一種金錢松內(nèi)酯h的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了金錢松種子中成分金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品及藥物中的應(yīng)用，所述的金錢松內(nèi)酯H是由如下方法制備得到的：將金錢松種子粉碎后，先用溶劑A提取，濾渣再用溶劑B提取，兩次提取的提取液濃縮干燥后合并得到總粗提物，將總粗提物分散于低級(jí)醇的水溶液中，用石油醚提取脫脂，棄去石油醚相，將萃余液濃縮干燥即得金錢松種子三萜提取物，進(jìn)一步采用鹵代甲烷和丙酮混合溶液為溶劑，對(duì)三萜提取物進(jìn)行重結(jié)晶，獲得金錢松內(nèi)酯H；本發(fā)明制備方法工藝簡(jiǎn)單，操作方便，能耗小，適宜大規(guī)模從金錢松種子中提取生產(chǎn)金錢松內(nèi)酯H。
【專利說(shuō)明】一種金錢松內(nèi)酯H的制備方法及應(yīng)用
(—)【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及金錢松種子中成分金錢松內(nèi)酯H(pseudolarolide H)在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，及金錢松內(nèi)酯H的制備方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
(二)【背景技術(shù)】
[0002]隨著世界經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人口的老齡化,糖尿病(Diatetesmellitus)已成為肆虐全球的一種流行性非傳染病，它與癌癥、心血管疾病并稱世界性三大疾病。糖尿病是以糖代謝紊亂為主要表現(xiàn)的內(nèi)分泌，代謝障礙疾病。它是一組由于胰島素分泌缺陷，或胰島素作用缺陷，或者 兩者兼而有之引起的高血糖代謝為特征的代謝疾病。糖尿病的慢性高血糖帶來(lái)氧化應(yīng)激增加，引起多臟器的長(zhǎng)期損害，功能減退和衰竭，尤其是眼、腎臟、神經(jīng)、心臟和血管，危害健康。近年來(lái)糖尿病發(fā)病率逐年上升，據(jù)WHO估計(jì)，全世界約有1.5億糖尿病患者，發(fā)達(dá)國(guó)家中，糖尿病發(fā)病率為3 %~5 %。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，到2025年，患糖尿病的人數(shù)將比現(xiàn)在翻一番，將突破3億，嚴(yán)重威脅著人類健康。
[0003]糖尿病是慢性終身性疾病，一旦催患需終身治療。西醫(yī)目前治療糖尿病的口服藥主要有:磺酰脲類(如格列美脲)、雙胍類(如二甲雙胍)等，它們大多為合成類藥物，可促進(jìn)胰島素分泌、減少肝糖元的輸出或增加對(duì)胰島素的敏感性，但容易引起低血糖或乳酸中毒，并且無(wú)法根本阻止胰島β細(xì)胞的進(jìn)一步壞死，導(dǎo)致胰島素依賴。隨著對(duì)糖尿病基礎(chǔ)理論研究的深入，具有其它作用機(jī)制的新型糖尿病藥物研究取得進(jìn)展，并有不少己應(yīng)用于臨床:α-葡萄糖甙酶抑制劑類(如阿卡波糖)，可抑制小腸上段的α-糖甙酶，阻斷碳水化合物分解而進(jìn)入小腸中下段再分解吸收，從而使血糖平穩(wěn)地維持在一定水平，緩解餐后血糖的升高，但該類藥物會(huì)產(chǎn)生腹部不適、脹氣等消化道不良反應(yīng)。醛糖還原酶抑制劑類(如依帕司他)，可通過(guò)抑制聚醇代謝通路達(dá)到預(yù)防和延緩糖尿病并發(fā)癥的目的，但該類藥物毒副作用較大且療效不很理想，大大限制了其應(yīng)用。另外，還有糖元異生抑制劑、胰島素增敏劑等，應(yīng)用范圍也不是很廣。因而，繼續(xù)尋找具有良好療效、副作用小的新藥，依然是當(dāng)前糖尿病研究領(lǐng)域的一個(gè)重點(diǎn)。
[0004]天然藥物具有資源豐富、毒副作用小、易于接受和長(zhǎng)期服用的優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越受到重視。近年來(lái)，隨著化學(xué)分析方法和藥理實(shí)驗(yàn)技術(shù)的長(zhǎng)足發(fā)展，有關(guān)天然藥物降血糖作用的研究不斷深入、從中發(fā)現(xiàn)了多種療效確實(shí)而顯著的活性成分，為開(kāi)發(fā)治療糖尿病的新藥探明了方向。
(三)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H具有糖苷酶抑制活性和降血糖作用，可用于制備治療臨床常見(jiàn)的糖尿病及相關(guān)代謝性疾病的功能食品與藥物，并且本發(fā)明還提供了一種金錢松種子中成分金錢松內(nèi)酯H的制備方法。
[0006]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法按如下步驟進(jìn)行:
[0007](I)將金錢松種子粉碎后，用溶劑A提取，分離固液相得濾渣A和提取液Α，將所得提取液A濃縮干燥得到粗提物A ;所述溶劑A選自氯仿或二氯甲烷；
[0008](2)將步驟⑴中所得濾渣A用溶劑B提取，分離固液相得濾渣B和提取液B，將所得提取液B濃縮干燥得到粗提物B ;所述溶劑B選自乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮中的一種或者是其中兩種以上任意比例的混合溶劑；
[0009](3)合并步驟(1)和步驟(2)中所得的粗提物A和粗提物B得總粗提物，將所述的總粗提物分散于醇水溶液中，再用石油醚提取脫脂，棄去石油醚相，將萃余液濃縮干燥即得金錢松種子三萜提取物；所述的醇水溶液是由醇與水按體積比1:0.1~10混合配制而成的，其中所述的醇為Cl~C4的醇；
[0010](4)將步驟(3)所得的金錢松種子三萜提取物在40~50°C下溶于鹵代甲烷與丙酮的混合溶液，自然冷卻至室溫或制冷冷卻至2~7°C促進(jìn)結(jié)晶，過(guò)濾獲得晶體粗品；進(jìn)一步將所述的晶體粗品在40~50°C下溶于鹵代甲烷與丙酮的混合溶液，冷卻重結(jié)晶，過(guò)濾獲得晶體產(chǎn)品，所述的晶體產(chǎn)品干燥后即為金錢松內(nèi)酯H ;所述鹵代甲烷與丙酮的混合溶液中，鹵代甲烷與丙酮的體積比為1:3~5，優(yōu)選為1:4。本發(fā)明方法制備的金錢松內(nèi)酯H液相測(cè)得含量達(dá)90%以上，金錢松內(nèi)酯H產(chǎn)品量約占金錢松三萜提取物的24wt%左右。
[0011]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(1)中，優(yōu)選所述溶劑A的體積用量以金錢松種子的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g ;優(yōu)選所述的溶劑A為二氯甲烷。
[0012]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(2)中，優(yōu)選所述溶劑B的體積用量以金錢松種子的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g ;優(yōu)選所述的溶劑B為乙酸乙酯。
[0013]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(1)和步驟(2)中，所述提取的方法可選擇下述兩種方法之一:①采用索氏回流提取6~24h ;②采用浸潰提取方式，浸提2次，每次5~7天。。
[0014]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(3)中，優(yōu)選所述醇水溶液的體積用量以總粗提物的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g ;所述醇水溶液中的醇優(yōu)選為甲醇或乙醇。
[0015]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(3)中，所述的石油醚提取脫脂可以采用如下方法:將總粗提物分散于醇水溶液中后，加入石油醚萃取I~3次，棄去萃取液，將萃余液濃縮干燥即得金錢松種子三萜提取物；優(yōu)選所述石油醚的體積用量以總粗提物的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g ;優(yōu)選所述的石油醚與醇水溶液的用量體積比為1:1。
[0016]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(4)中，所述的金錢松種子三萜提取物在用鹵代甲烷與丙酮混合溶液重結(jié)晶獲得晶體粗品的過(guò)程中，優(yōu)選所述鹵代甲烷與丙酮混合溶液的質(zhì)量用量是金錢松種子三萜提取物質(zhì)量的5~7倍，特別優(yōu)選為6倍。
[0017]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(4)中，所述的鹵代甲烷優(yōu)選為二氯甲烷或三氯甲烷，特別優(yōu)選二氯甲烷。
[0018]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H可用于制備治療糖尿病的功能食品和藥物。所述的金錢松內(nèi)酯H可通過(guò)添加常規(guī)藥用輔料，按照藥學(xué)領(lǐng)域中熟知的方法進(jìn)一步制備成膠囊、片劑、顆粒或其他口服制劑。
[0019]本發(fā)明所述的金錢松內(nèi)酯H制備方法的優(yōu)點(diǎn)在于:結(jié)合了粉碎-浸提-萃取-結(jié)晶-重結(jié)晶的方式，對(duì)金錢松種子中金錢松內(nèi)酯H進(jìn)行提取。通過(guò)采用將浸膏分散于乙醇水溶液中，再用石油醚脫脂的方式，分離脫除了金錢松種子中大量的油脂類成分，使提取物中雜質(zhì)含量降低，有利于后面結(jié)晶工藝的進(jìn)行。進(jìn)一步結(jié)晶制備金錢松內(nèi)酯H的工藝簡(jiǎn)單，操作方便，能耗小。前期調(diào)研表明，金錢松種子中存在大量的三萜類化合物，這些化合物缺乏制備及活性報(bào)道。本發(fā)明主要采用溶劑萃取，結(jié)合溶劑重結(jié)晶的方式，高效制備了具有降血糖活性的金錢松內(nèi)酯H。其中
[0020]1、操作步驟(3)中，針對(duì)金錢松種子中油脂含量高的特點(diǎn)，采用了浸膏分散于乙醇水溶液中，石油醚脫脂的方式，除去油脂類成分，有利于結(jié)晶進(jìn)行。
[0021]2、操作步驟(4)中的冷卻結(jié)晶，于室溫冷卻結(jié)晶較慢但可以形成較大晶體，提高晶體均勻度。處理量大時(shí)可強(qiáng)制制冷冷卻結(jié)晶，加快生產(chǎn)效率。
[0022]3、操作步驟(4)中金錢松種子三萜提取物重結(jié)晶獲得的母液可以反復(fù)利用，繼續(xù)用來(lái)加熱溶解三萜提取物。充分利用8次以上，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)影響。
[0023]化合物金錢松內(nèi)酯H的碳譜數(shù)據(jù)如下:
[0024]金錢松內(nèi)酯H: 13C-NMR (CDCl3, 500ΜΗζ) δ: 146.2 (C-1), 119.3 (C_2)，166.1 (C_3)，84.2 (C-4)，54.4 (C-5)，27.6 (C_6)，27.9 (C_7)，52.1 (C_8)，87.5 (C_9)，86.2 (C-1O)，27.5 (C-11), 29.7(C-12), 43.4(C-13), 47.7(C-14), 40.5(C-15), 77.0(C-16), 55.2(C-17), 17.9 (C-18)，59.4 (C-19)，30.1 (C-20)，19.2 (C-21)，44.2 (C-22)，107.2 (C-23)，42.7 (C-24)，34.2 (C-25)，179.6 (C-26)，15.0 (C—27), 21.9 (C—28)，30.7 (C—29), 21.3 (C—30)。
[0025]結(jié)構(gòu)式如下:
[0026]
【權(quán)利要求】
1.金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的金錢松內(nèi)酯H是按如下步驟制備得到的: (1)將金錢松種子粉碎后，用溶劑A提取，分離固液相得濾渣A和提取液A，將所得提取液A濃縮干燥得到粗提物A ;所述溶劑A選自氯仿或二氯甲烷； (2)將步驟(1)中所得濾渣A用溶劑B提取，分離固液相得濾渣B和提取液B，將所得提取液B濃縮干燥得到粗提物B ;所述溶劑B選自乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮中的一種或者是其中兩種以上任意比例的混合溶劑； (3)合并步驟(1)和步驟(2)中所得的粗提物A和粗提物B得總粗提物，將所述的總粗提物分散于醇水溶液中，再用石油醚提取脫脂，棄去石油醚相，將萃余液濃縮干燥即得金錢松種子三萜提取物；所述的醇水溶液是由醇與水按體積比1:0.1~10混合配制而成的，其中所述的醇為Cl~C4的醇； (4)將步驟(3)所得的金錢松種子三萜提取物在40~50°C下溶于鹵代甲烷與丙酮的混合溶液，自然冷卻至室溫或制冷冷卻至2~7°C促進(jìn)結(jié)晶，過(guò)濾獲得晶體粗品，進(jìn)一步將所述的晶體粗品在40~50°C下溶于鹵代甲烷與丙酮的混合溶液，冷卻重結(jié)晶，過(guò)濾獲得晶體產(chǎn)品，所述的晶體產(chǎn)品干燥后即為金錢松內(nèi)酯H;所述鹵代甲烷與丙酮的混合溶液中，鹵代甲烷與丙酮的體積比為1:3~5。
3.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(1)中，所述溶劑A的體積用量以金錢松種子的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g ;所述的溶劑A為二氯甲烷。
4.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(2)中，所述溶劑B的體積用量以金錢松種子的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g ;所述的溶劑B為乙酸乙酯。
5.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(1)和步驟(2)中，所述提取的方法為:采用索氏回流提取6~24h ;或采用浸潰提取方式，浸提2次，每次5~7天。
6.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(3)中，所述醇水溶液的體積用量以總粗提物的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g。
7.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(3)中，所述醇水溶液中的醇選自甲醇或乙醇。
8.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(3)中，所述石油醚提取脫脂的方法為:將總粗提物分散于醇水溶液中后，加入石油醚萃取I~3次，棄去萃取液，將萃余液濃縮干燥即得金錢松種子三萜提取物；所述石油醚的體積用量以總粗提物的質(zhì)量計(jì)為3~10mL/g ;所述的石油醚與醇水溶液的用量體積比為1:1。
9.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(4)中，所述的金錢松種子三萜提取物在用鹵代甲烷與丙酮的混合溶液重結(jié)晶獲得晶體粗品的過(guò)程中，所述鹵代甲烷與丙酮混合溶液的質(zhì)量用量是金錢松種子三萜提取物質(zhì)量的5~7倍。
10.如權(quán)利要求2所述的金錢松內(nèi)酯H在制備治療糖尿病的功能食品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于金錢松內(nèi)酯H的制備方法步驟(4)中，所述的鹵代甲烷選自二氯甲烷或三氯甲烷。
【文檔編號(hào)】A61K31/365GK104013614SQ201410205205
【公開(kāi)日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2014年5月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月15日
【發(fā)明者】郭輝, 張斌, 錢俊青 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)