凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的及其制備方法與臨床應(yīng)用，成功的制造出凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜生物新型材料。它是以豬乙膜為動(dòng)物模型進(jìn)行基質(zhì)應(yīng)用的試驗(yàn)研究獲得成功。本發(fā)明所制備的“異種乙膜”能夠阻絕大面積燒傷患者的機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，降低超高代謝，并且能夠最大限度的保留了后期皮膚修復(fù)必須的殘存的皮膚結(jié)構(gòu)。治療過(guò)程中經(jīng)過(guò)對(duì)創(chuàng)面徹底清創(chuàng)消毒后可做到不換藥、不植皮、不手術(shù)、保護(hù)創(chuàng)面無(wú)污染、無(wú)并發(fā)癥，從而提高了大面積燒傷治愈率，而且抑制疤痕增生，減少了患者的致殘率。
【專利說(shuō)明】?jī)艏?xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于一次性無(wú)菌醫(yī)療器械制品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說(shuō)屬于生物“乙膜”中核與壁驅(qū)離后呈現(xiàn)網(wǎng)架膜狀外科使用的生物敷料領(lǐng)域，尤其是涉及“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜基質(zhì)”及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]一次性無(wú)菌醫(yī)用生物敷料在治療大面積燒燙傷患者中具有搶救生命的重要作用。隨著組織工程的迅猛發(fā)展，在異體皮膚替代物的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用方面有了很大的進(jìn)展，然而移植皮膚前還存在一些問(wèn)題有待解決。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外皮膚專家一直在尋求相容性良好的創(chuàng)面修復(fù)覆蓋材料，以消除排異反應(yīng)和抗原性為目的制作“異種乙膜”，低溫冷凍保存，以備搶救時(shí)使用。永久性皮膚創(chuàng)面替代材料是當(dāng)前急需要解決的新材料、新技術(shù)。已解決皮膚康復(fù)后血管網(wǎng)毛囊、皮脂腺、汗腺等正常的生理功能。最終使受傷創(chuàng)面達(dá)到解剖重建與功能修復(fù)“完美愈合”。因此，該產(chǎn)品為提高搶救大面積燒燙傷患者的療效，具有廣闊的前景。
[0003]在中國(guó)專利CN1266716A中公開(kāi)了一種交聯(lián)型豬脫細(xì)胞皮片，采用0.25%的胰蛋白酶在4°C下浸泡16~24小時(shí)脫細(xì)胞生物材料。當(dāng)自體皮生長(zhǎng)出來(lái)，保護(hù)膜自然脫落。
[0004]在中國(guó)專利CN1522766A中公開(kāi)一種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，采用
0.04~0.06%胰蛋白酶在2~4°C下消化30~60分鐘之后預(yù)冷，在-70-_80冷凍和37°C "39°C融化的凍融反復(fù)凍融3次后在含慶大霉素等抗生素的磷酸鹽緩沖液中保存。
[0005]在2009.02.26申請(qǐng)了名稱為:無(wú)菌異種醫(yī)用生物膜及其制備方法(申請(qǐng)?zhí)?00910067946.9)的發(fā)明專利現(xiàn)已授權(quán)，它是經(jīng)滅菌加工后的小豬皮，皮厚0.5~1.0mm，表面分布若干裂口。再選用核反應(yīng)堆電子加速器輻照比鈷-60輻照到同樣的滅菌效果，且對(duì)生物膜真皮細(xì)胞和成纖維組織降低了破壞作用。當(dāng)時(shí)主要解決的是生物產(chǎn)品改性問(wèn)題。隨著研究的不斷深入，本發(fā)明人遇到了解決深度創(chuàng)面永久性植入人體并替代異體皮膚緊缺問(wèn)題。為此本發(fā)明人研究完成了凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”及其制備方法，能夠阻絕大面積燒傷患者的機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，降低超高代謝，并且能夠最大限度的保留了燒燙傷患者自身創(chuàng)面皮膚修復(fù)必須的殘存的皮膚結(jié)構(gòu)。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行:
a.原材料精選:選取40~60 kg烏克蘭白豬脊背(60X90) cm2新鮮膜片、采用稀釋為0.1%~0.3%(w/w)菠蘿蛋白酶，30~40°C純凈水浸泡10-35分鐘，清洗后陰干至含水量59T8%(W/W);再次浸入淋水甩干整平，玻璃操作臺(tái)晾干5~10分鐘，裁剪寬60 Cm，每張膜等份均分，按“標(biāo)準(zhǔn)”規(guī)格區(qū)分成上機(jī)剝離膜片；b.凈面甲膜平鋪玻璃面，人工凈脂后甲、乙膜驅(qū)離，除掉甲膜膠原蛋白層，乙膜00.2cm輸入鼓式剝離器至0.5 mm ±0.02 mm厚度、投入清洗罐，采用0.5%(w/w)生理鹽水于液面下，再次浸泡30-40分鐘后用39°C ±2°C純凈水清洗兩遍，晾干淋水5~10分鐘、裝入恒溫震蕩器皿中；其中甲膜指的是烏克蘭白豬表皮層，乙膜為烏克蘭白豬真皮層；
c.恒溫振蕩器玻璃皿中首先加入1%~10%(w/w)菠蘿蛋白酶溶液，將乙膜放置在水溶液平面下，在頻繁恒溫震蕩10次，時(shí)間在4飛小時(shí)后用純凈水清洗兩遍、淋水后再次加入凈細(xì)核剝離液在水溫在50°C ±0.2，依次交叉反復(fù)清洗，使溶液達(dá)到pH值6~8，需震蕩3飛次，在震蕩3飛小時(shí)后排凈菠蘿蛋白酶殘留的酸性溶液，再次清洗，檢測(cè)其化學(xué)性能，最后使其PH值達(dá)到7.1~7.5之間，以適用于人體創(chuàng)面的良好相容性能，顯微鏡下抽樣檢驗(yàn)直至殘質(zhì)雜物排凈達(dá)到100%合格為止；
所述的凈細(xì)核剝離液指的是:
(1)5000毫升/lg)碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3% (W/W)菠蘿蛋白酶配制的溶液； (2)5000毫升/lg)碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3% (ff/ff) N/A酶制劑配制的溶液；
N/A酶制劑是:卡那霉素；采用這兩個(gè)溶液依次交叉反復(fù)清洗。
[0008]d.檢驗(yàn)“乙膜”化學(xué)性能達(dá)標(biāo)，再次用溫度39°C ±2凈水清洗凈細(xì)核過(guò)程中的所有雜質(zhì)物、淋水甩干放置包裝袋里低溫保存，二次統(tǒng)一滅活；
e.滅菌:采用β輻射殺菌計(jì)量為35~50千克瑞，得到“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”。計(jì)量適用于無(wú)菌醫(yī)療器械IS013485:2003和YY/T0287:2003標(biāo)準(zhǔn)。
[0009]本發(fā)明所述的“乙膜”，其保留的基底膜應(yīng)平整，平均厚度為0.5 mm ±0.02 mm臨床使用最佳。其中步驟a所述的標(biāo)準(zhǔn)指的是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系IS013485:2003和YY/T0287: 2003標(biāo)準(zhǔn)；所述的新鮮膜指的是當(dāng)日屠殺取皮、去毛、去脂的烏克蘭白豬的脊背；從取皮到成品入庫(kù)需要在8小時(shí)內(nèi)當(dāng)天完成進(jìn)入低溫冷存。步驟d所述的滅活指的是“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”產(chǎn)品自身微生物全殺死后，并將死亡的凈細(xì)核徹底清洗排除掉，以達(dá)到產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)網(wǎng)狀基底膜改性目的。
[0010]優(yōu)選凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜(也稱為保留“基底膜網(wǎng)狀支架”)的平均厚度為0.5 mm±0.02 mm臨床使用最佳。
[0011]優(yōu)選β輻射無(wú)菌最佳計(jì)量為35飛O “千克瑞”。
[0012]優(yōu)選化學(xué)性能pH值7.3^7.5最佳相容性(與人體血液pH值7.35~7.45相符合)。
[0013]“乙膜”保留基底膜平整網(wǎng)架的平均厚度為0.5 mm ±0.02 mm臨床使用。β輻射無(wú)菌最佳計(jì)量為35飛O “千克瑞”?；瘜W(xué)性能pH值7.3^7.5最佳相容性。
[0014]具體實(shí)施標(biāo)準(zhǔn):
?、選擇膜源執(zhí)行GB-16548-1996，膜片無(wú)硬傷、無(wú)破損、無(wú)血跡、保鮮、有彈性。
[0015]⑩、剝離工序執(zhí)行GB/T14233.2-2005第二部分生物實(shí)驗(yàn)方法。
[0016]￡)、采用天然生物洗滌劑(菠蘿酶蛋白)清洗、去脂、去毛、去雜物。執(zhí)行GB/T16886.1-2001第一部分:評(píng)價(jià)與實(shí)驗(yàn)。[0017]?、生物性能驗(yàn)證執(zhí)行GB/T16886.5-1997醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第五部分:細(xì)核毒性實(shí)驗(yàn):體外法、臨床驗(yàn)證該產(chǎn)品無(wú)毒、無(wú)菌、無(wú)刺激、無(wú)致敏。
[0018]?、物理性能檢測(cè):執(zhí)行GMP環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)一執(zhí)行YY/T0287:2003、IS013485:2003國(guó)
家和國(guó)際質(zhì)量管理體系標(biāo)準(zhǔn)。產(chǎn)品呈淡黃色，具有彈性和韌性，折疊不斷裂，網(wǎng)狀纖維組織排列有序，基底膜結(jié)構(gòu)平整。
[0019]本發(fā)明所述的結(jié)合自體皮微粒植入混合度治愈指的是(深I(lǐng)r和ΙΙI )燒燙傷大面積深度創(chuàng)面的修復(fù)。微粒皮移植是燒傷外科針對(duì)特大面積深度燒燙傷創(chuàng)面的修復(fù)常用的手術(shù)之一。
[0020]本發(fā)明公開(kāi)的“凈細(xì)核異種無(wú)菌乙膜”制備方法的技術(shù)關(guān)鍵和技術(shù)指標(biāo)如下:
一、技術(shù)關(guān)鍵:
(1)確定豬膜選區(qū)及豬種標(biāo)準(zhǔn)的控制:豬齡:3-10個(gè)月、豬種:烏克蘭白豬、凈細(xì)核及處理工藝，通過(guò)30~50 “千克瑞”定量?jī)?yōu)選滅活快速剝離法，以保持“乙膜”的新鮮速凍保存。
[0021](2)對(duì)新型“乙膜”進(jìn)行臨床驗(yàn)證、完成病例的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，對(duì)新型“乙膜”基質(zhì)的包裝、滅菌和存儲(chǔ)條件；運(yùn) 輸要求保證產(chǎn)品保鮮、無(wú)菌以達(dá)到國(guó)內(nèi)外推廣應(yīng)用及目的。
[0022]二、技術(shù)指標(biāo):
①“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”及其制備方法的特點(diǎn):
應(yīng)用天然植物菠蘿蛋白酶凈化后，使“乙膜”成為不含細(xì)核成份達(dá)99%以上，形成天然的乙膜支架，以消除其抗原性和排異反映。
[0023]②、豬取材:(I) 40-60 kg健康烏克蘭白豬
(2)活殺后即可取皮。
[0024]③、膜片厚度及規(guī)格:00.5-0.9 mm (0.7 mm ±0.02 腿最佳)、(10X10) cm 2、(10X20)cm 2。
[0025]④、組織學(xué)要求:乙膜膜片中不含任何細(xì)核成分，凈細(xì)核與凈細(xì)壁分離、清洗、質(zhì)檢。
[0026]⑤、細(xì)菌學(xué)要求:打開(kāi)密閉袋后，含菌為0%。
[0027]⑥、存儲(chǔ)條件:低溫-18°C至_88°C，運(yùn)輸過(guò)程保持0_5°C保鮮箱中。
[0028]⑦、存儲(chǔ)期:36個(gè)月。
[0029]近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外眾多科研單位頻繁立項(xiàng)，為尋找良好的皮膚組織相容性生物材料投入了大量的人才和資金，經(jīng)過(guò)數(shù)年的反復(fù)實(shí)驗(yàn)和大量的臨床驗(yàn)證，終于研發(fā)出“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”新型生物材料。該產(chǎn)品為深ΙI和ΙΙI燒燙傷創(chuàng)面的治療和修復(fù)提供了一個(gè)創(chuàng)新方法。針對(duì)深度燒燙傷及其皮膚破損創(chuàng)面治療實(shí)施了重大突破。其重要因素是:研究生產(chǎn)工藝采取了高能物理核應(yīng)用手段快速凈細(xì)核，并清理基底膜中破碎雜物，使其網(wǎng)架狀態(tài)(乙膜)起到穩(wěn)定模板作用，完全排凈了異種材料中的排斥反應(yīng)和抗原性，植入人體內(nèi)相容性良好，可快速促進(jìn)皮下組織再生。該產(chǎn)品植入后，質(zhì)地柔軟、網(wǎng)架狀力學(xué)韌性能良好。覆蓋肉芽、潰瘍創(chuàng)面透氣性、保濕性均屬良好。并有清潔、凈化創(chuàng)面等作用。
[0030]本發(fā)明更進(jìn)一步公開(kāi)了凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜在如下醫(yī)療生物材料方面的應(yīng)用:
(I)凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜在制備治療作為人體真皮缺損替代和修復(fù)醫(yī)療生物材料方面的應(yīng)用；其中的人體真皮缺損指的是燒傷、燙傷、交通傷創(chuàng)面以及肉芽、潰瘍、皮膚深度感染褥瘡。
[0031](2)凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜在制備治療作為大面積燒燙傷患者皮膚植入無(wú)菌醫(yī)用生物敷料方面的應(yīng)用。所述的大面積燒燙傷患者皮膚植入指的是深度植入燒傷、燙傷創(chuàng)面修復(fù)疤痕。所述的深度植入指的是深ΙI和ΙΙI燒燙傷創(chuàng)面的治療。
[0032](3)凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜在制備治療抑制疤痕增生，減少患者致殘率方面的應(yīng)用。
[0033]本發(fā)明能夠阻絕大面積燒燙傷患者的機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，降低超高代謝，并且能夠最大限度的保留了皮膚修復(fù)必須的殘存的皮膚結(jié)構(gòu)。治療過(guò)程中不換藥、不植皮、不手術(shù)、保護(hù)創(chuàng)面無(wú)污染、無(wú)并發(fā)癥，從而提高了大面積燒燙傷治愈率，而且后期抑制疤痕增生、不長(zhǎng)疤痕，減少了患者的致殘率。
[0034]【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
圖1為混合深I(lǐng)I °燙傷左上肢創(chuàng)面；
圖2為混合深I(lǐng)I °燙傷應(yīng)用“乙膜”包扎后五周情況；
圖3為混合深I(lǐng)I °燙傷10周創(chuàng)面愈合情況；
圖4為ΙΙI燒傷5天雙腿膝下至腳部位創(chuàng)面采用“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”植入醫(yī)學(xué)攝影圖像；
圖5為ΙΙI燒傷25天 雙腿膝下至腳部位創(chuàng)面采用“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”修復(fù)醫(yī)學(xué)攝影圖像；
圖6為快速剝離凈細(xì)核乙膜基底膜平整產(chǎn)品攝影圖像；
圖7為快速剝離凈細(xì)核乙膜基底膜產(chǎn)品膠原蛋白束排列整齊攝影圖像。
[0035]【具體實(shí)施方式】:
下面結(jié)合實(shí)施病例說(shuō)明本發(fā)明，這里所述實(shí)施例的方案，不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域的專業(yè)人員按照本發(fā)明的精神可以對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)和變化，所述的這些改進(jìn)和變化都應(yīng)視為在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)由權(quán)利要求來(lái)限定。本發(fā)明所用到的試劑例如菠蘿蛋白酶、N/A酶制劑(卡那霉素)均有市售，其他的除特別指出外均有市售。
[0036]實(shí)施例1
一種凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行:
a.原材料精選:選取40~60kg烏克蘭白豬脊背(60X90) cm2新鮮膜片、采用稀釋為0.1%~0.3%(w/w)菠蘿蛋白酶，30~40°C純凈水浸泡10-35分鐘，清洗后陰干至含水量59T8%(W/W);再次浸入淋水甩干整平，玻璃操作臺(tái)晾干5~10分鐘，裁剪寬60 Cm，每張膜等份均分，按“標(biāo)準(zhǔn)”規(guī)格區(qū)分成上機(jī)剝離膜片；
b.凈面甲膜平鋪玻璃面，人工凈脂后甲、乙膜驅(qū)離，除掉甲膜膠原蛋白層，乙膜C0.2cm輸入鼓式剝離器至0.5 mm ±0.02 mm厚度、投入清洗罐，采用0.5%(w/w)生理鹽水于液面下，再次浸泡30-40分鐘后用39°C ±2°C純凈水清洗兩遍，晾干淋水5~10分鐘、裝入恒溫震蕩器皿中；其中甲膜指的是烏克蘭白豬表皮層，乙膜為烏克蘭白豬真皮層；
c.恒溫振蕩器玻璃皿中首先加入1%~10%(w/w)菠蘿蛋白酶溶液，將乙膜放置在水溶液平面下，在頻繁恒溫震蕩10次，時(shí)間在4飛小時(shí)后用純凈水清洗兩遍、淋水后再次加入凈細(xì)核剝離液在水溫在50°C ±0.2，依次交叉反復(fù)清洗，使溶液達(dá)到pH值6~8，需震蕩3飛次，在震蕩3飛小時(shí)后排凈菠蘿蛋白酶殘留的酸性溶液，再次清洗，檢驗(yàn)化學(xué)性能，最后使其pH值達(dá)到7.1~7.5之間，以適用于人體創(chuàng)面的良好相容性能，顯微鏡下抽樣檢驗(yàn)直至殘質(zhì)雜物排凈達(dá)到100%合格為止；
所述的凈細(xì)核剝離液指的是:
(1)5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3% (W/W)菠蘿蛋白酶配制的溶液；
(2)5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3% (ff/ff) N/A酶制劑配制的溶液；
(3)N/A酶制劑是:卡那霉素；
d.檢驗(yàn)乙膜化學(xué)性能達(dá)標(biāo)后，再次用溫度39°C±2凈水清洗凈細(xì)核過(guò)程中的所有雜質(zhì)物、淋水甩干放置包裝袋里低溫保存，二次統(tǒng)一滅活；
e.滅菌:采用β輻射殺菌計(jì)量為35~50千克瑞，得到凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜。其中所述的乙膜，其保留的基底膜應(yīng)平整，平均厚度為0.5 mm ±0.02 mm臨床使用最佳。
[0037]步驟a所述的標(biāo)準(zhǔn)指的是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系IS013485:2003和YY/T0287:2003標(biāo)準(zhǔn)；所述的新鮮膜指的是當(dāng)日屠殺取皮、去毛、去脂的烏克蘭白豬的脊背；從取皮、剝離、凈核到成品入庫(kù)在8小時(shí)內(nèi)當(dāng)天完成進(jìn)入低溫冷存。步驟d所述的滅活指的是凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜中微生物全殺死后，并將死亡的凈細(xì)核徹底排除掉，以達(dá)到產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)網(wǎng)狀基底膜改性目的。
[0038]實(shí)施例2
凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備方法:
a.原材料精選:選取40kg烏克蘭白豬脊背(60X90) cm 2新鮮膜片、采用稀釋為0.1%(w/w)菠蘿蛋白酶，30°C純凈水浸泡10分鐘，清洗后陰干至含水量5% (w/w);再次浸入淋水甩干整平，玻璃操作臺(tái)晾干5分鐘，裁剪寬60 Cm，每張膜等份均分，按“標(biāo)準(zhǔn)”規(guī)格區(qū)分成上機(jī)剝離膜片；
b.凈面甲膜平鋪玻璃面，人工凈脂后甲、乙膜驅(qū)離，除掉甲膜膠原蛋白層，乙膜C0.2cm輸入鼓式剝離器至0.5 mm ±0.02 mm厚度、投入清洗罐，采用0.5%(w/w)生理鹽水于液面下再次浸泡30分鐘后用39°C ±2°C純凈水清洗兩遍，晾干淋水5分鐘、裝入恒溫震蕩器皿中；其中甲膜指的是烏克蘭白豬表皮層，乙膜為烏克蘭白豬真皮層；
c.恒溫振蕩器玻璃皿中首先加入1%(w/w)菠蘿蛋白酶溶液，將乙膜放置在水溶液平面下，在頻繁恒溫震蕩10次，時(shí)間在4飛小時(shí)后用純凈水清洗兩遍、淋水后再次加入凈細(xì)核剝離液在水溫在50°C ±0.2，依次交叉反復(fù)清洗，使溶液達(dá)到pH值7，需震蕩3次，在震蕩3小時(shí)后凈除菠蘿蛋白酶殘留的酸性溶液，再次清洗，檢測(cè)化學(xué)性能，最后使其PH值達(dá)到7.1之間，以適用于人體創(chuàng)面的良好相容性能，顯微鏡下抽樣檢驗(yàn)直至殘質(zhì)雜物凈除達(dá)到100%合格為止；所述的凈細(xì)核剝離液指的是:
(1)5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3% (W/W)菠蘿蛋白酶配制的溶液；
(2)5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3%(ff/ff)N/A酶制劑(卡那霉素)配制的溶液；采用這兩個(gè)溶液依次交叉反復(fù)清洗。
[0039]d.檢驗(yàn)“乙膜”化學(xué)性能達(dá)標(biāo)，再次用溫度39°C ±2凈水清洗凈細(xì)核過(guò)程中的所有雜質(zhì)物、淋水甩干放置包裝袋低里溫保存，二次統(tǒng)一滅活；
e.滅菌:采用β輻射殺菌計(jì)量為35 “千克瑞”，得到“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”。
[0040]其中步驟 a所述的標(biāo)準(zhǔn)指的是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系IS013485:2003和YY/T0287:2003標(biāo)準(zhǔn)；所述的新鮮膜指的是當(dāng)日屠殺取皮、去毛、去脂的烏克蘭白豬的脊背；從取皮、剝離、凈核到成品入庫(kù)在8小時(shí)內(nèi)當(dāng)天完成進(jìn)入低溫冷存。步驟d所述的滅活指的是凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜產(chǎn)品自身微生物全殺死后，并將死亡的凈細(xì)核徹底清洗排除掉，以達(dá)到產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)網(wǎng)狀基底膜改性目的。
[0041]實(shí)施例3
凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備方法:
a.原材料精選:選取60kg烏克蘭白豬脊背(60X90) cm2新鮮膜片、采用稀釋為0.3%(w/w)菠蘿蛋白酶，40°C純凈水浸泡35分鐘，清洗后陰干至含水量8%(w/w);再次浸入淋水甩干整平，玻璃操作臺(tái)晾干10分鐘，裁剪寬60 Cm，每張膜等份均分，按“標(biāo)準(zhǔn)”規(guī)格區(qū)分成上機(jī)剝離膜片；
b.凈面甲膜平鋪玻璃面，人工凈脂后甲、乙膜驅(qū)離，除掉甲膜膠原蛋白層，乙膜C0.2cm輸入鼓式剝離器至0.5 mm ±0.02 mm厚度、投入清洗罐，采用0.5%(w/w)生理鹽水于液面下，再次浸泡40分鐘后用39°C ±2°C純凈水清洗兩遍，晾干淋水10分鐘、裝入恒溫震蕩器皿中；其中甲膜指的是烏克蘭白豬表皮層，乙膜為烏克蘭白豬真皮層；
c.恒溫振蕩器玻璃皿中首先加入10%(w/w)菠蘿蛋白酶溶液，將乙膜放置在平面下，在頻繁恒溫震蕩10次，時(shí)間在6小時(shí)后用純凈水清洗兩遍、淋水后再次加入凈細(xì)核剝離液在水溫在50°C ±0.2，依次交叉反復(fù)清洗，所述的凈細(xì)核剝離液指的是:
(1)先用5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHC033%(ff/ff)菠蘿蛋白酶配制的溶液洗；
(2)再用5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHCO3與3%(ff/ff) N/A酶制劑(卡那霉素)配制的溶液洗；采用這兩個(gè)溶液依次交叉反復(fù)清洗。最后使溶液達(dá)到PH值8，需震蕩6次，在震蕩5小時(shí)后排凈菠蘿蛋白酶殘留的酸性溶液，再次清洗，檢測(cè)其化學(xué)性能，最后使其pH值達(dá)到
7.5，以適用于人體創(chuàng)面的良好相容性能，顯微鏡下抽樣檢驗(yàn)直至殘質(zhì)雜物凈除達(dá)到100%合格為止；
d.檢驗(yàn)“乙膜”化學(xué)性能達(dá)標(biāo)，再次用溫度39°C±2凈水清洗凈細(xì)核過(guò)程中的所有雜質(zhì)物、淋水甩干放置包裝袋里低溫保存，二次統(tǒng)一滅活；
e.滅菌:采用β輻射殺菌計(jì)量為50“千克瑞”，得到“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”。
[0042]其中步驟a所述的“標(biāo)準(zhǔn)”指的是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系IS013485:2003和YY/T0287:2003標(biāo)準(zhǔn)；所述的新鮮膜指的是當(dāng)日屠殺取皮、去毛、去脂的烏克蘭白豬的脊背；從取皮、剝離、凈核到成品入庫(kù)在8小時(shí)內(nèi)當(dāng)天完成進(jìn)入低溫冷存。步驟d所述的滅活指的是凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜產(chǎn)品自身微生物全殺死后，并將死亡的凈細(xì)核徹底清洗排除掉，以達(dá)到產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)網(wǎng)狀基底膜改性目的。
[0043]實(shí)施例4
本發(fā)明的臨床試驗(yàn)情況及典型病例如下:
一、本發(fā)明制備的“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”，從2005年至今曾先后在省市級(jí)三甲醫(yī)院進(jìn)行了多年的臨床應(yīng)用，共治療患者120例，其中削痂創(chuàng)面49例，軀干創(chuàng)面31例，肢體刃厚皮創(chuàng)面27例，自體微粒皮13例。
[0044]深I(lǐng)r、ΙΙI燙傷的判定標(biāo)準(zhǔn):
深I(lǐng)I。燙傷:深I(lǐng)I。創(chuàng)面用“乙膜”包扎30~40天左右自體細(xì)胞增生、起血運(yùn)后自然愈合。
[0045]ΙΙI燙傷:壞死性，(也指焦痂性)指燙傷及皮膚的全層皮膚剝落，選用自體微粒植皮后植入“乙膜”保護(hù)創(chuàng)面，60~80天創(chuàng)面起血運(yùn)自體皮細(xì)胞增生、創(chuàng)面平整無(wú)瘢痕自然愈
口 ο
[0046]療效判斷標(biāo)準(zhǔn):
治愈:臨床癥狀體征消失，恢復(fù)正常。
[0047]顯效:臨床癥狀體征基本消失，或大部分消失。
[0048]本發(fā)明的臨床觀察標(biāo)準(zhǔn):
深創(chuàng)面以及肉芽、潰瘍、皮膚深度感染
(I)對(duì)于燒傷深的患者，替代異體皮植皮成活率(89.05±6.2)%達(dá)到治愈的效果。
[0049](2)對(duì)于燙傷的患者，植皮成活率(89.0±7.5)%達(dá)到治愈的效果。
[0050](3)交通傷創(chuàng)面(未發(fā)生感染)100%達(dá)到治愈的效果。
[0051]臨床的治療效果:本發(fā)明運(yùn)用“凈細(xì)核無(wú)菌乙膜”闡述驗(yàn)證，本發(fā)明制備的“凈細(xì)核無(wú)菌乙膜”與人體結(jié)合治愈各類皮膚破損創(chuàng)面已達(dá)到120例臨床驗(yàn)證。
[0052]有效率96.5% ；
顯效率100% ；
治愈率98%。
[0053]二、臨床情況及報(bào)告
資料與方法通過(guò)“異體真皮”和“異種乙膜”在臨床中的對(duì)比應(yīng)用；
1)病例選擇觀察應(yīng)用不同部位的皮膚覆蓋與植皮成活的關(guān)系進(jìn)行了組織學(xué)觀察，包括頸部、軀干、上肢和下肢；
2)治療方法:治療組，對(duì)照組植皮成活率“異體真皮”(93.4±3.1)%和“異種乙膜”(89.0 ±7.5)% ；
3)觀察指標(biāo)及療效判定經(jīng)臨床對(duì)照指標(biāo)植皮成活率各種創(chuàng)面植皮無(wú)顯著差異(P>
0.05)
4)產(chǎn)品特點(diǎn)
①凈細(xì)核清除了排斥反應(yīng)的表皮細(xì)胞的同時(shí)也清除了抗原成分，保留了膠原蛋白纖維、彈力纖維和網(wǎng)狀纖維等真皮組織，解決了大面積深度燒燙傷病人皮源不足的問(wèn)題；
②有完整的基底膜，具有與自體真皮細(xì)胞外基質(zhì)的相同性結(jié)構(gòu)及成分；
③具有促進(jìn)纖維細(xì)胞增生，新生血管和上皮細(xì)胞形成；
④成活率高，植皮后期效果好。節(jié)省皮源、供皮區(qū)不留疤痕，是修復(fù)深度燒燙傷創(chuàng)面的一種最佳方法。
[0054]5)結(jié)論 典型實(shí)例如下:
參照附圖(I)實(shí)例I
患者王某某，女性，42歲，全身燙傷總面積58%，其中右上肢部位有9%燙傷面積為深ΙI'，采用了本發(fā)明制備的“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”植入，4周后網(wǎng)架隙孔均勻滋生自體細(xì)胞，血運(yùn)均勻、呈平整無(wú)痕、無(wú)排斥反應(yīng)順利持續(xù)80天后痊愈。
[0055]參照附圖(2)實(shí)例2
患者趙某某，男性，38歲，全身燒傷總面積69%，其中左右雙腿膝下至腳部位燒傷為III°的面積16%，應(yīng)用自體皮微粒及本發(fā)明制備的“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”，8周后自體細(xì)胞由網(wǎng)架隙孔均勻爬入，血運(yùn)均勻、呈平整無(wú)瘢痕均勻生長(zhǎng)100天后愈合。
[0056]結(jié)果:“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”適用于削痂、切痂及切瘢創(chuàng)面植入成活率分別為(94.3±5.2) %、(93.9±4.8) %、(95.7±3.6) % 相互之間無(wú)明顯區(qū)別。
[0057]結(jié)論:應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)方法研制所獲得的“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”結(jié)合自體皮微粒植入混合治愈或修復(fù)深度燒燙傷的皮膚破損創(chuàng)面及切痂和切瘢痕后創(chuàng)面修復(fù)最佳理想醫(yī)用治愈生物材料。而且解決了異體皮來(lái)源甚少、價(jià)格昂貴，還伴有“國(guó)際人權(quán)”的爭(zhēng)議，所以最創(chuàng)新發(fā)現(xiàn)可替代異體皮的最佳選擇是應(yīng)用“凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜”結(jié)合自體皮微粒植入混合治愈或修復(fù)深度燒燙傷的皮膚破損創(chuàng)面、以及切痂和切瘢痕后創(chuàng)面修復(fù)最佳理想醫(yī)用治愈生物材料，深受?chē)?guó)內(nèi)外醫(yī)務(wù)工作者的歡迎。
[0058]以上對(duì)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，不能被認(rèn)為用于限定本發(fā)明的實(shí)施范圍。凡依本發(fā)明申請(qǐng)范圍所作的均等變化與改進(jìn)等，均應(yīng)仍歸屬于本發(fā)明的專利涵蓋范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜的制備方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行: a.原材料精選:選取40~60kg烏克蘭白豬脊背(60X90) cm2新鮮膜片、采用稀釋為0.1%~0.3%(w/w)菠蘿蛋白酶，30~40°C純凈水浸泡10-35分鐘，清洗后陰干至含水量59T8%(W/W);再次浸入淋水甩干整平，玻璃操作臺(tái)晾干5~10分鐘，裁剪寬60 Cm，每張膜等份均分，按“標(biāo)準(zhǔn)”規(guī)格區(qū)分成上機(jī)剝離膜片； b.凈面甲膜平鋪玻璃面，人工凈脂后甲、乙膜驅(qū)離，除掉甲膜膠原蛋白層，乙膜C0.2cm輸入鼓式剝離器至0.5 mm ±0.02 mm厚度、投入清洗罐，采用0.5%(w/w)生理鹽水于液面下，再次浸泡30-40分鐘后用39°C ±2°C純凈水清洗兩遍，晾干淋水5~10分鐘、裝入恒溫震蕩器皿中；其中甲膜指的是烏克蘭白豬表皮層，乙膜為烏克蘭白豬真皮層； c.恒溫振蕩器玻璃皿中首先加入1%~10%(w/w)菠蘿蛋白酶溶液，將乙膜放置在水平面下，在頻繁恒溫震蕩10次，時(shí)間在4飛小時(shí)后用純凈水清洗兩遍、淋水后再次加入凈細(xì)核剝離液水溫在50°C ±0.2，依次交叉反復(fù)清洗，使溶液達(dá)到pH值6~8，需震蕩3飛次，在震蕩:3~5小時(shí)后排凈菠蘿蛋白酶殘留的酸性溶液，再次清洗，最后使其pH值達(dá)到7.1~7.5之間，以適用于人體創(chuàng)面的良好相容性能，顯微鏡下抽樣檢驗(yàn)直至殘質(zhì)雜物排凈達(dá)到100%合格為止； 所述的凈細(xì)核剝離液指的是: (1)5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3% (W/W)菠蘿蛋白酶配制的溶液； (2)5000毫升/Ig碳酸氫鈉NaHCO3與1%~3% (ff/ff) N/A酶制劑配制的溶液； 其中的N/A酶制劑指的是:卡那霉素； d.檢驗(yàn)乙膜化學(xué)性能達(dá)標(biāo)后，再次用溫度39°C±2凈水清洗凈細(xì)核過(guò)程中的所有雜質(zhì)物、淋水甩干放置包裝袋里低溫保存，二次統(tǒng)一滅活； e.滅菌:采用β輻射殺菌計(jì)量為35~50千克瑞，得到凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜。
2.權(quán)利要求1所述的凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜制備方法，其中所述的乙膜，其保留的基底膜應(yīng)平整，平均厚度為0.5 mm ±0.02 mm臨床使用最佳。
3.權(quán)利要求1所述的凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜制備方法，其中步驟a所述的標(biāo)準(zhǔn)指的是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系IS013485:2003和YY/T0287:2003標(biāo)準(zhǔn)；所述的新鮮膜指的是當(dāng)日屠殺取皮、去毛、去脂的烏克蘭白豬的脊背；從取皮、剝離、凈核到成品入庫(kù)需要在8小時(shí)內(nèi)當(dāng)天完成進(jìn)入低溫冷存。
4.權(quán)利要求1所述的凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜制備方法，其中步驟d所述的滅活指的是凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜中微生物全殺死后，并將死亡的凈細(xì)核徹底排除掉，以達(dá)到產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)網(wǎng)狀基底膜改性目的。
5.采用權(quán)利要求1所述方法制備的凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜在治療深度燒燙傷創(chuàng)面作為人體真皮缺損替代植入和修復(fù)醫(yī)療生物材料方面的應(yīng)用；其中的人體真皮缺損指的是燒傷、燙傷、交通傷創(chuàng)面以及肉芽、潰瘍、皮膚深度感染褥瘡。
6.采用權(quán)利要求1所述方法制備的凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜在制備治療作為大面積燒燙傷患者皮膚植入無(wú)菌醫(yī)用生物敷料方面的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中所述的大面積燒燙傷患者皮膚植入和修復(fù)指的是:深度創(chuàng)面植入，同時(shí)修復(fù)疤痕。
8.權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中所述的深度植入指的是深ΙI`和ΙΙI`燒燙傷創(chuàng)面的治療。
9.采用權(quán)利要求1所述方法制備的凈細(xì)核無(wú)菌異種乙膜在制備治療抑制疤痕增生，減少患者致殘率方面 的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61L27/36GK103920195SQ201410167588
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月24日
【發(fā)明者】劉邑卿 申請(qǐng)人:劉邑卿