維生素c在抑制農藥ddt肝臟毒性中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的應用。將維生素C與DDT共同處理人肝臟正常細胞，檢測維生素C對DDT肝臟損傷的抑制效果。30μM和60μM的DDT對人肝臟細胞的損傷分別為27.5％和46.4％。通過加入1-50μM維生素C后，減弱了該損傷。用維生素C處理人肝臟細胞24小時，無明顯毒副作用，體現(xiàn)了維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的效果。
【專利說明】維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及維生素C的新用途，具體屬于維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的應用。
【背景技術】
[0002]DDT,又稱二氯二苯三氯乙烷，是有機氯殺蟲劑的一種，于1874年首次合成，最初被用于消滅瘧疾等蟲媒傳染病，第二次世界大戰(zhàn)后，其作為一種有效殺蟲劑，廣泛應用于農業(yè)。但是從20世紀60年代開始，人們逐漸發(fā)現(xiàn)，隨著該類農藥的長期使用，生態(tài)環(huán)境中DDT的積累也越來越多，動物、植物、水、土壤以及空氣的樣本中均發(fā)現(xiàn)了 DDT的殘留，即使是在從沒有該類農藥使用紀錄的南極，也發(fā)現(xiàn)了 DDT的存在，說明DDT的影響是全球性的。在人群的流行病學調查中發(fā)現(xiàn)，DDT在人體中的蓄積有可能是過去50年來肝癌、結腸癌以及乳腺癌等癌癥發(fā)病率升高的原因之一。鑒于DDT對生態(tài)環(huán)境的巨大污染以及潛在的對人體健康的危害，從70年代開始，歐美等的發(fā)達國家相繼禁止DDT的生產和使用。2001年5月21-23日，在瑞典斯德哥爾摩外交大會上通過《關于持久性有機污染物的斯德哥爾摩公約》后，包括中國在內的世界上92個國家和歐共體在斯德哥爾摩簽署了旨在控制和消除POPs及其污染影響的公約，從而全面開始了削減和淘汰POPs的國際合作，但在一些欠發(fā)達國家和地區(qū)，特別是在非洲國家，DDT作為切斷瘧疾傳染途徑的廉價而有效工具仍在使用。此外，DDT具有持久性、半衰期長(約為7年)和難降解的特性，且在生物體內具有累積性，在環(huán)境中仍大量存在，其殘留量對人體健康具有嚴重損傷，因此，關于其和人類健康關系的研究，特別是和肝臟健康的相關性研究越來越受到人們的重視。
[0003]維生素C又稱抗壞血酸，是一種水溶性的天然抗氧化劑。維生素C的應用也比較廣泛，它可以增強人體免疫功能；預防和治療缺鐵性貧血；預防和治療惡性貧血；預防和治療壞血病；促進膠原形成和膽固醇的代謝；有利于維持骨骼和牙齒的正常功能；有利于維持細胞膜的完整性；具有抗衰老作用；具有防癌抗癌作用。此外，維生素C對某些毒性物質具有解毒作用，鉛化物、砷化物、苯、細菌毒素等是日常膳食中常見的有毒有害物質，對人體健康存在潛在危害。當致毒劑量的鉛化物、砷化物、苯以及細菌毒素等進人人體內時，充足的維生素C有利于緩解其毒性，從而降低這些有害物質對人體健康的危害程度。但是關于維生素C對于農藥毒性的解毒作用，目前未見報道。
[0004]經對現(xiàn)有文獻的檢索，未見關于維生素C在抑制DDT肝臟毒性中應用的報道。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供維生素C的新用途，即維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的應用。
[0006] 本發(fā)明是通過體外細胞實驗，用DDT和維生素C單獨或者共同處理人正常肝細胞HL-7702，檢測該細胞生長的情況，30 μ M和60 μ M的DDT對人肝臟細胞的損傷分別為27.5%和46.4%，通過加入5-100 μ M維生素C后，減弱了該損傷，細胞凋亡率最大降低至2 %，實驗表明維生素C與DDT共同處理HL-7702細胞，可以顯著抑制DDT對HL-7702細胞損傷，而維生素C單獨處理細胞，對HL-7702細胞生長沒有影響。說明維生素C可在抑制DDT肝臟毒性中的應用。
[0007]維生素C傳統(tǒng)上是作為一種水溶性的天然抗氧化劑，具有增強人體免疫功能；預防和治療惡性貧血和壞血?。淮龠M膠原形成和膽固醇的代謝；有利于維持骨骼和牙齒的正常功能和細胞膜的完整性；具有抗衰老和防癌抗癌等功能。本發(fā)明為維生素C提供了一種新用途，即維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的應用。可使DDT高暴露地區(qū)、高殘留地區(qū)人群重視維生素C的食用，服務于人類健康。也可以為農藥DDT污染的環(huán)境治理提供理論依據(jù)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0008]圖1經MTT方法檢測，所得到的DDT對HL-7702細胞生長的影響
[0009]圖2經MTT方法檢測，所得到的維生素C對HL-7702細胞生長的影響
[0010]圖3經MTT方 法檢測，所得到的維生素C與DDT共同處理，對HL-7702細胞生長的影響
【具體實施方式】
[0011]實施例1:
[0012](一)農藥DDT和維生素C單獨處理或共同處理的劑量選擇:
[0013](I)取0.176g維生素C粉末，加入IOml PBS緩沖液，置于4°C攪拌器上攪拌，在細胞超凈臺中，用0.22微米的微孔濾膜過濾。配成終濃度為IOOmM的維生素C溶液。
[0014](2)將(I)中得到的IOOmM的維生素C溶液，用培養(yǎng)細胞所用的培養(yǎng)基，稀釋成不同的工作濃度，即 1、2、5、10、30、50、70、100μΜ。
[0015](3)在細胞超凈臺中，往0.1g DDT粉末中加入3.54ml DMS0，置于振蕩儀上振蕩。配成終濃度為IOOmM的DDT溶液。
[0016](4)將(3)得到IOOmM的DDT溶液，用培養(yǎng)細胞所用的培養(yǎng)基，稀釋成不同濃度的工作濃度，即 1、5、10、20、30、40、50、60 μ Μ。
[0017](5)將⑴中獲得的IOOmM的維生素C溶液，用⑶中稀釋得到的30或60 μ M的DDT溶液，稀釋成1、2、5、10、30、50、70、100μΜ的維生素C溶液。
[0018]( 二)農藥DDT和維生素C單獨處理或共同處理HL-7702細胞24小時后，對細胞生長的影響:
[0019]將處于對數(shù)生長期的HL-7702細胞，以IX IO3個/孔傳入96孔培養(yǎng)板。37°C含5%的CO2培養(yǎng)箱孵育24小時后，分別用維生素C和DDT單獨或共同處理，設五個復孔。孵育24小時后棄去孔內培養(yǎng)基，用PBS洗滌2次后加入新的培養(yǎng)基，每孔加MTT溶液(5mg/ml) 20ml，繼續(xù)孵育4小時后終止培養(yǎng)。小心棄去孔內培養(yǎng)上清液，每孔加入150ml DMSO,搖床振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。于570nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值。
[0020]本發(fā)明用維生素C和DDT單獨或共同處理，檢測對人正常肝細胞株HL-7702細胞的生長影響，當DDT含量為1、5、10、20、30、40、50、60 μ M時，對HL-7702細胞生長的抑制，呈劑量依賴性的關系，且當含量大于10 μ M時，顯著性地抑制了 HL-7702細胞的生長(ρ〈0.05)(見圖1);當維生素C含量為1、2、5、10、30、50、70、10(^]?，處理1-7702細胞24小時后，對HL-7702細胞生長基本無影響(ρ>0.05)(見圖2);當1、2、5、10、30、50 μ M的維生素C與30或60 μ M的DDT共同處理HL-7702細胞24小時后，維生素C減弱了 DDT對HL-7702細胞生長的抑制效果，且當維生素C含量大于2-50 μ M時，極顯著地減弱DDT的肝臟毒性(ρ〈0.01)(見圖 3)。
【權利要求】
1.維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的應用。
2.如權利要求1所述的維生素C在抑制農藥DDT肝臟毒性中的應用，其特征在于所述的維生素C有效抑 制劑量為1-50 μ M0
【文檔編號】A61P1/16GK103976996SQ201410226508
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月26日 優(yōu)先權日:2014年5月26日
【發(fā)明者】晉小婷, 李卓玉, 宋莉, 李漢卿, 劉相元, 陳美蘭 申請人:山西大學