蛋白融合的干擾素中的一種與多糖制備成干擾素多糖顆粒，所述干擾素多糖顆粒再與緩釋材料制備成干擾素微球。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明發(fā)掘了干擾素微球的新醫(yī)療用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域；本發(fā)明的干擾素微球作為藥物治療血管瘤具有長(zhǎng)效緩釋、無毒副作用、順應(yīng)性好、減輕病人痛苦、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，易于被患者接受；干擾素微球的制備工藝簡(jiǎn)單，對(duì)環(huán)境友好，在治療血管瘤方面有良好的應(yīng)用前景。
【專利說明】干擾素微球在制備治血管瘤藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及干擾素微球的新用途，具體地說，是涉及干擾素微球在制備治血管瘤 藥物中的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 血管瘤是小孩常見的一種疾病，新生嬰兒發(fā)病率為2%?3%，0?1歲發(fā)病率為10% 左右，早產(chǎn)或偏輕的新生兒發(fā)病率約為20%?30%。目前有手術(shù)治療、激光治療等，但是這 些方法均有不同程度的毒副作用。2008年《新英格蘭醫(yī)學(xué)》雜志報(bào)道了 口服普萘洛爾（心得 安)能起到很好的療效，但是口服普萘洛爾存在潛在的心臟毒副作用?？茖W(xué)家們開始尋找新 的藥物治療血管瘤。
[0003] 干擾素（IFN)是一種廣譜抗病毒劑，其并不直接殺傷或抑制病毒，而主要是通過細(xì) 胞表面受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，從而抑制病毒的復(fù)制，其類型分為三類，α-(白細(xì) 胞）型、β-(成纖維細(xì)胞）型和(淋巴細(xì)胞）型；同時(shí)還可增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（ΝΚ細(xì)胞)、 巨噬細(xì)胞和Τ淋巴細(xì)胞的活力，從而起到免疫調(diào)節(jié)作用，并增強(qiáng)抗病毒能力。干擾素是一組 具有多種功能的活性蛋白質(zhì)(主要是糖蛋白），是一種由單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因 子。它們?cè)谕N細(xì)胞上具有廣譜的抗病毒、影響細(xì)胞生長(zhǎng)，以及分化、調(diào)節(jié)免疫功能等多種 生物活性。關(guān)于干擾素與多糖、緩釋材料制備的微球用來治療血管瘤的應(yīng)用還未見報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種干擾素微球在制備治血管瘤藥 物中的應(yīng)用。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0006] 干擾素微球在制備治血管瘤藥物中的應(yīng)用，所述干擾素微球是：自然提取的干擾 素、基因重組表達(dá)干擾素、聚乙二醇修飾的干擾素、糖基化修飾的干擾素或人血清蛋白融合 的干擾素中的一種與多糖制備成干擾素多糖顆粒，所述干擾素多糖顆粒再與緩釋材料制備 成干擾素微球。
[0007] 優(yōu)選地，所述干擾素多糖顆粒是指干擾素與多糖在聚乙二醇溶液中通過冷凍干燥 或噴霧干燥制備得到，所述多糖選自葡聚糖或海藻酸鈉中的一種或兩種。
[0008] 優(yōu)選地，所述干擾素為干擾素-α、干擾素-β或干擾素-Υ。
[0009] 優(yōu)選地，所述緩釋材料選自聚乳酸、聚羥基乙酸-聚乳酸、聚己內(nèi)酯、聚乳酸-聚乙 二醇或聚羥基乙酸-聚乳酸-聚乙二醇中的一種或多種。
[0010] 優(yōu)選地，所述干擾素微球是通過水包油-油包固的方法或水包油-油包油-油包 固的方法制備得到。
[0011] 優(yōu)選地，所述干擾素微球是通過皮下注射或顱內(nèi)注射。
[0012] 優(yōu)選地，所述干擾素微球的注射劑量為7 X 104單位/平方米?1. 8 X 1012單位/平 方米，所述平方米是指腫瘤的面積。
[0013] 優(yōu)選地，所述干擾素微球的注射頻率為7天?60天一次。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有以下有益效果：
[0015] 1、本發(fā)明發(fā)掘了干擾素微球的新醫(yī)療用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域；
[0016] 2、本發(fā)明的干擾素微球作為藥物治療血管瘤具有長(zhǎng)效緩釋、無毒副作用、順應(yīng)性 好、減輕病人痛苦、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，易于被患者接受；
[0017] 3、干擾素微球制備工藝簡(jiǎn)單，對(duì)環(huán)境友好，在治療血管瘤方面有良好的應(yīng)用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018] 附圖1為本發(fā)明的干擾素微球在臨床治療血管瘤的效果對(duì)照?qǐng)D；其中，B是治療I 組，D是治療II組，A和C是不治療組。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明。
[0020] 實(shí)施例1干擾素微球的制備
[0021] 一、制備干擾素多糖顆粒
[0022] ①用超純水分別制備10% (w/w)的聚乙二醇（PEG)水溶液和10% (w/w)的葡聚糖 水溶液。精確稱取800mg自然提取的干擾素溶于7.2ml超純水中待用。
[0023] ②在0°C?4°C條件下，將上述的葡聚糖水溶液、干擾素水溶液和PEG水溶液按照 體積比為1:1: 5、1:1:10、1:1:20或1:1:40的比例混合，然后旋渦震蕩30s?60s充分混勻。
[0024] ③將干擾素、PEG和葡聚糖形成的混合溶液冷凍過夜，然后真空冷凍干燥。
[0025] ④將步驟③所得的樣品用二氯甲烷洗滌三次除去PEG連續(xù)相，獲得載干擾素多糖 顆粒。
[0026] 得到的干擾素多糖顆粒的粒徑為0. 3?5μπι，這些玻璃體顆粒光滑圓整，粒徑分 布均勻，干擾素的結(jié)構(gòu)得到較好的保護(hù)，避免了在劑型制備過程中失活。
[0027] 需要說明的是，干擾素還可以是基因重組表達(dá)干擾素、聚乙二醇修飾的干擾素、糖 基化修飾的干擾素或人血清融合的干擾素中的任意一種。所述干擾素多糖顆粒還可以是干 擾素與多糖在聚乙二醇溶液中通過噴霧干燥制備得到，所述多糖還可以是海藻酸鈉。
[0028] 二、制備干擾素微球
[0029] ①稱取lg聚乙烯醇（PVA)和5g NaCl，加超純水94g，然后加熱、攪拌，至PVA完全 溶脹，停止加熱，繼續(xù)緩慢攪拌，待溶液呈澄清透明且無氣泡后，停止攪拌，放于4°C冰箱待 用。該溶液中PVA濃度為1% (w/w)，NaCl濃度為5% (w/w)。
[0030] ②精確稱取緩釋材料聚羥基乙酸-聚乳酸（PLGA) 200mg，加二氯甲烷800mg，漩渦 振蕩，使PLGA溶于二氯甲烷中，得PLGA的二氯甲烷溶液，濃度為20 % (w/w)，現(xiàn)用現(xiàn)配，以 防二氯甲烷揮發(fā)。
[0031] ③稱取上述制備的干擾素多糖顆粒l〇mg，均勻分散于0. 5g步驟②中的PLGA的二 氯甲燒溶液中，磁力攪拌15min，轉(zhuǎn)速1800rpm，充分?jǐn)嚢枋沟酶蓴_素多糖顆粒均勻分散于 PLGA的二氯甲烷溶液中，將所得初乳分散于含1% (w/w) PVA和5% (w/w)氯化鈉的水溶 液中，以2200rpm的轉(zhuǎn)速勻楽成復(fù)乳（S/0/W)，于lmin內(nèi)轉(zhuǎn)移到4°C的10% (w/w)氯化鈉 的水溶液中固化，攪拌3?4小時(shí)后收集陳化的蛋白微球，用超純水洗滌三次，在冰相預(yù)凍 過夜，再真空冷凍干燥，制得粒徑在50 μ m?120 μ m的微球。
[0032] 所述緩釋材料還可以是聚乳酸（PLA)、聚己內(nèi)酯（PCL)、聚乳酸-聚乙二醇 (PLA-PEG)或聚羥基乙酸-聚乳酸-聚乙二醇（PLGA-PEG)中的一種或幾種。
[0033] 所述干擾素微球還可以采用水包油-油包油-油包固（S/0/0/W)的方法制備得到 (i￥JAL ：Yuan ff, ffu F, Guo M, Jin T. Development of protein delivery microsphere system by a novel S/0/0/W multi-emulsion. Eur J Pharm Sci, 2009, 36 (2-3) : 212-218.袁偉恩，吳 飛，葛梅燕，金拓.用一種新穎的水包油-油包油-油包固的方法制備輸送蛋白微球系統(tǒng)， 歐洲藥劑科學(xué)雜志，2009, 36 (2-3) :212-218)。制備的干擾素微球可以用于皮下注射或顱 內(nèi)注射，起到緩釋和治療血管瘤的作用。
[0034] 實(shí)施例2自然提取的干擾素 -α制備的微球治療血管瘤的臨床試驗(yàn)
[0035] 一、實(shí)驗(yàn)方法
[0036] 1.干擾素微球注射液的預(yù)處理
[0037] 按照實(shí)施例1的方法制備自然提取的干擾素-α微球。
[0038] 羧甲基纖維素（CMC)溶劑的配方為：0. 5%CMC，5%甘露醇，0. 1%吐溫-80,余量為水。
[0039] 干擾素微球注射液的制備：將123mg干擾素微球混懸于7. 5ml CMC溶劑中，得到含 干擾素微球和CMC的混懸液，即干擾素微球注射液，其中，干擾素的終濃度為3X 101(lU/ml。
[0040] 2.干擾素微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)
[0041] 血管瘤的幼兒患者分為不接受治療組和治療組，治療組分為I組和II組，治療組 根據(jù)血管瘤的面積大小注射干擾素微球，I組的注射劑量為7 X 104單位/平方米/7天(治 療4個(gè)月），II組的注射劑量為1.8X1012單位/平方米/60天(治療4個(gè)月）。
[0042] 3.干擾素微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0043] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示(其中，B是治療I組，D是治療II組，A和C是不治療組)。結(jié) 果顯示：相對(duì)于不接受治療組，I組、II組的血管瘤明顯變小或消失了，說明本發(fā)明的干擾 素微球完全可以治愈血管瘤。
[0044] 實(shí)施例3重組干擾素 -α制備的微球治療血管瘤的臨床試驗(yàn)
[0045] 一、實(shí)驗(yàn)方法
[0046] 1.重組干擾素 -α微球注射液預(yù)處理
[0047] 按照實(shí)施例1的方法制備重組干擾素-α微球。
[0048] 羧甲基纖維素（CMC)溶劑的配方為：0. 5%CMC，5%甘露醇，0. 1%吐溫-80,余量為水。
[0049] 干擾素微球注射液的制備：將123mg干擾素微球混懸于7. 5ml CMC溶劑中，得到含 干擾素微球和CMC的混懸液，即干擾素微球注射液，其中，干擾素的終濃度為3X 101(lU/ml。
[0050] 2.重組干擾素-α微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)
[0051] 血管瘤的幼兒患者分為不接受治療組和治療組，治療組分為I組和II組，治療組 根據(jù)血管瘤的面積大小注射干擾素微球，I組的注射劑量為7 X 104單位/平方米/7天(治 療4個(gè)月），II組的注射劑量為9X 1011單位/平方米/60天(治療4個(gè)月）。
[0052] 3.重組干擾素-α微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0053] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于不接受治療組，I組、II組的血管瘤明顯變小或消失了，說 明本發(fā)明的干擾素微球完全可以治愈血管瘤。
[0054] 實(shí)施例4聚乙二醇修飾的干擾素 -α制備的微球治療血管瘤的臨床試驗(yàn)
[0055] -、實(shí)驗(yàn)方法
[0056] 1.聚乙二醇修飾的干擾素 _α微球注射液預(yù)處理
[0057] 按照實(shí)施例1的方法制備聚乙二醇修飾的干擾素 _α微球。
[0058] 羧甲基纖維素（CMC)溶劑的配方為：0. 5%CMC，5%甘露醇，0. 1%吐溫-80,余量為水。
[0059] 干擾素微球注射液的制備：將123mg干擾素微球混懸于7. 5ml CMC溶劑中，得到含 干擾素微球和CMC的混懸液，即干擾素微球注射液，其中，干擾素的終濃度為3X 101(lU/ml。
[0060] 2.聚乙二醇修飾的干擾素-α微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)
[0061] 血管瘤的幼兒患者分為不接受治療組和治療組，治療組分為I組和II組，治療組 根據(jù)血管瘤的面積大小注射干擾素微球，I組的注射劑量為7 X 104單位/平方米/7天(治 療4個(gè)月），II組的注射劑量為7X 1011單位/平方米/60天(治療4個(gè)月）。
[0062] 3.聚乙二醇修飾的干擾素-α微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0063] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于不接受治療組，I組、II組的血管瘤明顯變小或消失了，說 明本發(fā)明的干擾素微球完全可以治愈血管瘤。
[0064] 實(shí)施例5人血清蛋白融合干擾素-α制備的微球治療血管瘤的臨床試驗(yàn)
[0065] 一、實(shí)驗(yàn)方法
[0066] 1.人血清蛋白融合干擾素_α微球注射液預(yù)處理
[0067] 按照實(shí)施例1的方法制備人血清蛋白融合干擾素 _α微球。
[0068] 羧甲基纖維素（CMC)溶劑的配方為：0. 5%CMC，5%甘露醇，0. 1%吐溫-80,余量為水。
[0069] 干擾素微球注射液的制備：將123mg干擾素微球混懸于7. 5ml CMC溶劑中，得到含 干擾素微球和CMC的混懸液，即干擾素微球注射液，其中，干擾素的終濃度為3X 101(lU/ml。
[0070] 2.人血清蛋白融合干擾素 -α微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)
[0071] 血管瘤的幼兒患者分為不接受治療組和治療組，治療組分為I組和II組，治療組 根據(jù)血管瘤的面積大小注射干擾素微球，I組的注射劑量為7 X 104單位/平方米/7天(治 療4個(gè)月），II組的注射劑量為6X 101°單位/平方米/60天(治療4個(gè)月）。
[0072] 3.人血清蛋白融合干擾素-α微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0073] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于不接受治療組，I組、II組的血管瘤明顯變小或消失了，說 明本發(fā)明的干擾素微球完全可以治愈血管瘤。
[0074] 實(shí)施例6重組干擾素-β制備的微球治療血管瘤的臨床試驗(yàn)
[0075] 一、實(shí)驗(yàn)方法
[0076] 1.重組干擾素微球注射液預(yù)處理
[0077] 按照實(shí)施例1的方法制備重組干擾素微球。
[0078] 羧甲基纖維素（CMC)溶劑的配方為：0. 5%CMC，5%甘露醇，0. 1%吐溫-80,余量為水。
[0079] 干擾素微球注射液的制備：將123mg實(shí)施例1所制備的干擾素微球混懸于7. 5ml CMC溶劑中，得到含干擾素微球和CMC的混懸液，即干擾素微球注射液，其中，干擾素的終濃 度為 3X101(lU/ml。
[0080] 2.重組干擾素 -β微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)
[0081] 血管瘤的幼兒患者分為不接受治療組和治療組，治療組分為I組和II組，治療組 根據(jù)血管瘤的面積大小注射干擾素微球，I組的注射劑量為7 X 104單位/平方米/7天(治 療4個(gè)月），II組的注射劑量為5X 1011單位/平方米/60天(治療4個(gè)月）。
[0082] 3.重組干擾素 -β微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0083] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于不接受治療組，I組、II組的血管瘤明顯變小或消失了，說 明本發(fā)明的干擾素微球完全可以治愈血管瘤。
[0084] 實(shí)施例7重組干擾素-Υ制備的微球治療血管瘤的臨床試驗(yàn)
[0085] 一、實(shí)驗(yàn)方法
[0086] 1.重組干擾素微球注射液預(yù)處理
[0087] 按照實(shí)施例1的方法制備重組干擾素 -Υ微球。
[0088] 羧甲基纖維素（CMC)溶劑的配方為：0. 5%CMC，5%甘露醇，0. 1%吐溫-80,余量為水。
[0089] 干擾素微球注射液的制備：將123mg干擾素微球混懸于7. 5ml CMC溶劑中，得到含 干擾素微球和CMC的混懸液，即干擾素微球注射液，其中，干擾素的終濃度為3X 101(lU/ml。
[0090] 2.重組干擾素微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)
[0091] 血管瘤的幼兒患者分為不接受治療組和治療組，治療組分為I組和II組，治療組 根據(jù)血管瘤的面積大小注射干擾素微球，I組的注射劑量為7 X 104單位/平方米/7天(治 療4個(gè)月），II組的注射劑量為4X 101°單位/平方米/60天(治療4個(gè)月）。
[0092] 3.重組干擾素微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0093] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于不接受治療組，I組、II組的血管瘤明顯變小或消失了，說 明本發(fā)明的干擾素微球完全可以治愈血管瘤。
[0094] 實(shí)施例8人血清蛋白干擾素-Y制備的微球治療血管瘤的臨床試驗(yàn)
[0095] 一、實(shí)驗(yàn)方法
[0096] 1.人血清蛋白干擾素微球注射液預(yù)處理
[0097] 按照實(shí)施例1的方法制備人血清蛋白干擾素-Y微球。
[0098] 羧甲基纖維素（CMC)溶劑的配方為：0. 5%CMC，5%甘露醇，0. 1%吐溫-80,余量為水。
[0099] 干擾素微球注射液的制備：將123mg干擾素微球混懸于7. 5ml CMC溶劑中，得到含 干擾素微球和CMC的混懸液，即干擾素微球注射液，其中，干擾素的終濃度為3X 101(lU/ml。
[0100] 2.人血清蛋白干擾素-γ微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)
[0101] 血管瘤的幼兒患者分為不接受治療組和治療組，治療組分為I組和II組，治療組 根據(jù)血管瘤的面積大小注射干擾素微球，I組的注射劑量為7 X 104單位/平方米/7天(治 療4個(gè)月），II組的注射劑量為8X 1011單位/平方米/60天(治療4個(gè)月）。
[0102] 3.人血清蛋白干擾素微球治療血管瘤的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0103] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于不接受治療組，I組、II組的血管瘤明顯變小或消失了，說 明本發(fā)明的干擾素微球完全可以治愈血管瘤。
[0104] 本發(fā)明發(fā)掘了干擾素微球的新醫(yī)療用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明的干 擾素微球作為藥物治療血管瘤具有長(zhǎng)效緩釋、無毒副作用、順應(yīng)性好、減輕病人痛苦、價(jià)格 低等優(yōu)點(diǎn)，易于被患者接受。且干擾素微球的制備工藝簡(jiǎn)單，對(duì)環(huán)境友好，在治療血管瘤方 面有良好的應(yīng)用前景。
[0105] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1. 干擾素微球在制備治血管瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述干擾素微球是：自然 提取的干擾素、基因重組表達(dá)干擾素、聚乙二醇修飾的干擾素、糖基化修飾的干擾素或人血 清蛋白融合的干擾素中的一種與多糖制備成干擾素多糖顆粒，所述干擾素多糖顆粒再與緩 釋材料制備成干擾素微球。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述干擾素多糖顆粒是指干擾素與多糖 在聚乙二醇溶液中通過冷凍干燥或噴霧干燥制備得到，所述多糖選自葡聚糖或海藻酸鈉中 的一種或兩種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述干擾素為干擾素_α、干擾素-β或 干擾素1。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述緩釋材料選自聚乳酸、聚羥基乙 酸-聚乳酸、聚己內(nèi)酯、聚乳酸-聚乙二醇或聚羥基乙酸-聚乳酸-聚乙二醇中的一種或多 種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述干擾素微球是通過水包油-油包固的 方法或水包油-油包油-油包固的方法制備得到。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述干擾素微球是通過皮下注射或顱內(nèi) 注射。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述干擾素微球的注射劑量為7 Χ104單 位/平方米?1. 8 X 1012單位/平方米，所述平方米是指腫瘤的面積。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述干擾素微球的注射頻率為7天?60 天一次。
【文檔編號(hào)】A61K47/34GK104056256SQ201410123851
【公開日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年3月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月28日
【發(fā)明者】袁偉恩, 吳飛, 汪道晨, 徐明新 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)