一種酪氨酸酶抑制劑微乳及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酪氨酸酶抑制劑微乳及其制備方法與應(yīng)用，屬于食品、醫(yī)藥和化妝品【技術(shù)領(lǐng)域】。微乳含有基質(zhì)、酪氨酸酶抑制劑steppogenin、artocarpanone和水；其中基質(zhì)由45％～60％的表面活性劑、20％～30％的助表面活性劑和10～30％的油相組成。微乳由各原料組分按一定配比投料制成。本發(fā)明克服了天然酪氨酸酶抑制劑steppogenin和artocarpanone在水中溶解度極低的缺陷，提供了一種操作簡單自發(fā)形成微乳的方法，用水或水溶液稀釋形成粒徑為納米級的微乳。所得微乳液能夠有效用于抗果蔬酶促褐變、制備美白化妝品、用于預(yù)防和治療黑色素過多導(dǎo)致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的藥物。
【專利說明】一種酪氨酸酶抑制劑微乳及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種酪氨酸酶抑制劑微乳及其制備方法與應(yīng)用，屬于食品、醫(yī)藥和化妝品【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]酪氨酸酶(EC1.14.18.1)，為多酚氧化酶的一種，廣泛存在于生物體中。其通過催化作用，先使單酚羥基化成鄰二酚，然后進(jìn)一步氧化鄰二酚成鄰二醌類，隨后再經(jīng)過一系列復(fù)雜的非酶反應(yīng)，最終生成黑色素。在這個過程中，酪氨酸酶起著關(guān)鍵的作用。人體中產(chǎn)生的黑色素可以使人體皮膚免受太陽紫外線的傷害，同時，皮膚中不同黑色素的含量和種類決定人類的膚色和頭發(fā)顏色，但過多黑色素分泌會引起嚴(yán)重的美容問題，如色斑、黑斑、老年斑等。在食品加工過程中，酪氨酸酶由于催化反應(yīng)導(dǎo)致新鮮水果、蔬菜和飲料產(chǎn)生褐變，從而降低其貯藏周期、營養(yǎng)價(jià)值、以及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0003]酪氨酸酶抑制劑可以抑制酪氨酸酶的活性，從而降低酪氨酸酶引起的不利影響。到目前為止，人們從低等菌類到高等植物中發(fā)現(xiàn)了許多天然酪氨酸酶抑制劑，如曲酸(kojic acid)和壬二酸(azelaic acid);從高等植物中獲得的酪氨酸酶抑制劑多數(shù)屬于多酚類物質(zhì)(主要分為黃酮類和二苯乙烯類)。許多黃酮及其苷類物質(zhì)顯示出酪氨酸酶抑制活性，但只有少數(shù)具有很強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性如steppogenin或artocarpanone,但此類物質(zhì)卻存在幾乎不溶或難溶于水等缺點(diǎn)，極大限制了其應(yīng)用前景。所以，雖然天然酪氨酸酶抑制劑作為生物活性物質(zhì)在食品、醫(yī)藥和化妝品領(lǐng)域中具有廣闊的開發(fā)前景，但由于受其有效性、溶解性等因素制約而難于得到廣泛應(yīng)用。
[0004]微乳是由互不相溶的兩相(一般為油相和水相)經(jīng)過簡單攪拌自發(fā)形成的熱力學(xué)穩(wěn)定的、各向同性的、外觀透明或者半透明的分散體系。從結(jié)構(gòu)上來說，分為水包油型(0/W)、油包水型(W/0)和雙連續(xù)型三種類型。微乳的油相和水相之間被混合活性劑膜分開，混合活性劑膜由表面活性劑，助表面活性劑以及其中的油、水分子構(gòu)成。制作合適的微乳液是增加溶解度的一個適當(dāng)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的第一個技術(shù)問題是提供一種酪氨酸酶抑制劑微乳，尤其是針對酪氨酸酶抑制劑steppogenin (草大戟素)或artocarpanone (桂木二氫黃素)的高活性、無毒、納米粒徑的天然酪氨酸酶抑制劑微乳，解決天然酪氨酸酶抑制劑在水中不溶及溶解度低的問題。
[0006]所述微乳含有基質(zhì)、酪氨酸酶抑制劑和水。
[0007]所述基質(zhì)由表面活性劑、助表面活性劑和油相組成，其中表面活性劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45 %?60 %，助表面活性劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20 %?30 %，油相質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 %?30 % ;上述質(zhì)量分?jǐn)?shù)是各組分占基質(zhì)質(zhì)量的比例。
[0008]所述水是去離子水、純凈水或自來水，根據(jù)需要添加適量水。[0009]所述表面活性劑選自下列一種或幾種的混合:吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80。
[0010]所述助表面活性劑選自下列任意一種:乙醇、PEG400。
[0011]所述油相選自下列任意一種:丁酸乙酯、薄荷油、檸檬油。根據(jù)酪氨酸酶抑制劑在油中的溶解度進(jìn)行選擇。
[0012]一種優(yōu)選的酪氨酸酶抑制劑微乳，其基質(zhì)是由20 %的丁酸乙酯、53 %的吐溫80和27%的乙醇組成(上述質(zhì)量分?jǐn)?shù)是各組分占基質(zhì)質(zhì)量的比例)，所述酪氨酸酶抑制劑中微乳含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 80%的水和 1.08mg/mL 的 steppogenin 或 1.25mg/mL 的 artocarpanone。
[0013]一 種優(yōu)選的酪氨酸酶抑制劑微乳，其基質(zhì)含有46.7 %的表面活性劑吐溫80、23.3%的助表面活性劑聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯；所述微乳含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的7jC和 1.02mg/mL 的 steppogenin。
[0014]一種優(yōu)選的酪氨酸酶抑制劑微乳，其基質(zhì)含有46.7 %的表面活性劑吐溫80、23.3%的助表面活性劑聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯；所述微乳含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的7jC和 1.06mg/mL 的 artocarpanone。
[0015]所用上述試劑都是食品級。
[0016]本發(fā)明要解決的第二個技術(shù)問題是提供所述酪氨酸酶抑制劑微乳的制備方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0017]按配比將表面活性劑和助表面活性劑混合為混合活性劑，再加入一定比例的油相并攪拌均勻，最后加入一定量的酪氨酸酶抑制劑超聲攪拌使其完全溶解，待上述體系混合均勻后，采用滴水法將水慢慢加入上述混合溶液中，充分?jǐn)嚢柚敝馏w系透明澄清，即得到酪氨酸酶抑制劑微乳。
[0018]上述方法制備的微乳液在8000r/min下高速離心15min不分層，粒徑為15~35nm。
[0019]微乳制備過程中表面活性劑過多，易形成凝膠狀態(tài)，微乳形態(tài)不易形成。助表面活性劑過多，則體系不易穩(wěn)定，難以形成微乳澄清透明的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果:
[0020](I)本發(fā)明借助微乳液的超小粒徑和超強(qiáng)增溶能力的特性，選用食品級非離子型表面活性劑、助劑和油相，解決了天然酪氨酸酶抑制劑在水中難溶和幾乎不溶的問題，將其溶解度提高了 5~100倍，提高了天然酪氨酸酶抑制劑在實(shí)際使用中的生物活性，為其在食品、醫(yī)藥和化妝品工業(yè)中的應(yīng)用提供了方法。
[0021](2)本發(fā)明工藝簡單，選用的表面活性劑、助劑和油相均為價(jià)格較低廉、應(yīng)用廣泛的食品級物質(zhì)，對人體安全無毒副作用。
[0022](3)本發(fā)明的微乳體系可用任意比例的水稀釋，無需復(fù)雜的均質(zhì)工藝，加水?dāng)嚢杓纯勺詣有纬杉{米級別微乳，體系澄清穩(wěn)定，目標(biāo)物不會析出。本發(fā)明所制備的微乳，根據(jù)不實(shí)際需要可配置不同濃度的天然酪氨酸酶抑制劑使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1、蘋果切片在steppogenin微乳及各種溶液中處理后抗褐變的a值。
[0024]附圖1中附圖標(biāo)記含義:? —steppogenin微乳水溶液， —0.01 % (w/v)steppogenin微乳水溶液加0.1% (w/v)的維生素C, X—0.1 % 4-己基間苯二酹+0.1 % Vc的水溶液，* —0.1 % Vc水溶液，.--未加目標(biāo)物的空白微乳水溶液，I —去離子水。
[0025]圖2、蘋果切片在artocarpanone微乳及各種溶液中處理后抗褐變的a值。
[0026]附圖2中附圖標(biāo)記含義:? —steppogenin微乳水溶液， —0.01 % (w/v)steppogenin微乳水溶液加0.1% (w/v)的維生素C, X—0.1 % 4-己基間苯二酹+0.1 % Vc的水溶液，* —0.1 % Vc水溶液，.一未加目標(biāo)物的空白微乳水溶液，I —去離子水。
[0027]圖3Steppogenin 的結(jié)構(gòu)式。
[0028]圖 4Artocarpanone 的結(jié)構(gòu)式。
【具體實(shí)施方式】
[0029]實(shí)施例1Steppogenin樣品的制備方法
[0030]St印pogenin是從菠蘿蜜中提取，將2kg波羅蜜木材(木材采自海南省文昌縣)用6倍量95 %乙醇超聲波提取2次，每次lh，減壓濃縮至干燥，稱重。然后以95%乙醇溶解，定性濾紙過濾，加入Amberlite XAD16中，自然晾干或減壓蒸干,上Amberlite XAD16層析柱，分別用20 %、30 %、40 %、50 %及95 %的乙醇洗脫6個柱體積，收集40 %乙醇洗脫部分，濃縮得干燥樣品，用甲醇溶解后用葡萄糖凝膠柱層析進(jìn)行分離，甲醇-水(v/v，l:l)洗脫，即得化合物steppogenin。
[0031]Steppogenin的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
[0032]1H NMR (Acetone-d6, 400ΜΗζ) δ: 12.21 (1Η, s, 0H-5)，9.72 (1H, s, 0H-7)，8
?74 (1H, s, 0H-2’ ), 8.47 (1H, s, OH-4’ ), 7.30 (1H, d, J = 8.4Hz, H_6’ ), 6.47 (1H, d, J=2.1Hz, H-3' ) , 6.42 (1H, dd, J = 8.4，2.4 H z，H - 5 ’)，5.9 6 (I H，d，J=2.4Hz, H-8) , 5.94 (1H, d, J = 2.4Hz，H-6)，5.70 ( I H，dd，J =13.2, 2.8Hz, H-2) , 3.17 (1H, dd, J = 17.2, I 3.2Hz, H-3) , 2.7 I (1H, dd, J =17.2，2.8Hz, H-3) ；13C NMR(Acetone-d6, 100MHz) δ: 197.8 (C = 0，C_4)，167.5 (C, C_7)，165.4(C, C-5), 164.9 (C, C_9)，159.7 (C, C_2，)，156.5 (C, C_4，)，129.1 (CH, C_6，)，117.5 (C, C_l，
)，107.9 (CH, C-5’)，103.6 (CH, C_3’)，103.2 (C, C_10)，96.8 (CH, C_6)，95.9 (CH, C_8), 75.4(CH, C-2)，42.7 (CH2, C_3)。
[0033]實(shí)施例2Steppogenin微乳液的制備方法一
[0034]Steppogenin是一種存在于?？浦参锏奶烊稽S酮類酪氨酸酶抑制劑,具有很強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性，而其在水中卻很難溶解，實(shí)驗(yàn)測得其在水中的溶解度為8.19μ g/mL。
[0035]Steppogenin微乳制備工藝:選擇表面活性劑為吐溫80,助表面活性劑為聚乙二醇，油相為丁酸乙酯。20°C下選擇油相、表面活性劑和助表面活性劑的質(zhì)量比為2:5.3:2.7，將吐溫80和聚乙二醇按質(zhì)量比5.3:2.7先混合攪拌3h，再將混合活性劑與丁酸乙酯按8:2的質(zhì)量比混合，攪拌均勻后取2g混合液加入IOmg steppogenin, 20°C下超聲30min使其完全溶解。最后用滴水法加入Sg水使其水含量達(dá)到80%。制備得到的微乳體系澄清透明穩(wěn)定，經(jīng)HPLC測得目標(biāo)物steppogenin含量為1.08mg/mL，溶解度提高了 132倍。用激光粒度儀測定steppogenin微乳的粒徑為15~35nm。
[0036]高效液相檢測條件:
[0037]儀器:島津LC-20AT液相色譜儀配以DAD檢測器。
[0038]色譜柱:GraceC18 (250 X 4.6mm, 5 μ m)。[0039]流動相:A相:含0.2%甲酸的去離子水出相:乙腈。線性洗脫梯度:0min，20% B ；IOmin,60% B ；20min, 100% B ；25min, 100% B ；30min,20% B。流速:1.0mL/min，檢測波長:285nm。
[0040]實(shí)施例3Steppogenin微乳液的制備方法二
[0041]參照實(shí)施例2的制備方法，以吐溫80作為表面活性劑，以乙醇作為助表面活性劑，以丁酸乙酯作為油相，混合液中油相、表面活性劑和助表面活性劑三者的比例為20%:53%:27%,所得微乳體系中st印pogenin的濃度為0.93mg/mL,水含量為80%，體系澄清透明穩(wěn)定，steppogenin溶解度提高了 114倍。
[0042]實(shí)施例4Steppogenin微乳液的制備方法三
[0043]參照實(shí)施例2的制備方法，以吐溫80作為表面活性劑，以聚乙二醇作為助表面活性劑，以丁酸乙酯作為油相，混合液中油相、表面活性劑和助表面活性劑三者的比例為3:4.67:2.33，所得微乳體系中steppogenin的濃度為1.02mg/mL，水含量為80%，體系澄清透明穩(wěn)定，steppogenin溶解度提高了 124倍。
[0044]實(shí)施例5Steppogenin微乳的酪氨酸酶抑制活性評價(jià)
[0045]取制備的微乳液用去離子水稀釋為20、10、5、2.5，1.25 μ g/mL，取五種濃度的樣品微乳液各lmL。陽性對照曲酸用DMSO分別配成50、25、10、5、2.5μ g/mL濃度的溶液，取五種濃度的曲酸溶DMSO液各300 μ L，用700 μ L的磷酸鹽緩沖溶液配成lmL。在陽性對照和樣品微乳液中分別加入由PH值6.8的磷酸鹽緩沖溶液配成0.lmg/mL的酪氨酸液ImL和200U/mL的酪氨酸酶溶液ImL,在37°C下孵育20min,于492nm處測定吸光值。
[0046]酶活性抑制率=[(A2-A1)- (B2-B1) ] / (A2-A1) X 100 %
[0047]A1為Omin時候未加抑制劑的吸收值；A2為20min后未加抑制劑的吸收值；
[0048]B1為Omin時候加抑制劑的吸收值；B2為20min后加了抑制劑的吸收值。
[0049]按上述方法測得St印pogenin微乳液的IC5tl為3.2 μ M，與化合物用DMSO溶解直接進(jìn)行酪氨酸酶抑制活性測試結(jié)果相似，說明制得的微乳保留了酪氨酸酶抑制劑活性。
[0050]實(shí)施例6Steppogenin微乳液抗褐變效果實(shí)驗(yàn)
[0051]實(shí)驗(yàn)選用的微乳按實(shí)施例2中配方制得，再加水稀釋微乳后，微乳水溶液濃度為
0.01% (w/v),選用溶液體積為400mL,組I是steppogenin微乳溶液,組2是steppogenin微乳溶液加0.1 % (w/v)的維生素C,組3是steppogenin飽和水溶液，組4是陽性對照
0.01% (w/v) 4-己基間苯二酹水溶液,組5是0.1%的Vc水溶液，組6是未加steppogenin的空白微乳水溶液，組7是空白去離子水。實(shí)驗(yàn)方法為將蘋果洗凈后切成厚度為I?1.5cm片狀，分成7組，每組3個，在各組水溶液中浸泡5min之后取出，用濾紙吸干水分后放入培養(yǎng)皿中并使用色差儀測其L值、b值和a值，20°C下保存。每隔0h，3h，6h，12h，24h繼續(xù)測其L值、b值和a值，通過L值和a值的變化程度判斷褐變程度。從蘋果切片抗褐變實(shí)驗(yàn)結(jié)果上來看，組1、組2、組3、組4和組5具有不同程度的抗褐變效果，其中組4抗褐變效果明顯，組2、組3有較好的抗褐變效果；組I和組5抗褐變效果微弱。這表明，第一，steppogenin微乳水溶液本身就具有極好的抗褐變能力；第二，雖然Vc水溶液抗褐變效果微弱，但是Vc在steppogenin微乳水溶液體系中能較好的促進(jìn)這種抗褐變作用,起到協(xié)同作用。
[0052]參照上述的方法，也對其他配方下的steppogenin微乳也進(jìn)行了蘋果切片抗褐變效果實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，實(shí)施例2的配方抗褐變效果最好，其他配方也具有一定的抗褐變效果，抗褐變效果與微乳體系增溶效果正相關(guān)。綜上所述，說明steppogenin微乳液在果蔬抗酶促褐變方面有著潛在的應(yīng)用前景。
[0053]實(shí)施例7Artocarpanone的制備方法
[0054]Artocarpanone是從菠蘿蜜中提取,將2kg波羅蜜木材(木材采自海南省文昌縣)用6倍量95 %乙醇超聲波提取2次，每次lh，減壓濃縮至干燥，稱重。然后以95 %乙醇溶解，定性濾紙過濾，加入Amberlite XAD16中，自然晾干或減壓蒸干,上Amberlite XAD16層析柱，分別用20 %、30 %、40 %、50 %及95 %的乙醇洗脫6個柱體積，收集50 %乙醇洗脫部分6個體積，濃縮得干燥樣品，稱重，用硅膠柱層析進(jìn)行分離，乙酸乙酯-正己烷(1:2)洗脫。
[0055]Artocarpanone的核磁共振光譜數(shù)據(jù)如下:
[0056]1H NMR (Acetone_d6，400ΜΗζ) δ:12.17 (1H, s, 0H-5)，8.64 (1H, s, 0H-2，)，8.39 (1H，s, OH-4’)，7.32 (1H, d, J = 8.4Hz, H_6’), 6.47 (1H, d, J = 2.4Hz, H_3’), 6.44 (1H, dd, J =8.4，2.4Hz, H-5’), 6.05 (1H, d, J = 2.4Hz, H-8)，6.03 (1H, d, J = 2.4Hz, H_6)，5.73 (1H, dd, J=13.2，2.8Hz, H- 2)，3.85 (3H, s, OMe), 3.21 (1H, dd, J = 17.2，13.2Hz, H-3)，2.74 (1H, dd, J=17.2，2.8Hz, H-3) ；13C NMR(Acetone-d6, 100MHz) δ: 198.2 (C = 0，C_4)，168.9 (C, C_7)，I65.1 (C, C-5)，164.8 (C, C_9), 159.7 (C, C_4，), 156.5 (C, C_2，), 129.2 (CH, C_6，)，117.4 (C, C-1，)，108.0 (CH, C-5，)，103.8 (C, C_10)，103.6 (CH, C_3，), 95.5 (CH, C_8)，94.6 (CH, C_6)，75
?6 (CH, C-2)，56.3 (CH3, 0CH3)，42.7 (CH2, C_3)。
[0057]實(shí)施例8Artocarpanone微乳液的制備方法一
[0058]Artocarpanone是一種存在于?？浦参锏奶烊稽S酮類酪氨酸酶抑制劑,具有很強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性，而其在水中卻很難溶解，實(shí)驗(yàn)測得其在水中的溶解度為3.36 μ g/mL。
[0059]Artocarpanone微乳制備工藝:選擇表面活性劑為吐溫80,助表面活性劑為聚乙二醇，油相為丁酸乙酯。20°C下選擇油相、表面活性劑和助表面活性劑的質(zhì)量比為2:5.3:2.7，將吐溫80和聚乙二醇按質(zhì)量比5.3:2.7先混合攪拌3h，再將混合活性劑與丁酸乙酯按8:2的質(zhì)量比混合,攪拌均勻后取2g混合液加入IOmg artocarpanone, 20°C下超聲30min使其完全溶解。最后用滴水法加入Sg水使其水含量達(dá)到80%。制備得到的微乳體系澄清透明穩(wěn)定，經(jīng)HPLC測得目標(biāo)物artocarpanone含量為1.25mg/mL,溶解度提高了 372倍。用激光粒度儀測定artocarpanone微乳的粒徑為10~30nm。
[0060]高效液相檢測條件:
[0061]儀器:島津LC-20AT液相色譜儀配以DAD檢測器。
[0062]色譜柱:GraceC18 (250 X 4.6mm, 5 μ m)。
[0063]流動相:A相:含0.2%甲酸的去離子水出相:乙腈。線性洗脫梯度:0min，20% B ；IOmin,60% B ；20min, 100% B ；25min, 100% B ；30min,20% B。流速:1.0mL/min，檢測波長:285nm。
[0064]實(shí)施例9Artocarpanone微乳液的制備方法二
[0065]參照實(shí)施例8的制備方法，以吐溫80作為表面活性劑，以乙醇作為助表面活性劑，以丁酸乙酯作為油相，混合液中油相、表面活性劑和助表面活性劑三者的比例為2:5.3:2.7,所得微乳體系中artocarpanone的濃度為1.02mg/mL,水含量為80%,體系澄清透明穩(wěn)定，artocarpanone溶解度提高了 303倍。
[0066]實(shí)施例1OArtocarpanone微乳液的制備方法三[0067]參照實(shí)施例8的制備方法，以吐溫80作為表面活性劑，以聚乙二醇作為助表面活性劑，以丁酸乙酯作為油相，混合液中油相、表面活性劑和助表面活性劑三者的比例為3:4.67:2.33,得微乳體系中Artocarpanone的濃度為1.06mg/mL,水含量為80%,體系澄清透明穩(wěn)定，Artocarpanone溶解度提高了 315倍。
[0068]實(shí)施例1lArtocarpanone微乳的酪氨酸酶抑制活性評價(jià)
[0069]取制備的微乳液用去離子水稀釋為20、10、5、2.5，1.25 μ g/mL，取五種濃度的樣品微乳液各lmL。陽性對照曲酸用DMSO分別配成50、25、10、5、2.5μ g/mL濃度的溶液，取五種濃度的曲酸DMSO溶液各300 μ L，用700 μ L的磷酸鹽緩沖溶液配成lmL。在陽性對照和樣品微乳液中分別加入由PH值6.8的磷酸鹽緩沖溶液配成0.lmg/mL的酪氨酸液ImL和200U/mL的酪氨酸酶溶液ImL,在37°C下孵育20min,于492nm處測定吸光值。
[0070]酶活性抑制率=[(A2-A1)- (B2-B1) ] / (A2-A1) X 100 %
[0071]A1為Omin時候未加抑制劑的吸收值；A2為20min后未加抑制劑的吸收值；
[0072]B1為Omin時候加抑制劑的吸收值；B2為20min后加了抑制劑的吸收值。
[0073]按上述方法測得artocarpanone微乳液的IC5tl為18.5 μ Μ,與化合物用DMSO溶解直接進(jìn)行酪氨酸酶抑制活性測試結(jié)果相似，說明制得的微乳保留了酪氨酸酶抑制劑活性。
[0074]實(shí)施例12Artocarpanon微乳液抗褐變效果實(shí)驗(yàn)
[0075]實(shí)驗(yàn)選用的微乳按實(shí)施例8中配方制得，再加水稀釋微乳后，微乳水溶液濃度為0.01 % (w/v),選用溶液體積為400mL,組I是artocarpanone微乳溶液，組2是artocarpanone微乳溶液加0.1 % (w/v)的維生素C,組3是artocarpanone飽和水溶液，組4是陽性對照0.01 % (w/v) 4-己基間苯二酚水溶液，組5是0.1 %的Vc水溶液，組6是未加artocarpanone的空白微乳水溶液,組7是空白去離子水。實(shí)驗(yàn)方法為將蘋果洗凈后切成厚度為I?1.5cm片狀，分成7組，每組3個，在各組水溶液中浸泡5min之后取出，用濾紙吸干水分后放入培養(yǎng)皿中并使用色差儀測其L值、b值和a值，20°C下保存。每隔lh，3h，6h，12h，24h繼續(xù)測其L值、b值和a值，通過L值和a值的變化程度判斷褐變程度。從蘋果切片抗褐變實(shí)驗(yàn)結(jié)果上來看，組1、組2、組3、組4和組5具有不同程度的抗褐變效果，其中組2和組4抗褐變效果明顯且沒有顯著性差異；組I和組3抗褐變效果微弱。這表明，第一,artocarpanone微乳水溶液本身就具有抗褐變能力；第二，雖然Vc水溶液抗褐變效果微弱，但是Vc在artocarpanone微乳水溶液體系中能很好的促進(jìn)這種抗褐變作用,起到協(xié)同作用。
[0076]參照上述的方法，也對其他配方下的artocarpanone微乳也進(jìn)行了蘋果切片抗褐變效果實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，實(shí)施例8的配方抗褐變效果最好，其他配方也具有一定的抗褐變效果，抗褐變效果與微乳體系增溶效果正相關(guān)。綜上所述，說明artocarpanone微乳液在果蔬抗酶促褐變方面有著潛在的應(yīng)用前景。
[0077]雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種酪氨酸酶抑制劑微乳，含有基質(zhì)、酪氨酸酶抑制劑和水；所述基質(zhì)由表面活性齊U、助表面活性劑和油相組成，其中表面活性劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45%?60%，助表面活性劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20 %?30 %,油相質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 %?30 % ;所述酪氨酸酶抑制劑是steppogenin、artocarpanone中的一種或兩種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑微乳，其特征在于，所述水是去離子水、純凈水或自來水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑微乳，其特征在于，所述表面活性劑選自下列一種或幾種的混合:吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑微乳，其特征在于，所述助表面活性劑選自乙醇、PEG400中任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑微乳，其特征在于，所述油相選自丁酸乙酯、薄荷油、朽1檬油的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑微乳，其特征在于，所述基質(zhì)含有20%的丁酸乙酯、53%的吐溫80和27%的乙醇；所述微乳含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的水和1.08mg/mL的steppogenin 或 1.25mg/mL 的 artocarpanone。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑微乳，其特征在于，所述基質(zhì)含有46.7%的表面活性劑吐溫80、23.3%的助表面活性劑聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯；所述微乳含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的水和1.02mg/mL的steppogenin。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑微乳，其特征在于，所述基質(zhì)含有46.7%的表面活性劑吐溫80、23.3%的助表面活性劑聚乙二醇和30%的油相丁酸乙酯；所述微乳含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的水和1.06mg/mL的artocarpanone。
9.一種制備權(quán)利要求1-8任一所述酪氨酸酶抑制劑微乳的方法，是按配比將表面活性劑和助表面活性劑混合為混合活性劑，再按比例加入油相并攪拌均勻，加入一定量的酪氨酸酶抑制劑超聲攪拌使其完全溶解，待上述體系混合均勻后，采用滴水法將水慢慢加入上述混合溶液中，充分?jǐn)嚢柚敝馏w系透明澄清，即得到酪氨酸酶抑制劑微乳。
10.權(quán)利要求1-8任一所述酪氨酸酶抑制劑微乳的應(yīng)用，是用于抑制果蔬的酶促褐變、制備美白化妝品，制備用于抑制酪氨酸酶活性的藥物。
【文檔編號】A61K31/352GK103960351SQ201410186238
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月5日
【發(fā)明者】鄭宗平, 陳潔, 袁佳麗 申請人:江南大學(xué)