含雙歧桿菌發(fā)酵液的新型抑菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了含雙歧桿菌發(fā)酵液的新型抑菌組合物，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。新型抑菌組合物中雙歧桿菌與納米氧化鋅合用對抑制大腸桿菌O157、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、臘樣芽胞桿菌具有良好的協(xié)同抑菌效果。本發(fā)明的含雙歧桿菌的新型抑菌組合物與現(xiàn)有的雙歧桿菌發(fā)酵液抑菌相比，不僅降低了微生物耐酸性的發(fā)生概率，還解決了納米氧化鋅的難溶于水的問題，增強納米氧化鋅的抑菌效果，使納米氧化鋅的應(yīng)用更為廣泛，同時采用兩種抑菌物質(zhì)低濃度的新型抑菌組合物可提高其生物相容性和安全性。
【專利說明】含雙歧桿菌發(fā)酵液的新型抑菌組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種抑菌物。
【背景技術(shù)】
[0002]雙歧桿菌是一種常見的腸道益生菌用。雙歧桿菌能很好的抑制常見腐敗菌和低溫細(xì)菌，它能在腸道內(nèi)通過細(xì)胞磷壁酸與腸黏膜上皮細(xì)胞相互作用，與其他厭氧菌共占據(jù)腸黏膜表面，構(gòu)成一個生物學(xué)屏障，阻止致病菌的入侵。雙歧桿菌還能抑制有害細(xì)菌的生長從而抑制腐敗菌毒害物質(zhì)如吲哚、甲酚、胺等的產(chǎn)生，并將其作為自身營養(yǎng)源進(jìn)行代謝。雙歧桿菌的主要抗菌機制是通過酵解產(chǎn)生有機酸來調(diào)節(jié)機體環(huán)境中的PH值使其降低，過酸的環(huán)境使腐敗菌和致病菌的生長繁殖得到抑制。故以雙歧桿菌為中心的微生態(tài)制劑被廣泛開發(fā)和利用。
[0003]然而，隨著抗生素等抑菌藥物的濫用，越來越多的微生物通過變異產(chǎn)生了耐藥性，且一些由耐藥性細(xì)菌引起的疾病無法醫(yī)治，同時也使得具備高效、廣譜且不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點的納米氧化鋅抑菌劑引起人們的重視。隨著納米技術(shù)的高速發(fā)展，金屬氧化物氧化鋅被加工成納米氧化鋅后，其比表面積極大，表現(xiàn)出明顯的表面效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)和宏觀隧道效應(yīng)，這種活性極強的納米氧化鋅顆粒具備超強的抗菌能力。但是納米氧化鋅難溶于水，這對納米氧化鋅的抗菌 能力有明顯的抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對納米氧化鋅難以溶于水以至于難以體現(xiàn)其抑菌性能的問題，本發(fā)明人經(jīng)過大量實驗，發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌發(fā)酵液產(chǎn)酸能增強納米氧化鋅的溶解度。同時，雙歧桿菌能代謝產(chǎn)生有機酸、過氧化氫和細(xì)菌素等物質(zhì)，這些物質(zhì)也能夠抑制病原菌和腐敗菌，故雙歧桿菌發(fā)酵液能增強納米氧化鋅的抑菌性能，同時使微生態(tài)制劑更具有特殊保健功能。本發(fā)明的目的在于提供一種雙歧桿菌和納米氧化鋅組合物，提高納米氧化鋅的溶解度，減少微生物耐酸性的產(chǎn)生。
[0005]本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
含雙歧桿菌發(fā)酵液的新型抑菌組合物，含有雙歧桿菌發(fā)酵液、納米氧化鋅；
所述雙歧桿菌發(fā)酵液制備包括如下步驟:取雙歧桿菌單菌落接種于5mL的MRS培養(yǎng)液中，厭氧培養(yǎng)至菌濃度在IO8 CFU/mL的雙歧桿菌發(fā)酵液；
所述納米氧化鋅為10mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液,粒徑為200nm。
[0006]抑制大腸桿菌0157、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和臘樣芽胞桿菌時，雙歧桿菌發(fā)酵液與納米氧化鋅的體積比為1:1。
[0007]如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制大腸桿菌0157藥物中的應(yīng)用。
[0008]如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制沙門氏菌藥物中的應(yīng)用。
[0009]如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制金黃色葡萄球菌藥物中的應(yīng)用。
[0010]如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制臘樣芽孢桿菌藥物中的應(yīng)用。[0011]本發(fā)明的新型抑菌組合物中雙歧桿菌發(fā)酵液產(chǎn)酸能增強納米氧化鋅的溶解度。同時，雙歧桿菌能代謝產(chǎn)生有機酸、過氧化氫和細(xì)菌素等物質(zhì)，這些物質(zhì)也能夠抑制病原菌和腐敗菌，雙歧桿菌發(fā)酵液能協(xié)同增強納米氧化鋅的抑菌性能，同時使微生態(tài)制劑更具有特殊保健功能。
[0012]
【具體實施方式】
[0013]實施例1
I，雙歧桿菌發(fā)酵液制備包括如下步驟:以雙歧桿菌出發(fā)菌株，MRS (含0.05%的半胱氨酸鹽酸鹽)為液體培養(yǎng)基，接雙歧桿菌單菌落于5mL的MRS (含0.05%的半胱氨酸鹽酸鹽)液體培養(yǎng)基中，于37°C厭氧培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)12h，即可以得到菌濃度在IO8 CFU/mL的雙歧桿菌發(fā)酵液。
[0014]2，納米氧化鋅膠體溶液的制備:取上海阿拉丁有限公司生產(chǎn)的納米氧化鋅0.01g溶于ImL的蒸懼水中，震蕩混勻得到10mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液,粒徑為200nm。
[0015]3、雙歧桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅協(xié)同抑菌作用。
[0016]a細(xì)菌的培養(yǎng)
挑取LB瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌0157的單菌落于IOmL LB肉湯培養(yǎng)基中，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)5h后，取I mL上述菌液用IxPBS水連續(xù)稀釋兩個梯度，最終的菌液大約為IO8 CFU/mL。
[0017]b雙歧桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅在抑菌性能上的協(xié)同作用
分別取900 μ L上述已稀釋好的菌液于1.5 mL滅菌的離心管中，向I號離心管中加Λ IOOyL雙歧桿菌發(fā)酵液，向2號離心管中加入100 μ L濃度為10 mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液，向3號離心管中加入100 μ L納米氧化鋅膠體溶液和雙歧桿菌發(fā)酵液的混合液(1:1)，向4號離心管中加入100 μ LlxPBS水，置于37 °〇恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 h。每組實驗平行三次。
[0018]c平板計數(shù)
將實驗組待測液和空白組都用IxPBS連續(xù)稀釋4個梯度，ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—4各取出IOy L分別均勻涂布在LB固體平板上；平板吹干后，37°C倒置培養(yǎng)12 h，長出菌落后計數(shù)，以30-300個菌落形成單位(CFU)為有效的計數(shù)范圍。
[0019]實驗結(jié)果如下:_
【權(quán)利要求】
1.含雙歧桿菌發(fā)酵液的新型抑菌組合物，其特征在于含有雙歧桿菌發(fā)酵液、納米氧化鋅； 如權(quán)利要求1所述的抑菌組合物，其特征在于所述雙歧桿菌發(fā)酵液制備包括如下步驟:取雙歧桿菌單菌落接種于5mL的MRS培養(yǎng)液中，厭氧培養(yǎng)至菌濃度在IO8 CFU/mL的雙歧桿菌發(fā)酵液；所述納米氧化鋅為10mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液,粒徑為200nm。
2.如權(quán)利要求1所述的抑菌組合物，其特征在于抑制大腸桿菌0157、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和臘樣芽胞桿菌時，雙歧桿菌發(fā)酵液與納米氧化鋅的最適體積比為1:1。
3.如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制大腸桿菌0157藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制沙門氏菌藥物中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制金黃色葡萄球菌藥物中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制臘樣芽孢桿菌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/04GK103977032SQ201410179432
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】許恒毅, 況慧娟, 張婉怡, 聶麗菊, 葉稱連 申請人:南昌大學(xué)