維生素e在葛根素注射劑中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及維生素E在葛根素注射劑中的應(yīng)用，該注射劑將維生素E與葛根素相互配伍制成含葛根素的注射劑，或者維生素E注射劑與葛根素注射劑聯(lián)合應(yīng)用，有效克服了含有葛根素注射劑的偶發(fā)性溶血不良反應(yīng)，提高了葛根素注射給藥的安全性。
【專利說明】維生素E在葛根素注射劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及維生素E的醫(yī)藥新用途，具體涉及在葛根素注射劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]維生素E又名生育酚，產(chǎn)妊酚。維生素E有a、b、r、g四種，活性以a最強(qiáng)，約占生育酚活性90%。維生素E具有抗衰老作用。大劑量應(yīng)用維生素E能夠治療消化性潰瘍。促進(jìn)傷口愈合，具有抗炎作用。防治新生兒溶血性貧血。增強(qiáng)肝細(xì)胞解毒功能(見介新撰寫的《維生素E的臨床新用途》，首都醫(yī)藥，2003，9:32頁)。維生素E還具有抗癌作用(見任國喜、郭啟玲、袁茵、李穎、郭少華撰寫的《維生素E的臨床新用途》，中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥，1995，5:228頁)。在糖尿病中，維生素E可通過清除自由基，改善糖尿病患者對胰島素的敏感性，降低血脂水平，抑制血拴素生成，控制糖尿病。維生素E可以治療冠心病，抑制低密度脂蛋白氧化，防止動脈粥樣硬化和高血壓。治療難治性癲癇、甲狀腺腺瘤、病毒性肝炎(見沈衛(wèi)康、王增泮撰寫的《維生素E的臨床新用途》，山東醫(yī)藥，1996，36 (I):56-57頁)。維生素E治療不穩(wěn)定性心絞痛、治療原發(fā)性腎病綜合征血液高凝性傾向、溶血尿毒綜合征、預(yù)防白內(nèi)障、延緩帕金森氏癥(見魏旭蘭、劉元帛撰寫的《維生素E的臨床新用途》，現(xiàn)代診斷與治療，1991，2 (I):59-61頁)。維生素E臨床可作為輔助藥物用于神經(jīng)、肌肉疾患，對腦炎、腦水腫等也有助于改善癥狀和縮短病程(見胡延水、孫立靖、鮑艷芬撰寫的《維生素E的臨床應(yīng)用與注意事項(xiàng)》，醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24 (3):252-253頁)。維生素E還能治療老年性癡呆、健忘癥、延緩老年性癡呆，改善記憶力、治療肩部酸痛、減輕肌肉疲勞，消除精神壓力。預(yù)防血小板凝集，降低血凝固作用，可預(yù)防血栓靜脈炎、血栓形成、心肌梗塞，預(yù)防腦中風(fēng)(見吳虎平、張芳芳撰寫的《維生素E的臨床用途》，中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥雜志，2003，10 (10):45-46頁)。
[0003]葛根素是從豆科植物野葛的干燥根中提取的單體-異黃酮化合物，4’，7 —二羥基-8-β-D葡萄糖基異黃酮。臨床上廣泛用于心血管疾病的治療。目前應(yīng)用于臨床的含有葛根素的藥物制劑主要是注射劑。隨著葛根素的廣泛使用，近年來有關(guān)葛根素不良反應(yīng)的報(bào)道也越來越多，引起醫(yī)藥界廣泛關(guān)注。通過分析近20年中藥不良反應(yīng)，葛根素注射液位列第18位。國家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心曾在2003年I月第3期《藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)》中通報(bào)了葛根素注射液的不良反應(yīng)。大多數(shù)研究者認(rèn)為，葛根素注射液是以50%丙二醇為溶媒配制而成，不可避免因提取工藝、技術(shù)等方面的差異產(chǎn)生純度不夠，引入雜質(zhì)而導(dǎo)致各種反應(yīng)(見徐向輝撰寫的《對臨床使用葛根素注射液出現(xiàn)不良反應(yīng)的分析》，上海中醫(yī)藥雜志，2006，40 (8):71 -72 ;和徐世國撰寫的《葛根素的臨床應(yīng)用及不良反應(yīng)》，時(shí)珍國醫(yī)國藥，2005，16(12) =1307-1308)。在對2000-2004年國內(nèi)主要醫(yī)藥期刊報(bào)道的63例葛根素不良反應(yīng)進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，男40例，女23例；年齡34~81 (57.5±23.5)歲。所有病例均為靜脈滴注給藥。給藥劑量為0.4~0.6g，藥品稀釋液均為5%葡萄糖液、生理鹽水、5%葡萄糖鹽水等。反應(yīng)發(fā)生時(shí)間最快者為3min，最慢者為13d，均發(fā)生在給藥過程中。首次給藥出現(xiàn)反應(yīng)者47例,重復(fù)給藥出現(xiàn)反應(yīng)者16例。統(tǒng)計(jì)顯示,常見不良反應(yīng)有變態(tài)反應(yīng)(發(fā)熱、顫抖等，24例)、過敏性休克(4例)、溶血性貧血(13例)、肝損害、腎損害(7例)、藥物熱(10例)、死亡(5例)。所有病例均無過敏史，反應(yīng)發(fā)生后停藥經(jīng)對癥處理均恢復(fù)(死亡病例除外)。用藥劑量及所用稀釋液在藥品說明書提示范圍內(nèi)，所有反應(yīng)均肯定為葛根素所致。不良反應(yīng)的發(fā)生與所患疾病無關(guān)，與年齡、性別無關(guān)，與藥物稀釋液無多大聯(lián)系。與患者體質(zhì)差異有關(guān)，特別是年老體弱者易發(fā)生。反應(yīng)發(fā)生時(shí)間的長短與中藥制劑起效緩慢程度有關(guān)(見全心榮撰寫的《葛根素不良反應(yīng)63例文獻(xiàn)分析》，現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，14(1):140)。一患者靜滴葛根素約lOmin，即出現(xiàn)為急性腎功能不全，溶血性貧血(見關(guān)銘華撰寫的《葛根素致溶血性貧血》，藥物不良反應(yīng)雜志，2003，5:291)。因此，葛根素引起的溶血性貧血是葛根素本身所致。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供維生素E藥物的新用途，即維生素E在葛根素注射劑中的應(yīng)用，維生素E可有效防治葛根素誘發(fā)的血管內(nèi)溶血不良反應(yīng)。
[0005]實(shí)際上，本發(fā)明涉及維生素E在制備葛根素注射用復(fù)方制劑時(shí)的應(yīng)用，也可以和葛根素注射劑以注射和輸液的方式臨時(shí)配合應(yīng)用，或者在以注射和輸液的方式應(yīng)用維生素E后再接著應(yīng)用葛根素注射劑。
[0006]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:維生素E在制備葛根素注射劑的新用途。維生素E和葛根素注射劑以注射和輸液的方式臨時(shí)配合應(yīng)用。在以注射和輸液的方式應(yīng)用維生素E后再接著應(yīng)用葛根素注射劑。
[0007]上述技術(shù)方案中的有關(guān)內(nèi)容解釋如下:
[0008]1、上述方案中，所 述的注射劑，含有以下重量份藥物:維生素El~50份，葛根素
I~5000份。
[0009]2、上述方案中，所述的注射劑，還含有輔料I~50重量份，注射用水I~10000重量份。所述的輔料為碳酸氫鈉溶液、葡萄糖液、丙二醇液、葡萄糖鹽水、氯化鈉注射液或生理鹽水。
[0010]3、上述方案中，所述的注射劑可以是臨床上可接受的注射液、粉針或輸液。
[0011]4、上述方案中，所述的注射劑的制備方法如下所述:
[0012]所述的粉針，由維生素E和葛根素混合、滅菌制得；或者由維生素E、葛根素和氯化鈉混合，加注射用水溶解，再用鹽酸或碳酸氫鈉溶液調(diào)整PH值至5.0-8.5，過濾，濾液滅菌后灌封在粉狀安瓿中再次滅菌制得；
[0013]所述的注射液。由維生素E、葛根素和氯化鈉混合，加注射用水溶解，再用鹽酸或碳酸氫鈉溶液調(diào)整pH值5.0-8.5，過濾，濾液灌封在安瓿中滅菌制得?；蚓S生素E由5%葡萄糖液，5%葡萄糖鹽水，丙二醇液(由丙二醇與生理鹽水按體積比(I: I)配置而成，內(nèi)含丙二醇0.5ml/ml)，氯化鈉注射液或生理鹽水溶解，再與葛根素注射劑混合，過濾，濾液灌封在安首瓦中滅囷制得。
[0014]所述的輸液，由維生素E、葛根素和氯化鈉混合，加注射用水溶解，再用鹽酸或碳酸氫鈉溶液調(diào)整PH值5.0-8.5，溶解，過濾，濾液灌封在鹽水玻璃瓶中滅菌制得?；蚓S生素E由5%葡萄糖液，5%葡萄糖鹽水，丙二醇液(由丙二醇與生理鹽水按體積比(I: I)配置而成，內(nèi)含丙二醇0.5ml/ml)，氯化鈉注射液或生理鹽水溶解，再與葛根素注射劑混合，過濾，濾液灌封在安瓿中滅菌制得。[0015]5、上述方案中，所述的臨時(shí)配合應(yīng)用是指在醫(yī)院，在應(yīng)用葛根素注射劑的同時(shí)與維生素E混合一同輸液或注射。
[0016]6、上述方案中，所述的在以注射和輸液的方式應(yīng)用維生素E后再接著應(yīng)用葛根素注射劑，是指在醫(yī)院，以注射和輸液的方式應(yīng)用維生素E后，再接著以注射和輸液的方式應(yīng)用葛根素注射劑。
[0017]葛根素具有有擴(kuò)張冠狀動脈和腦血管、降低心肌耗氧量，改善微循環(huán)和抗血小板聚集的作用。臨床上用于輔助治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、視網(wǎng)膜動靜脈阻塞、突發(fā)性耳聾及缺血性腦血管病、小兒病毒性心肌炎、糖尿病等。葛根素可以與維生素E配伍制成復(fù)方葛根素注射劑用于防治多種疾病，如用于防治糖尿病周圍神經(jīng)病變、高血壓合并糖尿病、糖尿病腎病、急性腦梗死、穩(wěn)定型心絞痛、下肢深部靜脈血栓形成以及椎基底動脈供血不足性眩暈等。但是，含葛根素注射劑中的葛根素極易引起血管內(nèi)溶血。維生素E具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，本
【發(fā)明者】經(jīng)過研究證實(shí)維生素E還具有拮抗由葛根素誘發(fā)的血管內(nèi)溶血不良反應(yīng)，提高葛根素注射給藥的安全性。
[0018]下面結(jié)合一些試驗(yàn)進(jìn)一步來說明本發(fā)明的目的和所能達(dá)到的效果。
[0019]本實(shí)驗(yàn)參考《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》對溶血試驗(yàn)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)SmM葛根素能夠引起I %的綿羊紅細(xì)胞溶血10%，體外溶血試驗(yàn)發(fā)生概率為100%，溶血試驗(yàn)結(jié)果均得到重現(xiàn)，說明方法可重復(fù)。該方法可用于發(fā)現(xiàn)注射劑的潛在的偶發(fā)溶血現(xiàn)象，是進(jìn)行注射劑新藥開發(fā)判斷是否存在偶發(fā)性溶血的可行試驗(yàn)方法，有利于減少不良反應(yīng)的發(fā)生，提高注射劑的安全性。
[0020]一、維生素E拮抗含有葛根素的注射劑溶血不良反應(yīng)的作用及效果[0021 ](一)葛根素注射劑溶血試驗(yàn) [0022]研究維生素E與葛根素合用對綿羊紅細(xì)胞的影響。取10只小尾寒羊的紅細(xì)胞，分別加入一定劑量的維生素E與葛根素，IOmin后，觀察紅細(xì)胞的狀態(tài)和溶血發(fā)生率，用X2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，探尋維生素E對葛根素注射劑偶發(fā)性溶血的對抗作用?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下:
[0023]I實(shí)驗(yàn)材料
[0024]1.1受試藥物
[0025]維生素E注射劑①，維生素E由廣州白云山制藥總廠生產(chǎn)，規(guī)格IOOmg/粒。用生理鹽水溶液溶解并稀釋。用IOmL容量瓶定容至10mL，此為注射劑①，濃度為IOmg ，用微孔濾膜(0.22 μ m)過濾除菌，4°C保存。
[0026]注射劑②:用滅菌生理鹽水將注射劑①稀釋至Img.mL—1，10mL，4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0027]注射劑③:用滅菌生理鹽水將注射劑①稀釋至0.1mg.mL—1，10mL，4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0028]葛根素注射劑④:由浙江康恩貝制藥股份有限公司提供，2mL，產(chǎn)品批號090501，每mL注射劑含葛根素50mg。
[0029]葛根素注射劑(250mM)⑤:用電子天平精確稱取葛根素粉末(購自江蘇天晟藥品有限公司)1.041g，用40%二甲基亞砜(DMSO，DZ0231，AMRESCO)溶解，超聲助溶，生理鹽水溶液稀釋至9mL，容量瓶定容至10mL，溶液顏色呈無色(配置環(huán)境:超凈工作臺中進(jìn)行)。溶劑為40% DMSO溶液。用微孔濾膜(0.22 μ m)過濾除菌，4°C保存。
[0030]復(fù)方葛根素注射劑⑥:取注射劑①0.04mL,注射劑④0.27mL,混勻，共0.3ImL,組成注射劑⑥。每mL注射劑含葛根素43.55mg、維生素E 1.29mg。
[0031]復(fù)方葛根素注射劑⑦:取注射劑②0.04mL，注射劑④0.27mL，混勻，共0.3ImLji成注射劑⑦。每mL注射劑含葛根素43.55mg、維生素E 0.129mg。
[0032]復(fù)方葛根素注射劑⑧:取注射劑③0.04mL,注射劑④0.27mL,混勻，共0.3ImL,組成注射劑⑧。每mL注射劑含葛根素43.55mg、維生素E 0.0129mg。
[0033]復(fù)方葛根素注射劑⑨:取注射劑①0.04mL,注射劑⑤0.13mL，混勻，共0.17mL，組成注射劑⑨。每mL注射劑含葛根素79.61mg、維生素E 2.35mg。
[0034]復(fù)方葛根素注射劑⑩:取注射劑②0.04mL,注射劑⑤0.13mL，混勻，共0.17mL，組成注射劑⑩。每mL注射劑含葛根素79.61mg、維生素E 0.235mg。
[0035]復(fù)方葛根素注射劑?:取注射劑③0.04mL,注射劑⑤0.13mL，混勻，共0.17mL，組成注射劑O。每mL注射劑含葛根素79.61mg、維生素E0.0235mg。
[0036]1.2實(shí)驗(yàn)動物
[0037]小尾寒羊10只(20~30Kg)，由西北農(nóng)林科技大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。在室溫15~25°C，相對濕度50%條件下飼養(yǎng)。
[0038]1.3試劑、儀器
[0039]氯化鈉注射劑，批號:31213042402，石藥銀湖制藥有限公司生產(chǎn)；注射用水，自制；TGL-16B高速離心機(jī)，湖南星科科學(xué)儀器有限公司；HPY-01B生化培養(yǎng)箱，黃石恒豐醫(yī)療器械有限公司；B10-RAD680酶標(biāo)儀；酶標(biāo)條購由江蘇海門三和興亞醫(yī)療器械廠生產(chǎn)，購自陜西省楊凌寶鑫器材有限公司。
[0040]2 方法
[0041] 2.1紅細(xì)胞懸浮液的制備
[0042]小尾寒羊10只，分別進(jìn)行溶血實(shí)驗(yàn)。每只綿羊采頸靜脈血10mL，肝素鈉(江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司)160IU抗凝后，置于刻度離心管內(nèi)，以2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,棄去血漿,加入適量的氯化鈉注射劑洗滌,離心棄去上清液及白細(xì)胞層。再加適量生理鹽水搖勻、離心，如此反復(fù)洗滌3次，至離心后上清液呈無色透明為止。將所得壓積紅細(xì)胞用生理鹽水稀釋成11% (體積比)的紅細(xì)胞懸液。至此，紅細(xì)胞懸液準(zhǔn)備完畢。
[0043]2.2葛根素溶液體外溶血實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0044]設(shè)葛根素溶液作用于紅細(xì)胞的濃度為8mM(0.00333g.mL-1)。設(shè)陰性對照組，溶劑對照組(用DMSO代替葛根素溶液作用于紅細(xì)胞)，藥物處理組及陽性對照組。用METTLERTOLEDO臺式pH計(jì)測定葛根素溶液的pH值為7.16。
[0045]按照下表1中所示，分別往試管里加入相應(yīng)成分,注意加樣順序。每加完一種成分后，都輕輕搖勻。等體系中所有成分都加入體系中后，輕輕震蕩混勻，放置37°C的生化培養(yǎng)箱溫育。IOmin后觀察溶血和凝聚反應(yīng)。凝聚反應(yīng)判定方法:若溶液中有紅棕色或棕紅色絮狀沉淀，振搖后不分散，表明有紅細(xì)胞凝集發(fā)生，若凝聚物振搖后又能均勻分散，則為假凝集，若凝聚物不被搖散者則為真凝集。接著各管按照5000rpm/min條件離心，肉眼觀察上清液顏色。取上清液，于540nm波長處檢測光吸收值(0D值)。根據(jù)2005年《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》，按公式計(jì)算各組各管的溶血率(％):
[0046]溶血率(％ )=(藥物處理組OD值-陰性對照組OD值)/ (陽性對照組OD值-陰性對照組OD值)[0047]參考評價(jià)標(biāo)準(zhǔn):溶血率> 5%表明有溶血現(xiàn)象發(fā)生，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
[0048]表1葛根素溶液與維生素E體外溶血實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)
[0049]
【權(quán)利要求】
1.維生素E在葛根素注射劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:維生素E可以和葛根素注射劑做成復(fù)方注射劑應(yīng)用，也可以和葛根素注射劑以注射和輸液的方式臨時(shí)配合同時(shí)應(yīng)用，或者在以注射和輸液的方式應(yīng)用維生素E后再接著應(yīng)用葛根素注射劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的同時(shí)應(yīng)用，其特征在于:葛根素注射劑和維生素E注射劑在為患者應(yīng)用前混勻，再以注射和輸液的方式應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的以注射和輸液的方式應(yīng)用維生素E后再接著應(yīng)用葛根素注射劑，其特征在于:先為患者應(yīng)用維生素E注射劑結(jié)束后，再接著應(yīng)用葛根素注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4所述的注射劑和注射劑的應(yīng)用，其特征在于:含有以下重量份藥物:維生素El~50份，葛根素I~5000份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5所述的注射劑和注射劑的應(yīng)用，其特征在于:可以含有輔料I~50重量份、注射用水I~10000重量份。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5、6所述的注射劑和注射劑的應(yīng)用，其特征在于:所述的輔料可以為碳酸氫鈉溶液、葡萄糖液、葡萄糖鹽水、丙二醇液、氯化鈉注射液或生理鹽水注射液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或7所述的注射劑和注射劑的應(yīng)用，其特征在于:所述的注射劑和注射劑的應(yīng)用可以是臨床上可接受的注射液、粉針或輸液。
【文檔編號】A61P25/00GK104013613SQ201410248191
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年5月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月28日
【發(fā)明者】李新平, 周博, 寧利華, 曹統(tǒng) 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)