一種腫瘤治療復(fù)合納米材料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種腫瘤治療復(fù)合納米材料及其制備，具體地，本發(fā)明提供了一種復(fù)合納米材料，所述的復(fù)合納米材料包括核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物：其中，核心材料A為氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料，或氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料和其他材料進(jìn)行復(fù)合形成的復(fù)合材料。本發(fā)明的復(fù)合納米材料可以用于腫瘤光熱治療，或作為腫瘤藥物的載體等。
【專利說明】一種腫瘤治療復(fù)合納米材料及其制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種復(fù)合納米材料。具體地，本發(fā)明提供了一種可實現(xiàn)惡性腫瘤的治療或診斷，特別是光熱與化學(xué)藥物協(xié)同的腫瘤治療的復(fù)合納米材料，及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]光熱治療(Photothermal Therapy, PTT)是一種新的腫瘤治療模式。其基本原理是將光熱試劑積累在腫瘤部位，通過局部近紅外激光照射，光熱試劑將光能轉(zhuǎn)換為熱能，通過高溫將腫瘤殺死。該方法具有高選擇性與微創(chuàng)性，且可以避免傳統(tǒng)腫瘤治療方法所帶來的副作用，因此是腫瘤治療的熱點研究領(lǐng)域?；谀[瘤光熱治療的原理，尋找生物相容性好、近紅外吸收強、光熱轉(zhuǎn)化效率高、熱穩(wěn)定性好的光熱治療材料是腫瘤光熱治療的重點研究方向，而發(fā)展多功能、多模式腫瘤光熱治療材料則是該領(lǐng)域的發(fā)展趨勢。光熱治療是一種非侵入式腫瘤局部治療技術(shù)，借助醫(yī)學(xué)成像手段，對腫瘤進(jìn)行精確的成像定位，是光熱有效治療腫瘤的重要因素之一。因此，發(fā)展一種具有增強腫瘤組織醫(yī)學(xué)成像信號功能的光熱治療材料，提高腫瘤部位的成像靈敏度，必然能夠提高光熱治療惡性腫瘤的效果。此外，以光熱治療材料為載體，搭載抗腫瘤化療藥物形成的多模式治療試劑，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)化療藥物的靶向遞送與光控釋放、降低藥物副作用，而且由于熱消融作用，腫瘤細(xì)胞對化療藥物愈加敏感，表現(xiàn)出化療與光熱治療的協(xié)同增敏效應(yīng)，克服了近紅外光穿透深度有限而造成的腫瘤消融不完全，從而極大地提高惡性腫瘤的治療效果。
[0003]因此，本領(lǐng)域迫切需要一種在生物環(huán)境下穩(wěn)定性好，不易團(tuán)聚，具有生物應(yīng)用價值的光熱治療材料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種在生物環(huán)境下穩(wěn)定性好，不易團(tuán)聚，具有生物應(yīng)用價值的光熱治療材料。
[0005]本發(fā)明的第一方面，提供了一種復(fù)合納米材料，所述的復(fù)合納米材料包括核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物:其中，
[0006]所述的核心材料A為氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料，或氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料和選自下組的材料進(jìn)行復(fù)合形成的復(fù)合材料:磁性納米材料、上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料、貴金屬納米材料、量子點、熒光材料，或其組合；
[0007]所述的穩(wěn)定劑B選自下組:有機高分子聚合物、脂質(zhì)體、微泡、白蛋白納米球，或其組合，其中，所述的有機高分子聚合物的聚合單體選自下組:C2-C10的不飽和醇、酸或胺、C2-C12的多羥基化合物、乳酸、羥基乙酸，或其組合。
[0008]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合為物理負(fù)載和/或化學(xué)修飾。
[0009]在另一優(yōu)選例中，所述的穩(wěn)定劑B基本包覆核心材料A，或所述的穩(wěn)定劑B包埋核心材料A。
[0010]在另一優(yōu)選例中，所述穩(wěn)定劑B含有用于進(jìn)行進(jìn)一步修飾或反應(yīng)的官能團(tuán)。[0011]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料粒徑為5-50nm,較佳地為10_40nm。
[0012]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料的平均水合粒徑為10_500nm，較佳地為50_200nm。
[0013]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料在水溶液或生理溶液(如磷酸鹽緩沖液、血清、生理鹽水)中穩(wěn)定，其中，所述的穩(wěn)定指所述的復(fù)合納米材料在水溶液中不發(fā)生明顯的團(tuán)聚。
[0014]在另一優(yōu)選例中，所述的“不發(fā)生明顯的團(tuán)聚”指所述的復(fù)合納米材料在水溶液中不發(fā)生透射電鏡可檢測到的團(tuán)聚。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料在水溶液或生理溶液(如磷酸鹽緩沖液、血清、生理鹽水)中的平均水合粒徑為≤I μ m，較佳地為≤500nm，更佳地為≤300nm。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料在可見光與近紅外區(qū)具有光吸收。
[0017]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料能夠?qū)⑽盏墓饽苻D(zhuǎn)換為熱能；較佳地，所述的復(fù)合納米材料的光熱轉(zhuǎn)換效率為≥ 20%，較佳地為≥30%，更佳地為≥ 35%。
[0018]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料具有低的細(xì)胞毒性。
[0019]在另一優(yōu) 選例中，在濃度為≥200 μ g/mL,較佳地為≥300 μ g/mL,更佳地為^ 500 μ g/mL的情況下，所述的復(fù)合納米材料對細(xì)胞活性沒有明顯抑制。
[0020]在另一優(yōu)選例中，所述的“沒有明顯抑制”指抑制率為≤20%，較佳地為≤15%。[0021 ] 在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料具有較好的生物相容性。
[0022]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料具有以下特征:對生物體進(jìn)行靜脈給藥24小時后，對該生物體器官功能和/或身體指標(biāo)無明顯影響。
[0023]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料還包括:與核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物偶聯(lián)的腫瘤靶向分子C。
[0024]在另一優(yōu)選例中，所述的復(fù)合納米材料還包括:負(fù)載于核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物的活性藥物成分D。
[0025]在另一優(yōu)選例中，
[0026]所述氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料選自下組:氫化的TiO2納米材料、氫化的ZrO2納米材料、氫化的ZnO納米材料，或其組合；和/或
[0027]所述磁性納米材料選自下組=Fe3O4納米材料、CoFe2O4納米材料、ZnFe2O4納米材料、NiFe2O4納米材料、MnFe2O4納米材料、Gd2O3納米材料，或其組合；和/或
[0028]所述上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料選自下組=NaYF4: Er3+/Yb3+納米材料、NaYF4: Yb3+/Tm3+納米材料、NaYF4: Tm3VEr3+ 納米材料、NaYF4: Yb3+/Tm37Er3\ NaGdF4: Yb3+/Tm37Er3+ 納米材料，或其組合；和/或
[0029]所述貴金屬納米材料選自下組:Au納米材料、Ag納米材料、Pt納米材料、Pd納米材料，或其組合；和/或
[0030]所述量子點選自下組:量子點CdSe、CdS、CdTe、ZnS、ZnSe,或其組合；和/或
[0031]所述熒光材料選自下組:有機熒光染料分子(如茜素紅、羅丹明、吲哚菁綠、花青素Cy5.5、Cy7)、無機熒光介孔材料、貴金屬熒光納米材料(如小粒徑金、小粒徑銀)，或其組
八
口 ο
[0032]在另一優(yōu)選例中，所述的穩(wěn)定劑B選自下組:聚乙二醇、聚丙烯酸、葡聚糖、聚乙烯亞胺、聚乙烯胺、聚馬來酸、羧甲基殼聚糖、羧甲基淀粉、羧甲基葡聚糖、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸、脂質(zhì)體、白蛋白納米球，或其組合。
[0033]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤靶向分子C選自下組:葉酸、氨甲蝶呤、氨基蝶呤、RGD肽(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、神經(jīng)多肽(NPY)、腫瘤特異性抗體，或其組合。
[0034]在另一優(yōu)選例中，所述活性藥物成分D選自下組:阿霉素、紫杉醇中的一種或多種。
[0035]本發(fā)明的第二方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的復(fù)合納米材料的制備方法，所述方法包括步驟:
[0036](I)提供一氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料A ;
[0037](2)用所述的氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料A與穩(wěn)定劑B反應(yīng)，得到核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物。
[0038]在另一優(yōu)選例中，所述的制備方法還包括步驟:用所述的核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物與腫瘤靶向分子C進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到核心材料A-穩(wěn)定劑B-腫瘤靶向分子C復(fù)合物。
[0039]在另一優(yōu)選例中，所述的制備方法還包括步驟:用所述的核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物與活性藥物成分D進(jìn)行負(fù)載，得到核心材料A-穩(wěn)定劑B-活性藥物成分D復(fù)合物。
[0040]在另一優(yōu)選例中，所述的制備方法還包括步驟:用所述的核心材料A-穩(wěn)定劑B腫瘤靶向分子C復(fù)合物與活性藥物成分D進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到核心材料A-穩(wěn)定劑B-腫瘤靶向分子C-活性藥物成分D復(fù)合物。
[0041]本發(fā)明的第三方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的復(fù)合納米材料的用途，所述材料用于:
[0042](a)制備腫瘤光熱治療藥物組合物；
[0043](b)用于制備腫瘤成像造影劑；
[0044](C)用于體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞活性；
[0045](d)用于體外非治療性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
[0046]在另一優(yōu)選例中，當(dāng)用于體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞活性時，將所述的復(fù)合納米材料施用于待抑制的腫瘤細(xì)胞后，對所述待抑制的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行紅外光照射。
[0047]在另一優(yōu)選例中，當(dāng)用于體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞活性時，所述復(fù)合納米材料的作用時間為2~96h，較佳地為5-48h。
[0048]在另一優(yōu)選例中，當(dāng)用于體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞活性時，所述復(fù)合納米材料的作用濃度為20-500 μ g/mL，較佳地為50-300 μ g/mL。
[0049]本發(fā)明的第四方面，提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物包括治療有效量的如本發(fā)明第一方面所述的復(fù)合納米材料；和藥學(xué)上可接受的載體。
[0050]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物用于治療腫瘤；較佳地，所述的治療是光熱治療或光熱/藥物協(xié)同治療。
[0051]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物為注射劑；較佳地，所述的藥物注射劑為靜脈注射劑。
[0052]在另一優(yōu)選例中， 所述的藥學(xué)上可接受的載體是生理鹽水。
[0053]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤為肝臟腫瘤或脾臟腫瘤。[0054]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤為乳腺腫瘤。
[0055]在另一優(yōu)選例中,所述藥物組合物還包括其他腫瘤治療藥物；較佳地，所述的其他腫瘤治療藥物選自下組:阿霉素、紫杉醇。
[0056]在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述的藥物組合物包括其他腫瘤治療藥物時，所述的其他腫瘤治療藥物在酸性環(huán)境下釋放；較佳地，在pH = 1-6的酸性環(huán)境下釋放。
[0057]在另一優(yōu)選例中，在pH = 1-6的酸性環(huán)境下，所述的其他腫瘤治療藥物的48小時釋放量為> 60，較佳地為> 70%，更佳地為> 80%。
[0058]本發(fā)明的第五方面，提供了一種腫瘤治療方法，所述方法包括:對治療對象施用治療有效量的如本發(fā)明第一方面所述的復(fù)合納米材料。
[0059]在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括:對治療對象的腫瘤部位進(jìn)行紅外光照射。
[0060]在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括:對治療對象施用其他腫瘤治療藥物；較佳地，所述的其他腫瘤治療藥物選自下組:阿霉素、紫杉醇。
[0061]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在
此不再一一累述。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0062]圖1是實施例1、2所制備的黑TiO2、黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料的透射電鏡結(jié)果(實施例19)。
[0063]圖2是實施例1、2所制備的黑TiO2、黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA在水中的動態(tài)光散射水合粒徑分布。
[0064]圖3是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料以及白TiO2的紫外-可見吸收光譜(實施例19)。
[0065]圖4是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料及其中間體黑TiO2-PEG-NH2的Zeta電勢(實施例19)。
[0066]圖5是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料在808nm、2ff/cm2的近紅外光照射下的升溫曲線(實施例19)。
[0067]圖6是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的細(xì)胞毒性(實施例20)。
[0068]圖7是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料在808nm、2ff/cm2的近紅外光照射下，對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的光熱治療效果(實施例21，MTT結(jié)果)。
[0069]圖8是實施例1制備的黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料在808nm、2W/cm2的近紅外光照射下，對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的光熱治療效果(實施例21，鈣黃綠素/碘化丙啶染色)。
[0070]圖9是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料對健康小鼠肝、腎相關(guān)的血清生化指標(biāo)的影響(實施例22)。
[0071]圖10是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料經(jīng)尾靜脈注射人乳腺癌細(xì)胞荷瘤小鼠后，在其心、肝、脾、腎、肺以及腫瘤內(nèi)的分布情況(實施例23)。
[0072]圖11是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料在808nm、2ff/cm2的近紅外光照射下，對人乳腺癌細(xì)胞荷瘤小鼠的光熱治療效果(實施例23)?！揪唧w實施方式】
[0073]本發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，在現(xiàn)有的產(chǎn)能材料(光催化降解水產(chǎn)氫領(lǐng)域)經(jīng)過氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料表面，用穩(wěn)定劑進(jìn)行修飾，居然能夠得到一種新穎的腫瘤光熱治療藥物(或材料)。所述藥物(或材料)的生物利用度高，且在水中的穩(wěn)定性與分散性非常好，適合應(yīng)用于腫瘤光熱治療領(lǐng)域，制成腫瘤治療藥物或輔助治療藥物?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。
[0074]術(shù)語
[0075]如本文所用，術(shù)語“復(fù)合”指兩種材料以任意本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行結(jié)合，例如物理負(fù)載(或搭載)，或者化學(xué)偶聯(lián)等形式。
[0076]術(shù)語“核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合材料”、“核心材料-穩(wěn)定劑復(fù)合材料”或“Α-B復(fù)合材料”可以互換使用，均指具有穩(wěn)定劑⑶修飾的核心材料(A)。其中，核心材料如本文所定義。在優(yōu)選的情況下，上述術(shù)語指不帶有其他復(fù)合材料(例如本發(fā)明的腫瘤靶向分子及活性藥物成分)的核心材料-穩(wěn)定劑復(fù)合材料。[0077]術(shù)語“C2-C10的不飽和醇、酸或胺”指具有2-10個碳原子，且結(jié)構(gòu)中存在C-C雙鍵的醇、酸或胺類，如丙烯酸、乙烯亞胺、乙烯胺、馬來酸，或類似化合物。
[0078]術(shù)語“C2-C12的多羥基化合物”指具有2-12個碳原子，且結(jié)構(gòu)中存在一個以上羥
基的化合物，如乙二醇、丙三醇、糖類等。
[0079]經(jīng)過廣泛的文獻(xiàn)調(diào)研，本發(fā)明提出以氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料為核心材料、或復(fù)合具有增強醫(yī)學(xué)成像信號功能的納米材料、搭載腫瘤化療藥物，形成復(fù)合納米材料，用于惡性腫瘤的光熱治療或光熱與化學(xué)藥物協(xié)同治療。此外，本發(fā)明所制備的復(fù)合納米材料還可用于惡性腫瘤的診斷與可視化治療。
[0080]核心材料
[0081]氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料(ScientificReports2014, do1: 10.1038/srep03986.),如經(jīng)過高溫、高壓氫化處理的黑色TiO2納米粒子(Angew.Chem.1nt.Ed.2012，51，12410-12412.；Science2011, 331，746-750.)，與傳統(tǒng)的白色TiO2納米材料相比，其材料表面無序、內(nèi)部具有大量氧缺陷、在近紅外區(qū)域具有強烈的吸收、光熱轉(zhuǎn)化效率優(yōu)異，具有待進(jìn)一步開發(fā)成腫瘤光熱治療材料的潛力。然而，氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料在生理鹽水等仿生環(huán)境中極易發(fā)生團(tuán)聚，這阻礙了其在腫瘤治療中的應(yīng)用。
[0082]本發(fā)明的復(fù)合材料包括核心材料A和穩(wěn)定劑B，其中，所述的核心材料A是經(jīng)過氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料，或含有經(jīng)過氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料的復(fù)合材料。
[0083]與傳統(tǒng)的白色TiO2納米材料相比,經(jīng)過氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料表面無序、內(nèi)部具有大量氧缺陷、在近紅外區(qū)域具有強烈的吸收、光熱轉(zhuǎn)化效率優(yōu)異，具有待進(jìn)一步開發(fā)的潛力。然而，氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料的生物應(yīng)用性能較差，這阻礙了其在腫瘤治療中的應(yīng)用。
[0084]在另一優(yōu)選例中，所述氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料選自下組:氫化的TiO2納米材料(即黑TiO2)、氫化的ZrO2納米材料(即黑ZrO2)、氫化的ZnO納米材料(即黑ZnO)，或其組合。
[0085]在本發(fā)明中，所述的經(jīng)過氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料可與其他的納米材料進(jìn)行復(fù)合，組成含有經(jīng)過氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料的復(fù)合材料。其中，優(yōu)選的進(jìn)行復(fù)合的納米材料選自下組:磁性納米材料、上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料、貴金屬納米材料、量子點、熒光材料，或其組合。
[0086]在本發(fā)明的優(yōu)選例中，所述磁性納米材料選自下組=Fe3O4納米材料、CoFe2O4納米材料、ZnFe2O4納米材料、NiFe2O4納米材料、MnFe2O4納米材料、Gd2O3納米材料，或其組合。
[0087]在本發(fā)明的優(yōu)選例中，所述上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料選自下組=NaYF4: Er3+/Yb3+納米材料、NaYF4: Yb3VTm3+ 納米材料、NaYF4: Tm3+/Er3+ 納米材料、NaYF4: Yb3+/Tm37Er3\ NaGdF4: Yb3+/Tm3VEr3+納米材料,或其組合。
[0088]在本發(fā)明的優(yōu)選例中,所述貴金屬納米材料選自下組:Au納米材料、Ag納米材料、Pt納米材料、Pd納米材料,或其組合。
[0089]在本發(fā)明的優(yōu)選例中，所述量子點選自下組:量子點CdSe、CdS、CdTe、ZnS、ZnSe,或其組合。
[0090]在本發(fā)明的優(yōu)選例中，所述熒光材料選自下組:有機熒光染料分子(如茜素紅、羅丹明、吲哚菁綠(ICG)、花青素Cy5.5、Cy7)、無機熒光介孔材料、貴金屬熒光納米材料(如小粒徑金、小粒徑銀)，或其組合。
[0091]穩(wěn)定劑
[0092]本發(fā)明中，用穩(wěn)定劑B對核心材料A進(jìn)行修飾，以改善其生物應(yīng)用性能。
[0093]所述的穩(wěn)定劑B可以是選自下組的穩(wěn)定劑:有機高分子聚合物、脂質(zhì)體、微泡、白蛋白納米球，或其組合，優(yōu)選為上述四種中的一種。
[0094]其中，所述的有機高分子聚合物的聚合單體選自下組:C2_C10的不飽和醇、酸或胺、C2-C12的多羥基化合物、乳酸、羥基乙酸，或其組合，優(yōu)選的所述有機高分子聚合物可以是聚乙二醇、聚丙烯酸、葡聚糖、聚乙烯亞胺、聚乙烯胺、聚馬來酸、羧甲基殼聚糖、羧甲基淀粉、羧甲基葡聚糖中的一種或多種。
[0095]其中，所述的微泡指微米級球狀空心結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明的優(yōu)選例中,所述微泡的殼體材料可以是聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸中的一種或多種。
[0096]腫瘤靶向分子及活性藥物成分
[0097]本發(fā)明中，核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合材料可以任選地和其他腫瘤治療相關(guān)的材料，例如腫瘤靶向分子，或者活性藥物成分進(jìn)行復(fù)合，以改善其靶向性或療效。其中，所述的復(fù)合形式?jīng)]有特別限制，可以是物理負(fù)載(或搭載)，或者化學(xué)偶聯(lián)等形式。
[0098]在本發(fā)明中，所述的腫瘤靶向分子沒有特別的限制，可以為任意本領(lǐng)域已知的具有腫瘤靶向性，且可以偶聯(lián)于A-B的分子。在一個優(yōu)選例中，所述的腫瘤靶向分子C選自下組:葉酸、氨甲蝶呤、氨基蝶呤、RGD肽(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、神經(jīng)多肽(NPY)、腫瘤特異性抗體，或其組合。
[0099]所述的活性藥物成分沒有特別限制，可以為任意本領(lǐng)域已知的能夠用于腫瘤治療，或者輔助腫瘤治療的藥物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，所述的活性藥物成分D選自下組:阿霉素、紫杉醇中的一種或多種。
[0100] 腫瘤光熱治療藥物組合物[0101]光熱治療(Photothermal Therapy, PTT)是一種新的腫瘤治療模式。其基本原理是將光熱試劑積累在腫瘤部位，通過局部近紅外激光照射，光熱試劑將光能轉(zhuǎn)換為熱能，通過高溫將腫瘤殺死。借助醫(yī)學(xué)成像手段，對腫瘤進(jìn)行精確的成像定位，是光熱有效治療腫瘤的重要因素之一。因此，發(fā)展一種具有增強腫瘤組織醫(yī)學(xué)成像信號功能的光熱治療材料，提高腫瘤部位的成像靈敏度，必然能夠提高光熱治療惡性腫瘤的效果。
[0102]基于此，本發(fā)明提供了一種腫瘤光熱治療藥物組合物。所述的組合物包括治療有效量的本發(fā)明復(fù)合材料，即核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合材料，或核心材料A-穩(wěn)定劑B與腫瘤靶向分子C和/或活性藥物成分D復(fù)合形成的復(fù)合材料。
[0103]所述的用穩(wěn)定劑B修飾的復(fù)合材料具有一系列適合進(jìn)行生物應(yīng)用的特性，例如，具有穩(wěn)定劑B修飾的核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合材料在水中具有較好的穩(wěn)定性；在可見光與近紅外區(qū)有光吸收，且具有很高的光熱轉(zhuǎn)換效率，因而適用于腫瘤光熱治療；細(xì)胞毒性低，生物相容性好，等等。
[0104]較佳地，所述的復(fù)合材料還包括藥學(xué)上可接受的載體。所述的藥學(xué)上可接受的載體包括:注射劑載體,如蒸餾水,生理鹽水,丙三醇等。
[0105]本發(fā)明的主要有益效果包括:
[0106](1)本發(fā)明提供了一種治療惡性腫瘤的復(fù)合納米材的制備方法，該方法簡單易行，成本低廉，利于工業(yè)化生產(chǎn)和市場推廣。
[0107](2)將本發(fā)明提供的復(fù)合納米材料給予腫瘤部位，可實現(xiàn)近紅外光激發(fā)的腫瘤光熱治療，還可以實現(xiàn)近紅外光激發(fā)的光熱與化療藥物協(xié)同治療腫瘤。
[0108](3)本發(fā)明提供的復(fù)合納米材料，能夠增強磁共振成像、超聲成像、光聲成像、熒光成像等醫(yī)學(xué)造影信號，可以用于惡性腫瘤的診斷與可視化治療。
[0109]下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。
[0110]實施例1:黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0111]取0.2mol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解5小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每兩小時換一次新水，共換水5次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，240°C加熱10小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)80°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取上述制備的TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，設(shè)定如下反應(yīng)條件:壓力20.(^&1*、溫度2001:、氫化時間5天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米粒子。取黑TiO2納米粒子IOOmg分散于200mL乙醇中，200W超聲波分散30分鐘。取聚乙二醇(PEG，分子量為2000)7500mg，溶于300mL乙醇中。將含有黑TiO2納米材料的乙醇逐滴加入到PEG乙醇溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除上清液中多余的PEG，獲得黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料。
[0112]實施例2:黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料的制備
[0113]取實施例1制備的黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料50mg，分散于IOOmL乙醇中。取3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES) 600 μ L，溶于200mL乙醇中。將APTES的乙醇溶液逐滴加入到含黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料的乙醇中，攪拌反應(yīng)24小時，使黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料表面的PEG末端修飾上氨基。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除上清液中多余的反應(yīng)副產(chǎn)物，獲得黑TiO2-PEG-NH2復(fù)合納米材料中間體，并將其分散于IOOmL純水中。取20mgl-(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺(EDC),加入到IOOmL的0.lmg/mL葉酸(FA)溶液中活化葉酸的羧基，迅速將EDC與FA的混合溶液加入到含黑TiO2-PEG-NH2復(fù)合納米材料的純水中，攪拌反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除上清液中多余的副產(chǎn)物，獲得黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料。
[0114]實施例3:黑TiO2-PEG-DOX復(fù)合納米材料的制備
[0115]取實施例1制備的黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料50mg，分散于250mL純水，高溫滅菌后待用。取4mg抗腫瘤藥物阿霉素(DOX)，溶于250mL純水中，0.22 μ m濾膜過濾除菌。在無菌條件下，將DOX溶液逐滴加入到經(jīng)高溫滅菌后的黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料分散液中，攪拌反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)束后，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除上清液中多余的D0X，獲得黑TiO2-PEG-DOX復(fù)合納米材料。
[0116]實施例4:黑TiO2-PEG-FA-DOX復(fù)合納米材料的制備
[0117]取實施例2制備的黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料lOOmg，分散于200mL純水。取5mg DOX,溶于200mL純水中。將DOX溶液逐滴加入到黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料分散液中，攪拌反應(yīng)18小時。反應(yīng)結(jié)束后，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除上清液中多余的D0X，獲得黑TiO2-PEG-FA-DOX復(fù)合納米材料。
[0118]實施例5:氫化ZrO2-PAA復(fù)合納米材料的制備
[0119]取6mL鋯酸四丁酯溶于40mL異丙醇中，得到溶于A。取2mL超純水、2mL濃硝酸溶于40mL異丙醇中，得到溶液B。將A溶液逐滴加入到B溶液中，攪拌I小時后將反應(yīng)液置于反應(yīng)釜中，180°C反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)束后，60°C將反應(yīng)物加熱烘干，獲得ZrO2前驅(qū)體。將ZrO2前驅(qū)體研磨成粉末后，在600°C下煅燒5小時，獲得ZrO2納米粒子。取上述ZrO2納米粒子粉末，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度220°C下氫化5天，獲得氫化ZrO2納米粒子。取上述制備的氫化ZrO2納米粒子50mg,分散于200mL乙醇中，超聲波分散0.5小時。取聚丙烯酸(PAA，分子量為2000)2000mg，溶于300mL乙醇中。將含有氫化ZrO2納米材料的乙醇逐滴加入到PAA乙醇溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PAA充分包裹于氫化ZrO2納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除上清液中多余的PAA，獲得氫化ZrO2-PAA復(fù)合納米材料。
[0120]實施例6:氫化ZnO-PEI復(fù)合納米材料的制備
[0121]取2mol/L的碳酸鈉溶液(Na2CO3) 20mL，攪拌加熱至80°C。取lmol/L的硫酸鋅(ZnSO4)溶液10mL，逐滴加入到Na2CO3溶液中，攪拌反應(yīng)I小時后，冷卻抽濾。將反應(yīng)物在80°C下烘干后，置于反應(yīng)釜中400°C反應(yīng)3小時后，獲得ZnO納米粒子粉末。取上述ZnO納米粒子，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度200°C下氫化4天，獲得氫化ZnO納米粒子。取上述氫化ZnO納米粒子20mg，分散于200mL乙醇中，超聲波分散0.5小時。取聚乙烯亞胺(PEI,分子量為5000)400mg，溶于IOOmL乙醇中。將含有氫化ZnO納米材料的乙醇逐滴加入到PEI乙醇溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEI充分包裹于氫化ZnO納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除上清液中多余的PEI，獲得氫化ZnO-PEI復(fù)合納米材料。
[0122]實施例7:黑TiO2-Fe3O4-PEG復(fù)合納米材料的制備[0123]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解4小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每3小時換一次新水，共換水5次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，180°C加熱12小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)60°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末lOOmg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力22.0bar、溫度220°C、氫化3天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取黑TiO2納米材料lOOmg，分散于200mL乙醇中，超聲分撒0.5小時后，逐滴加入到IOOmL正己烷中，攪拌均勻。將200mg乙酰丙酮鐵[Fe (acac) 3]溶于40mL油胺和120mL正辛醇的混合溶液中。將黑TiO2分散液加入到上述混合溶液中、攪拌，加熱到80°C，使乙醇與正己烷蒸發(fā)。之后將上述溶液置于反應(yīng)釜中，240°C反應(yīng)2小時。反應(yīng)結(jié)束后離心去除油胺和正辛醇，并用乙醇清洗多次，獲得黑TiO2-Fe3O4復(fù)合納米材料。將上述黑TiO2-Fe3O4復(fù)合納米材料分散于200mL乙醇中，超聲波分散30分鐘。取PEG (分子量為1500)5000mg，溶于300mL乙醇中。將含有黑TiO2-Fe3O4復(fù)合納米材料的乙醇分散液逐滴加入到PEG乙醇溶液中，攪拌反應(yīng)18小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-Fe3O4復(fù)合納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，除去上清液中多余的PEG，獲得黑TiO2-Fe3O4-PEG復(fù)合納米材料。
[0124]實施例8:黑TiO2-Gd2O3-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0125]取六水硝酸釓[Gd(NO3)3.6H20]100mg、氫氧化鈉Img溶于200mL—縮二乙二醇中，180°C下磁力攪拌反應(yīng)5小時，將反應(yīng)液進(jìn)行透析后獲得透析液。取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液7mL，緩慢滴加于93mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解3小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每3小時換一次新水，共換水4次，獲得TiO2前驅(qū)體溶液。將TiO2前驅(qū)體置于反應(yīng)釜中，180°C加熱10小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)6(TC高溫烘干后,獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末IOOmg,置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度220°C、氫化5天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取黑TiO2納米材料lOOmg，分散于200mL乙醇中，超聲分撒30分鐘后，逐滴加入上述六水硝酸釓?fù)肝鲆?，攪拌；反?yīng)8小時后，室溫陳化24小時；12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除多余反應(yīng)物，得到黑TiO2-Gd2O3復(fù)合納米材料。將黑TiO2-Gd2O3復(fù)合納米材料分散于200mL乙醇中，超聲處理30分鐘，取PEG (分子量為1500) 4000mg，溶于300mL乙醇中。將含有黑TiO2-Gd2O3復(fù)合納米材料的乙醇分散液逐滴加入到PEG乙醇溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-Gd2O3復(fù)合納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，除去上清液中多余的PEG，獲得黑TiO2-Gd2O3-PEG復(fù)合納米材料。
[0126]實施例9:黑TiO2-NaYF4IYb3VTm3+-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0127]取0.2mol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水 解5小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每3小時換一次新水，共換水4次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，180°C加熱10小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)60°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末lOOmg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度220°C、氫化3天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取黑1102納米材料50mg分散到IOOmL的水中，超聲波分散30分鐘。然后依次加入20mg/mL的氯化釔(YCl3)8.9mL、氯化鐿(YbCl3) lmL、氯化錢(TmCl3)0.lmL。再加入20mg/mL的檸檬酸鈉水溶液IOmL和10mg/mL的氟化鈉(NaF)水溶液40mL，并攪拌I小時。之后將混合溶液放入反應(yīng)釜，在120°C下，水熱反應(yīng)2小時。反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物離心水洗數(shù)次，獲得黑TiO2-NaYF4: Yb3+/Tm3+復(fù)合納米材料。將制備的黑TiO2-NaYF4:Yb3+/Tm3+復(fù)合納米材料50mg，分散于IOOmL乙醇中。取PEG (分子量為1500) 2000mg,溶于300mL乙醇中。將含有黑TiO2-NaYF4: Yb3+/Tm3+復(fù)合納米材料的乙醇分散液逐滴加入到PEG乙醇溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-NaYF4 = Yb3+/Tm3+復(fù)合納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，除去多余的PEG，獲得黑 TiO2-NaYF4:Yb3+/Tm3+-PEG 復(fù)合納米材料。
[0128]實施例10:黑TiO2-NaYF4: Yb3+/Tm3+-PEG-VEGF復(fù)合納米材料的制備
[0129]取實施例9制備的黑TiO2-NaYF4: Yb3+/Tm3+-PEG復(fù)合納米材料10mg，分散于IOOmL乙醇中。取3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES) 50 μ L，溶于IOOmL乙醇中。將APTES的乙醇溶液逐滴加入到含黑TiO2-NaYF4: Yb3VTm3+-PEG復(fù)合納米材料的乙醇中，攪拌反應(yīng)24小時，使黑TiO2-NaYF4:Yb3+/Tm3+-PEG復(fù)合納米材料表面的PEG末端修飾上氨基。反應(yīng)結(jié)束后，13000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除多余的3-氨丙基三乙氧基硅烷，收集制備的黑TiO2-NaYF4: Yb3VTm3+-PEG-NH2復(fù)合納米材料，并將其分散于IOOmL純水中。取經(jīng)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)活化的0.lmg/mL血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)溶液ImL加入到含黑TiO2-NaYF4:Yb3+/Tm3+-PEG-NH2復(fù)合納米材料的純水中，攪拌反應(yīng)18小時。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除多余的VEGF，獲得黑TiO2-NaYF4: Yb3+/Tm3+-PEG-VEGF復(fù)合納米材料。
[0130]實施例11:黑TiO2-Au-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0131]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液5mL，緩慢滴加于95mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解3小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每2小時換一次新水，共換水5次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，180°C加熱10小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)60°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末lOOmg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度220°C、氫化3天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取黑TiO2納米材料50mg，分散于IOOmL乙醇中，超聲波分散30分鐘。將上述溶液加入到IOOmL葡萄糖(lOmmol/mL)水溶液中攪拌，使葡萄糖吸附在黑TiO2粒子表面。然后再加入ImL濃度為1mmol/mL氯金酸(AuCl4)溶液、IOmg檸檬酸鈉并加熱攪拌16小時，獲得黑TiO2-Au復(fù)合納米材料。將上述獲得的黑TiO2-Au復(fù)合納米材料分散于IOOmL純水中，超聲波分散30分鐘。取PEG(分子量為1500) 1000mg,溶于300mL純水中。將含有黑TiO2-Au納米材料的分散液逐滴加入到PEG水溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-Au復(fù)合納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除多余的PEG，獲得黑TiO2-Au-PEG復(fù)合納米材料。
[0132]實施例12:黑TiO2-CdSe-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0133]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解3小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每2小時換一次新水，共換水4次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，180°C加熱12小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)60°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度220°C、氫化5天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取黑TiO2納米材料50mg，分散于IOOmL純水中，超聲波分散30分鐘。然后用0.lmol/L的鹽酸水溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值到3.0，加入100 μ L濃度為10mmol/L硒代硫酸鈉(Na2SeSO3)水溶液,再加入ImL濃度為5mmol/L的氯化鎘(CdCl2)水溶液，攪拌反應(yīng)24小時，通過高速離心獲得黑TiO2-CdSe復(fù)合納米材料。將獲得的黑TiO2-CdSe復(fù)合納米材料分散于300mL純水中，超聲波分散30分鐘。取PEG (分子量為2000) 2000mg,溶于200mL純水中。將含有黑TiO2-CdSe納米材料的純水逐滴加入到PEG水溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-CdSe復(fù)合納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除多余的PEG，獲得黑TiO2-CdSe-PEG復(fù)合納米材料。
[0134]實施例13:黑TiO2-1CG-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0135]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解5小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每2小時換一次新水，共換水5次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，220°C加熱12小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)60°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度220°C、氫化5天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取制備的黑TiO2納米材料50mg，分散于90mL純水中，超聲波分散30分鐘。然后加入0.lmg/mL的吲哚菁綠(ICG)溶液IOml避光攪拌反應(yīng)16小時。反應(yīng)結(jié)束后，通過離心去除多余的ICG，獲得黑TiO2-1CG復(fù)合納米材料。將上述復(fù)合納米材料分散于IOOmL超純水中。取PEG (分子量為1500) lOOOmg，溶于200mL純水中。將含有黑TiO2-1CG納米材料的分散液逐滴加入到PEG水溶液中，避光攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-1CG復(fù)合納米材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，去除多余的PEG，獲得黑TiO2-1CG-PEG復(fù)合納米材料。
[0136]實施例14:黑TiO2-熒光介孔硅-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0137]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解3小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每I小時換一次新水，共換水5次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，200°C加熱10小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)80°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度200°C、氫化6天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取制備的黑1102納米材料50mg，溶于IOOmL乙醇中，超聲分散30分鐘后，加入IOOmL純水并攪拌均勻，獲得溶液A。向溶液A中加入300mg十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、lmL氨水(NH3.H2O)，40°C攪拌加熱30分鐘溶解CTAB。待CTAB溶解后，向反應(yīng)液中加入400 μ L正硅酸乙酯(TEOS)，攪拌反應(yīng)8小時，多次離心水洗后，得到黑TiO2-介孔硅復(fù)合材料。取黑TiO2-介孔硅復(fù)合材料50mg分散到IOOmL的水中，然后依次加入20mg/mL的氯化釔(YC13)8.9mL、氯化鐿(YbCl3) lmL、氯化銩(TmCl3)0.lmL。 再加入20mg/mL的檸檬酸鈉水溶液IOmL和20mg/mL的氟化鈉水溶液20mL,并攪拌I小時。之后將混合溶液放入反應(yīng)釜，在130°C下，進(jìn)行水熱反應(yīng)2小時。反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物離心水洗數(shù)次，獲得黑TiO2-熒光介孔硅復(fù)合材料。將制備的黑TiO2/熒光介孔硅復(fù)合材料50mg，分散于200mL水中。取PEG (分子量為2000) 3000mg，溶于300mL水中。將含有黑TiO2/熒光介孔硅復(fù)合材料的分散液逐滴加入到PEG水溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-熒光介孔硅復(fù)合材料表面。反應(yīng)結(jié)束后，通過離心除去多余的PEG,獲得黑TiO2-熒光介孔硅-PEG復(fù)合納米材料。
[0138]實施例15:黑TiO2-熒光Au-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0139]取0.2mol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解6小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每I小時換一次新水，共換水5次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，240°C加熱12小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)80°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度220°C、氫化3天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取制備的黑TiO2納米粒子5mg，分散于5mL超純水中，超聲分散30分鐘。將5mL的4mg/mL氯金酸(HAuCl4)、5mL的20mg/mL牛血清白蛋白(BSA)溶液分別加入到攪拌狀態(tài)下的黑TiO2納米粒子分散液中。37°C下，加入50 μ L的0.3mg/mL抗壞血酸溶液，使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH至11，攪拌反應(yīng)5小時，獲得黑TiO2-熒光Au復(fù)合納米簇。將獲得的黑TiO2-熒光Au復(fù)合納米簇分散于50mL水中。取PEG (分子量為2000) 500mg,溶于200mL水中。將含有黑TiO2-熒光Au復(fù)合納米簇的水溶液逐滴加入到PEG水溶液中，攪拌反應(yīng)24小時，使PEG充分包裹于黑TiO2-熒光Au復(fù)合納米簇表面。反應(yīng)結(jié)束后，通過離心除去多余的PEG，獲得黑TiO2-熒光Au-PEG復(fù)合納米材料。
[0140]實施例16:黑TiO2-脂質(zhì)體-PEG復(fù)合納米材料的制備
[0141]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液5mL，緩慢滴加于95mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解2小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每I小時換一次新水，共換水6次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，200°C加熱16小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)80°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度200°C、氫化4天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取制備的黑TiO2納米材料10mg、氫化大豆磷脂40mg、膽固醇20mg、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000單甲氧醚50mg，將上述材料分散于或溶于IOmL氯仿-正己烷(1:1，體積比)中，超聲分散成乳后，經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2mL濃乳，獲得A乳液。取氫化大豆磷脂40mg、膽固醇20mg、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000單甲氧醚50mg，溶于5mL氯仿-正己烷(1:1，體積比)，獲得B乳液。將B乳液加入到A濃乳中，混勻后，加入IOmL賴氨酸緩沖液(0.02mol/L)，充分振蕩后，乳液經(jīng)減壓蒸發(fā)至不再產(chǎn)生氣泡，吹氮氣蒸發(fā)有機溶劑，室溫超聲5分鐘，獲得黑TiO2-脂質(zhì)體-PEG復(fù)合納米材料。
[0142]實施例17:黑TiO2-BSA復(fù)合納米材料的制備
[0143]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液10mL，緩慢滴加于90mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解3小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每2小時換一次新水，共換水5次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，220°C加熱10小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)80°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度200°C、氫化4天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取制備的黑1102納米材料50mg，溶于IOOmL超純水中，超聲分散30分鐘。取50mg牛血清白蛋白(BSA)，溶于50mL pH為10的氯化鈉溶液(0.8mg/mL)中。將黑TiO2分散液逐滴加入到BSA溶液中，邊加邊攪拌，并逐滴加Λ 5mL乙醇，再逐滴加入10%的戊二醛溶液50 μ L，攪拌反應(yīng)24小時，再加入50mg/mL的賴氨酸溶液lmL，攪拌2小時。將反應(yīng)溶液于超純水中透析5次后，獲得黑TiO2-BSA復(fù)合納米材料。
[0144]實施例18:黑TiO2-PLA復(fù)合材料的制備
[0145]取0.lmol/L四氯化鈦(TiCl4)的鹽酸溶液5mL，緩慢滴加于95mL超純水中，冰浴條件下攪拌、水解4小時。水解結(jié)束后，將反應(yīng)液置于透析袋中，于超純水中透析，每2小時換一次新水，共換水4次,獲得TiO2前驅(qū)體溶液。取TiO2前驅(qū)體溶液IOOmL置于反應(yīng)爸中，240°C加熱12小時，得到TiO2納米粒子。TiO2納米粒子經(jīng)80°C高溫烘干后，獲得TiO2納米粒子粉末。取TiO2納米粒子粉末50mg，置于高壓氫氣系統(tǒng)，壓力20.0bar、溫度200°C、氫化5天。反應(yīng)結(jié)束后，獲得氫化的黑TiO2納米材料。取制備的黑Ti025mg，加入到含有0.1g聚乳酸(PLA)、0.05g司盤80(Span80)的2mL三氯甲烷中，超聲處理I分鐘得到均勻的初乳。將上述初乳加入到20mL的聚乙烯醇溶液(30mg/mL)中，劇烈攪拌6小時，獲得微泡，待二氯甲烷揮發(fā)完全。將微泡離心水洗3次，重新分散在純水中，冷凍干燥后獲得黑TiO2-PLA復(fù)合材料。[0146]實施例19:復(fù)合納米材料的表征
[0147]綜合物理性能:取實施例1-18制備的復(fù)合納米材料，通過透射電子顯微鏡(TEM)、X射線衍射儀(XRD)、動態(tài)光散射納米粒度分析儀(DLS)、傅立葉變換紅外光譜儀(FT-1R)、紫外-可見分光光譜儀(UV-VIS)等儀器對復(fù)合納米材料的微觀形貌、晶型、水合粒徑、化學(xué)鍵、近紅外吸收等進(jìn)行表征。
[0148]以實施例1、2所制備的復(fù)合納米材料的表征結(jié)果為例，實施例1、2所制備的黑TiO2、黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料的透射電鏡結(jié)果如圖1所示，表征結(jié)果顯示，制備的黑T i O2基復(fù)合納米材料粒徑在20nm左右，但是，黑Ti O2發(fā)生了明顯的團(tuán)聚，而黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料的分散性良好。
[0149]實施例1、2所制備的黑TiO2、黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料的動態(tài)光散射水合粒徑分布如圖2所示，實驗結(jié)果顯示，黑TiO2在水中極易團(tuán)聚，團(tuán)聚的平均水合粒徑為3 μ m左右，而黑TiO2經(jīng)過穩(wěn)定劑PEG包裹后(黑Ti02_PEG、黑TiO2-PEG-FA)，在水中的穩(wěn)定性得到顯著的提高，其平均水合粒徑為200nm左右。
[0150]實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料以及白TiO2的紫外-可見吸收光譜結(jié)果如圖3所示，表征結(jié)果顯示，制備的黑TiO2基復(fù)合納米材料在可見光與近紅外區(qū)具有明顯的光吸收，具備了腫瘤光熱治療試劑的基本特征。而同等濃度的白TiO2在近紅外區(qū)的光吸收非常弱。
[0151]實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料及其中間體黑Ti02-PEG-NH2的Zeta電勢結(jié)果如圖4所示，表征結(jié)果顯示，在pH = 7的中性水溶液中，黑TiO2-PEG表面帶負(fù)電荷(-33.9)，經(jīng)過APTES對其表面進(jìn)行氨基修飾后，黑TiO2-PEG-NH2表面帶正電荷0.16)，將葉酸偶聯(lián)于黑TiO2-PEG-NH2表面后，形成的黑TiO2-PEG-FA帶負(fù)電荷(-20.77)，說明葉酸被成功地偶聯(lián)于復(fù)合納米材料表面。
[0152]光熱轉(zhuǎn)換性能:取實施例1-18制備的復(fù)合納米材料lmg、另取Img白TiO2作為對照，分別分散于IOmL純水中。使用808nm激光器系統(tǒng)輻照含有復(fù)合納米材料的分散液10分鐘，激光功率密度為2W/cm2。測量每分鐘時間點的液體溫度，繪制升溫曲線，計算材料的光熱轉(zhuǎn)換效率。以實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料為例。實驗結(jié)果如圖5顯示，復(fù)合納米材料具有優(yōu)異的光熱轉(zhuǎn)換效率，能夠?qū)⑽盏墓饽苎杆俎D(zhuǎn)化為熱能，其中黑TiO2-PEG的光熱轉(zhuǎn)換效率達(dá)到了 38%。該結(jié)果表明，制備的復(fù)合納米材料具備了腫瘤光熱治療納米材料的基本特征。
[0153]生理條件下穩(wěn)定性:取實施例1-18制備的復(fù)合納米材料lmg，分別分散于IOmL的0.lmol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)、10%胎牛血清(FBS)、0.9%生理鹽水(NaCl)中，在37°C恒溫箱中放置30天，每天通過動態(tài)光散射納米粒度分析儀(DLS)對復(fù)合納米材料的粒徑進(jìn)行測量。實驗結(jié)果顯示，制備的復(fù)合納米材料在PBS、10% FBS,0.9% NaCl等溶液中粒徑穩(wěn)定保持在10-300nm之間。該結(jié)果表明，制備的復(fù)合納米材料在生理溶液中具有良好地穩(wěn)定性與分散性，具備了體內(nèi)注射的基本條件。
[0154]pH控制的藥物釋放性能:取實施例3、4制備的黑Ti02-PEG-D0X、黑TiO2-PEG-FA-DOX復(fù)合納米材料10mg，分散于pH為3、5、7的緩沖液IOmL中，將上述緩沖液裝入透析袋中，置于PH相同的90mL同種緩沖液中透析2天，每隔2小時取ImL透析液(同時補足ImL新的緩沖液)，使用高效液相色譜(HPLC)對透析液中的DOX進(jìn)行定量分析，繪制藥物釋放曲線。實驗結(jié)果顯示，在PH = 3的酸性環(huán)境下，DOX更容易釋放，48小時的釋放量為80%，而pH = 7的中性環(huán)境下，DOX釋放量為20%。該結(jié)果說明，制備的復(fù)合納米材料具備了腫瘤給藥體系的基本特征，可用于抗腫瘤化療藥物的遞送。
[0155]磁共振成像(MRI)性能:取實施例7、8制備的黑TiO2-Fe3O4-PEGmO2-Gd2O3-PEG復(fù)合納米材料，分散于超純水中，配制成濃度為0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.08mg/mL、0.16mg/mL、0.32mg/mL的溶液各2mL。通過核磁共振儀(NMR)表征復(fù)合納米材料的T2或Tl加權(quán)的MRI信號。實驗結(jié)果顯示，制備的復(fù)合納米材料具有良好的Τ2 (黑TiO2-Fe3O4-PEG)或Tl (黑TiO2-Gd2O3-PEG)加權(quán)的MRI信號，可用于腫瘤的MRI診斷以及治療效果評價。
[0156]電子計算機X射線斷層掃描(CT)成像:性能取實施例11制備的黑TiO2-Au-PEG復(fù)合納米材料，分散于超純水中，配制成濃度為0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.08mg/mL、0.16mg/mL的溶液各2mL。通過電子計算機X射線斷層掃描儀表征復(fù)合納米材料的X_射線成像性能。實驗結(jié)果顯示，制備的復(fù)合納米材料具有良好的CT信號，可用于腫瘤的CT診斷以及治療效果評價。
[0157]熒光發(fā)光性能:取實施例9、10、12、13、14 制備的黑 TiO2-NaYF4: Yb3+/Tm3+-PEG、黑 TiO2-NaYF4:Yb3+/Tm3+-PEG-VEGF、黑 Ti02-CdSe_PEG、黑 TiO2-1CG-PEG、黑 TiO2-熒光介孔硅-PEG復(fù)合納米材料各lmg，分散于IOmL純水中，配制成0.lmg/mL。通過熒光光譜儀測試上述復(fù)合納米材料的熒光發(fā)光性能。實驗結(jié)果顯示，上述復(fù)合納米材料具有良好的熒光發(fā)光性能，可用于腫瘤的診斷以及可視化治療。
[0158]雙光子發(fā)光性能:取實施例15制備的黑TiO2-熒光Au-PEG復(fù)合納米材料Img分散于IOmL超純水中。通過雙光子顯微鏡觀察復(fù)合納米材料的發(fā)光性能。結(jié)果顯示，制備的黑TiO2-熒光Au-PEG復(fù)合納米材料具有良好的雙光子激發(fā)熒光性能，可用于腫瘤的診斷以及可視化治療。
[0159]超聲成像性能:取實施例18制備的黑TiO2-PLA復(fù)合材料2mg，分散于20mL超純水中。將復(fù)合材料注入瓊脂糖模擬超聲成像軟管中，通過超聲波成像儀，檢測復(fù)合材料的超聲信號。實驗結(jié)果顯示，該復(fù)合材料具有良好的超聲信號，可用于腫瘤的診斷以及可視化治療。
[0160]實施例20:復(fù)合納米材料的細(xì)胞毒性
[0161]取實施例1-18制得的復(fù)合納米材料，高溫滅菌后，分散于培養(yǎng)液中，分別配制成50、100、200、300、400、500μ g/mL待用。取對數(shù)生長期的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，調(diào)整細(xì)胞濃度為I X IO5個/mL，分別接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μ L，在5% C02、37°C、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。24小時后，棄掉培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)板中分別加入新鮮培養(yǎng)液、含有復(fù)合納米材料的培養(yǎng)液，在5% C02、37°C、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育24小時。24小時后，在培養(yǎng)孔中加入10 μ L噻唑藍(lán)(MTT, 5mg/mL)，孵育細(xì)胞4小時。4小時后將培養(yǎng)液吸棄，每孔加入100 μ L 二甲基亞砜(DMSO)，溶解10分鐘后，于酶標(biāo)儀上550nm測量每孔OD值，計算復(fù)合納米材料的細(xì)胞毒性。以實施例1、2所制備的復(fù)合納米材料的表征結(jié)果為例，實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的細(xì)胞毒性如圖6所示，結(jié)果顯示，濃度高達(dá)500 μ g/mL的復(fù)合納米材料作用細(xì)胞24小時后，細(xì)胞活性沒有發(fā)生明顯地降低，說明制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料細(xì)胞毒性低、生物相容性良好。
[0162]實施例21:復(fù)合納米材料對腫瘤細(xì)胞的光熱治療
[0163]取實施例1-18制得的復(fù)合納米材料，高溫滅菌后，分散于培養(yǎng)液中，配制成100 μ g/mL待用。取對數(shù)生長期的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，調(diào)整細(xì)胞濃度為I X IO5個/mL，分別接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μ L，在5% CO2、37°C、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。24小時過后，棄掉培養(yǎng)孔板中的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)板中分別加入新鮮培養(yǎng)液、含有復(fù)合納米材料的培養(yǎng)液，在5% C02、37°C、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育4小時。棄去原液，加入培養(yǎng)液。使用808nm激光器系統(tǒng)對細(xì)胞進(jìn)行照射、激光功率密度為2W/cm2。照射結(jié)束后，取其中一部分細(xì)胞，用鈣黃綠素/溴化丙啶染色后，于熒光顯微鏡下觀察；另一部分細(xì)胞在5% C02、37°C、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育24小時。24小時后，在培養(yǎng)孔中加AlOyL噻唑藍(lán)(MTT, 5mg/mL)，孵育細(xì)胞4小時。4小時后將培養(yǎng)液吸棄，每孔加入100 μ L二甲基亞砜(DMS0)，溶解10分鐘后，于酶標(biāo)儀上550nm測量每孔OD值，計算復(fù)合納米材料對乳腺癌細(xì)胞的光熱治療效果。
[0164]以實施例1、2所制備的復(fù)合納米材料的表征結(jié)果為例，實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料在808nm、2W/cm2的近紅外光照射下，對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的光熱治療效果的MTT結(jié)果如圖7所示，結(jié)果顯示，100 μ g/mL復(fù)合納米材料作用細(xì)胞4小時后、使用2W/cm2的808nm近紅外光照射細(xì)胞5分鐘后，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24小時，被照射的腫瘤細(xì)胞全部死亡。
[0165]圖8是實施例1制備的黑TiO2-PEG復(fù)合納米材料在808nm、2W/cm2的近紅外光照射下，對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的光熱治療效果的鈣黃綠素/溴化丙啶染色結(jié)果。結(jié)果顯示，100 μ g/mL黑TiO2-PEG作用細(xì)胞4小時后，使用2W/cm2的808nm近紅外光照射細(xì)胞5分鐘，腫瘤細(xì)胞即發(fā)生大量死亡，死亡率可高達(dá)95%或更高。
[0166]實施例22:復(fù)合納米材料的動物急性毒性
[0167] 取實施例1-18制得的復(fù)合納米材料分散于生理鹽水中，配制成200 μ g/mL,高溫滅菌待用。取健康的小鼠，通過尾靜脈給藥IOOyL復(fù)合納米材料以及生理鹽水。觀察并記錄動物在給藥后24小時內(nèi)的毒性癥狀及程度。24小時后，將小鼠處死，測定肝、腎功能相關(guān)的血清生化指標(biāo)、并對心、肝、脾、腎、肺等主要臟器進(jìn)行組織切片分析。
[0168]圖9是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料對健康小鼠肝、腎相關(guān)的血清生化指標(biāo)的影響的實驗結(jié)果。結(jié)果顯示，制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料生物相容性良好，作用小鼠24小時后，沒有顯著地影響小鼠肝、腎器官的功能。
[0169]實施例23:復(fù)合納米材料對荷瘤小鼠實體瘤的光熱治療
[0170]取實施例1-18制得的復(fù)合納米材料分散于生理鹽水中，配制成200 μ g/mL,高溫滅菌待用。取MCF-7細(xì)胞荷瘤小鼠，給藥200 μ L的復(fù)合納米材料以及生理鹽水，用2W/cm2的808nm激光照射腫瘤部位。照射結(jié)束后，將一半小鼠處死，對其腫瘤進(jìn)行蘇木精/伊紅染色的組織切片分析，評價小鼠腫瘤損傷情況，通過ICP-MS分析被處死小鼠的心、肝、脾、腎、肺以及腫瘤中鈦元素的含量。其余小鼠在兩周內(nèi)，每天測量腫瘤大小及體重，分析治療效果。兩周之后將所有小鼠處死，解剖實體瘤，記錄其體積、重量，評價復(fù)合納米材料治療小鼠實體瘤的效果。
[0171]圖10是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料經(jīng)尾靜脈注射人乳腺癌細(xì)胞荷瘤小鼠后，在其心、肝、脾、腎、肺以及腫瘤內(nèi)的分布情況。結(jié)果顯示，黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料主要分布于肝、脾等器官，在腫瘤部位也有一定量的分布。
[0172]圖11是實施例1、2所制備的黑Ti02-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料在808nm、2ff/cm2的近紅外光照射下，對人乳腺癌細(xì)胞荷瘤小鼠的光熱治療效果。結(jié)果顯示，與對照組(生理鹽水、激光、黑TiO2-PEG、黑TiO2-PEG-FA等)相比，黑TiO2-PEG、黑TiO2-PEG-FA復(fù)合納米材料在808nm近紅外光作用下的，能夠顯著地引起腫瘤的消融，說明制備的復(fù)合納米材料是一種優(yōu)異的腫瘤光熱治療試劑。
[0173]在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種復(fù)合納米材料，其特征在于，所述的復(fù)合納米材料包括核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物:其中， 所述的核心材料A為氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料，或氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料和選自下組的材料進(jìn)行復(fù)合形成的復(fù)合材料:磁性納米材料、上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料、貴金屬納米材料、量子點、熒光材料，或其組合； 所述的穩(wěn)定劑B選自下組:有機高分子聚合物、脂質(zhì)體、微泡、白蛋白納米球，或其組合，其中，所述的有機高分子聚合物的聚合單體選自下組:C2-C10的不飽和醇、酸或胺、C2-C12的多羥基化合物、乳酸、羥基乙酸，或其組合。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合納米材料，其特征在于，所述的復(fù)合納米材料還包括:與核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物偶聯(lián)的腫瘤祀向分子C。
3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合納米材料，其特征在于，所述的復(fù)合納米材料還包括:負(fù)載于核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物的活性藥物成分D。
4.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合納米材料，其特征在于， 所述氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料選自下組:氫化的TiO2納米材料、氫化的ZrO2納米材料、氫化的ZnO納米材料,或其組合；和/或 所述磁性納米材料選自下組=Fe3O4納米材料、CoFe2O4納米材料、ZnFe2O4納米材料、NiFe2O4納米材料、MnFe2O4納米材料、Gd2O3納米材料，或其組合；和/或 所述上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料 選自下組=NaYF4: Er3+/Yb3+納米材料、NaYF4: Yb3+/Tm3+納米材料、NaYF4: Tm3VEr3+ 納米材料、NaYF4: Yb3+/Tm37Er3\ NaGdF4: Yb3+/Tm37Er3+ 納米材料，或其組合；和/或 所述貴金屬納米材料選自下組:Au納米材料、Ag納米材料、Pt納米材料、Pd納米材料，或其組合；和/或 所述量子點選自下組:量子點0(156、0(15、0(?^、21^、21^6，或其組合；和/或 所述熒光材料選自下組:有機熒光染料分子(如茜素紅、羅丹明、吲哚菁綠、花青素Cy5.5、Cy7)、無機熒光介孔材料、貴金屬熒光納米材料(如小粒徑金、小粒徑銀)，或其組口 ο
5.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合納米材料，其特征在于，所述的穩(wěn)定劑B選自下組:聚乙二醇、聚丙烯酸、葡聚糖、聚乙烯亞胺、聚乙烯胺、聚馬來酸、羧甲基殼聚糖、羧甲基淀粉、羧甲基葡聚糖、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸、脂質(zhì)體、白蛋白納米球，或其組合。
6.如權(quán)利要求2所述的復(fù)合納米材料，其特征在于，所述的腫瘤靶向分子C選自下組:葉酸、氨甲蝶呤、氨基蝶呤、RGD肽(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、神經(jīng)多肽(NPY)、腫瘤特異性抗體，或其組合。
7.如權(quán)利要求3所述的復(fù)合納米材料，其特征在于，所述活性藥物成分D選自下組:阿霉素、紫杉醇中的一種或多種。
8.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合納米材料的制備方法，其特征在于，包括步驟: (1)提供一氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料A; (2)用所述的氫化處理的金屬氧化物半導(dǎo)體納米材料A與穩(wěn)定劑B反應(yīng)，得到核心材料A-穩(wěn)定劑B復(fù)合物。
9.如權(quán)利要求1-7任一所述的復(fù)合納米材料的用途，其特征在于，用于:(a)制備腫瘤光熱治療藥物組合物； (b)用于制備腫瘤成像造影劑； (C)用于體外非治療性地抑制腫瘤細(xì)胞活性； (d)用于體外非治療性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
10.一種藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物包括治療有效量的如權(quán)利要求.1-7任一所述的復(fù)合納米材料；和藥學(xué)上可接受的載體。
【文檔編號】A61K9/14GK103893128SQ201410175018
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月28日
【發(fā)明者】任文智, 吳愛國 申請人:中國科學(xué)院寧波材料技術(shù)與工程研究所