冬青素a在制備抗腫瘤藥物中的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了從植物海南冬青中獲得的單體成分冬青素A(IlexgeninA)在制備抗腫瘤藥物方面的醫(yī)藥新用途。同時，公開了以IlexgeninA為原料制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑、注射劑等藥物劑型。體外實驗表明，在一定濃度范圍內(nèi)，多種腫瘤細胞株具有很強的抑制作用。整體荷瘤實驗表明，冬青素A30mg/kg劑量下抑瘤率達到51.13%。因此，可以用于制備成抗腫瘤藥物以及防治腫瘤的藥物。
【專利說明】冬青素A在制備抗腫瘤藥物中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及冬青素A (IlexgeninA)的抗腫瘤活性以及IlexgeninA在制備抗腫瘤藥物中的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]IlexgeninA為烏蘇燒型三職衍生物，最早在毛冬青(Ilexpubescens Hook,et.Am)中發(fā)現(xiàn),在冬青屬植物中含量較高,是山綠茶的主要特征成分(Johji Yamahara等.Photochemistry, 1987，26(7): 2023-2027)。我們前期報道其對大鼠非酒精性脂肪肝具有較好的改善作用(We1-xi Cui, Jing-Jing Li等.Drug DevelopmentResearch, 2013，74(4):227 - 236);另外我們研究發(fā)現(xiàn)IlexgeninA具有一定的抑菌作用(Xiao-Qing Chen等.Food Chemistry, 2011, 126 (3): 1454 - 1459)。另有報道稱 IlexgeninA具有抑制較好的心血管活性，其可抑制血栓形成(L1-Ping Lin等.Chinese ChemicalLetters, 2013, 24(8):723 - 726)。
[0003]我們的研究發(fā)現(xiàn)IlexgeninA具有良好的抗腫瘤作用，特別是對人皮膚癌、肺癌及胃癌等，在一定濃度范圍內(nèi)，對腫瘤細胞具有殺傷作用，且整體荷瘤動物實驗，對皮膚癌呈現(xiàn)較強的抑制作用。此外，尚未見文獻報道將IlexgeninA制備成抗腫瘤藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的之一提供了 IlexgeninA在制備抗腫瘤藥物中的用途；本發(fā)明目的之二提供了 IlexgeninA的藥物劑型。
[0005]本發(fā)明所指的抗腫瘤藥物為抗皮膚癌、肺癌、胃癌等多種腫瘤的藥物。IlexgeninA可劑量依賴性地抑制皮膚癌、肺癌、胃癌細胞活，因此IlexgeninA具有高效抗腫瘤作用。
[0006]本發(fā)明的藥物制劑含有1%~99%的IlexgeninA和99%~1%的藥用賦形劑(包括其他可組方的藥物)，優(yōu)選含30%~80%的IlexgeninA和70%~20%的藥用賦形劑(包括其他可組方的藥物)，最好含有60%~70%的IlexgeninA和40%~30%的藥用賦形劑(包括其他可組方的藥物)。
[0007]依照藥劑學(xué)方法,擬將本發(fā)明的IlexgeninA制備成多個臨床藥物劑型用于抗腫瘤，包括口服制劑和非腸道給藥的劑型。所指的口服制劑選自于片劑、膠囊劑、滴丸劑、口服液體制劑中的任意一種，所指的非腸道給藥劑型為注射劑。
[0008]本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。本發(fā)明抗腫瘤藥物中的其他配伍用的藥物，指的是有效劑量的I IexgeninA為一定的藥物原料,再配伍其他已允許合用的中藥或化學(xué)藥品。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1是冬青素A(IlexgeninA)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
[0010]圖2是11exgeninA對人肺癌A549、胃癌細胞株SGC7901、黑色素瘤B16細胞株細胞株O~72h的抑制率圖。A.1lexgeninA對:人肺癌細胞株A549、B:胃癌細胞株SGC7901、C:黑色素癌B16活力的影響。
[0011]圖3是IlexgeninA對荷瘤小鼠的抑瘤率。
【具體實施方式】
[0012]下面通過具體實施例來對本發(fā)明作進一步的說明，但這些實施例只是為了說明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0013]冬青素A(IlexgeninA)的分子式C3tlH46O6,化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1。
[0014]冬青素A購自四川標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，含量≥98%。
[0015]本試驗所用的細胞株為國際公用的腫瘤細胞株-肺癌細胞A549、胃癌細胞
[0016]SGC7901、黑色素皮膚癌細胞B16，購買自中國科學(xué)院上海細胞所。
[0017]實施例一:采用MTT比色法檢測IlexgeninA對人肺癌細胞株A549活力的影響:取對數(shù)生長期的肺癌細胞株A549，0.25%胰蛋白酶消化，收集消化后的細胞計數(shù)，用DMEM培養(yǎng)基稀釋成IO3-1O4個/100 μ I濃度的單細胞懸液，每孔100 μ 1，接種到96孔板上，置37°C、5%C02、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h后。空白對照組加入緩沖液PBS，陰性對照組用等體積DMEM培養(yǎng)液，陽性對照組加入不同濃度的順鉬溶液，實驗組加入不同濃度的IlexgeninA (0、5、10、20、40 μ g/ml),每個濃度設(shè) 6 個復(fù)孔，每孔 20 μ I。96 孔板置 37。。、5%C02、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4h后，加入5mg/ml MTT，每孔10 μ 1，培養(yǎng)4h，每孔加Λ 150 μ I DMSO,搖床振蕩IOmin,酶標(biāo)儀570nm吸收波長測定吸光度(A值)，分別測出24、48、72h的OD值。按下列公式計算相對抑制率，抑制率(%) = (1-A實驗組/A對照組)X 100%。結(jié)果見圖2A。
[0018]結(jié)論: 如圖2A所示，IlexgeninA與A549細胞作用后，隨IlexgeninA濃度增加抑制率增高，在20 μ g/ml濃度下即對A549細胞增殖有明顯的抑制作用，與陰性對照組比較差異有顯著性(P〈0.05)，并呈劑量依賴關(guān)系；同時，隨著時間推移，IlexgeninA對A549細胞抑制率逐步升聞，呈時間依賴關(guān)系。
[0019]實施例二，采用MTT比色法檢測IlexgeninA對人胃癌細胞株SGC7901活力的影響:方法學(xué)部分參照實施例一，結(jié)果見圖2B。
[0020]結(jié)論:如圖2A所示，IlexgeninA與SGC7901細胞作用后，隨著IlexgeninA的增加抑制率上升，在10.0 μ g/ml,20.0 μ g/ml,40.0 μ g/ml濃度時對SGC7901細胞增殖抑制作用增強，與陰性對照組比較差異有顯著性(P〈0.01，P〈0.001)，且呈劑量依賴性；同時，隨時間推移，IlexgeninA對SGC7901細胞抑制率亦逐步增加，呈時間依賴關(guān)系。
[0021]實施例三，采用MTT比色法檢測IlexgeninA對黑色素癌細胞株B16的活力影響:方法學(xué)部分參照實施例一，結(jié)果見圖2C。
[0022]結(jié)論:如圖2C所示，IlexgeninA與黑色素癌B16細胞作用后，隨著IlexgeninA的增加，抑制率上升，在5 μ g/ml、10 μ g/ml、20 μ g/ml和40 μ g/ml濃度時對B16細胞增殖有明顯的抑制作用，與陰性對照組比較有顯著性差異(P〈0.05)，呈劑量依賴關(guān)系；同時，隨著時間推移，IlexgeninA對黑色素癌B16細胞抑制率逐步增加，呈時間依賴關(guān)系。
[0023]實施例四，IlexgeninA對黑色素瘤小鼠瘤重的影響
[0024]將BALB/c nu/nu 裸鼠隨機分為模型組、IlexgeninA15mg/kg、30mg/kg 劑量組。將小鼠B16惡性黑色素瘤細胞于背部皮下接種，細胞密度為1\106，每只0.2!^。待成瘤后(2周)連續(xù)給藥17天進行干預(yù)。第18天處死小鼠并剝離腫瘤稱重，計算抑瘤率。
[0025]結(jié)論:冬青素A15mg/kg、30mg/kg劑量組的抑瘤率分別達到36.45%和51.13%實施例五.膠囊的制備IlexgeninA250g,淀粉2500g,將干燥好的淀粉與IlexgeninA充分混合，過120目篩，充分混勻后制備膠囊1000粒，每粒含IlexgeninA250mg。
[0026]實施例六.滴丸的制備600g聚乙二醇水浴溶化,加入IlexgeninA1200g,充分攪拌后置于保溫管中，后采用液體石蠟包裹，吸干石蠟油后加入少量滑石粉混勻，制備滴丸1000丸
[0027]實施例七.片劑的制備IlexgeninAlOOg,淀粉1000g,糖粉200g,適量乙醇制粒后，
經(jīng)整粒機處理后，壓片分裝。
[0028]實施例八.注射劑的制備IlexgeninAlOg,丙二醇20ml,聚乙二醇40ml,注射用水200ml，混合后水浴加熱0.5h， 注射用水加至500ml，超聲處理lOmin，水浴加熱0.5h，調(diào)節(jié)ρΗ5.5~6.5，過濾，灌封滅菌即得。
【權(quán)利要求】
1. 冬青素A在制備抗腫瘤藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用途，其特征在于所述抗腫瘤藥物為抗皮膚癌、肺癌及胃癌的藥物。
3.一種藥物制劑，其特征在于含有有效治療劑量的冬青素A和一種或多種藥學(xué)上可接受的藥用賦形劑，或可與冬青素A組方的其他藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其特征在于含有1%~99%的冬青素A和99%~1%的藥用賦形劑或其他可組方的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于含有30%~80%的冬青素A和70%~20%的藥用賦形劑或其他可組方的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于含有60%~70%的冬青素A和40%~30%的藥用賦形劑或其他可組方的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利3所述的藥物制劑，其特征在于該藥物劑型選自于膠囊劑、片劑、滴丸劑、口服液體制劑、注射劑當(dāng)中的任何一種。
【文檔編號】A61P35/00GK103893188SQ201410146662
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月11日
【發(fā)明者】孫云, 王強 申請人:揚州大學(xué)