一種用于修復(fù)肝損傷的藥物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于修復(fù)肝損傷的藥物及其制備方法。本發(fā)明的藥物包括下述重量份數(shù)的組分：鱉甲1～5、太子參0.5～3、枸杞0.5～3、黃精0.5～2.6、郁金0.5～3、百合0.6～2.2、雞內(nèi)金0.6～3、三七0.1～1、生甘草0.1～1；其中總皂苷的重量為1.10～3.50mg/g、粗多糖的重量為4.50～13.60mg/g。本發(fā)明的藥物可以有效地通過降低血清中IL-18、肝組織中的TNFα、MDA含量和Fas、FasL的表達(dá)，增加SOD的含量，減少肝組織中的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而減少肝細(xì)胞壞死和凋亡，并表現(xiàn)出療效明顯地隨劑量的增加而提高。本發(fā)明通過臨床實(shí)驗(yàn)，對(duì)患者的血清指標(biāo)、癥狀體征、影像學(xué)指標(biāo)均有改善，具有良好的抗病毒性肝炎肝損傷、防止肝纖維化形成的作用，臨床總有效率達(dá)83.3%。
【專利說明】一種用于修復(fù)肝損傷的藥物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于修復(fù)肝損傷的藥物及其制備方法。
[0002]【背景技術(shù)】
我國(guó)是個(gè)肝病多發(fā)國(guó)家，成人乙肝病毒(HBsAg)攜帶率10%，約1.3億人，其中乙型肝炎患者約2800萬，約2000萬人將最終死于乙肝相關(guān)的疾病。肝損傷是多種肝臟疾病共有的一種病理狀態(tài)，其長(zhǎng)期存在往往是導(dǎo)致肝纖維化，甚至肝硬化、肝癌發(fā)生的最重要的始動(dòng)因素。防治肝損傷是臨床肝病治療的主要環(huán)節(jié)之一，也成為肝病實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)。因此，有效抗肝損傷藥物的研究意義重大。中醫(yī)藥在防治肝損傷方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，其抗肝損傷的作用靶點(diǎn)是多方面的，也是尚未研究明確的，只有深入研究其確切作用機(jī)制才能使臨床選藥和新藥研制工作更加規(guī)范。自上世紀(jì)90年代以來，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對(duì)肝損傷的認(rèn)識(shí)進(jìn)入了細(xì)胞分子水平，對(duì)中醫(yī)藥防治肝損傷作用機(jī)制的認(rèn)識(shí)也不僅停留在保護(hù)肝細(xì)胞膜，降低轉(zhuǎn)氨酶等較粗的層面，而是深入到其細(xì)胞分子學(xué)機(jī)制的探討。近年來，中醫(yī)藥抗肝損傷機(jī)制的研究進(jìn)展如下:
I減少肝細(xì)胞壞死和凋亡
1.1減少致炎和凋亡相關(guān)介質(zhì)的產(chǎn)生
1.1.1 TNFa
TNFa主要由單核細(xì)胞 和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。它可以活化單核、巨噬細(xì)胞，釋放超氧自由基和NO，以及IL-6，1，8等多種白介素提高其殺傷活性；增加中性粒細(xì)胞吞噬和產(chǎn)生超氧陰離子的能力并增強(qiáng)ADCC功能；還可使內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)多種粘附分子，從而加重炎癥反應(yīng)；其本身可通過與TNFRl結(jié)合，并進(jìn)一步結(jié)合TRADD或經(jīng)RIP結(jié)合RAIDD傳導(dǎo)死亡信號(hào)激活Caspase引起肝組織凋亡。Leist等認(rèn)為TNF α誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡可能是肝組織損傷的重要啟動(dòng)因素。陳乃玲等人以原位雜交法檢測(cè)了 94例慢性肝病肝組織凋亡蛋白的表達(dá)表明，慢性乙型肝炎病毒感染相關(guān)性慢性肝病肝組織損傷與腫瘤壞死因子ct (tumornecrosisfactor,TNF α)和腫瘤壞死因子受體(TNFR)的激活有關(guān)。孫怡軍、戴峰的實(shí)驗(yàn)證明TNF α也是早期酒精性肝損傷、梗阻性黃疸的重要致炎和凋亡相關(guān)介質(zhì)。因此，TNFa是肝損傷的形成過程中有重要的作用和地位，降低TNFa是抗肝損傷的重要機(jī)制之一。
[0003]許多研究表明中藥及其有效成分可以通過減少肝損傷時(shí)TNFa的表達(dá)，達(dá)到抗肝損傷的目的。卓蘊(yùn)慧等的實(shí)驗(yàn)表明，以制大黃、敗醬草、赤芍、石菖蒲組成的清開顆粒對(duì)D-GalN + LPS和TAA腹腔注射引起的急性肝壞死大鼠血清中TNF α和NO有明顯降低作用(ρ〈0.05，ρ〈0.01)。武凡等的實(shí)驗(yàn)表明，三七的主要成分三七皂甙可以明顯減輕CCL4引起的肝損傷大鼠血清TNFa升高。吳建成等用丹參、赤芍、蛇舌草為主藥的清熱涼血方對(duì)37例慢性乙肝患者進(jìn)行治療觀察，發(fā)現(xiàn)治療后患者血清單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)的TNFa有明顯的降低，與對(duì)照組相比有顯著差異(Ρ〈0.01)。馬書娟等人的實(shí)驗(yàn)表明，中藥四逆顆粒對(duì)CCL4所致肝損傷大鼠升高的血清TNFa有明顯的降低作用，與模型組相比有顯著差異(ρ〈0.01)。這些實(shí)驗(yàn)用從中藥單體到中藥復(fù)方為治療藥物，以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人體為研究對(duì)象，通過對(duì)同一指標(biāo)的檢測(cè)說明了中藥降低肝損傷時(shí)TNFa的確切作用，證實(shí)了中藥抗肝損傷的這一作用途徑。
[0004]1.1.2 白介素
白介素是由單核/巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，在非特異免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)中起重要作用。許多白介素在肝損傷的病理過程中起關(guān)鍵作用，如白介素1，2，6，8，12，10，18等。其中IL 一 8是一種重要的趨化性細(xì)胞因子，可由單核、巨噬、內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生，趨化和激活中性粒細(xì)胞、靜止的CD4 +或CD8 + T淋巴細(xì)胞和活化的NK細(xì)胞，這些細(xì)胞在組織聚集往往產(chǎn)生大量TNFa等炎癥因子，引起局部組織的強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)。研究觀察表明中重度乙型肝炎肝組織中和酒精性肝病患者、丙型肝炎還有肝切除術(shù)后患者血漿中IL - 8含量與正常人相比明顯升高，且不同程度地參與了肝損傷。再如IL-18，可由激活的肝臟枯否細(xì)胞產(chǎn)生，可以誘導(dǎo)活化T細(xì)胞和NK細(xì)胞，上調(diào)其FasL的表達(dá)，并使其分泌INF Y，后者可以進(jìn)一步刺激活化單核/巨噬細(xì)胞，從而產(chǎn)生NO等共同形成對(duì)肝細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。文維群等人的研究表明慢性乙肝活動(dòng)期患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-18表達(dá)顯著增多，且與炎癥活動(dòng)度明顯相關(guān)。賈紅宇等研究表明慢性丙肝患者血清IL-18增多，與ALT的增高顯著正相關(guān)。.目前中藥對(duì)肝損傷白介素變化的研究方興未艾，初步證明了對(duì)白介素的調(diào)節(jié)是中醫(yī)藥抗肝損傷的機(jī)制之一。萬千紅等對(duì)32名慢乙肝患者的的研究表明，以清熱涼血方、赤芍、丹參、白花蛇舌草等組成的中藥復(fù)方可明顯降低乙肝患者外周血中單個(gè)核細(xì)胞中的IL 一 8的表達(dá)(p〈0.01)。王連江等人的實(shí)驗(yàn)表明以茵陳、大黃、厚樸等組成的腑安顆粒使內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肝損傷大鼠體內(nèi)的IL-18明顯降低，(p〈0.05)，且這種作用與肝功和病理學(xué)的改善相一致。以上實(shí)驗(yàn)說明了調(diào)節(jié)白介素的分泌可能也是中藥抗肝損傷的重要作用機(jī)制之一，但檢測(cè)白介素在中醫(yī)藥目前的抗肝損傷實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用還較少，今后值得進(jìn)一步深入研究。
[0005]1.1.3 Fa s/FasL
Fas和FasL是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的一對(duì)膜蛋白，兩者結(jié)后通過結(jié)合胞內(nèi)的死亡受體FADD/MORTl或DAXX，進(jìn)而激活Capase8或Jnk通路引起表達(dá)Fas的細(xì)胞凋亡。在多種肝病中可發(fā)現(xiàn)其介導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡，在病毒性肝炎中尤為明顯。在慢性乙型、丙型病毒性肝炎等肝病中，國(guó)內(nèi)外的研究均發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞表面Fas和FasL的表達(dá)同時(shí)增加，在匯管區(qū)等炎癥活躍的區(qū)域增加明顯，并隨炎癥的嚴(yán)重程度而增加。這些發(fā)現(xiàn)打破了經(jīng)典的Fas介導(dǎo)的凋亡途徑，即肝細(xì)胞僅表達(dá)Fas，而CTL、NK細(xì)胞表達(dá)FasL。對(duì)乙肝患者的病理切片的觀察表明，隨著肝組織炎癥程度的加重，其Fas抗原表達(dá)也明顯增強(qiáng)，F(xiàn)as/FasL是慢性乙型肝炎肝細(xì)胞凋亡的一種重要機(jī)制之一，抑制肝細(xì)胞Fas表達(dá)將有助于減輕肝細(xì)胞損傷程度。對(duì)抗Fas和FasL誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡成為抗肝損傷研究的新的亮點(diǎn)。
[0006]目前在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中初步證明了中醫(yī)藥的合理配伍和有效成分有抑制Fas和FasL表達(dá)，并籍此抗肝損傷的作用。葫蘆素B是甜瓜蒂的有效成分，蔣遠(yuǎn)明等的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在LPS所致的肝損傷模型中，葫蘆素B兩劑量組肝臟內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)和及Fas和FasL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯低于LPS模型組，并有顯著性差異，說明葫蘆素B可通過抑制Fas和FasL表達(dá)，從而抗肝細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生保肝作用。楊大國(guó)等人的實(shí)驗(yàn)表明在D — GalN肝損傷模型中，肝組織中Fas/FasL表達(dá)程度隨肝組織炎癥壞死加重而增加，中藥復(fù)方赤芍承氣湯可明顯減輕肝細(xì)胞中Fas和FasL陽(yáng)性表達(dá)，與模型組相比有明顯差異(p〈0.01)，提示赤芍承氣湯可以通過降低Fas/FasL陽(yáng)性率抑制肝細(xì)胞凋亡，減輕肝組織病理?yè)p害。
[0007]1.2抗自由基損傷自由基指含有未配對(duì)電子的原子、原子團(tuán)或分子，易于臨近物質(zhì)電子交換，組織損傷的重要分子機(jī)制。各種損傷因子，如肝炎病毒、藥物及毒物等在肝損傷機(jī)制中，均有自由基的大量產(chǎn)生，自由基致肝損傷可以看做各種肝損傷機(jī)制的共同通路之一，并與肝損傷后肝癌及肝纖維化的發(fā)生有密切的關(guān)系。自由基對(duì)肝臟的損傷表現(xiàn)在①對(duì)肝細(xì)胞膜相結(jié)構(gòu)脂質(zhì)的氧化攻擊，使膜受體、膜離子通道和通透性破壞，引發(fā)Ca離子內(nèi)流；②對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氧化攻擊，各種酶活性喪失；③對(duì)DNA鏈的氧化攻擊使肝細(xì)胞突變、凋亡或壞死。因此抗自由基損傷是抗肝損傷的重要機(jī)制，也是近十幾年來的研究熱點(diǎn)。
[0008]在中藥抗肝損傷的研究中抗氧自由基損傷是研究最多，金昔陸等人的實(shí)驗(yàn)表明內(nèi)南五味子的提取物木脂素戈米辛J對(duì)Fe2+ - VitC和ADP/NADPH所致肝線粒體膜脂質(zhì)過氧化和超氧陰離子自由基有明顯的抑制作用。SOD活力可以反映機(jī)體清除氧自由基的能力，MDA是過氧化作用的最終產(chǎn)物，二者聯(lián)合檢測(cè)可反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。錢涯鄰等人的研究表明以清熱利濕、解毒退黃為大法組成的中藥乙肝I號(hào)方使D-氨基半乳糖(D-GaLN)所致肝損傷 小鼠肝損傷明顯減輕，肝勻漿MDA含量下降，SOD含量升高血清ALT降低，降低程度與用藥量呈明顯的量效關(guān)系。王曉燕等的實(shí)驗(yàn)表明胡黃連總皂甙能明顯抑制免疫性肝損傷小鼠血清ALT、AST活性的升高，減輕增加的肝臟重量指數(shù)，顯著抑制肝組織中MDA含量的升高及SOD活性的下降，病理結(jié)果也顯示給藥組小鼠肝組織損傷程度明顯減輕(p〈0.01)。這些實(shí)驗(yàn)都說明了中藥可以通過抗自由基損傷，達(dá)到抗肝損傷的目的。
[0009]2促進(jìn)肝臟血液循環(huán)
肝臟正常的血液循環(huán)對(duì)維持肝臟正常的生理功能有十分重要的意義。急性病毒性肝炎時(shí)，肝細(xì)胞大量壞死，引起肝小葉結(jié)構(gòu)塌陷，肝竇內(nèi)壞死碎片充斥，以致血流阻力增高；慢性肝炎，腫脹的肝細(xì)胞和新生的假小葉、以及纖維隔板形成等壓迫肝竇，使肝臟的血液循環(huán)異常。一方面，血流減慢使各種炎癥細(xì)胞易于附壁聚集，造成和加重局部的炎癥反應(yīng)，另一方面，缺血缺氧使肝細(xì)胞線粒體內(nèi)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸的氧化型和還原型的比例下降，ATP酶受抑制，出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)ATP耗竭和酸中毒，持續(xù)缺氧使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度上升，激活蛋白、脂質(zhì)和DNA的降解，形成以小葉中央?yún)^(qū)為主的肝組織變性、壞死。因此，改善肝臟的供血供氧是抗肝損傷的重要環(huán)節(jié)之一。
[0010]由于血栓素(TXA 2)是迄今所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的血小板聚集物和促血管收縮物質(zhì)。而前列腺素(PGI 2)是目前所知的最有效的抑制血小板聚集的物質(zhì)和血管擴(kuò)張物質(zhì)，目前多從對(duì)TXA2/ PGI2的干預(yù)來間接檢測(cè)中藥對(duì)肝血液循環(huán)的影響。孫沛毅等人的研究表明，以清熱利濕、解毒退黃為大法組成的中藥乙肝I號(hào)方可以明顯降低肝損傷小鼠血漿TXB2濃度、提高6-酮-PGF1 α濃度，改善肝組織血供，并與過氧化損傷的程度呈正比，說明乙肝I號(hào)方可以通過改善小鼠的血液循環(huán)，減少肝組織的損傷，與模型組相比有顯著差異(Ρ〈0.01)。王醒等人的實(shí)驗(yàn)表明，由茵陳蒿湯和犀角地黃湯加減組成的茵陳犀角地黃注射液可以使D-氨基半乳糖造成的肝損傷小鼠體內(nèi)TXB2濃度明顯降低，與模型組相比有顯著差異(ρ〈0.01)，并可以明顯提高PGI2/ TXB2的比值，與模型組相比有明顯差異(ρ〈0.05)，并因此通過改善肝臟的微循環(huán)達(dá)到抗肝損傷、防止肝衰竭的目的。
[0011]3促進(jìn)肝細(xì)胞再生
肝細(xì)胞有強(qiáng)烈的再生能力，肝細(xì)胞的再生是肝細(xì)胞受損后肝功能恢復(fù)的重要機(jī)制。重癥肝炎往往伴有大量肝細(xì)胞的壞死和凋亡，大量肝細(xì)胞的缺失一方面使肝臟的功能衰竭，引起全身性的嚴(yán)重反應(yīng)，另一方面使殘存的肝細(xì)胞以過大的負(fù)荷進(jìn)行代償，結(jié)果是加速其死亡。因此促進(jìn)肝細(xì)胞的再生是改善肝臟功能提高患者生存力的重要手段和環(huán)節(jié)。
[0012] 周小舟等人的實(shí)驗(yàn)定量DNA圖像分析發(fā)現(xiàn)由黃芪、穿山甲、田七、丹參、桃仁、鱉甲、葉下株、茯苓、枳殼9味中藥組成的軟肝沖劑能促進(jìn)肝細(xì)胞再生，抑制肝纖維化、肝硬變的形成，其機(jī)制可能與肝內(nèi)細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)劑P21在細(xì)胞增殖周期性的負(fù)調(diào)控中起重要作用有關(guān)。劉碧崇等的研究表明朱砂蓮的提取物D-氨基半乳糖造成的肝損傷小鼠的肝細(xì)胞DNA的合成有明顯促進(jìn)作用，其，3HTdR的滲入量明顯多于空白對(duì)照組和模型組(p〈0.01)。張志偉等人的研究表明丹參注射液(含丹參1.5g/支)與模型組相比，通過增加葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、鎂離子激活三磷酸腺苷酶(Mg2+-ATPase)，促進(jìn)肝細(xì)胞代謝，為肝細(xì)胞再生提供能量物質(zhì)，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，并通過升高琥珀酸脫氫酶(SDH)、減少乳酸脫氫酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)得到證實(shí)。
[0013]綜上所述，中醫(yī)藥對(duì)肝損傷的治療作用機(jī)制是多靶點(diǎn)，多層次的，根據(jù)這些機(jī)制篩選有效的抗肝損傷中藥將使肝損傷的治療更加前景光明。肝病的中醫(yī)藥治療機(jī)制研究仍存在一些問題，如廣度不夠，與肝臟損傷相關(guān)的細(xì)胞因子還有很多，如細(xì)胞間黏附因子、多種白介素等，中醫(yī)藥的作用靶點(diǎn)的觀察范圍還是太少；深度不夠，對(duì)細(xì)胞損傷和藥物作用的細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和藥物血清的研究還是太少；復(fù)方和中藥提取物的研究較多，對(duì)單一治法的大型研究和有效方劑的拆方研究太少，對(duì)臨床的有效指導(dǎo)意義尚不是很大；造1吳方法多種多樣，但缺乏公認(rèn)的、高效的、簡(jiǎn)便易行的、與臨床很相近的動(dòng)物模型；對(duì)動(dòng)物的研究較多，以人為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的研究指導(dǎo)意義最大，但目前還較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供了一種用于修復(fù)肝損傷的藥物，該藥物主要作用于肝損傷久病后導(dǎo)致肝腎陰虛、肝郁脾虛、痰瘀互結(jié)的疾病，并在中醫(yī)辯證論治思想的指導(dǎo)下，結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)，參考現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果，以滋補(bǔ)肝腎、祛瘀散結(jié)為主要治則，利用鱉甲與多味藥食通用的中草藥進(jìn)行配伍，以特定工藝制成了一種有效的用于修復(fù)肝損傷的藥物。
[0015]本發(fā)明還提供了一種上述的用于修復(fù)肝損傷藥物的制備方法。
[0016]本發(fā)明提供的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物，其成分由下述重量份的原料組成: 鱉甲I~5份、太子參0.5~3份、枸杞0.5~3份、黃精0.5~2.6份、郁金0.5~3
份、百合0.6~2.2份、雞內(nèi)金0.6~3份、三七0.1~1份、生甘草0.1~1份。
[0017]優(yōu)選的上述藥物的重量份數(shù)為:鳘甲3份、枸杞1.5份、太子參1份、黃精1.5份、郁金1.5份、百合1份、雞內(nèi)金0.5份、三七0.5份、生甘草0.5份。
[0018]其活性成分含有總皂苷、粗多糖，其重量比分別為1.10~3.50mg/g、4.50~13.60mg/g。
[0019]所述的藥物的劑型優(yōu)選為片劑和膠囊劑。
[0020]所述的藥物的制備方法，包括如下步驟:
O干燥:分別把鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草在100~110°C下干燥2~3小時(shí)；
2)研磨:按上述重量份稱取鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草進(jìn)行預(yù)混合，然后在超微研磨機(jī)內(nèi)進(jìn)行研磨，溫度控制50°C以下，研磨粒度控制在0.2-4.37 μ m，達(dá)到細(xì)胞級(jí)的粒度，使其藥效得以充分釋放并利于人體的腸系膜直接吸收；
3)高效混合:采用三維高效混合機(jī)進(jìn)行攪拌混合，攪拌的時(shí)間為3min；
4)混合攪拌均勻，得本發(fā)明的活性組分；然后加入制備不同劑型所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤(rùn)滑劑、黏合劑等進(jìn)行二次混合攪拌，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服劑型，如散劑、片劑、膠囊劑、丸劑等。優(yōu)選為按常規(guī)方法制成膠囊劑。
[0021 ] 優(yōu)選的，崩解劑為羧甲基淀粉鈉CMS-Na，潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂，黏合劑羧甲基纖維素鈉 CMC-Na。
[0022]本發(fā)明所得到的活性組分可以加入制備不同劑型所需的各種常規(guī)輔料，如崩解齊?、潤(rùn)滑劑、粘合劑等，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服劑型，如散劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑等。本發(fā)明采用膠囊劑劑型，具有成本低、攜帶方便，吸收迅速之優(yōu)點(diǎn)。
[0023]本發(fā)明人在研究開發(fā)中，通過動(dòng)物試驗(yàn)和臨床研究，找到了有修復(fù)肝損傷功效的藥物。本發(fā)明公開的這種藥物，主要由鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、內(nèi)金、三七、甘草等中草藥按一定重量配比制備而成。
[0024]鳘甲，鳘科動(dòng)物中華鳘(7>io/y^r sinensis i6----?/?)的背甲。味咸，性微寒，歸肝腎經(jīng)。主要功效滋陰散結(jié)、軟堅(jiān)散結(jié)、熄風(fēng)潛陽(yáng)。鱉甲入肝而補(bǔ)陰之水，為滋陰清熱要藥。善走肝經(jīng)血分，消痞化癥，軟堅(jiān)散結(jié)，可以治療各種原因?qū)е碌母纹⒛[大，脅肋疼痛。陳士鐸《本草新編》中云 :“鱉甲，味咸氣平，善能攻堅(jiān)，又不損氣，陰陽(yáng)上下有痞滯不除者，皆宜用之。”在本方中針對(duì)乙肝久病的主要病機(jī)特點(diǎn)，預(yù)防癥瘕積聚的生成。
[0025]枸杞,為爺科植物寧夏枸杞iLycium barb arum L.)的干燥成熟果實(shí)。味甘，平，歸肝、腎肺。《中國(guó)藥典》:滋補(bǔ)肝腎，益精明目。用于虛勞精虧、腰膝酸痛，眩暈耳鳴，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃，目昏不明?！侗静輩R言》:“性潤(rùn)無毒，可升可降，陰中陽(yáng)也，入足少陰，足厥陰經(jīng)?！敝髦胃文I陰虛，及由此引起的頭暈?zāi)垦?、視物不清、腰膝酸軟、?yáng)痿遺精、虛勞咳嗽、口渴引飲?，F(xiàn)代藥理研究表明，寧夏枸杞的水浸液(20%，8ml/天灌胃)對(duì)CC14中毒小鼠有輕度抑制脂肪在肝內(nèi)沉積，促進(jìn)肝細(xì)胞新生的作用。還可防止CC14引起的肝功能紊亂(以膽堿酯酶、轉(zhuǎn)氨酶的活性為指標(biāo))。因此枸杞有良好的保肝作用。通過清除自由基抗氧化及影響NADPH—細(xì)胞色素P450還原酶的活性可以明顯抑制CC14致大鼠肝脂類過氧化作用，提升SOD活力，降低MDA含量亦可促進(jìn)肝細(xì)胞再生，恢復(fù)肝細(xì)胞功能，修復(fù)肝臟的形態(tài)學(xué)改變。
[0026]太子參，為石竹科植物孩兒參heterophylla(Miq.)Pax ex
的干燥塊根。性甘、微苦，平。歸脾、肺經(jīng)?！吨袊?guó)藥典》:益氣健脾，生津潤(rùn)肺。
用于脾虛體倦，食欲不振，病后虛弱，氣陰不足，自汗口渴，肺燥干咳?！吨腥A本草》記載:太子參補(bǔ)益脾肺；益氣生津。主脾胃虛弱；食欲不振；倦怠無力；氣陰兩傷；干咳痰少；自汗氣短；以及溫病后期氣虛津傷；內(nèi)熱口渴；或神經(jīng)衰弱，心悸失眠，頭昏健忘，小兒夏季熱。
[0027]黃精，為百合科植物漠黃精kingianumColl.et Hemsl.、黃精sibiricum Delar.ex Tfet/owie)或多花黃精 P.cyrtonema Hua.的干燥根莖。性甘，平。歸脾、肺、腎經(jīng)?！吨袊?guó)藥典》:補(bǔ)氣養(yǎng)陰，健脾，潤(rùn)肺，益腎。用于脾胃虛弱，體倦乏力，口干食少，肺虛燥咳，精血不足，內(nèi)熱消渴?！侗静輳男隆?謂其“平補(bǔ)氣血而潤(rùn)”;《滇南本草》曰:“補(bǔ)虛添精”。主治脾虛乏力，食少口干；腎虛腰膝酸軟、耳鳴目暗；陰虛肺燥咳嗽?，F(xiàn)代臨床研究發(fā)現(xiàn)對(duì)治療慢性肝炎的乏力、腹脹有較好效果，此外黃精提取液對(duì)傷寒桿菌、金黃色葡萄球菌、抗酸桿菌等有較好的抗菌作用，對(duì)慢性肝病的內(nèi)毒素血癥的防治可能有一定作用；黃精對(duì)實(shí)驗(yàn)性高血脂癥模型有明顯的降血脂的作用，常用于脂肪性肝病的治療。
[0028]郁金,為姜科植物溫郁金(wenyujinY.H.Chen et C.)的塊根。味辛、苦，性寒，歸心、肝、膽經(jīng)。主要功效為活血止痛、行氣解郁、清心涼血、疏肝利膽。正
如《本草匯言》所言:“郁金，清氣化瘀，散瘀血之藥也，其性輕揚(yáng)，能散郁滯，順逆氣......，心
肺肝胃氣血火痰郁遏不行者最驗(yàn)。故治胸胃膈痛，兩脅脹痛、肚腹攻痛、飲食不思等癥”?，F(xiàn)代研究表明郁金有良好的抗肝損傷的作用。溫郁金I號(hào)注射液[]能降低CCL4中毒大鼠血清ALT，增加血清總蛋白和白蛋白含量，腹腔注射20ml/d，7天后明顯升高正常和CCL4中毒小鼠肝細(xì)胞微粒體細(xì)胞色素P450的含量， 明顯增加肝內(nèi)還原型谷胱甘肽的含量，對(duì)半胱氨酸、FeS04引起的過氧化有明顯抑制作用，加速了肝臟的減毒和解毒的能力。郁金揮發(fā)油10對(duì)緩解肝內(nèi)損傷性免疫反應(yīng)具有重要意義?？纱龠M(jìn)白蛋白生成□，與三七相伍作用最強(qiáng)。
[0029]百合，為百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb.、百合brownii F.E.Brown var.viridulum Baker的干燥肉質(zhì)磷葉。性甘、寒。歸心、肺經(jīng)。《中國(guó)藥典》:養(yǎng)陰潤(rùn)肺，清心安神。用于陰虛久咳，痰中帶血，虛煩驚悸，失眠多夢(mèng)，精神恍惚。《本經(jīng)》言其“主邪氣腹脹、心痛。利大小便，補(bǔ)中益氣?！敝髦侮幪摼每?，熱病后期余熱未清?，F(xiàn)代研究表明百合有較好的抗肝纖維化作用；有較強(qiáng)的鎮(zhèn)靜催眠作用，所以可用于肝病有神經(jīng)衰弱表現(xiàn)，失眠多夢(mèng)的患者。
[0030]內(nèi)金,雉科動(dòng)物家雞(fe77i/5.識(shí)777"5.0rOffie1Siicw1S Ari1S1SO/?)的砂囊內(nèi)膜。味甘，性平，歸脾、胃、腎、膀胱經(jīng)。主要功效為健脾消食、澀精止遺、消癥化石?！夺t(yī)學(xué)衷中參西錄》謂其“善化瘀積，治痃癖癥瘕，通經(jīng)閉?！坏芟⑽钢e，無論臟腑何處有積，久久復(fù)之皆能治愈。”主治消化不良食積脹滿，嘔吐反胃，遺精遺尿、癥瘕結(jié)石等。現(xiàn)代研究雞內(nèi)金含有18種氨基酸和多種維生素、微量元素，可以補(bǔ)充肝臟合成蛋白所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有助肝功代償、恢復(fù)。服用雞內(nèi)金后胃運(yùn)動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)、蠕動(dòng)波增強(qiáng)、胃排空速率加快，有助于緩解肝病患者腹脹、納差的癥狀。
[0031]三七，五加科植物三七(/--?:H.Chen ex C 的根。味甘、微苦，性溫，歸肝、胃、肺、心、大腸經(jīng)。有散瘀止血、消腫止痛之功。治療各種出血證和瘀血癥瘕?！侗静菪戮帯吩黄洹爸寡嫜a(bǔ)虛”，《欲求藥解》謂“和營(yíng)止血，通脈行瘀”。現(xiàn)代研究表明三七有較好的止血作用，可以縮短凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間，促進(jìn)血小板變形和脫顆粒，因此可以糾治慢性肝病的出血傾向；同時(shí)抗血小板聚集，抑制纖維蛋白原向纖維蛋白的轉(zhuǎn)化，故有一定的抗纖維化作用，此外還有一定促進(jìn)肝臟蛋白合成的作用，對(duì)肝臟DNA的合成有促進(jìn)作用，因此還具有促肝細(xì)胞再生的作用。此外還有抗脂質(zhì)過氧化的作用，能提高心、肝、腦等組織和血清的SOD活性，降低MDA含量，具有明顯的抗衰老作用。
[0032]生甘草,豆科植物甘草/7Z1ScA )的根和根莖。味甘性平，歸脾胃心經(jīng)，主要功效有益氣補(bǔ)中、緩急止痛、潤(rùn)肺化痰止咳，瀉火解毒，調(diào)和諸藥?！夺t(yī)學(xué)起源》曰:“能補(bǔ)三焦元?dú)庹{(diào)和諸藥相協(xié)，共為力而不爭(zhēng)，性緩，善解諸急。《主治秘要》云:其用有五:和中一也；補(bǔ)陽(yáng)氣二也；調(diào)諸藥三也；能解其太過四也；去寒邪五也。又云，養(yǎng)血，補(bǔ)胃?！迸R床研究表明，甘草有較強(qiáng)的保肝作用，其有效成份甘草甜素、甘草酸、甘草次酸等可明顯減輕CCL4所致大鼠肝臟的變性壞死，促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)糖原及核糖核酸的恢復(fù)，使血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶下降。甘草甜素明顯抑制黃曲霉素和二乙基亞硝胺對(duì)肝癌的誘發(fā)作用，甘草甜素對(duì)病毒性肝炎的治療作用機(jī)制與增強(qiáng)NK細(xì)胞作用有關(guān)；甘草總皂甙對(duì)黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)產(chǎn)生的氧自由基有較強(qiáng)的清除作用；甘草黃酮通過抗脂質(zhì)過氧化作用保護(hù)肝臟；此外甘草還有類皮質(zhì)激素的作用，可以抑制炎癥反應(yīng)，抑制補(bǔ)體活性等，通過多種作用途徑減輕肝臟炎癥。
[0033]本發(fā)明的藥物，在中醫(yī)傳統(tǒng)理論指導(dǎo)下，借鑒現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的最新研究成果，采用具有以滋補(bǔ)肝腎、祛瘀散結(jié)之功效的原料，經(jīng)合理配伍，完善制備工藝，優(yōu)選劑型，從而到修復(fù)肝損傷之功效。
[0034]1.本發(fā)明通過觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)性免疫性肝損傷小鼠肝組織和血清中的炎癥介質(zhì)和凋亡相關(guān)因子的干預(yù)，證明該藥物可以有效地通過降低血清中IL-18、肝組織中的TNFa、MDA含量和Fas、FasL的表達(dá)，增加SOD的含量，減少肝組織中的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而減少肝細(xì)胞壞死和凋亡，并表現(xiàn)出療效明顯地隨劑量的增加而提高。[0035]2.本發(fā)明通過觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)30例乙型病毒性肝炎患者的臨床療效，發(fā)現(xiàn)對(duì)患者的血清指標(biāo)、癥狀體征、影像學(xué)指標(biāo)均有改善，具有良好的抗病毒性肝炎肝損傷、防止肝纖維化形成的作用。臨床總有效率達(dá)83.3%，且未發(fā)現(xiàn)各安全指標(biāo)的異常變化。
【具體實(shí)施方式】
[0036]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作更進(jìn)一步的說明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但并不因此限制本發(fā)明。
[0037]實(shí)施例1 原料配料:
鱉甲3000g、枸杞1500g、太子參1000g、黃精1500g、郁金1500g、百合1000g、雞內(nèi)金500g、三七500g、生甘草500g。
[0038]制備方法:
O干燥:分別把鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草在100~110°C下干燥2~3小時(shí)；
2)研磨:按上述重量份稱取鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草進(jìn)行預(yù)混合，然后在超微研磨機(jī)內(nèi)進(jìn)行研磨，溫度控制50°C以下，研磨粒度控制在0.20~
4.37 μ m ；
3)高效混合:采用三維高效混合機(jī)進(jìn)行攪拌混合，攪拌的時(shí)間為3min；
4)混合攪拌均勻，得本發(fā)明的活性組分；
5)膠囊灌裝:將本發(fā)明的活性成分，加入全自動(dòng)膠囊罐裝機(jī)罐裝成硬膠囊劑，規(guī)格0.3g/ 粒；
6)拋光:將灌裝好的膠囊用拋光機(jī)進(jìn)行拋光處理，得成品。
[0039]所述膠囊中，含總阜苷0.86mg/粒,含粗多糖3.49mg/粒。
[0040]本實(shí)施例的藥物干預(yù)免疫性肝損傷小鼠炎癥介質(zhì)及刁亡相關(guān)因子的動(dòng)物實(shí)驗(yàn): 材料與方法
材料
動(dòng)物:健康昆明小鼠60只,雄性,體重18±20g,購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào):010284，魯動(dòng)質(zhì)字:20021023。小鼠普通飼料，購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。[0041]藥物:按照實(shí)施例1制成的膠囊劑。
[0042]益肝靈片:保肝藥，具有改善肝功能，保護(hù)肝細(xì)胞膜的作用，用于急慢性肝炎及遷延型肝炎，江蘇中興藥業(yè)有限公司，批號(hào):20030409，規(guī)格:每片含水飛薊38.5mg, 口服，一次2片，一日3次。
[0043]主要試劑:卡介苗原漿(806，1.86父107菌/11^):北京生物制品研究所，批號(hào):031030 ;脂多糖(LPS)，購(gòu)自北京舒伯偉化工儀器有限責(zé)任公司，美國(guó)SIGMA公司產(chǎn)品；S0D、MDA試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；TNF α放免試劑盒，購(gòu)自中國(guó)人民解放軍科技開發(fā)中心；IL_18酶聯(lián)試劑盒購(gòu)自大連泛邦化工技術(shù)開發(fā)有限公司，F(xiàn)as、FasL兔抗鼠一抗購(gòu)自北京萊博生物實(shí)驗(yàn)材料研究所，二抗購(gòu)自武漢博士德生物公司
方法
造模:用BCG+LPS法:將BCG和LPS用生理鹽水分別稀釋為2.5 X IO8菌/ml和50 μ g/ml，小鼠尾靜脈注射配好的BCG液0.2ml/只，(含5 X IO7個(gè)菌以上)，致敏10天后，尾靜脈注射LPS液0.2ml/只，16小時(shí)后摘眼球取血處死，剖腹取肝、脾。飼以普通飼料，自由飲水。
[0044]分組及處理方法:將小鼠隨機(jī)分為6組，即A組:正常對(duì)照組、B組:模型組、C組:益肝靈對(duì)照組、D組:本發(fā)明藥物高劑量組、E組:本發(fā)明藥物中劑量組、F組:本發(fā)明藥物低劑量組，每組各10只。本發(fā)明的藥物按成人每日0.3 X 15 = 4.5g，換算成小鼠日給藥量:4.5gX0.0026=0.0117g/20g，0.0177X50=0.585g/kg，0.585g/kgX2=l.17g/kg, 1.17g/kgX4=4.68g/kg，三個(gè)劑量分別為臨床用藥量的1、2和4倍。
[0045]益肝靈按成人每日用水飛薊38.5X6=231mg，換算成給藥量
0.231X0.0026=0.0006g/20g 0.0006X50=0.03g/kg。本發(fā)明的藥物按低、中、高劑量用涼開水配成為5.85%、11.7%,23.4 %混懸液，益肝靈用配成0.015%的混懸液。各組動(dòng)物處理如下表1。
[0046]表1動(dòng)物分組及處理情況一覽表
【權(quán)利要求】
1.一種用于修復(fù)肝損傷的藥物，其特征在于，所述的藥物包括下述重量份數(shù)的組分: 鱉甲I~5太子參0.5~3 枸杞0.5~3黃精0.5~2.6 郁金0.5~3百合0.6~2.2 雞內(nèi)金0.6~3三七0.1~I 生甘草0.1~I ; 上述的各組分中，總皂苷的重量為1.10~3.50mg/g、粗多糖的重量為4.50~13.60mg/g。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物，其特征在于，所述的藥物包括下述重量份數(shù)的組分: 鱉甲3枸杞1.5 太子參I黃精1.5 郁金1.5百合I 雞內(nèi)金0.5三七0.5 生甘草0.5 ； 上述的各組分中，總皂苷的重量為2.87mg/g、粗多糖的重量為11.64mg/g。
3.如權(quán)利要求1所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物的制備方法，包括下述步驟: (1)干燥:分別取鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草在100~110°C下干燥2~3小時(shí)；所述的原料的重量份數(shù)分別為:鱉甲I~5、太子參0.5~3、 枸杞0.5~3、黃精0.5~2.6、郁金0.5~3、百合0.6~2.2、雞內(nèi)金0.6~3、三七0.1 ~1、 生甘草0.1~I ; (2)研磨:按上述重量份稱取鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草進(jìn)行預(yù)混合，然后在超微研磨機(jī)內(nèi)進(jìn)行研磨，溫度控制50°C以下，研磨粒度控制在0.2~4.37 μ m ； (3)混合:攪拌混合步驟(2)中的原料,攪拌的時(shí)間為3min； (4)混合攪拌均勻，得本發(fā)明的活性組分。
4.如權(quán)利要求3所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物的制備方法，其特征在于，所述的藥物為口服劑型，所述的口服劑型為沖劑、片劑、膠囊劑、丸劑中的任一種。
5.如權(quán)利要求3所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物的制備方法，包括下述的步驟: (1)干燥:分別取鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草在100~110°C下干燥2~3小時(shí)；所述的原料的重量份數(shù)分別為:鱉甲3、枸杞1.5、太子參1、黃精1.5、郁金1.5、百合1、雞內(nèi)金0.5、三七0.5、生甘草0.5 ； (2)研磨:按上述重量份稱取鱉甲、枸杞、太子參、黃精、郁金、百合、雞內(nèi)金、三七、生甘草進(jìn)行預(yù)混合，然后在超微研磨機(jī)內(nèi)進(jìn)行研磨，溫度控制50°C以下，粒度控制在0.20~4.37 μ m ； (3)混合:將步驟(2)中的原料攪拌混合均勻，攪拌的時(shí)間為3min； (4)混合攪拌均勻，得本發(fā)明的活性組分；然后加入制備不同劑型所需的各種常規(guī)輔料，所述的常規(guī)輔料為崩解劑、潤(rùn)滑劑、黏合劑中的至少一種，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任一種常用口服劑型，所述的口服劑型為散劑、片劑、膠囊劑、丸劑中的任一種。
6.如權(quán)利要求5所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物的制備方法，其特征在于，攪拌過程所用設(shè)備為三維高效混合機(jī)。
7.如權(quán)利要求5所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物的制備方法，其特征在于，所述的崩解劑為羧甲基淀粉鈉CMS-Na。
8.如權(quán)利要求5所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物的制備方法，其特征在于，所述的潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂。
9.如權(quán)利要求5所述的一種用于修復(fù)肝損傷的藥物的制備方法，其特征在于，所述的黏合劑羧甲基纖維素鈉C MC-Na。
【文檔編號(hào)】A61K35/37GK103977355SQ201410232996
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月29日
【發(fā)明者】張家國(guó), 尹常健 申請(qǐng)人:山東商業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院