一種納豆激酶口服乳劑及其制備方法【專利摘要】一種納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為100-10000IU/mL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分：磷脂8-12％，蜂蠟4-6％，去氧膽酸0.4-1％，輔助乳化劑1.25-5％，余量為油。本申請(qǐng)還提供上述納豆激酶口服乳劑的制備方法。本申請(qǐng)的納豆激酶口服乳劑能夠明顯改善納豆激酶的熱穩(wěn)定性和放置穩(wěn)定性，同時(shí)能夠提高納豆激酶的口服藥效。而且，本申請(qǐng)的制備方法操作簡單，生產(chǎn)成本低，易于大規(guī)?；a(chǎn)?！緦＠f明】一種納豆激酶口服乳劑及其制備方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本申請(qǐng)涉及藥物制劑領(lǐng)域，更具體地，涉及一種納豆激酶口服乳劑及其制備方法和灌裝有所述乳劑的膠囊?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]1、納豆激酶簡介[0003]納豆(natto)源自古代中國，是一種大豆經(jīng)納豆菌發(fā)酵而成的食品。唐朝時(shí)，納豆由鑒真大師傳入日本，其首先在寺廟得到發(fā)展，并逐漸風(fēng)靡日本民間，在日本人的餐桌上占有重要的位置。20世紀(jì)80年代,在美國從事血栓研究的HiroyukiSumi(須見洋行)用人工血栓板對(duì)各種天然產(chǎn)物進(jìn)行大量篩選，以尋找新的抗血栓物質(zhì)。一次偶然的嘗試，他發(fā)現(xiàn)納豆具有極強(qiáng)的溶解人工血栓的能力，在進(jìn)行深入研究后，終于從納豆的粘性物質(zhì)中分離出一種能夠溶解血栓的絲氨酸蛋白酶，并命名為納豆激酶(Nattokinase，NK)(參見文獻(xiàn):Sumi,H.,etal.,Anovelfibrinolyticenzyme(nattokinase)inthevegetablecheeseNatto；atypicalandpopularsoybeanfoodintheJapanesediet.CellularandMolecularLifeSciences,1987.43(10):p.1110-1111.)。[0004]NK是由納豆芽孢桿菌分泌的、由275個(gè)氨基酸殘基組成的不含二硫鍵的單鏈多肽酶。其分子量為27700Da，具有8個(gè)賴氨酸殘基，且不含有半胱氨酸殘基，等電點(diǎn)為8.66±0.3(參見文獻(xiàn):凌均建，羅立新，楊汝德，納豆激酶的分子生物學(xué)研究進(jìn)展.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)1999.15(004):第300-303頁)。NK的溶栓機(jī)理主要包括(I)直接溶解血栓塊中的交聯(lián)纖維蛋白(參見文獻(xiàn):王萍，陳鈞，納豆激酶纖溶活性研究.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004.26(3):第431-434頁；Mahajan,P.M.,S.V.Gokhale,andS.S.Lele,ProductionofnattokinaseusingBacillusnattoNRRL3666:Mediaoptimization,scaleup,andkineticmodeling.FoodScienceandBiotechnology,2010.19(6):p.1593-1603;段智變，江漢湖，張書霞，江曉，董名盛，趙曉燕，納豆激酶粗制液對(duì)家兔溶血栓作用及其機(jī)制研究.營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2003.25(001):第46-51頁；饒穎竹等，納豆激酶粗提液的體外溶栓抑菌實(shí)驗(yàn).蛇志，2004.16(001):第7-1頁；Omura,K.，etal.,AnewlyderivedproteinfromBacillussubtilisnattowithbothantithromboticandfibrinolyticeffects.Journalofpharmacologicalsciences,2005.99(3):p.247-251.);(2)激活血管內(nèi)的尿激酶原和內(nèi)皮細(xì)胞，從而產(chǎn)生內(nèi)源性尿激酶和組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)，進(jìn)而促使體內(nèi)的纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶而溶栓(參見文獻(xiàn):Kumada,K.，T.0nga,andH.Hoshino,Theeffectofnattopossessingahighfibrinolyticactivityinhumanplasma.1gakutoSeibutsugaku,1994.128(3):p.117-119.)；(3)降解纖溶酶原激活劑的抑制劑PA1-1,從而減少t-PA的水解，使纖溶酶生成量增加而加速溶栓(參見文獻(xiàn):毛娜娜等，納豆激酶溶栓作用研究進(jìn)展.中國血液流變學(xué)雜志，2008(2))。[0005]2、納豆激酶溶栓效果[0006]已有大量研究證明NK在體內(nèi)具有較強(qiáng)的溶栓效果。Fujita等研究了NK對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷引起的血栓的溶解作用，發(fā)現(xiàn)靜脈注射NK的動(dòng)物其動(dòng)脈血流恢復(fù)率高達(dá)62.0%，注射纖溶酶的動(dòng)物其恢復(fù)率只有15.8%，而注射彈性蛋白酶的沒有得到任何恢復(fù)，表明NK在體內(nèi)的溶栓活性遠(yuǎn)高于纖溶酶和彈性蛋白酶(參見文獻(xiàn):Fujita，M.，etal.,Thrombolyticeffectofnattokinaseonachemicallyinducedthrombosismodelinrat.Biological&pharmaceuticalbulletin,1995.18(10):p.1387.)。此外，F(xiàn)ujita等還發(fā)現(xiàn)通過向十二指腸內(nèi)注射給藥后，NK也可以有效地被吸收，并增強(qiáng)大鼠體內(nèi)的纖溶活性(參見文獻(xiàn):FuJITA,M.，etal.,Transportofnattokinaseacrosstheratintestinaltract.Biological&pharmaceuticalbulletin,1995.18(9):p.1194-1196.)。段智變等建立家兔頸動(dòng)脈血栓模型，之后通過十二指腸內(nèi)注射分別給予高(4500IU.kg-1)、低劑量(2500IU.kg-1)的NK和生理鹽水(參見文獻(xiàn):(段智變，江漢湖，張書霞，江曉，董名盛，趙曉燕，納豆激酶粗制液對(duì)家兔溶血栓作用及其機(jī)制研究.營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2003.25(001):第46-51頁.))。給藥后1-1.5h內(nèi)，相比于生理鹽水組，NK高劑量組的凝血時(shí)間、凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間和活化的部分凝血活酶時(shí)間均顯著延長，而低劑量組只有凝血酶時(shí)間顯著延長。給藥后2h，相比于生理鹽水組，NK高劑量組的優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間和纖維蛋白原含量顯著降低，纖維蛋白降解產(chǎn)物含量明顯增高，血漿D-二聚體呈陽性。NK低劑量組的優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間明顯縮短，纖維蛋白降解產(chǎn)物含量、凝血酶時(shí)間值顯著增加，血漿D-二聚體呈陽性，纖維蛋白原含量無明顯變化。Kumada等給健康人口服NK后，發(fā)現(xiàn)血中優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間大大降低；優(yōu)球蛋白的纖溶活性提高，在第4天達(dá)到最高值，并維持到第8天；纖維蛋白降解產(chǎn)物在第I天即迅速達(dá)到最高值(參見文獻(xiàn):Kumada，K.，T.0nga,andH.Hoshino,Theeffectofnattopossessingahighfibrinolyticactivityinhumanplasma.1gakutaSeibutsugaku,1994.128(3):p.117-119.)。[0007]3、納豆激酶的其他藥理作用[0008]Kim等給予20-80歲的高血壓患者口服NK膠囊(2000FU/天)，于8周后檢測受試者血壓，結(jié)果顯示與對(duì)照組(服用安慰劑)相比，服用NK的患者的舒張壓和收縮壓均明顯降低，證明NK具有治療高血壓的功效，其降壓作用的確切機(jī)制尚不明確(參見文獻(xiàn):Kim，J.Y.,etal.,Effectsofnattokinaseonbloodpressure:arandomized,controlledtrial.Hypertensionresearch,2008.31(8):p.1583-1588.)。[0009]4、納豆激酶安全性[0010]納豆是一種具有長期服用歷史(不晚于公元7世紀(jì))的食品，人類即使每日空腹口服200g也未見有相關(guān)不良反應(yīng)發(fā)生(參見文獻(xiàn):Sumi,H.，etal.,Enhancementofthefibrinolyticactivityinplasmabyoraladministrationofnattokinase.ActaHaematol,1990.84(3):p.139-143.)。韓國維壽酶公司(Vasozymecompany)生產(chǎn)的維壽酶腸溶膠囊(其中NK為單純的物理混合，沒有形成乳劑)，每日推薦服用量為8000IU;而中國臺(tái)灣的臺(tái)鹽實(shí)業(yè)公司生產(chǎn)的納豆大師(納豆紅曲素食膠囊)，其每日推薦服用量高達(dá)12800IU。上述兩種產(chǎn)品長期服用時(shí)未見不良反應(yīng)報(bào)道。黃曉曼等研究了NIH小鼠口服NK的急性毒性，按小鼠的吞食極限單次灌服NK濃溶液(劑量為400kIU.kg-1)，發(fā)現(xiàn)該劑量不會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)小鼠產(chǎn)生死亡及異常(觀察2周)，2周后處死動(dòng)物，內(nèi)臟無病理學(xué)變化(參見文獻(xiàn):黃曉曼，楊鵲，邱志健，曾琳玲，彭中健，夏楓耿，納豆激酶的安全性試驗(yàn)中國食品添加劑，2008(002):第109-112頁.)。此外，黃曉曼等亦證實(shí)，以尾靜脈注射的方式對(duì)NIH小鼠給予NK，IOOkIU-kg-1的劑量不會(huì)導(dǎo)致小鼠死亡，并在一系列劑量梯度的實(shí)驗(yàn)中得到半數(shù)致死量為172.6kIU.kg-1，存活動(dòng)物在2周后解剖，各器官均未發(fā)現(xiàn)病理學(xué)改變。[0011]5、納豆激酶的現(xiàn)有制劑[0012]由于NK在溶解血栓和/或預(yù)防血栓性疾病發(fā)生等方面的突出療效，近年來將其作為功能性食品和添加劑的產(chǎn)品不斷面世。日本大和制藥有限公司以須見洋行博士的技術(shù)為支持開發(fā)納豆產(chǎn)品，其名稱為NKCP(Nattoessecompound)，劑型有硬膠囊、軟膠囊(非腸溶膠囊，其中NK為單純的物理混合，混懸制劑)和片劑。該公司在生產(chǎn)制劑的同時(shí)也供應(yīng)原料。韓國維壽酶公司生產(chǎn)的“維壽酶”則是NK干粉腸溶膠囊。除此之外，朝鮮的納豆產(chǎn)品“血宮不老精”(RoyalBloodFresh)也已面市，該藥由金日成綜合大學(xué)生命科學(xué)部微生物酵素研究室研究師們于1995年研究開發(fā)，其主要成分是青曲醬中的細(xì)菌分離精制的酵素劑(其中含有NK)(NationalinstituteofDrugcontrollingofDPR.Korea.FromAnalysisofRoyalBlood-FreshN0:PG90-4c_0486)，劑型為膠囊(非腸溶膠囊，其中NK為單純的物理混合，混懸制劑)，生產(chǎn)商為朝鮮富強(qiáng)會(huì)社。國內(nèi)則主要有北京燕京中發(fā)的燕京牌納豆(納豆提取物腸溶膠囊)，天津百德公司的納豆口嚼片，草仙藥業(yè)的凈血酶納豆膠囊，湖南貴生坊的納豆素膠囊，天津?qū)毢闵锏牡鞍孜{豆膠囊等。從以上資料可知，目前的NK產(chǎn)品在形式上都為普通膠囊(非腸溶膠囊，其中NK為單純的物理混合，混懸制劑)或片劑。[0013]NK是從納豆發(fā)酵液中精制而來，納豆發(fā)酵液自身即是一種具有確切療效的液體口服劑。但液體酶的缺點(diǎn)是穩(wěn)定性差，容易失活。因此目前的產(chǎn)品或文獻(xiàn)多采用凍干的方式獲得NK凍干粉而增加其穩(wěn)定性。此外，NK在pH低于5的環(huán)境下很快失活(如胃液中)，在高于60°C的情況下也迅速變性(參見文獻(xiàn):付利，楊志興，納豆激酶的研究與應(yīng)用.生物工程進(jìn)展，1995.15(5):第46-49頁.)。而且對(duì)于NK這樣的蛋白多肽類藥物而言，口服給藥時(shí)會(huì)面臨腸道的三大障礙，即酶的降解、黏液層的擴(kuò)散屏蔽以及粘膜的吸收屏蔽(參見文獻(xiàn):程剛，生物藥劑學(xué)2010:中國醫(yī)藥科技出版社)。[0014]因此在NK相關(guān)產(chǎn)品的劑型設(shè)計(jì)和工藝確定中都必須同時(shí)考慮如何最大限度的維持NK的活性，促進(jìn)NK吸收，以及工藝的經(jīng)濟(jì)性。[0015]遺憾的是，目前上市產(chǎn)品和文獻(xiàn)報(bào)道中能對(duì)這些因素進(jìn)行全面考慮的甚少。以片劑為例，壓片過程中物料內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生高溫，后期的包衣工藝可能引入的高溫及有機(jī)溶劑，這些都可能影響NK的活性。NK凍干粉直接灌裝腸溶膠囊雖然減弱了溫度的影響，但NK作為分子量28kDa的多肽，其在腸道中的吸收受到一定的限制(參見文獻(xiàn):張霞，尹宗寧，王怡鑫，納豆激酶脂質(zhì)體的制備及其體外釋放.中國藥學(xué)雜志，2007.42(4):第279-282頁)。[0016]張?jiān)品宓仁褂贸暪に囍苽淞薔K環(huán)糊精包合物，以期提高NK的穩(wěn)定性和跨膜能力，但超聲工藝(常溫下0.5h)不僅可能帶來NK活性的降低，而且在產(chǎn)業(yè)化上也不經(jīng)濟(jì)(參見:張?jiān)品澹{豆激酶羥丙基環(huán)糊精包合物的制備和鑒定.廣東化工，2011.38(001):第10-10頁；張?jiān)品濉⒗钴?、陳曉煒、曹曉琴，專利CN201010287914.2)。[0017]高大海等分別選取了兩種腸溶體系(海藻酸鈣膠囊和以CAP為包衣的腸溶微丸體系)來制備納豆激酶腸溶制劑(參見:高大海，納豆激酶的分離純化和酶學(xué)性質(zhì)的研究，2005，浙江大學(xué))，并考察了兩種體系對(duì)NK包埋率的影響以及兩種體系在體外模擬的人工腸液和人工胃液中的釋放情況。結(jié)果表明以CAP制備得到的腸溶微丸較為理想，其在模擬胃液中120min內(nèi)總釋放度小于10%，在模擬腸液中60min內(nèi)完全釋放。[0018]也有研究者使用微丸制劑工藝包裹NK并灌裝膠囊，工藝流程為將NK與藥用輔料混合，制軟材，制丸芯，噴入包衣液包衣，裝膠囊(參見:肖潔瑾，徐.顧.鄒.，專利CN1766096A，標(biāo)題為“一種納豆激酶組合物及其制備方法”)。但這種方法也存在一些缺點(diǎn):(I)由于包衣溫度較低(30°C)，容易造成微丸的粘連，影響微丸制劑的成型；(2)包衣后微丸還需要一個(gè)低溫(30°C)烘箱內(nèi)的膜愈合過程，由于溫度較低，所以膜愈合時(shí)間長達(dá)8h，這也給生產(chǎn)帶來不便。Law和Zhang等以高純度NK凍干粉末作為原料，制備腸溶緩釋片(參見:Law,D.andZ.Zhang,StabilizationandtargetdeliveryofNattokinaseusingcompressioncoating.Drugdevelopmentandindustrialpharmacy,2007.33(5):p.495-503.)。[0019]用輔料丨:?L100-55和HPC的混合物對(duì)藥物進(jìn)行直接壓縮包衣，可實(shí)現(xiàn)制劑的腸道控制釋放。[0020]陳景鑫等以環(huán)糊精包合法制備NK微膠囊并對(duì)制劑的耐酸、耐熱、儲(chǔ)存穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察(參見:陳景鑫，納豆激酶微膠囊的制備及其穩(wěn)定性研究，2010，黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué))，結(jié)果表明該方法能明顯改善制劑的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，但此法制備工藝較復(fù)雜。[0021]綜上可知，制劑工作者在NK口服制劑的開發(fā)方面做了大量工作，給出了眾多方案，但至今還沒有找到一個(gè)能同時(shí)兼顧NK口服吸收好、活性保持強(qiáng)、工藝簡單和制備成本低的方案?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0022]本申請(qǐng)的目的是提供一種納豆激酶口服乳劑。[0023]本申請(qǐng)的另一目的是提供一種制備上述納豆激酶口服乳劑的方法。[0024]本申請(qǐng)的又一目的是提供一種灌裝有上述納豆激酶口服乳劑的膠囊。[0025]具體地，在一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為100-10000IU/mL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:磷脂8-12%，蜂蠟4-6%，去氧膽酸0.4-1%，輔助乳化劑1.25-5%，余量為油。[0026]本申請(qǐng)所述的納豆激酶水溶液是納豆激酶凍干粉溶于水中所制得的溶液。本申請(qǐng)所用的納豆激酶凍干粉可以購買自汕頭雙駿生物科技有限公司、日本生物科技等。[0027]本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解的是，在本申請(qǐng)中所用的油可以為用于制備乳劑的各種常用的油。[0028]在一些實(shí)施方式中，所述油相各組分的重量百分?jǐn)?shù)為:磷脂10%，蜂蠟5%，去氧膽酸0.5%，輔助乳化劑2.5%，余量為油。[0029]在一些實(shí)施方式中，所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值可以為2.5:1~20:1。優(yōu)選地，所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值可以為5:1。[0030]在一些實(shí)施方式中，所述磷脂可以選自大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂中的一種或兩種。[0031]在一些實(shí)施方式中，所述輔助乳化劑可以選自聚氧乙烯氫化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸甘油酯中的一種或多種。[0032]在一些實(shí)施方式中，所述油可以選自中鏈甘油三酯或長鏈甘油三酯中的一種或兩種。優(yōu)選地，所述油可以為中鏈甘油三酯。[0033]本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解的是，在本申請(qǐng)中所用的蜂蠟、去氧膽酸、大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、聚氧乙烯氫化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸甘油酯、中鏈甘油三酯和長鏈甘油三酯均為市售產(chǎn)品。[0034]在一些實(shí)施方式中，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為100-10000IU/HlL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:大豆卵磷脂8-12%，蜂蠟4-6%，去氧膽酸0.4-1%，聚氧乙烯氫化蓖麻油1.25-5%，余量為中鏈甘油三酯；所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為2.5:1~20:1，優(yōu)選地為5:1。[0035]在一些實(shí)施方式中，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為100-10000IU/HlL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:大豆卵磷脂10%，蜂蠟5%，去氧膽酸0.5%，聚氧乙烯氫化蓖麻油2.5%，余量為中鏈甘油三酯；所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為5:1。[0036]在另外的方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N制備上述納豆激酶口服乳劑的方法，所述方法可以包括如下步驟:[0037]配制配方量的納豆激酶水溶液，即得到水相，待用；[0038]混合配方量的油相各組分，得到油相各組分的混合物；[0039]在55_70°C的溫度下，攪拌油相各組分的混合物至分散均勻，得到油相，冷卻至室溫，待用;[0040]將油相的溫度控制在35-45°C下，在攪拌狀態(tài)下將水相加入到油相中，并在此溫度下持續(xù)攪拌1-10分鐘，即得納豆激酶口服乳劑。[0041]本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解的是，本申請(qǐng)所述的室溫可以為20~30°C之間的溫度。[0042]在一些實(shí)施方式中，可以在60-65°C下，攪拌混合物至分散均勻。[0043]在一些實(shí)施方式中，可以將油相的溫度控制在36-38°C下，在攪拌狀態(tài)下將水相加入到油相中，并在此溫度下持續(xù)攪拌1-10分鐘，優(yōu)選地?cái)嚢?-5分鐘。[0044]在又一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N灌裝有上述納豆激酶口服乳劑的膠囊。[0045]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)所提供的納豆激酶口服乳劑為W/0(油包水)乳劑，實(shí)驗(yàn)證明，本申請(qǐng)的納豆激酶口服乳劑能夠明顯改善納豆激酶的熱穩(wěn)定性和放置穩(wěn)定性，同時(shí)提高了納豆激酶的口服藥效。同時(shí)，本申請(qǐng)所提供的制備上述納豆激酶口服乳劑的方法操作簡單，生產(chǎn)成本低，易于大規(guī)?；a(chǎn)?！揪唧w實(shí)施方式】[0046]下面通過實(shí)施例來描述本申請(qǐng)的實(shí)施方式，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，這些具體的實(shí)施例僅表明為了達(dá)到本申請(qǐng)的目的而選擇的實(shí)施技術(shù)方案，并不是對(duì)技術(shù)方案的限制。根據(jù)本申請(qǐng)的教導(dǎo)，結(jié)合現(xiàn)有技術(shù)對(duì)本申請(qǐng)技術(shù)方案的改進(jìn)是顯然的，均屬于本申請(qǐng)保護(hù)的范圍。[0047]在本申請(qǐng)中，所有的設(shè)備或原料等均可從市場獲得或是本行業(yè)常用的。在以下實(shí)施例中，所用各成分的相關(guān)信息如下:[0048]大豆卵磷脂(SPC)，購自:Lipoid，批號(hào)為20110113；[0049]蛋黃卵磷脂(EPC)，購自:Lipoid，批號(hào)為201003011；[0050]聚氧乙烯氫化蓖麻油(RH40)，購自:巴斯夫，批號(hào)為20110516；[0051]去氧膽酸(DCA)，購自:百靈威，批號(hào)為20120325；[0052]中鏈脂肪酸甘油三酯(MCT)，購自:Lipoid，批號(hào)為20100219；[0053]長鏈脂肪酸甘油三酯(LCT)，購自=Lipoid，批號(hào)為20101101；[0054]蜂臘，購自:禹王公司，批號(hào)為20091026；[0055]辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，購自:嘉法獅(上海)貿(mào)易有限公司，批號(hào)為20091103；[0056]聚乙二醇月桂酸甘油酯，購自:嘉法獅(上海)貿(mào)易有限公司，批號(hào)為20090513；[0057]聚乙二醇硬脂酸甘油酯，購自:嘉法獅(上海)貿(mào)易有限公司，批號(hào)為20100319；[0058]納豆激酶(NK)凍干粉購買自汕頭雙駿生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為Y2013021301。[0059]在本申請(qǐng)中，所述NK溶液均是將NK凍干粉溶解于水中獲得的，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)濃度在100-10000IU/mL時(shí)，均能制備得到穩(wěn)定的納豆激酶口服乳劑。[0060]實(shí)施例1[0061]一種納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為10000IU/HlL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組^:SPC10%(w/w)，蜂蠟5%(w/w),RH402.5%(w/w),DCA0.5%(w/w)，余量為MCT。同時(shí)，所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為5:1。[0062]制備方法:[0063]稱取配方量的納豆激酶凍干粉溶解于水中，得到水相；[0064]稱取配方量的SPC、蜂蠟、RH40、DCA和MCT，總共IOg置于25mL燒杯中，于65°C水浴下恒溫?cái)嚢杌旌现练稚⒕鶆颍玫接拖?，室溫下冷卻待用；[0065]將油相的溫度控制在37°C下，凝固的油相在此溫度下融化，并在攪拌狀態(tài)下移取2mLNK溶液緩緩注入油相中，同時(shí)在此溫度下持續(xù)攪拌lmin，即得納豆激酶口服乳劑。[0066]所述納豆激酶口服乳劑為半固態(tài)、乳膏狀，無絮凝狀沉淀量，放置7天后不分層。[0067]實(shí)施例2[0068]一種納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為100IU/mL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:SPC10%(w/w),EPC1.6%(w/w),蜂臘5%(w/w),RH402.5%(w/w)、DCA0.5%(w/w),余量為MCT80.4%。同時(shí)，所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為5:1。[0069]制備方法:[0070]稱取配方量的納豆激酶凍干粉溶解于水中，得到水相；[0071]稱取配方量的5?(^?(:、蜂蠟、冊(cè)40、004和]\?:1'，總共IOg置于25mL燒杯中，于65°C水浴下恒溫?cái)嚢杌旌现练稚⒕鶆颍玫接拖?，室溫下冷卻待用；[0072]將油相的溫度控制在37°C下，凝固的油相在此溫度下融化，并在攪拌狀態(tài)下移取2mLNK溶液緩緩注入油相中，同時(shí)在此溫度下持續(xù)攪拌lmin，即得納豆激酶口服乳劑。[0073]所述納豆激酶口服乳劑的性狀與實(shí)施例1的納豆激酶口服乳劑的性狀相同。[0074]實(shí)施例3[0075]—種納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為1000IU/mL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:EPCl1.6%(w/w)，蜂蠟5%(w/w),RH402.5%(w/w)DCA0.5%(w/w)，余量為MCT。同時(shí)，所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為5:1。[0076]制備方法:[0077]稱取配方量的納豆激酶凍干粉溶解于水中，得到水相；[0078]稱取配方量的EPC、蜂蠟、RH40、DCA和MCT，總共IOg置于25mL燒杯中，于65°C水浴下恒溫?cái)嚢杌旌现练稚⒕鶆颍玫接拖?，室溫下冷卻待用；[0079]將油相的溫度控制在36°C下，凝固的油相在此溫度下融化，并在攪拌狀態(tài)下移取2mLNK溶液緩緩注入油相中，同時(shí)在此溫度下持續(xù)攪拌lmin，即得納豆激酶口服乳劑。[0080]所述納豆激酶口服乳劑的性狀與實(shí)施例1的納豆激酶口服乳劑的性狀相同。[0081]實(shí)施例4[0082]一種具有如實(shí)施例1所述的配方量的納豆激酶口服乳劑，其制備方法包括如下步驟:[0083]稱取配方量的納豆激酶凍干粉溶解于水中，得到水相；[0084]稱取配方量的SPC、蜂蠟、RH40、DCA和MCT，總共IOg置于25mL燒杯中，于55°C水浴下恒溫?cái)嚢杌旌现练稚⒕鶆颍玫接拖?，室溫下冷卻待用；[0085]將油相的溫度控制在35°C下，凝固的油相在此溫度下融化，并在攪拌狀態(tài)下移取2mLNK溶液緩緩注入油相中，同時(shí)在此溫度下持續(xù)攪拌5min，即得納豆激酶口服乳劑。[0086]所述納豆激酶口服乳劑的性狀與實(shí)施例1的納豆激酶口服乳劑的性狀相同。[0087]實(shí)施例5[0088]一種具有如實(shí)施例1所述的配方量的納豆激酶口服乳劑，其制備方法包括如下步驟:[0089]稱取配方量的納豆激酶凍干粉溶解于水中，得到水相；[0090]稱取配方量的SPC、蜂蠟、RH40、DCA和MCT，總共IOg置于25mL燒杯中，于60°C水浴下恒溫?cái)嚢杌旌现练稚⒕鶆?，得到油相，室溫下冷卻待用；[0091]將油相的溫度控制在45°C下，凝固的油相在此溫度下融化，并在攪拌狀態(tài)下移取2mLNK溶液緩緩注入油相中，同時(shí)在此溫度下持續(xù)攪拌lOmin，即得納豆激酶口服乳劑。[0092]所述納豆激酶口服乳劑的性狀與實(shí)施例1的納豆激酶口服乳劑的性狀相同。[0093]實(shí)施例6[0094]一種具有如實(shí)施例1所述的配方量的納豆激酶口服乳劑，其制備方法包括如下步驟:[0095]稱取配方量的納豆激酶凍干粉溶解于水中，得到水相；[0096]稱取配方量的SPC、蜂蠟、RH40、DCA和MCT，總共IOg置于25mL燒杯中，于70°C水浴下恒溫?cái)嚢杌旌现练稚⒕鶆?，得到油相，室溫下冷卻待用；[0097]將油相的溫度控制在38°C下，凝固的油相在此溫度下融化，并在攪拌狀態(tài)下移取2mLNK溶液緩緩注入油相中，同時(shí)在此溫度下持續(xù)攪拌8min，即得納豆激酶口服乳劑。[0098]所述納豆激酶口服乳劑的性狀與實(shí)施例1的納豆激酶口服乳劑的性狀相同。[0099]實(shí)施例7[0100]油相的以克計(jì)的重量與水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值對(duì)乳劑的影響[0101]納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為10000IU/mL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:SPClO%(w/w)，蜂蠟5%(w/w),RH402.5%(w/w),DCA0.5%(w/w)，余量為MCT。同時(shí)，所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值如表1所示。[0102]按照實(shí)施例1所述的制備方法來制備納豆激酶口服乳劑，產(chǎn)品的外觀、絮凝狀沉淀及室溫放置7天后的穩(wěn)定性如表1所示。[0103]表1.不同的油相與水相的比值(g/ml)對(duì)所制備的乳劑的性狀的影響[0104]【權(quán)利要求】1.一種納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為100-10000IU/mL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:磷脂8-12%，蜂蠟4-6%，去氧膽酸0.4-1%，輔助乳化劑1.25-5%，余量為油。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳劑，其中，所述油相各組分的重量百分?jǐn)?shù)為:磷脂10%，蜂蠟5%，去氧膽酸0.5%，輔助乳化劑2.5%，余量為油。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乳劑，其中，所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為2.5:1~20:1，優(yōu)選地為5:1。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乳劑，其中，所述磷脂選自大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂中的一種或兩種。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乳劑，其中，所述輔助乳化劑選自聚氧乙烯氫化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸甘油酯中的一種或多種。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乳劑，其中，所述油選自中鏈甘油三酯或長鏈甘油三酯中的一種或兩種，優(yōu)選地，所述油為中鏈甘油三酯。7.—種納豆激酶口服乳劑，所述乳劑包括油相和水相，所述水相是濃度為100-10000IU/mL的納豆激酶水溶液，所述油相含有如下基于所述油相的總重量計(jì)算的重量百分?jǐn)?shù)的各組分:大豆卵磷脂8-12%，蜂蠟4-6%，去氧膽酸0.4-1%，聚氧乙烯氫化蓖麻油1.25-5%，余量為中鏈甘油三酯；所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為2.5:1~20:1，優(yōu)選地為5:1。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的乳劑，其中，所述油相各組分的重量百分?jǐn)?shù)為:大豆卵磷脂10%，蜂蠟5%，去氧膽酸0.5%，聚氧乙烯氫化蓖麻油2.5%，余量為中鏈甘油三酯；所述油相的以克計(jì)的重量與所述水相的以毫升計(jì)的體積之間的比值為5:1。9.一種制備如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的納豆激酶口服乳劑的方法，所述方法包括以下步驟:配制配方量的納豆激酶水溶液，即得到水相，待用；混合配方量的油相各組分，得到油相各組分的混合物；在55-70°C的溫度下，攪拌油相各組分的混合物至分散均勻，得到油相，冷卻至室溫，待用；將油相的溫度控制在35-45°C下，在攪拌狀態(tài)下，將水相加入到油相中，并在此溫度下持續(xù)攪拌ι-?ο分鐘，即得納豆激酶口服乳劑；優(yōu)選地，在60-65°C下，攪拌混合物至分散均勻；優(yōu)選地，將油相的溫度控制在36-38°C下，在攪拌狀態(tài)下將水相加入到油相中，并在此溫度下持續(xù)攪拌1-10分鐘，優(yōu)選地?cái)嚢?-5分鐘。10.一種膠囊，其灌裝有如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的納豆激酶口服乳劑?！疚臋n編號(hào)】A61P7/02GK103977397SQ201410198490【公開日】2014年8月13日申請(qǐng)日期:2014年5月12日優(yōu)先權(quán)日:2014年5月12日【發(fā)明者】陳杰鵬,陳煜藩,陳鴻銳,邱雪蓮,段麗麗,胡留松,紀(jì)燁瑜,蔡桂珠,許志鍇,葉紅林,洪琳,黃曉瑩申請(qǐng)人:廣東雙駿生物科技有限公司