常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法
【專利摘要】常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，屬于植物活性成分的制備方法【技術領域】。其包括以下工藝步驟：1）原料稱取；2）酸堿分開制粒；3）酸堿制粒干燥，混合，研磨，壓片，得到常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片。本發(fā)明以常山胡柚果實皮渣廢棄物為材料，建立有效成分提取技術，提取檸檬苦素類和黃酮類物質，研發(fā)具有降血脂功能的泡騰片，滿足當今降血脂保健品市場，具有廣闊的市場前景。同時促進果業(yè)深加工及加工副產物的利用，提高經濟效益，減少環(huán)境污染，具有重要的實際指導意義。
【專利說明】常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物活性成分的制備方法【技術領域】，具體涉及常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法。
【背景技術】
[0002]常山胡柚又名金柚，是由柚和橙天然雜交而成的我國柑桔屬植物的一個新種，原產于浙江省常山縣，至今已有百余年栽培史。因其果實外形美觀、大小適宜、色澤誘人、香氣獨特、口感鮮脆，且營養(yǎng)豐富、極耐貯運，因而深受消費者的青睞，它既是一種理想的鮮食果實，也是一種很好的加工原料，經濟價值甚高，并多次在全國評比中獲獎，成為我國第一個優(yōu)質雜柑，號稱“中華第一雜柑”。
[0003]據(jù)統(tǒng)計，浙江省常山胡柚年產量13萬噸，但由于果品品質等原因，常山胡柚的經濟效益遞增緩慢，甚至出現(xiàn)局部地區(qū)產量過剩的現(xiàn)象，同時常山胡柚的皮渣廢棄物造成了一定的環(huán)境污染。因此，研究常山胡柚的深度加工技術，尤其是對果實皮渣廢棄物的綜合利用，是提高產業(yè)效益，減少皮渣廢棄物污染的重要途徑。

【發(fā)明內容】

[0004]針對現(xiàn)有技術存在的問題，本發(fā)明的目的在于設計提供一種常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法的技術方案。
[0005]所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟:
1)按照以下重量配比稱取各原料
常山胡柚果皮果渣提取物粉末5~15%、檸檬酸和碳酸鈉40~50%、糊精30~50%、無水乙醇2~8%、PEG-4000 0.2~1%，所述的檸檬酸:碳酸鈉的重量比為1.6:1 ;
2)取上述各原料過80目篩，將常山胡柚果皮果渣提取物粉末均勻分成兩份分別與檸檬酸和碳酸鈉混合，在酸堿體系中分別加入糊精做填充劑，以無水乙醇作為粘合劑，24目制粒進行酸堿分開制粒；
3)將酸堿制粒放入40~70°C恒溫干燥箱中進行干燥，干燥完成后，將酸堿制粒混合，加入所述重量配比的PEG-4000，研磨，使其充分混合后，在壓力3~IOMpa下進行壓片，得到常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片。
[0006]所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的常山胡柚果皮果渣提取物粉末通過以下步驟制得:
a)取新鮮的常山胡柚果皮果渣依次進行剪碎、60°C烘干和粉碎處理，得到粉末；
b)取步驟I)得到的粉末用95%乙醇溶液加熱回流進行三次抽提，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1.5小時，得到油狀提取物；
c)取步驟2)得到的油狀提取物加入石油醚進行脫脂處理，油狀提取物與石油醚按體積比1:1混合進行萃取，萃取后取下層提取物揮發(fā)石油醚得到脫脂后提取物；d)取脫脂后提取物利用DlOl型大孔樹脂進行柱層析，用濃度20~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液旋蒸，粉碎得常山胡柚果皮果渣提取物粉末。
[0007]所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中按常山胡柚果皮果渣提取物粉末7~12%、檸檬酸和碳酸鈉42~48%、糊精35~45%、無水乙醇3~6%和PEG-4000 0.4~0.8%稱取各原料。
[0008]所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中按常山胡柚果皮果渣提取物粉末10%、檸檬酸和碳酸鈉45%、糊精40%、無水乙醇4.5%、PEG-4000 0.5%稱取各原料。
[0009]所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中恒溫干燥箱烘干溫度為40°C。
[0010]所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟3)壓片壓力為6Mpa。
[0011]本發(fā)明以常山胡柚果實皮渣廢棄物為材料，建立有效成分提取技術，提取檸檬苦素類和黃酮類物質，研發(fā)具有降血脂功能的泡騰片，滿足當今降血脂保健品市場，具有廣闊的市場前景。同時促進果業(yè)深加工及加工副產物的利用，提高經濟效益，減少環(huán)境污染，具有重要的實際指導意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1黃酮類物質標準曲線圖；
圖2檸檬苦素類物質標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0013]以下結合實施例來進一步說明本發(fā)明。
[0014]實施例1:山胡柚果皮果渣提取物的制備
1)取新鮮的常山胡柚果皮果渣依次進行剪碎、60°c烘箱烘干和粉碎處理，得到粉末；
2)取步驟1)得到的粉末用95%乙醇溶液加熱回流進行分三次抽提，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1.5小時，得到油狀提取物；
3)取步驟2)得到的油狀提取物與石油醚按按體積比1:1混合進行萃取，重復5次，萃取后取下層提取物揮發(fā)石油醚，得到脫脂后提取物；
4)取脫脂后提取物利用DlOl型大孔樹脂進行柱層析，用濃度20~80%的乙醇洗脫洗脫，收集洗脫液，洗脫液旋蒸，粉碎得常山胡柚果皮果渣提取物粉末。
[0015]實施例2:山胡柚果皮果渣提取物泡騰片的制備
將實施例1得到的常山胡柚果皮果渣提取物粉末及各輔料，即:檸檬酸、碳酸鈉、糊精、PEG-4000各過80目篩；將常山胡柚果皮果渣提取物粉末分成兩份分別與檸檬酸和碳酸鈉混合，酸堿體系中 分別加入糊精做填充劑，以無水乙醇作為粘合劑，24目制粒進行酸堿分開制粒，其中酸源由常山胡柚果皮果渣提取物粉末5%、碳酸鈉17.3%、糊精20%混合，以無水乙醇2.25%作為粘合劑，24目制粒得到；堿源由常山胡柚果皮果渣提取物粉末5%、檸檬酸27.7%、糊精20%混合，以無水乙醇2.25%作為粘合劑，24目制粒得到；將酸堿制粒放入40°C恒溫干燥箱中進行干燥，干燥完成后，將酸堿制?；旌?，加入PEG-4000 0.5%，研磨，使其充分混合后，在壓力6Mpa下進行壓片，得到常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片。
[0016]實施例3:山胡柚果皮果渣提取物泡騰片的制備
將實施例1得到的常山胡柚果皮果渣提取物粉末及各輔料，即:檸檬酸、碳酸鈉、糊精、PEG-4000各過80目篩；將常山胡柚果皮果渣提取物粉末分成兩份分別與檸檬酸和碳酸鈉混合，酸堿體系中分別加入糊精做填充劑，以無水乙醇作為粘合劑，24目制粒進行酸堿分開制粒，其中酸源由常山胡柚果皮果渣提取物粉末6%、碳酸鈉18.5%、糊精17.5%混合，以無水乙醇2.1%作為粘合劑，24目制粒得到；堿源由常山胡柚果皮果渣提取物粉末6%、檸檬酸29.5%、糊精17.5%混合，以無水乙醇2.1%作為粘合劑，24目制粒得到；將酸堿制粒放入50°C恒溫干燥箱中進行干燥，干燥完成后，將酸堿制?；旌希尤隤EG-4000 0.8%，研磨，使其充分混合后，在壓力3Mpa下進行壓片，得到常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片。
[0017]實施例4:山胡柚果皮果渣提取物泡騰片的制備
將實施例1得到的常山胡柚果皮果渣提取物粉末及各輔料，即:檸檬酸、碳酸鈉、糊精、PEG-4000各過80目篩；將常山胡柚果皮果渣提取物粉末分成兩份分別與檸檬酸和碳酸鈉混合，酸堿體系中分別加入糊精做填充劑，以無水乙醇作為粘合劑，24目制粒進行酸堿分開制粒，其中酸源由常山胡柚果皮果渣提取物粉末3.5%、碳酸鈉16.2%、糊精22.5%混合，以無水乙醇2.8%作為粘合劑，24目制粒得到；堿源由常山胡柚果皮果渣提取物粉末3.5%、檸檬酸25.8%、糊精22.5%混合，以無水乙醇2.8%作為粘合劑，24目制粒得到；將酸堿制粒放入70°C恒溫干燥箱中進行干燥，干燥完成后，將酸堿制?；旌?，加入PEG-4000 0.4%，研磨，使其充分混合后，在壓力IOMpa下進行壓片，得到常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片。
[0018]實施例5:常山胡柚果皮果渣提取物中黃酮類物質和檸檬苦素類物質的測定和最佳工藝的確定
I材料與方法
1.1實驗材料、儀器、試劑及試藥 1.1.1實驗材料
常山胡柚(購于浙江省常山縣當?shù)厮袌?
1.1.2主要儀器
GZX-9140 MBE數(shù)顯鼓風干燥箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)，UV-1800紫外可見分光光度計(SHIMADZU CORPORATION (島津))，PL-203 電子天平(METTLER TOLEDO (梅特勒-托利多)儀器(上海)有限公司)，HWS26恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司上海一恒科技儀器有限公司)，Sorvall ST 16R 冷凍離心機(Thermo Scientific), FiveEasy PluspH計(METTLER TOLEDO (梅特勒-托利多)儀器(上海)有限公司)，臺式粉末壓片機(天津市思創(chuàng)精實科技發(fā)展有限公司)
1.1.3試劑及試藥
蘆丁(≥98%，購于上海金穗生物科技有限公司)，檸檬苦素(≥98%，購于上海金穗生物科技有限公司)，吳茱萸內酯(≤98%,購于阿拉丁試劑公司)，4-Nitrophenylbutyrate(Lot#lllM5207V，購于美國SIGMA試劑公司)，胰脂肪酶(Lot#SLBC9250V，購于美國SIGMA試劑公司)，橄欖油(化學純，購于阿拉丁試劑公司)
1.2實驗方法
1.2.1原料預處理取新鮮常山胡柚皮試樣，剪碎后放入60°C烘箱中烘干，用料理機粉碎成粉末，得粉末1647g，備用。
[0019]1.2.2黃酮類物質和檸檬苦素類物質提取純化
95%乙醇溶液加熱回流進行抽提，分三次提取，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次
1.5小時，得油狀提取物500mL。利用DlOl型大孔樹脂進行柱層析，分別用20%、40%、60%、80%,95%乙醇洗脫，提取液旋蒸得樣品粉末，即為黃酮類物質和檸檬苦素類物質。
[0020]1.2.3功能性成分的含量測定方法
1.2.3.1黃酮類物質含量測定
(I)蘆丁儲備液的配制
用電子天平稱取6.20mg蘆丁對照品于燒杯中，加入15ml無水乙醇溶液，置于恒溫水浴鍋中加熱至蘆丁溶解。轉移至25ml棕色容量瓶中，加無水乙醇定容；用電子天平稱取0.6676g A1C13固體配置成50mL A1C13溶液。配置方法:36%_38%鹽酸溶液按與蒸餾水1: 3的體積比在燒杯中配約為10%的鹽酸40mL，緩慢加入A1C13粉末，攪拌，直至完全溶解，轉移至50mL容量瓶中，再加入蒸餾水定容至50mL ;用電子天平稱取乙酸鈉固體0.8208g于燒杯中，用蒸懼水定容至50mL,加醋酸溶液調節(jié)至pH=5.2。
[0021](2)蘆丁標準溶液的配制
分別取蘆丁儲備液0.0mLU.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL，置于25 mL容量瓶中，加Λ 0.1 mol/L的A1CL3溶液2 mL、pH=5.2的醋酸鈉緩沖溶液I mL，用無水乙醇定容至刻度，搖勻。40°C水浴10 min后，取出容量瓶放入水中冷卻至室溫。
[0022](3)測定波長的選擇
分別量取供試品溶液、蘆丁儲備液各1.0mL，分別置于25mL量瓶中，各加入0.lmol/L三氯化鋁溶液2.0mL與pH=5.2的醋酸鈉緩沖溶液1.0mLjp 30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，40°C水浴10 min。同法制得空白液。按紫外一可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VA)實驗，在200-500 nm波長范圍內掃描，記錄紫外吸收光譜，得最適波長為360nmo
[0023](4)標準曲線的繪制
在360nm波長處測定各濃度蘆丁標準液的吸光度，繪制標準曲線，得回歸方程。如圖1所示。
[0024](5)樣品含量測定
準確稱取20%、40%、60%、80%的乙醇洗脫物粉末各8.0mg,加入燒杯中，加無水乙醇15mL，在恒溫水浴鍋中微熱溶解，恒溫水浴鍋的溫度設置為50°C。完全溶解后取出，冷卻至室溫，轉移至25mL棕色容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。各取3.0mL于25mL棕色容量瓶中，并編號分別為1、2、3、4。加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2.0 mL與pH=5.2的醋酸鈉緩沖溶液1.0mL，加無水乙醇定容至刻度，搖勻。40°C水浴10 min，取出。同時以無水乙醇作為空白對照。在360nm處測定吸光值，將各濃度乙醇洗脫物樣品吸光值代入回歸方程，計算得各濃度乙醇洗脫物中黃酮類物質含量。
[0025]1.2.3.2檸檬苦素類物質含量測定 (I)顯色劑的配制
準確稱取125.0mg對二 -甲氨基苯甲醒溶解于100.0mL硫酸:無水乙醇(V硫酸:V無水乙醇=35:65)混合液中，加入0.5mL 0.9%三氯化鐵溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0026](2)標準曲線的繪制
準確稱取檸檬苦素標準品10.0mg，置于20mL燒杯中，用少量無水乙醇溶解，轉移至IOmL容量瓶中，用無水乙醇定容，搖勻，配成lmg/mL的標準溶液，備用。另取5個IOmL容量瓶，分別加入0.lmL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL標準品溶液，再分別加入顯色劑5.0mL,搖勻，加入無水乙醇定容至刻度，靜置30min后于500nm波長處測定吸光度，以空白溶液為參t匕，以標準品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程。如圖2所示。
[0027](3)樣品含量測定
準確移取一定量標準溶液或樣品溶液于容量瓶中，加入顯色液，搖勻，靜置，以空白試劑作參比，在指定波長處測其吸光度。吸光度代入回歸方程，得到檸檬苦素的含量。
[0028]1.2.3.3降脂作用活性測定 胰脂肪酶是水解膳食脂肪的最重要的酶，等電點為5.0的酸性蛋白分子?？伤?0%-70%的食物脂肪，通過抑制胰脂肪酶活性可以控制高血脂。測定待測物對胰脂肪酶的抑制活性就可進行降脂作用評價。
[0029](I)實驗原理
利用胰脂肪酶將橄欖油水解生成脂肪酸和甘油，脂肪酸和顯色劑中的銅離子反應生成銅皂藍色絡合物，在710nm波長下有最大吸收值，再對照脂肪酸吸光度工作曲線得出脂肪酸的濃度，計算出酶的活性。
[0030](2)實驗操作(銅皂法測定活性)
a反應混合體系(5.8OmL底物)的配制
質量濃度為50g/L阿拉伯膠:取適量阿拉伯膠，加入蒸餾水配制，定容，備用。
[0031]Tris-HCl 緩沖液(20mol/L, ρΗ=7.7):量取 Tris2.4228g 于燒杯中，加適量蒸餾水溶解，加入HCl，利用PH劑進行調節(jié)使PH=7.7。再加蒸餾水定容至lOOOmL。取適量的質量濃度為50g/L阿拉伯膠溶于緩沖液中。
[0032]質量濃度為50g/L醋酸銅溶液(顯色劑):醋酸銅溶液用吡啶調至PH= 6.0。
[0033]配制6mol/L的HCl溶液:確量取36%_38%HC1溶液51.1mL,加水稀釋，定容至IOOmL0
[0034]胰脂肪酶溶液(5mg/mL，約200U/mL ):稱取50mg胰脂肪酶，用適量Tris-HCl緩沖液(75 mol/L, ρΗ=7.4)溶解，16000r/min 離心 5min,用 Tris-HCl 緩沖液定容至 10 mL。將IOmL均分成兩份后，取其中一份煮沸滅活。每次使用前配制。
[0035]橄欖油底物配制:取0.5mL橄欖油、4.50mL正己烷、0.80mL的20mol/LTris-HCl緩沖液混合制得。
[0036]乙醇提取物溶液:用甲醇溶解，使乙醇提取物最終質量濃度為lOOOyg/mL、800 μ g/mL> 600 μ g/mL> 400 μ g/mL> 200 μ g/mL>100 μ g/mL> 50 μ g/mL> 25 μ g/mL 和12.5yg/mL。每組設3個平行。
[0037]b測定樣品組以及對照組的確定
實驗設置樣品組、空白對照組、陽性對照組、陰性對照組，各組取一定量的Tris-HCl緩沖液、酶溶液和樣品，見表1。37°C保溫15min后，加入ImL的6mol/L的HCl溶液終止反應。
[0038]表1乙醇提取物對脂肪酶抑制效果實驗(mL)
【權利要求】
1.常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟: 1)按照以下重量配比稱取各原料 常山胡柚果皮果渣提取物粉末5~15%、檸檬酸和碳酸鈉40~50%、糊精30~50%、無水乙醇2~8%、PEG-4000 0.2~1%，所述的檸檬酸:碳酸鈉的重量比為1.6:1 ; 2)取上述各原料過80目篩，將常山胡柚果皮果渣提取物粉末均勻分成兩份分別與檸檬酸和碳酸鈉混合，在酸堿體系中分別加入糊精做填充劑，以無水乙醇作為粘合劑，24目制粒進行酸堿分開制粒； 3)將酸堿制粒放入40~70°C恒溫干燥箱中進行干燥，干燥完成后，將酸堿制?；旌?，加入所述重量配比的PEG-4000，研磨，使其充分混合后，在壓力3~IOMpa下進行壓片，得到常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片。
2.如權利要求1所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的常山胡柚果皮果 渣提取物粉末通過以下步驟制得: a)取新鮮的常山胡柚果皮果渣依次進行剪碎、60°C烘干和粉碎處理，得到粉末； b)取步驟I)得到的粉末用95%乙醇溶液加熱回流進行三次抽提，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1.5小時，得到油狀提取物； c)取步驟2)得到的油狀提取物加入石油醚進行脫脂處理，油狀提取物與石油醚按體積比1:1混合進行萃取，萃取后取下層提取物揮發(fā)石油醚得到脫脂后提取物； d)取脫脂后提取物利用DlOl型大孔樹脂進行柱層析，用濃度20~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液旋蒸，粉碎得常山胡柚果皮果渣提取物粉末。
3.如權利要求1所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中按常山胡柚果皮果渣提取物粉末7~12%、檸檬酸和碳酸鈉42~48%、糊精35~45%、無水乙醇3~6%和PEG-4000 0.4~0.8%稱取各原料。
4.如權利要求1所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中按常山胡柚果皮果渣提取物粉末10%、檸檬酸和碳酸鈉45%、糊精40%、無水乙醇4.5%、PEG-4000 0.5%稱取各原料。
5.如權利要求1所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中恒溫干燥箱烘干溫度為40°C。
6.如權利要求1所述的常山胡柚果皮果渣提取物的泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟3)壓片壓力為6Mpa。
【文檔編號】A61K9/46GK103919890SQ201410132810
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月3日 優(yōu)先權日:2014年4月3日
【發(fā)明者】張真真, 馮鄭珂, 林敏 , 任思捷, 潘家榮, 張永勇 申請人:中國計量學院